Sebuah Novel Alkaloid dari actinomycete Marine-Berasal

Streptomyces xinghaiensis dengan luas-Spectrum antibakteri

dan sitotoksik Kegiatan
Wence Jiao 1, Fenghua Zhang 2, Xinqing Zhao 1 *, Jiehan Hu 3, Joo-Won Suh 4
1 Sekolah Ilmu dan Bioteknologi, Dalian University of Technology, Dalian, Cina, 2 Rumah Sakit Afiliasi Pertama Dalian University Medical, Dalian, Cina, 3 Dalian Institut Kimia Fisika, Chinese Academy of Sciences, Dalian, Cina, 4 Divisi

Bioscience dan Bioinformatika, Myongji University, Yongin, Korea

Abstrak

Karena meningkatnya munculnya bakteri resisten dan sel tumor, antibiotik novel dengan kegiatan antibakteri dan sitotoksik sangat dibutuhkan. Actinobacteria laut
merupakan sumber yang kaya antibiotik baru, dan di sini kita melaporkan penemuan sebuah alkaloid baru, xinghaiamine A, dari actinomycete laut yang diturunkan Streptomyces
xinghaiensis NRRL B24674 T.
Xinghaiamine Sebuah dimurnikan dari kaldu fermentasi, dan strukturnya telah ditetapkan berdasarkan analisis spektroskopi luas, termasuk 1D dan spektrum 2D
NMR serta spektrometri massa. Xinghaiamine A diidentifikasi menjadi alkaloid novel dengan struktur yang sangat simetris atas dasar kelompok fungsional
sulfoksida, dan sulfoksida mengandung senyawa sejauh pernah dilaporkan dalam mikroorganisme. tes biologis mengungkapkan bahwa xinghaiamine A dipamerkan
spektrum luas kegiatan antibakteri untuk kedua Gram-negatif patogen rumah sakit terus-menerus (misalnya Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa dan Escherichia
coli) satu dan Gram-positif, yang meliputi Staphylococcus aureus dan Bacillus subtilis. Selain itu, xinghaiamine A juga menunjukkan aktivitas sitotoksik ampuh untuk
lini sel kanker manusia MCF-7 dan U-937 dengan IC yang 50 0,6 dan 0,5 m M, masing-masing.

Kutipan: Jiao W, Zhang F, Zhao X, Hu J, Suh JW (2013) Sebuah Novel Alkaloid dari actinomycete Marine-Berasal Streptomyces xinghaiensis dengan luas-Spectrum antibakteri dan sitotoksik Kegiatan. PLoS ONE 8 (10):
e75994. doi: 10.1371 / journal.pone.0075994

Editor: Marie-Joelle Virolle, Universitas Paris Selatan, Perancis

diterima 29 Juni 2013; diterima 19 Agustus 2013; Diterbitkan 1 Oktober 2013

Hak cipta: 2013 Jiao et al. Ini adalah sebuah artikel akses terbuka didistribusikan di bawah persyaratan Lisensi Creative Commons Attribution, yang memungkinkan terbatas
penggunaan, distribusi, dan reproduksi dalam media apapun, asalkan penulis asli dan sumber dikreditkan.

pendanaan: Karya ini didukung oleh Next-Generation BioGreen 21 program Administrasi pembangunan pedesaan, Republik Korea (No. PJ0080932011). Para penulis juga mengakui dukungan keuangan oleh laboratorium
program open kunci negara dari Key Laboratorium Kelautan Bioresources Berkelanjutan Pemanfaatan (No. LMB111002), dan negara kunci laboratorium program open dari Key Laboratory of Bioreactor Teknik, Cina Timur
Universitas Sains dan Teknologi. Penyandang dana tidak memiliki peran dalam desain penelitian, pengumpulan data dan analisis, keputusan untuk mempublikasikan, atau penyusunan naskah.

Bersaing Minat: Para penulis telah menyatakan bahwa tidak ada kepentingan bersaing ada.

* E-mail: xqzhao@dlut.edu.cn

pengantar
Peningkatan prevalensi infeksi yang disebabkan oleh multi-drugresistant (MDR)
patogen bakteri telah menimbulkan keprihatinan di seluruh dunia. Selain
methicillin-resistant Staphylococcus aureus
(MRSA) dan Pseudomonas aeruginosa strain yang menyebabkan infeksi kesehatan
terkait dan masyarakat-onset serius [1,2], Acinetobacter baumanii telah menerima
perhatian meningkat baru-baru ini sebagai patogen rumah sakit terus-menerus
karena meningkatnya dengan cepat jumlah infeksi antara pasien terganggu dan
terluka dan penyebaran global strain dengan resistensi terhadap beberapa antibiotik
[3,4]. Namun, penelitian antibiotik baru untuk mengobati obat tahan A. baumanii masih
sangat terbatas [5]. Oleh karena itu, ada kebutuhan mendesak untuk mencari
antibiotik baru untuk infeksi klinis yang disebabkan oleh bakteri patogen MDR.
dipelajari sebagai produsen antibiotik baru, di mana senyawa yang menarik dengan
kegiatan antibakteri dan kegiatan antikanker dilaporkan diisolasi [14,15].
Dalam penelitian kami sebelumnya, actinobacterium laut yang diturunkan
Streptomyces xinghaiensis diidentifikasi menjadi spesies baru, yang terbukti
menunjukkan spektrum luas kegiatan antibakteri [16]. Disini, kami melaporkan
isolasi, elusidasi struktur, dan aktivitas biologis dari senyawa baru dengan kegiatan
yang menjanjikan terhadap berbagai bakteri patogen, termasuk dua patogen
oportunistik terkenal A. baumanii dan P. aeruginosa. Untuk pengetahuan kita,
senyawa yang mengandung gugus fungsional sulfoxide sejauh pernah diamati
dalam mikroorganisme.

Bahan dan metode

actinomycetes laut yang diturunkan merupakan sumber yang kaya metabolit
sekunder baru yang pelabuhan struktur unik dan memiliki aktivitas biologis yang
beragam seperti antimikroba, antitumor, dan aktivitas imunosupresif [6-8]. Genera
laut obligat
Salinispora dan Marinispora telah ditandai [9,10], dan metabolit sekunder struktural
yang unik dan biologis aktif telah diisolasi, seperti salinosporamide A dengan
sitotoksisitas yang sangat baik dari S. tropica CNB-392 dan marinomycins A dengan
kegiatan antimikroba dan sitotoksik yang kuat dari Marinispora sp. CNQ-140 [11-13].
streptomycetes laut yang diturunkan juga banyak
pernyataan etika
Klinis methicillin-resistant S. aureus ( 5301, 5438 dan 5885)
dan A. baumanii digunakan sebagai strain uji diisolasi dari sampel dahak dari pasien
dan disediakan oleh Rumah Sakit Pertama Afiliasi dari Dalian University Medical.
Penelitian dan protokol menggunakan strain bakteri dari pasien telah disetujui oleh
Komite Etika Rumah Sakit Pertama Afiliasi dari Dalian Medical University, China.
Komite Etik Rumah Sakit Pertama Afiliasi dari Dalian University Medical dibebaskan
kebutuhan untuk informed consent tertulis.

PLoS ONE | www.plosone.org 1 Oktober 2013 | Volume 8 | Issue 10 | e75994


strain mikroba dan media kultur
S. xinghaiensis dipelihara di laboratorium kami sebagai saham gliserol di
2 80 u C dan juga di Cina General pusat mikrobiologi Culture Collection (CGMCC)
dengan nomor aksesi CGMCC
2251. S. aureus ( CGMCC 1,89), B. subtilis ( CGMCC 1,73), E. coli
(CGMCC 1,797), P. aeruginosa ( CGMCC 1,2031) dan C. albicans
(CGMCC 2,538) digunakan sebagai strain uji. Isolat klinis termasuk strain S. aureus ( 5301,dua volume etil asetat (EtOAc) dan terkonsentrasi pada tekanan rendah untuk
5438 dan 5885) dan A. baumanii
digunakan sebagai strain uji diisolasi dari sampel dahak dari pasien, dan prosedur
yang digunakan untuk isolasi strain disetujui oleh Komite Etika dari Rumah Sakit
Pertama Afiliasi dari Dalian University Medical. Komite Etik Rumah Sakit Pertama
Afiliasi dari Dalian University Medical dibebaskan kebutuhan untuk informed consent
tertulis. Bakteri dan ragi ketegangan dipertahankan pada Luria Bertani (LB, tryptone
10 g / l, ekstrak ragi 5 g / l, NaCl 10 g / l) dan Ragi Ekstrak Peptone Dextrose (YPD,
ekstrak ragi 5 g / l, pepton 10 g / l, glukosa 20 g / l) slants pada 4 u C, masing-masing.
Medium padat dibuat dengan menambahkan 1,5% agar ke media cair.
S. xinghaiensis diaktifkan di Tryptic Soytone Broth (TSB, BD Difco TM) menengah
benih dan media produksi dioptimalkan berdasarkan media dijelaskan oleh Wang et
al [17], dan dibuat sebagai berikut: larut pati 20 g / l, kedelai bubuk 25 g / l, (NH 4) 2 BEGITUCH 2 Cl 2 / EtOAc 2: 1, CH 2 Cl 2 / EtOAc 1: 1, CH 2 Cl 2 / EtOAc 1: 2, 100% EtOAc, EtOAc /
4 2 g / l, NaCl 2 g / l, K 2 HPO 4 0,5 g / l dan CaCO 3 5 g / l. medium disiapkan dengan air
suling, dan pH diatur menjadi 7,0 sebelum sterilisasi.
baris sel
Empat baris sel kanker manusia untuk tes sitotoksisitas dibeli dari Komite Budaya
Tipe Koleksi Chinese Academy of Sciences (CTCCCAS, Shanghai, Cina). Nomor
aksesi sel kanker garis payudara manusia MCF-7, manusia hidup sel kanker
SMMC-7721, garis myelogenous sel leukemia akut manusia U-937 dan kecil
paru-paru sel sel kanker manusia NCI-H1688 yang TCHU 74, TCHU 52, TCHu159
dan TCHu154, masing-masing. Semua garis sel yang maitained di RPMI1640
menengah (Invitrogen) ditambah dengan 10% serum janin sapi dan berbudaya pada
37 u C di udara lembab yang mengandung 5% CO 2.
kondisi budaya S. xinghaiensis
Budaya segar S. xinghaiensis dari TSB agar piring diinokulasi ke 250 labu ml
shaker dengan media 50 ml TSB dan dibudidayakan di 30 u C pada 200 rpm selama
dua hari. Budaya benih kemudian diinokulasi ke dalam media produksi (200 ml
media dalam 500 ml kocok labu) dengan tingkat inokulasi 10% dan berbudaya di 30 u C
pada 200 rpm selama 9 hari. resin tiga persen HP-20 (w / v) ditambahkan ke dalam
media produksi di hari ke-3 setelah inokulasi untuk meningkatkan produksi antibiotik.
prosedur eksperimental umum
rotasi optik ditentukan dengan JASCO P-1020 polarimeter digital. The ultraviolet
(UV) Data diperoleh pada spektrofotometer HP8453. Thermo Nicolet spektrometer
digunakan untuk spektroskopi IR scanning. Electrospray ionisasi (ESI) spektrum di
kedua mode ion positif dan negatif diukur pada HP1100 LC-MS spektrometer.
Resolusi tinggi-electrosprayionization spektrum massa (HR-ESIMS) dilakukan pada
QTOF Micro Mass Spectrometer. 1 H NMR, 13 C NMR, DEPT135, HSQC dan HMBC
spektrum direkam pada spektrometer Bruker Muka DPX400 (400 dan 100 MHz
untuk 1 H dan 13 C NMR, masing-masing) menggunakan tetrametilsilan (TMS) sebagai
standar internal. analisis unsur dilakukan pada Vario EL AKU AKU AKU
(Elementar, Jerman).
PLoS ONE | www.plosone.org
Novel Alkaloid dengan Kegiatan Biological
Ekstraksi dan isolasi senyawa antibakteri
Fermentasi kaldu (4 L) termasuk baik miselia dan resin langsung dicampur
dengan dua volume metanol (MeOH) dan terguncang pada 150 rpm selama 120
menit untuk mengekstrak senyawa bioaktif. Kemudian campuran disentrifugasi pada
5000 rpm selama 10 menit, setelah itu supernatan terkonsentrasi pada tekanan
rendah untuk obtainan larutan. Larutan berair kemudian diekstraksi tiga kali dengan
memberikan ekstrak kasar (10 g).
Ekstrak kasar itu pertama kali dianalisis menggunakan sistem HPLC (Waters,
USA) yang dilengkapi dengan kolom Waters Symmetry C18 (4,6 mm 6 250 mm, 5 m m).
Fase gerak terdiri dari H 2 O / asetonitril (ACN) dengan 0,1% TFA ditambahkan ke
kedua pelarut dan langkah gradien elusi diterapkan sebagai berikut: 0-15 menit,
5-100% ACN; 15-25 menit, 100% ACN. Laju aliran adalah 0,85 ml / menit dan elusi
dipantau oleh penyerapan UV pada 254 nm.
Ekstrak kasar kemudian dengan kromatografi kolom (CC) silika gel
(300-400 mesh, Qingdao Kelautan
Pabrik Kimia, Qingdao, Cina), dan dielusi dengan gradien bertahap dari CH 2 Cl 2, EtOAc
dan MeOH (100% CH 2 Cl 2,
MeOH 2: 1, EtOAc / MeOH 1: 1, EtOAc / MeOH 1: 2, dan akhirnya 100% MeOH, v /
v), masing-masing, untuk memperoleh sembilan fraksi (Fr. 01-Fr.09). fraksinasi
bioassay-dipandu dari ekstrak kasar mengungkapkan bahwa senyawa antibakteri
terhadap S. aureus ada di fraksi Fr.04, Fr.06, Fr.07 dan Fr.09 (174,3,
250,3, 186,5 dan 145,7 mg, masing-masing), yang kemudian difraksinasi dengan
lampu kilat C18 kromatografi kolom eluting dengan 30%, 60%, 80% dan 100%
campuran MeOH / air untuk memberikan beberapa sub-fraksi. Sub-fraksi (Fr.04-2,
Fr.06-3, Fr.07-2 dan Fr.09-4) mengandung senyawa antibakteri kemudian selanjutnya
dimurnikan dengan semi-preparatif fase terbalik HPLC yang dilengkapi dengan kolom
C18 (Waters simetri Prep TM C18 7,8 mm 6 300 mm, 7 m m, 3 ml / menit) untuk
memberikan senyawa E (bernama kemudian sebagai xinghaiamine A), D1, D2, D3,
C1, C2, B1 dan B2 (Untuk prosedur isolasi rinci, lihat Gambar. S1).
20 + 10,8 u ( c 0,245,
Xinghaiamine A. Brown, minyak kental; [ Sebuah] D
MeOH); UV (MeOH) l max (log e) 232,5 (3,88), 295,3 (1,15),
320,6 (0,08) nm; IR (MeOH) l max 2924, 2852, 1725, 1656, 1561,
1465, 1382, 1280, 1233, 1082 cm 2 1; 1 H dan 13 C NMR, lihat Tabel 1; ESIMS positif
menunjukkan [M + Na] + puncak pada m / z 747,5 dan [MH] + puncak di m / z 723,2;
HR-ESIMS m / z 747.3390 ([M + Na] +, calcd 747,3385 untuk C 50 H 48 N 2 OSNa).
Kegiatan tes biologis
kegiatan antimikroba xinghaiamine A melawan S. aureus
(CGMCC 1,89), B. subtilis ( CGMCC 1,73), E. coli ( CGMCC
1,797), P. aeruginosa ( CGMCC 1,2031), C. albicans ( CGMCC 2,538) dan
methicillin-resistant S. aureus ( MRSA 5301, 5438 dan 5885) serta A. baumanii diselidiki.
Xinghaiamine A dilarutkan dalam MeOH untuk menguji MIC (minimal
yg menghalangi
konsentrasi, didefinisikan sebagai konsentrasi terendah xinghaiamine A menghambat
pertumbuhan terlihat strain test) nilai-nilai, yang dicapai dengan menggunakan
metode seperti yang dijelaskan sebelumnya [18]. Tetrasiklin dan vankomisin
dipekerjakan sebagai kontrol positif untuk strain Model dan MRSA isolat
masing-masing dan MeOH dipekerjakan sebagai kontrol negatif.
Itu in vitro kegiatan sitotoksik xinghaiamine A melawan MCF-
7, SMMC-7721, U-937 dan NCI-H1688 dievaluasi dengan menggunakan metode MTT
(Methyl-Thiazol-Tetrozolium) [19]. Secara singkat, 200 m L suspensi sel diinokulasi ke
piring 96-baik dengan konsentrasi akhir 10 5 sel / ml dan berbudaya selama 24 jam.
Setelah itu, 50 m l dari xinghaiamine A dilarutkan dalam DMSO disesuaikan dengan
berbagai
2 Oktober 2013 | Volume 8 | Issue 10 | e75994
 Novel Alkaloid dengan Kegiatan Biological

Tabel 1. Data NMR spektroskopi (CD 3 OD) dari xinghaiamine A Sebuah

1 H- 1 H nyaman
Posisi d C, mengetik d H ( J di Hz) HMBC

1 107.7 CH 6.46, s 3 3, 5, 9

2 143.2 C

3 108,3 CH 6,76, m 1 1, 5, 11

4 138,3 C

5 120,4 C

6 134,5 C

7 120,0 CH 8.17, m 9 5, 9, 12, 19

8 140,2 C

9 116,1 CH 8.15, s 7 1, 5, 7, 19

10 122,2 C

11 120,7 CH 7.28, m 12 3, 5, 6

12 125,8 CH 7.28, m 11 4, 5, 7

13 27,2 CH 2 1.80, m 14 15, 21, 23, 24

14 27,5 CH 2 1,92, m 13, 15 22, 23

15 53,4 CH 3,09, t (8) 14, 23 2, 13, 18, 22

16 51,8 CH 2 2,85, t (8) 17 2, 18

17 22,3 CH 2 1,49, m 16 19, 21, 23

18 37,1 C

19 37,1 C

20 28,8 CH 2 1,29, s 8, 18, 22, 25

21 61,2 C

22 34,3 C

23 24,8 CH 2.12, d (12) 15 13, 14, 19, 21

24 20,9 CH 3 1,33, s 13, 21, 23

25 17,3 CH 3 1,23, s 8, 18, 20

Data direkam di CD 3 OD, 400 MHz untuk 1 H-NMR dan 100 MHz untuk 13 C-NMR. Sinyal ditugaskan dalam kombinasi dengan 1 H- 1 H NYAMAN, HSQC dan HMBC. doi: 10.1371 / journal.pone.0075994.t001

konsentrasi ditambahkan ke setiap baik. Setelah paparan xinghaiamine A selama 48
jam, 20 m L dari 5 mg / solusi MTT ml ditambahkan ke masing-masing dengan baik,
dan piring diinkubasi selama 4 jam pada 37 u C. Kemudian, 150 m l DMSO
ditambahkan dalam setiap sumur. Absorbansi yang disebabkan oleh kristalisasi
formazan tercatat sebesar 550 nm menggunakan scanning mutiwell
spektrofotometer. Pengukuran diulang tiga kali, dan nilai rata-rata diperoleh.
Viabilitas sel dihitung dengan menggunakan rumus berikut: viabilitas sel (%) = (OD 550
nm kelompok diobati dengan xinghaiamine A / OD 550 nm dari kelompok yang tidak
diobati) 6 100%. Cisplatin dan DMSO dipekerjakan sebagai kontrol positif dan
negatif, masing-masing.
xinghaiamine A dan menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan lebih
mudah dimurnikan. Dengan demikian kita kemudian fokus pada senyawa ini dalam
isolasi skala besar dan pemurnian.
analisis struktur xinghaiamine A
Xinghaiamine A diisolasi sebagai minyak kental berwarna coklat. Modus
positiveand negatif-ion ESIMS analisis xinghaiamine A ( m / z
747,5 [M + Na] +; m / z 723,2 [MH] +) menunjukkan berat molekul 724 Da (Gambar.
S2). Modus positif-ion data SDM-ESIMS dari xinghaiamine A dipamerkan [M + Na] +
ion molekul puncak di m / z
747.3390 (dihitung 747,3385) konsisten dengan rumus molekul C 50 H 48 N 2 OS, yang
membutuhkan 27 derajat ketidakjenuhan (Gambar. S3). Pita serapan karakteristik

hasil
Analisis ekstrak kasar fermentasi
Ekstrak kasar dianalisis dengan HPLC dan ditemukan bahwa senyawa dengan
waktu retensi di 11,18, 11,32, 11,62, 12,16,
13,36, 13,62, 13,92 dan 16,64 menit mungkin milik keluarga yang sama karena
penyerapan UV yang sama (Gambar. 1), yang kami berturut-turut bernama B1, B2,
C1, C2, D1, D2, D3 dan E, sementara. Untuk mengevaluasi aktivitas antibakteri
senyawa ini, sebuah prebioassay dilakukan dengan mengumpulkan sampel setiap
menit dan mempekerjakan S. aureus sebagai indikator setelah sekitar 20 mg ekstrak
kasar menjadi sasaran HPLC analitis. Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas
antibakteri S. xinghaiensis terutama karena keluarga senyawa ini, terutama senyawa
E, yang kami beri nama
pada 232, 295, dan 320 nm dari spektrum UV menunjukkan bahwa kromofor cincin
terkonjugasi naftalena (maxima di 218, 261, dan 331 nm) terlibat dalam
xinghaiamine A. Penyerapan IR band di 1082 cm 2 1 menunjukkan adanya gugus
fungsional sulfoxide (Gambar. S4), yang juga didukung oleh kandungan sulfur dari
4,3% dalam hasil analisis unsur (Gambar. S10). Itu 13 C NMR (Tabel 1) dalam
kombinasi dengan percobaan DEPT135 dan spektrum 2D NMR dimiliki 25 sinyal
karbon, termasuk dua metil, lima methylenes, delapan methines, dan sepuluh karbon
kuartener, yang mengungkapkan struktur molekul yang sangat simetris xinghaiamine
A atas dasar dari bagian sulfoksida.
Semua proton ditugaskan untuk karbon oleh percobaan HSQC. Untuk setiap
bagian, interpretasi 13 C NMR dan

PLoS ONE | www.plosone.org 3 Oktober 2013 | Volume 8 | Issue 10 | e75994


Gambar 1. Produksi dari keluarga senyawa dengan spektrum UV unik dengan S. xinghaiensis. 1a, profil HPLC dari ekstrak kasar fermentasi yang dihasilkan oleh S. xinghaiensis. elusi dipantau pada 254
nm pada laju alir 0,85 ml / menit. 1b, penyerapan UV dari keluarga senyawa. Senyawa E disebut sebagai xinghaiamine A. doi: 10.1371 / journal.pone.0075994.g001
Data spektrum DEPT menunjukkan bagian aromatik memiliki dua belas karbon,
termasuk enam methines dan enam karbon kuaterner, akuntansi untuk sepuluh dari
empat belas derajat ketidakjenuhan. interpretasi lebih lanjut dari 1 H NMR spektrum
xinghaiamine A menyumbang enam proton aromatik pada d 6.46 (s), 6,76 (m), 7,29
(m), 7,27 (m),
8.15 (s), dan 8,17 (m). Analisis NMR dengan kedua NYAMAN (H1 / H3, H7 / H9, H11 / H12) dan
spektrum HMBC (H1 untuk C3, H1 untuk C5, H1 untuk C9, H3 untuk C1, H3 untuk C5, H3 untuk
C11, H7 ke C5 , H7 untuk C9, H7 untuk C12, H7 untuk C19, H9 untuk C1, H9 untuk C5, H9
untuk C7, H9 untuk C19, H11 untuk C3, H11 untuk C5, H11 untuk C6, H12 untuk C4, H11 untuk
C5,
Gambar 2. Usulan struktur kimia xinghaiamine A.
doi: 10.1371 / journal.pone.0075994.g002
PLoS ONE | www.plosone.org
Novel Alkaloid dengan Kegiatan Biological
H12 untuk C7) menunjukkan korelasi yang menggambarkan bahwa proton dan
karbon sinyal-sinyal ini adalah komponen dari cincin naftalena diganti pada posisi
C-2, C-8 dan C-4, C-6 (cincin konjugat), masing-masing.
Sisanya fragmen alifatik membutuhkan lima situs lain ketidakjenuhan itu
disimpulkan memiliki lima atau empat cincin dengan berbagi cincin dengan bagian
aromatik. Interpretasi 13 C NMR dan data spektroskopi DEPT menunjukkan bahwa
bagian alifatik memiliki tiga belas karbon dan delapan belas proton, indikasi dari dua
metil, lima methylenes, dua methines, dan empat karbon kuaterner (Tabel 1). Itu d C
37,1 (C-19, -C) dan d C 140,2 (C-8, -C) didirikan berada di persimpangan fragmen
aromatik dan alifatik dengan korelasi HMBC dari H-20 sampai C-8, H-25 untuk C-
8, H-7 hingga C-19 serta H-9 sampai C-19. Juga, korelasi HMBC fromH-15 andh-16
ke C-2 membuktikan bahwa C-2 diganti withn. Jelas, sinyal proton pada d H 3,09
(C-15, -CH) dan d H 2,85 (C-16, -CH 2) yang terhubung ke N dengan medan magnet
yang relatif rendah. Itu 1 H- 1 H puncak NYAMAN lintas dari H-13 / H-14, H-14 / H-15
dan H-16 / H-17 menyarankan bahwa d H 1,80 (C-13, -CH 2) dan d H 3,09 (C-15, -CH)
terkait dengan d H 1,92 (C-14, -CH 2), d H 1,49 (C-17 CH 2) terkait dengan d 2.85 (C-16,
-CH 2), masing-masing. d C 61.2 (C-
21, -C) didirikan untuk dihubungkan dengan bagian sulfoxide karena pergeseran
kimia terendah unik dalam fragmen alifatik, yang juga konsisten dengan karakteristik
kelompok fungsional sulfoksida. Struktur fragmen alifatik lainnya didirikan atas dasar 1
H- 1 H nyaman (H15 / H23) dan korelasi HMBC dari (Lihat Tabel 1, Gambar. 2, 3 dan
Gambar. S5, S6, S7, S8, S9).
tes antimikroba
Xinghaiamine A menunjukkan spektrum luas kegiatan antibakteri terhadap
beberapa strain tes. Ini menunjukkan aktivitas antibakteri unggul S. aureus, B. subtilis, E.
coli, dan A. baumanii dengan nilai MIC 0,69, 0,35 0,17, 2,76 dan 11,04 m M,
masing-masing, yang
4 Oktober 2013 | Volume 8 | Issue 10 | e75994
 Novel Alkaloid dengan Kegiatan Biological

Tabel 2. kegiatan antimikroba xinghaiamine A (MIC, m M) terhadap strain uji.

MIC ( m M) Sebuah

xinghaiamine A b tetrasiklin c vankomisin c

S. aureus 0,69 4,50 2d

B. subtilis 0,35 2,25 2

E. coli 0,17 1.13 2

A. baumanii 2,76 9.0 2

P. aeruginosa 11.04 4,50 2

C. albicans . 176,64 2 2

MRSA 5301 5.52 2 0,35

MRSA 5438 2,76 2 0,18

MRSA 5885 5.52 2 0.70

Sebuah MIC mewakili konsentrasi senyawa termurah tampaknya menghambat pertumbuhan mikroorganisme.
b Xinghaiamine A dilarutkan dalam MeOH untuk uji MIC dan MeOH digunakan sebagai kontrol negatif. c Tetrasiklin
dan vankomisin dipekerjakan sebagai kontrol positif untuk bakteri patogen ( S. aureus, B. subtilis, E. coli, A.
baumanii dan P. aeruginosa) dan MRSA klinis isolat (5301, 5438 dan 5885), masing-masing. d '' 2 ''
Menunjukkan bahwa kontrol positif tidak diukur untuk strain uji. doi: 10.1371 / journal.pone.0075994.t002

Diskusi

Gambar 3. Terpilih 1 H- 1 H NYAMAN (garis tebal) dan HMBC (panah merah) korelasi
xinghaiamine A.
doi: 10.1371 / journal.pone.0075994.g003
jauh lebih rendah dibandingkan tetrasiklin. Namun, penghambatan xinghaiamine A
ke P. aeruginosa tidak sebaik seperti yang tetrasiklin. Xinghaiamine A juga
menunjukkan aktivitas yang cukup untuk MRSA klinis isolat dengan nilai MIC 2,76
dan 5,52 m M, meskipun tidak begitu baik sebagai vankomisin antibiotik yang kuat.
Penghambatan terhadap bakteri patogen dan MRSA klinis isolat dari xinghaiamine A
menunjukkan bahwa ia memiliki potensi untuk menjadi antibiotik yang efektif untuk
menangani patogen resistan terhadap obat, terutama S. aureus dan A. baumanii. Tidak
ada aktivitas antijamur yang jelas untuk C. albicans dari xinghaiamine A ditemukan
ketika diuji pada konsentrasi hingga 176,64 m M (Tabel 2).
The sulfoxide mengandung produk alami yang sangat terbatas di alam, dan saat
ini secara alami terjadi senyawa sulfoksida umumnya peptida turunan dari tanaman
terestrial termasuk kecambah Brussels ( S- metil-sistein sulfoksida) [20], dan Allium
siculums (S- alk sulfoxide (en) il-L-sistein, S- n-butil-sistein sulfoksida) [21-23], serta
langka metabolit sekunder laut dari invertebrata laut (spons laut Pseudoceratina
purpurea, ascidian Polycitor sp., dll), yang meliputi psammaplin N, eudistomin K,
lehualides J, varacins B dan D, eudistomidin E dan aplisulfamines [24-29]. Namun,
sejauh ini tidak ada antibiotik sulfoxide telah dilaporkan diproduksi oleh
mikroorganisme. The sulfoxide bagian yang disajikan dalam xinghaiamine A adalah
belum pernah terjadi sebelumnya di metabolit dari actinomycete laut. senyawa
sulfoksida memiliki broadspectrum kegiatan biologis, termasuk antimikroba sangat
baik, kegiatan pesticidic dan antitumor, dan sintesis kimia senyawa sulfoksida juga
telah menimbulkan kepentingan peneliti [30]. Penemuan xinghaiamine A sebagai
senyawa sulfoksida pertama dari laut Streptomyces sp. juga mempromosikan
gagasan bahwa senyawa sulfoksida dari invertebrata laut juga mungkin memiliki asal
mikroba.
Xinghaiamine A dipamerkan spektrum luas kegiatan antibakteri terhadap
berbagai strain diuji, termasuk A. baumanii, yang

Tabel 3. In vitro sitotoksisitas dari xinghaiamine A (IC 50 m M) terhadap empat

baris sel kanker manusia.

In vitro tes sitotoksisitas

In vitro tes sitotoksisitas dari xinghaiamine A melawan empat baris sel kanker Sitotoksisitas (IC 50, m M)

manusia mengungkapkan bahwa xinghaiamine A dipamerkan spektrum luas

MCF-7 SMMC-7721 U-937 NCI-H1688
kegiatan anti-proliferasi yang cukup (Tabel 3). Dari baris sel empat, aktivitas unggul
xinghaiamine A melawan U-937 diamati, dengan IC minimum 50 nilai 0,5 m M. Baik Xinghaiamine A Sebuah 0,6 6.3 0,5 2.2

kegiatan sitotoksik xinghaiamine A juga diamati agaist MCF-7 andNCI-H1688, cisplatin b 4.2 8,5 13.5 14,6

dengan IC 50 nilai-nilai yang jauh lebih rendah dibandingkan dengan kontrol.

Sebuah Xinghaiamine A dilarutkan dalam DMSO untuk IC yang 50 tes dan DMSO digunakan sebagai kontrol
Sebaliknya, aktivitas sebanding terhadap SMMC7721 dari xinghaiamina A dan
negatif. b Cisplatin dipekerjakan sebagai kontrol positif bagi sel tumor manusia. doi: 10.1371 /
cisplatin diamati (Tabel 3). journal.pone.0075994.t003

PLoS ONE | www.plosone.org 5 Oktober 2013 | Volume 8 | Issue 10 | e75994

 Novel Alkaloid dengan Kegiatan Biological

tetap menjadi salah satu patogen utama kalikan tahan bakteri untuk infeksi spektrometer dari 400 MHz untuk 13 C NMR menggunakan TMS sebagai standar internal.
kesehatan terkait dan masyarakat-onset serius. Isolasi xinghaiamine A tampaknya (TIF)
memberikan potensi kuat untuk memerangi munculnya mikroba patogen
multi-drugresistant. Selain itu, dibandingkan dengan cisplatin, xinghaiamine A juga
Gambar S6 1 spektrum H NMR dari xinghaiamine A.
ditampilkan kegiatan sitotoksik menjanjikan terhadap serangkaian lini sel kanker
Senyawa dilarutkan dalam CH 3 OD dan data tercatat pada spektrometer Bruker Muka
manusia. Baru-baru ini, perkembangan pesat resistensi terhadap beberapa obat
DPX400 dari 100 MHz untuk 1 H NMR menggunakan TMS sebagai standar internal.
kemoterapi tumor mendesak untuk mencari obat baru dan hasil di atas menunjukkan
(TIF)
bahwa xinghaiamine A bisa menjadi potensi yang berguna secara klinis antitumor
obat untuk memerangi dengan multi-obat lini sel kanker tahan meningkat, dan studi
saat ini disediakan dasar untuk lebih mengembangkan senyawa novel ini untuk Gambar S7 1 H- 1 H spektrum COZY dari xinghaiamine A.
terapi antikanker. (TIF)

spektrum Gambar S8 HSQC dari xinghaiamine A.

(TIF)

spektrum Gambar S9 HMBC dari xinghaiamine A.

(TIF)
informasi pendukung
analisis tokoh S10 Dasar dari xinghaiamine A. Percobaan dilakukan dua kali yang
Gambar S1 ALUR isolasi dan pemurnian senyawa antibakteri dari S. xinghaiensis.
digambarkan sebagai E1 dan E2, masing-masing. (TIF)

(TIF)

spektrum Gambar S2 ESI-MS dari xinghaiamine A, (a) modus positif-ion (b) mode
negatif-ion. Ucapan Terima Kasih
(TIF)
Para penulis berterima kasih kepada Profesor Hans-Pieter Fiedler di Universitas Tuebingen,
Modus ion Gambar S3 Positif dari HR-ESIMS spektrum xinghaiamine A. Jerman identifikasi xinghaiamine A senyawa keluarga sebagai senyawa baru mungkin. Para
penulis juga mengakui diskusi membantu dengan Dr. Shuangjun Lin di Shanghai Jiao Tong
(TIF) University, Cina untuk elusidasi struktur.

spektrum Gambar S4 IR dari xinghaiamine A.

(TIF)
penulis Kontribusi
Gambar S5 13 C NMR dan DEPT135 spektrum xinghaiamine A. Senyawa dilarutkan Disusun dan dirancang percobaan: XZ WJ. Melakukan percobaan: WJ. Menganalisis data: JH
dalam CH 3 OD dan data tercatat pada Bruker Muka DPX400 WJ XZ. Kontribusi reagen / bahan / alat analisis: XZ JS FZ. Menulis kertas: WJ XZ.

Referensi
1. de Kraker MEA, Wolkewitz M, Davey PG, Grundmann H (2011) dampak klinis resistensi antimikroba di 14. Raju R, Piggott AM, Barrientos D, Leticia X, Khalil Z, et al. (2010) Heronapyrroles A-C: farnesylated
rumah sakit Eropa: tingginya tingkat kematian dan lama tinggal di rumah sakit yang terkait dengan 2-nitropyrroles dari laut Australia berasal Streptomyces sp. Org Lett 12: 5158-5161.
methicillin-resistant Staphylococcus aureus
infeksi aliran darah. Antimicrob Agen Chemother 55: 1598-1605. 15. Kondratyuk TP, Taman EJ, Yu R, van Breemen RB, Asolkar RN, et al. (2012) phenazine laut Novel sebagai
2. Xu Z, Fang X, Wood TK, Huang ZJ (2013) Pendekatan sistem-level untuk menyelidiki Pseudomonas potensi kemopreventif kanker dan agen antiinflamasi. Mar Obat 10: 451-464.
aeruginosa pembentukan biofilm. PLoS ONE 8: e57050. doi: 10.1371 / journal.pone.0057050.
16. Zhao XQ, Li WJ, Jiao WC, Li Y, Yuan WJ, et al. (2009) Streptomyces xinghaiensis
3. Peleg AY, Seifert H, Paterson DL (2008) Acinetobacter baumanii: munculnya sp. November, terisolasi dari sedimen laut. Int J Syst Evol Microbiol 59: 2870-
patogen sukses. Clin Microbiol Rev 21: 538-582. 2874.
4. McConnell MJ, Actis L, Pacho'n J (2013) Acinetobacter baumanii: manusia 17. Wang F, Kong R, Liu B, Jing Zhao, Rongguo Qiu, et al. (2012) karakterisasi fungsional dari gen tauO, Tauk,
infeksi, faktor yang berkontribusi terhadap patogenesis dan hewan model. Janin Microbiol Rev 37: dan tauI dalam biosintesis tautomycetin. J Microbiol 50: 770-776.
130-155.
5. Lee KH, Kim KW, Rhee KH (2010) Identifikasi Streptomyces sp. Kh-29,
18. Wang J, Galgoci A, Kodali S, Herawati KB, Jayasuriya H, et al. (2003) Penemuan molekul kecil yang
yang menghasilkan zat antibiotik memproses aktivitas penghambatan terhadap multidrug-resistant Acinetobacter
menghambat pembelahan sel dengan memblokir FtsZ, target terapi baru antibiotik. J Biol Chem 278:
baumanii. J Microbiol Biotechnol 20: 1672-1676.
44424-
6. Manivasagan P, Venkatesan J, Sivakumar K, Kim SK (2013) Kelautan metabolit actinobacterial: Status dan
44.428.
perspektif masa depan. Microbiol Res 168: 311-332.
19. Burres NS, Clement JJ (1989) aktivitas antitumor dan mekanisme kerja produk alam laut baru mycalamide-A
dan -B dan onnamide. Kanker Res 49: 2935-2940.
7. Zotchev SB (2012) actinomycetes Kelautan sebagai sumber muncul untuk jaringan pipa pengembangan
obat. J Biotechnol 158: 168-175.
20. Marks HS, Hilson JA, Leichtweis HC, Stoewsand GS (1992) S- methylcysteine
8. Blunt JW, Copp BR, Keyzers RA, Munro MHG, Prinsep MR (2013) produk alami laut. Nat Prod Rep 30:
sulfoxide di Brassica sayuran dan pembentukan metil methanethiosulfinate dari kubis Brussel. J Agric
237-323.
Food Chem 40: 2098-2101.
9. Maldonado LA, Fenical W, Jensen PR, Kauffman CA, Mincer TJ, et al. (2005)
21. Kubec R, Kim S, McKeon DM, Musah RA (2002) Isolasi S- n-butylcysteine
Salinispora Arenicola gen. November, sp. November dan Salinispora tropica sp. November, wajib
sulfoksida dan enam n-butil yang mengandung thiosulfinates dari Allium siculum. J Nat Prod 65: 960-964.
actinomycetes laut milik keluarga Micromonosporaceae. Int J Syst Evol Microbiol 55: 1759-1766.

22. Rose P, Whiteman M, Moore PK, Zhu YZ (2005) Bioactive S- alk (en) sistein yl
10. Jensen PR, Mincer TJ, Williams PG, Fenical W (2005) keanekaragaman actinomycete Kelautan dan
metabolit sulfoxide dalam genus Allium: kimia agen terapi yang potensial. Nat Prod Rep 22: 351-368.
penemuan produk alami. Antonie Van Leeuwenhoek 87: 43-48.
11. feling RH, Buchanan GO, Mincer TJ, Kauffman CA, Jensen PR, et al. (2003) Salinosporamide A: A Sangat
23. Hornickova J, Velisek J, Ovesna J, Stavelikova H (2009) Distribusi S-
sitotoksik proteasome inhibitor dari sumber mikroba baru, bakteri laut dari genus baru Salinospora. Angew
alk sulfoxides (en) il-L-sistein dalam bawang putih ( Allium sativum L.). Republik J Food Sci 27: 232-235.
Chem Int Mengedit 42: 355-357.

12. Williams PG, Buchanan GO, feling RH, Kauffman CA, Jensen PR, et al. (2005) salinosporamides sitotoksik 24. Graham SK, Lambert LK, Pierens GK, Hooper JNA, Garson MJ (2010) Psammaplin metabolit baru dan lama:

baru dari actinomycete laut Salinispora tropica. sebuah studi NMR yang melibatkan kimia sulfur kiral. Aust J Chem 63: 867-872.

J Org Chem 70: 6196-6203.

13. Kwon HC, Kauffman CA, Jensen PR, Fenical W (2006) Marinomycins A-D, antitumor-antibiotik dari kelas 25. Danau RJ, Brennan MM, Blunt JW, Munro MHG, Pannell LK (1988) Eudistomin K sulfoxide - sebuah
struktur baru dari actinomycete laut dari genus baru ditemukan '' Marinispora ''. J Am Chem Soc 128: sulfoxide antivirus dari ascidian Selandia Baru
1622-1632. sigillinoides Ritterella. Tetrahedron Lett 29: 2255-2256.

PLoS ONE | www.plosone.org 6 Oktober 2013 | Volume 8 | Issue 10 | e75994


26. Barber JM, Quek NCH, Leahy DC, Miller JH, Bellows DS, et al. (2011) Lehualides E 2 K, metabolit sitotoksik
dari spons laut Tonga Plakortis
sp. J Nat Prod 74: 809-815.
27. Makarieva TN, Stonik VA, Dmitrenok AS, Grebnev BB, Isakov VV, et al. (1995) Varacin dan tiga polysulfides
antimikroba laut baru dari ascidian fareastern Polycitor sp. J Nat Prod 58: 254-258.
28. Murata O, Shigemori H, Ishibashi M, Sugama K, Hayashi K, et al. (1991) Eudistomidins E dan F, baru b- alkaloid
carboline dari berkulit laut okinawan Eudistoma glaucus. Tetrahedron Lett 32: 3539-3542.
PLoS ONE | www.plosone.org
Novel Alkaloid dengan Kegiatan Biological
29. Aiello A, Fattorusso E, Imperatore C, Luciano P, Menna M, et al. (2012) Aplisulfamines, baru sulfoksida yang
mengandung metabolit dari Aplidium berkulit: stereokimia mutlak pada sulfur dan karbon atom kiral
ditugaskan melalui kombinasi asli dari spektroskopi dan metode komputasi. Mar Obat 10: 51-63.
30. Prilezhaeva EN (2000) Sulfone dan sulfoxides dalam total sintesis dari senyawa alami biologis aktif. Ulasan
Rusia Kimia 69: 367-408.
7 Oktober 2013 | Volume 8 | Issue 10 | e75994