Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 1/37
CUPRINS:
1.Scop
2.Domeniu de aplicare
3.Documente de referinta
4.Definitii si abrevieri
5.Responsabilitati
6.Descrierea procedurii
7.Inregistrari si anexe
8.Istoricul versiunilor
Lista difuzare-retragere
Semnatura:
Data: 14.01.2016 15.01.2016 18.01.2016
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 2/37
1. SCOP
2. DOMENIU DE APLICARE
3. DOCUMENTE DE REFERINTA
3.1. SR EN ISO 15189:20013 Laboratorare medicale.Cerinte
particulare pentru calitate si competenta.
3.2. Norma metodologica din 01/04/2004 publicat in Monitorul
oficial, partea I nr.340 din 19/04/2004 de aplicare a Legii
nr.104/2003 privind manipularea cadavrelor umane si prelevarea
organelor si tesuturolor de la cadavre in vederea transplantului.
3.3. Maria Sajin: Aspecte histopatologice in cancerul colului uterin,
cap.IV din cancerul colului uterin, sub redactiaV.V. Horhoianu,
editura UniversitaraCarol Davila, Bucuresti.
3.4. Maria Sajin, Adrian Costache : Curs de Anatomie Patologica,
editia a II-a revizuita si adaugita, ed. Cermaprint, Bucuresti
2005
3.5. Manuela Pelmus, Adrian Badila, Ion Dinulescu, Paul Nicolescu,
Horia Orban, Radu Radulescu, Maria Sajin, : Patologie tumorala,
Editura Etna, Bucuresti 2004.
3.6. Maria Sajin: Colul uterin citohistopatologia leziunilor epiteliale,
editura Universitara Carol Davila.
3.7. Maria Sajin : Biopsia de endometru-histologie normala si
patologica, Editura Universitara Carol Davila.
3.8. Ghid de tehnici de histologie, citologie si imunohistochimie -
editura Medicala Universitara Craiova, 2003
3.9. Incursiune in problematica laboratorului de Anatomie Patologica-
Carmen Ardeleanu,Irina Draga Caruntu, Elena Lazar.
3.10. Robbins and Cotran Atlas of Pathology- Editura Sauders
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 3/37
4. DEFINITII SI ABREVIERI
4.1. DEFINITII
Numerotare individuala - sistem de codificare numerica folosit pentru
identificarea probelor
Consumabile - toate materialele folosite n cursul operrii care trebuie
schimbate n mod regulat.
Rack metalic -suport pentru probe prin care acestea sunt introduse n
analizor.
Reactivi - substane chimice care folosesc la determinarea unei anumite
analize.
Repetare -comand de efectuare a aceleiai analize autorizat de utilizator
din diferite motive sau efectuat de aparat n mod automat.
Standby - stare a sistemului n care acesta nu efectueaz analize dar este
pregtit pentru pornire / operare imediat sau dup o iniializare
minimal.
Conformitate ndeplinirea de ctre un produs, proces sau serviciu a
unor cerine specificate.
Control intern de calitate tehnici i activiti operaionale din cadrul
unui laborator care sunt folosite pentru a ndeplini cerinele calitii.
Controlul intern va fi realizat de doua ori pe an de catre seful de laborator
pentru fiecare specialitate in parte. Aceasta procedura are ca scop
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 4/37
4.2. ABREVIERI
N/A
5.RESPONSABILITATI
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 5/37
6. DESCRIERE PROCEDURA
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 6/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 7/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 8/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 9/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 10/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 11/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 12/37
Reactivii
- formol neutru de 10 %;
- substane pentru deparafinare si clarificare: toluen, xilen, ottix plus
(substituent pentru toluen, xilen);
- substane pentru hidratare, deshidratare i colorare: apa distilat, alcool
de diferite concentraii, ottix shaper (substituent pentru alcool); carbonat de
litiu; acid picric, fuxina acida; orange G; eozina B; eozina G, acid acetic
glacial.
- coloraie uzual: kit hematoxilin, kit eozin;
- kit substane pentru coloraii speciale: VanGieson; Van Gieson elastic;
PAS (acid clorhidric, metabisulfit de natriu sau potasiu, carbine active);
Tricromic; Schiff; Albastru alcian; Pearls (ferocianura de potasiu, acid
clorhidric, kernechtrot, fuxina acida, rosu neutru); Ziehl-Nielsen
( calbolfucsina, albastru de metilen !% sau verde lumina); Rosu de Congo
(hidroxid de potasiu sau hidroxid de sodiu); Giemsa (alcool izopropilic, acid
acetic glacial); Masson (hematoxilina Weigert, ponceau fucsina, acid
fosfomolibdenic, aniline orange sau verde lumina); Gomori (permanganate
de potasiu, metabisulfit de natriu sau potasiu, alaun feriamoniacal,
argento-amoniacala(Tollens), metabisulfit de natriu/potasiu, tiosulfat de
natriu).
- solutie decalcifiere acid azotic fumans; diadec; microdec.
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 13/37
Generalitti procedur
Este o metod rapid de diagnostic microscopic, n decursul interveniilor
chirurgicale. Aceasta se efectueaz la cererea clinicianului i trebuie
anunat cu 24 de ore nainte. Rezultatul examenului se comunic seciei
telefonic si conine numai afirmarea sau infirmarea malignitii, fapt
consemnat pe fia de nsoire a materialului biopsic PG-03/F5a,V.1. Pentru
aceast analiz, esuturile trebuie aduse imediat i nefixate (fr formol).
Probele tisulare mpreun cu fia de nsoire a materialului biopsic cod, PG-
03/F5a,V.1, sunt aduse n Departamentul de Anatomie Patologic,
compartiment extemporaneu, de personalul medical care solicit analiza.
Solicitarea acestei analize se face marcnd n dreptul analizei
extemporaneu, csua de pe fia de nsoire a materialului biopsic, cod PG-
03/F5a,V.1
TEHNICA DE LUCRU:
- se modeleaza fragmentul de analizat, ndeprtnd pe ct posibil,
grsimea perilezional care se congeleaz greu;
- grosimea piesei trebuie s fie maxim 3-4 mm;
- piesele mici se includ n totalitate n mediul de nglobare pentru seciuni
la ghea;
- pe plcua metalic, portobiect se pune mediul de nglobare i apoi piesa
nefixat. Temperatura de ngheare a probelor se alege n funcie de natura
esutului, conform tabelului de mai jos.
- pentru piese mai groase se folosete dispozitiv de ngheare rapid;
- se asteapt 3-4 minute pn la ngheare (mediul de nglobare devine
alb-opac);
- dup ngheare se monteaz placua metalic n dispozitivul de prindere
al microtomului, se degroeaz i se secioneaz la 6 microni, cu un cuit
perfect ascutit, utilizand plcua de plexiglas anti-rol;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 14/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 15/37
Piesele recoltate, pot avea dimensiuni foarte mari sau foarte mici. De aceea
medicul anatomo-patolog trebuie s execute o prelevare cu mare atenie a
materialului biologic din piesa trimis, deoarece poate rata diagnosticul
histologic daca nu identific cu exactitate leziunea sau zona de interes
histopatologic.
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 16/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 17/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 18/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 19/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 20/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 21/37
Tehnica de includere:
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 22/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 23/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 24/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 25/37
Coloraia Giemsa
- lamele sunt inute n dou cuve cu soluie de deparafinare, toluen/ottix
plus, timp de 10 de minute, pentru ndepartarea definitiv a surplusului de
parafin;
- dup expirarea timpului acestea vor trece n cuva de hidratare, alcool
absolut, alcool 96 sau ottix shaper, timp de 10 minute;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 26/37
- splare ap distilat;
- colorare Giemsa (o parte Giemsa+4 prti ap)- 20-30 minute;
- splare n ap distilat n care se pun 7-8 picturi de acid acetic glacial la
100 ml ap distilat;
- difereniere cu alcool 96% (pn preparatul devine roz);
- deshidratate i clarificare n alcool izopropilic;
- clarificare - toluen
- montare
Rezultate: nuclei - violet, citoplasma bazofil-albastru, citoplasma acidofil-
rou, mastocite-violet, Helicobacter pylori- albastru nchis.
Coloraia Perls
- deparafinare toluen/ottix plus
- hidratare alcool absolut, alcool 96, alcool 70/ottix shaper;
- splare ap distilat;
- imersie n soluie - soluie ferocianur de potasiu 2%
- soluie acid clorhidric 2%
(raport soluie 1/1 incubare timp de 30 minute, 56-60 C)
- splare ap distilat -10 minurte;
- supracolorare cu Kenerchtrot-3 minute sau fuxin acid 1%-1 minut sau
rou neutru 1% -5 minute;
- splare ap robinet;
- deshidratare alcool 70, alcool 96, alcool absolut sau ottix shaper;
- clarificare toluen/ottix plus;
- montare
Se prepar extemporaneu 1,5 g ferocianur de potasiu n 75 ml ap
distilat i 48 ml acid clorhidric 1N cu 27 ml ap distilat.
Rezultate - depozite de fier - albastru, nuclei-rou.
Coloraia Ziehl-Nielsen
- deparafinare -imersia frotiului n ap distilat;
- carbolfucsina- 10-20 minute (incalzire la intervale de timp egale pn la
emisia de vapori);
- splare ap robinet;
- tratare cu decolorant acid-alcool 3 minute;
- splare ap robinet;
- contracolorare cu soluie de metilen 1% sau verde lumin 30-60 secunde;
- splare ap robinet;
- deshidratare- alcool 70, alcool 96, alcool absolut sau ottix shaper;
- clarificare- ottix plus, toluen;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGICA LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGICA
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 27/37
- montare
Rezultate: bacili alcool rezisteni rou, albastru sau verde.
Coloraia Masson
- deparafinare- toluen/ottix plus;
- ap distilat;
- hematoxilin Weigert 7-10 minute;
- splare n ap i carbonat de litiu -5 secunde;
- ponceau fucsina (2 pri ponceau 1%, 1 parte fuxin acid 1%, 1 parte
acid acetic glacial) - 4 minute;
- splare ap distilat;
- acoperire cu acid fosfomolibdenic 1% - 10 minute;
- anilin orange verde lumina - 5 minute (lama nu se spal nainte);
- splare n ap distilat;
- deshidratare rapid n alcool absolut !%;
- clarificare- toluen/ottix plus;
- montare
Coloratia Gmri
- deparafinare -toluen/ ottix plus;
- hidratare -alcool absolut, alcool 96, alcool 70/ottix shaper;
- splare ap de robinet;
- oxidare cu permanganat de potasiu 1% (se filtreaz);
- splare ap de robinet;
- decolorare rapida cu metabisulfit de natriu sau potasiu 2 %;
- splare ap de robinet;
- mordansare - cu alaun feriamoniacal 2% - 2 minute;
- splare ap de robinet;
- impregnare- cu solutie argento-amoniacala (tollens);
- splare ap distilat 2 bi rapide;
- reducere- formol neutru 10 %;
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 28/37
- ap;
- reducere- cu metabisulfit de natriu/ potasiu 2 %- 1 minut, facultativ;
- ap;
- fixare- tiosulfat de natriu 1 %- 1 minut;
- splare ap robinet;
- deshidratare alcool absolut, alcool 96, alcool 70 sau ottix shaper;
- clarificare- toluen/ ottix plus;
- montare
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 29/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 30/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 31/37
6.8.Interferene
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 32/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 33/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 34/37
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 35/37
7. NREGISTRRI I ANEXE
7.1 Inregistrari
Registrul pentru examenul extemporaneu
Registrul histopatologic
Fisa de insotire a materialului biopsic
Consimtamantul pacientului
Registrul evidenta probe lucrate zilnic
Cerere eliberare lame/blocuri parafina in consult
Registru evidenta lame/blocuri in consult
Buletin de diagnostic histopatologic
Registru coloratii speciale
Cerere solitare coloratii speciale
7.2 Anexe
Anexa 1: Diagrama de flux pentru examenul histopatologic, cod PS-AP-
01/F1.V1
Anexa 2: Consimtamantul pacientului, cod PS-AP-01/F2.V1
Anexa 3: Cerere solicitare coloratii speciale, cod PS-AP-01/F3.V1
Anexa 4: Registru probe procesate , cod PS-AP-01/F4.V1
SPITALUL UNIVERSITAR DE URGENTA BUCURESTI
DEPARTAMENT DE ANATOMIE PATOLOGIC LABORATOR DE ANATOMIE
PATOLOGIC
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGIC Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 36/37
8. ISTORICUL VERSIUNILOR
Cod: PS-AP-01
PROCEDURA Versiunea: 1
SPECIFICA
EXAMINARE HISTOPATOLOGICA Data intrarii in
vigoare: 18.01.2016
Pagina: 37/37
Manager/ Prof.
Univ. Dr.
PS-AP-01 1 1 Ctlin Florin
Crstoiu 18.01.2016
Director
Medical
PS-AP-01 1 2 Dr. Drago
Davioiu 18.01.2016
Sef sectie
Departament
de Anatomie
PS-AP-01 1 3 Patologica -
Prof. Univ. Dr.
Maria Sajin 18.01.2016
PS-AP-01 1 4 RENAR