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Efecto de la temperatura, tiempo y la concentracin de la enzima comercial (Viscozyme

L.) sobre el rendimiento de extraccin de aceite a partir de semillas de girasol


(Helianthus annuus L.).
Effect of temperatura, time and concentration of comercial enzyme (Viscozyme L.) on
the efficiency of extraction of oil from sedes of sunflower (Helianthus annuus L.).

Noem Len Roque, Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo, Lambayeque Per,
nleonr@unprg.edu.pe; Tarcila Amelia Cabrera Salazar, Universidad Nacional Pedro
Ruiz Gallo, Lambayeque Per; Luis Alberto Nez Alejos, Universidad Nacional de
Jan, Cajamarca Per, secretariageneral@unj,edu.pe.

RESUMEN
Se evalu los efectos de un tratamiento enzimtico sobre el rendimiento de extraccin de
aceite de semillas de girasol (Helianthus annuus L.), con la Enzima comercial Viscozyme
L. complejo multienzimtico producido por Novozyme. Se realiz la determinacin de la
composicin qumica proximal, se acondicion a 5.9 de pH y se ajust la relacin
slido/lquido a 1:6 (solucin acuosa de 60% de humedad) para el proceso de extraccin,
se evalu el rendimiento en funcin de la temperatura, tiempo y concentracin de enzima,
mediante un diseo experimental trifactorial 3*3*3 con tres repeticiones y la Prueba
Tukey al 5% y se determin las propiedades fisicoqumicas (ndice de acidez, yodo,
perxidos, saponificacin, refraccin y densidad) y sensoriales del aceite obtenido. Los
resultados indican un 40.30 % de aceite, 23.75% de protena y 8.43 de fibra, para evaluar
el rendimiento las condiciones ptimas fueron: temperatura de 50 C, tiempo de hidrlisis
enzimtica de 4 horas y concentracin de enzima de 0.8 % con 52.5 % de aceite. El aceite
resultante tuvo un peso especfico a 20 C (g/cc) de 0.921, ndice de refraccin (20 C) de
1.4736, ndice de acidez (mg de KOH/g de aceite) de 1.85, cidos grasos libres de 0.93,
ndice de yodo de 130g I/100g de grasa, ndice de saponificacin de 189 mg KOH g-1,
ndice de perxidos 3.3 meq Kg-1, y las caractersticas sensoriales se mantuvo estable.
Se concluye que la incorporacin de un tratamiento enzimtico es una alternativa factible
para extraer el aceite de semillas de girasol bajo condiciones suaves de proceso mejorando
el rendimiento de extraccin.

Palabras claves: Tratamiento enzimtico, Viscozyme, rendimiento de extraccin.


ABSTRACT
It was evaluated the effects of enzymatic treatment on the extraction yield of sunflower
seed oil (Helianthus annuus L.), with the commercial enzyme Viscozyme L. multienzyme
complex produced Novozyme. Was performed to determine the chemical composition
proximal was conditioned at pH 5.9 and adjusted the solid / liquid relation of 1:6 (aqueous
solution of 60% humidity) for the extraction process was evaluated based on performance
temperature, time and enzyme concentration, using a three-factor experimental design 3 *
3 * 3 with three replicates and Tukey test at 5% and was determined physicochemical
properties (acid, iodine, peroxide, saponification, refraction and density) sensory and the
oil obtained. The results indicate a 40.30% oil, 23.75% protein and 8.43 of fiber, to
evaluate the performance optimal conditions were: temperature 50 C, enzymatic
hydrolysis time of 4 hours and enzyme concentration of 0.8%. with 52.5% of oil. The
resulting oil had specific gravity at 20 C (g / cc) in 0921, refractive index (20 C) of
1.4736, acid index (mg KOH / g oil) of 1.85, free fatty acids of 0.93, iodine index 130g
I/100g of oil, saponification index 189 mg KOH g-1, peroxide index 3.3 meq kg-1, and
sensory characteristics remained stable. we conclude that incorporation of an enzymatic
treatment is a feasible alternative to extract oil sunflower seed under mild conditions by
improving the processing efficiency of extraction.

Keywords: Enzyme treatment, Viscozyme, extraction yield.

I. INTRODUCCIN
Actualmente la extraccin de aceite se realiza en forma convencional y aplicando un
proceso de refinado que no conserva sus caractersticas nutritivas. Una de las formas de
mejorar esta tecnologa es realizando extraccin por mtodos enzimticos utilizando una
tecnologa limpia siendo una buena alternativa para los procesos industriales ya que es
ms simple y barato, no requiere disolventes orgnicos ni altas temperaturas. (Rubio,
2010).
Estas ventajas llevan a utilizar la tecnologa enzimtica para extraer el aceite de las
semillas de girasol evitando utilizar disolventes y altas temperaturas que destruyen los
antioxidantes y la vitamina E, son una gran fuente de cidos grasos insaturados y es una
fuente de Vitamina E, con gran potencial antioxidante. (Graciani, 2006).
Las semillas de girasol presenta alto contenido de aceite en su composicin de 35 a 54 %
como se muestra en la tabla 1 (Lpez, 2002).

Tabla 1: Composicin media de las principales semillas oleaginosas


Oleaginosa Aceite Protena Carbohidratos Fibra Cenizas
Porcentaje (%)
Algodn 15-22 16-22 22-26 4.5 2
Cacahuate 36-56 16-36 10-20 3 3
Crtamo 25-40 11-24 18.5 22 3
Colza 33-48 30-57 23 6 5
Girasol 35-54 18-25 18-22 21 3
Lino 37-42 20-24 15-29 5-9 3
Ricino 45-55 12-16 3-7 23-27 2
Soja 18-23 35-44 32-35 4.3-7.6 5

Fuente: Boyeldieu, 1991: Salunkhe et al. 1992. Citado por Lpez, 2002

Segn los estudios esta tecnologa mejora los rendimientos de aceite que la extraccin
realizada con tratamientos trmicos.
La industria extractiva de aceites comestibles, enfrenta problemas (el consumo de tiempo
en el proceso y la eficiencia de la extraccin) debido a la compleja naturaleza qumica. La
importancia y la demanda de estos productos han propiciado el desarrollo de nuevas
propuestas biotecnolgicas, siendo una de ellas la aplicacin de enzimas, como una
alternativa para minimizar estos problemas, adems de obtener productos ms naturales.
Las hidrolasas que tienen la capacidad de degradar los polisacridos que constituyen la
pared celular de los tejidos vegetales tales como la celulosa, la hemicelulosa y la pectina,
reciben en la actualidad mayor atencin principalmente en la industria alimentaria, por lo
que los preparados celuloliticos comerciales y los preparados con actividad mltiple, se
han aplicado con xito para facilitar y aumentar la liberacin de productos de inters y
para facilitar el proceso tecnolgico mediante la pre digestin enzimtica de la pared
celular de los tejidos vegetales.

II. MATERIALES Y MTODOS


Lugar de ejecucin
El presente trabajo de investigacin se realiz en los laboratorios de fisicoqumica y
laboratorio de alimentos de la Facultad de Ingeniera Qumica e Industrias Alimentarias
de la Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo Lambayeque.
Materia prima
Semillas de girasol (Helianthus annuus L.) del Departamento de Lambayeque.
Enzima
El enzima utilizado fue Viscozyme (R) L. de Enzima comercial novozyme, un complejo
multienzimtico producido por diferentes cepas de Aspergillus sp. que contiene
carbohidrasas, que incluyen arabinasa, celulasa, glucanasa, hemicelulasa y xilanasa.
Es un lquido marrn claro con una densidad aproximada de 1,2 g/ml. A 25C,
Temperatura de conservacin de 2-8C.
Procedimiento experimental
Se realiz la caracterizacin y acondicionamiento de las semillas de girasol para el
proceso de extraccin.
Proceso de Extraccin enzimtica
Se realiz siguiendo el siguiente diagrama de bloque.

Figura 1. Diagrama de Bloques del Proceso de Extraccin Enzimtica de Aceite Crudo.


Los resultados obtenidos de los diferentes tratamientos fueron tratados estadsticamente
para determinar el de mayor rendimiento, mediante el diseo estadstico trifactorial
establecido.

Figura 2. Diagrama de Bloques del Procedimiento Experimental.

III. RESULTADOS
Caracterizacin de la semilla de girasol
Para las determinaciones fsicas se utiliz la variedad de semilla de girasol seleccionada
que fue Helianthus annuus L., del Departamento de Lambayeque, cuyos resultados se
muestran en la tabla 2.
Tabla 2. Determinacin del rendimiento de la parte comestible de semillas de girasol en
porcentaje (%).
Caractersticas Determinaciones
Peso (g) Porcentaje (%)
Aquenio de girasol 88.41 100
Pericarpio o cscara 41.21 gr 46.6
Semilla o pipa 47.20 gr 53.4
Rendimiento de semilla 53.4

En la tabla 3, se presenta los resultados de la composicin qumica proximal de las


semillas o pipas de girasol. El contenido de aceite fue de 40.30 %
Tabla 3. Composicin qumico proximal de semillas o pipas de girasol
Determinacin Porcentaje (%)
Humedad 6.12
Protena 23.75
Grasa 40.30
Ceniza 4.86
Fibra 8.43
Carbohidratos 16.54

En la tabla 4, se presenta las determinaciones de pH y el porcentaje de acidez de la


harina de semilla de girasol.

Tabla 4. pH y Acidez Titulable de la harina de semilla de girasol.


Caractersticas Determinacin
pH 5.9
Acidez Titulable 0.294 %
Se ajust la relacin slido/lquido a 1:6, obteniendo una solucin acuosa al 60% de
humedad con un pH de 5.9; pH dentro del rango de trabajo del enzima, humedad adecuada
para la extraccin enzimtica.

Caracterizacin del aceite obtenido


En la tabla 5, se muestra los resultados de la determinacin fsico qumica del aceite
obtenido de las semillas o pipas de girasol
Tabla 5. Composicin del aceite obtenido.
Determinacin Valores determinados
Peso Especfico a 20 C (g/cc) 0.921
ndice de Refraccin (20 C) 1.4736
ndice de acidez (mg de KOH/g de aceite 1.85
cidos Grasos libres ( % ) 0.93
ndice de yodo (g de I/100 g de grasa) 130
ndice de saponificacin (mg de KOH/g de 189
aceite)
ndice de perxido (meq O2/Kg de aceite) 3.3
Tratamiento enzimtico
En esta etapa se procedi a evaluar varios factores durante el tratamiento enzimtico:
Factor A: temperatura (40, 50 y 60 C), Factor B: tiempo (2, 3 y 4 horas) y Factor C:
concentracin de la enzima (0,4; 0,6 y 0,8 %), con la finalidad de observar el efecto
producido sobre el rendimiento de extraccin y determinar en base a este los parmetros
de dicho proceso.
Efecto de la temperatura y el tiempo
Los resultados de las corridas experimentales de la extraccin enzimtica de aceite a las
concentraciones de 0.4, 0.6 y 0.8 % variando la temperatura y el tiempo de tratamiento
enzimtico se muestran en el grfico1.

50

40

30 t = 2 horas
t = 3 horas
20
t = 4 horas
10 t = 4 horas
0
t = 2 horas
40 50 60

Grfico 1.Variacin de la temperatura y el tiempo a las concentraciones de 0.4, 0.6 y 0.8


de enzima sobre el porcentaje (%) de extraccin de aceite.
Efecto de la temperatura y la concentracin de enzima
Los resultados de las corridas experimentales de la extraccin enzimtica de aceite
aplicados a un tiempo de 2, 3 y 4 horas de tratamiento enzimtico variando la temperatura
y la concentracin de enzima se muestran en los grficos 2, 3 y 4.

50
40
30 [E] 0.4

20 [E] 0.6

10 [E] 0.8 [E] 0.8


0 [E] 0.6
[E] 0.4
40 50 60

Grfico 2. Variacin de la temperatura y la concentracin de enzima a 2 horas de


tratamiento enzimtico sobre el porcentaje (%) de extraccin de aceite.
60
50
40 [E] 0.4
30
[E] 0.6
20
[E] 0.8
10 [E] 0.8
0 [E] 0.6
[E] 0.4
40 50 60

Grfico 3. Variacin de la temperatura y la concentracin de enzima a 3 horas de


tratamiento enzimtico sobre el porcentaje (%) de extraccin de aceite.

60
50
40 [E] 0.4
30
[E] 0.6
20
[E] 0.8
10 [E] 0.8
0
[E] 0.4
40 50 60

Grfico 4.Variacin de la temperatura y la concentracin de enzima a 4 horas de


tratamiento enzimtico sobre el porcentaje (%) de extraccin de aceite.
Efecto del tiempo y la concentracin de enzima
Los resultados de las corridas experimentales de la extraccin enzimtica de aceite a 40,
50 y 60 C de temperatura a 0.4, 0.6 y 0.8 % de enzima y a 2, 3 y 4 horas del proceso de
extraccin se muestra en los grficos 5, 6 y 7.

50
40
30 [E] 0.4

20 [E] 0.6
10 [E] 0.8
[E] 0.8
0
[E] 0.4
2 3 4

Grfico 5. Variacin del tiempo y la concentracin de enzima a 40C de temperatura sobre


el porcentaje (%) de extraccin de aceite.
60
50
40 [E] 0.4
30
[E] 0.6
20
[E] 0.8
10 [E] 0.8
0 [E] 0.6
[E] 0.4
2 3
4

Grfico 6. Variacin del tiempo y la concentracin de enzima a 50C de temperatura sobre


el porcentaje (%) de extraccin de aceite.

40

30
[E] 0.4
20
[E] 0.6
10 [E] 0.8
[E] 0.8
0 [E] 0.6
[E] 0.4
2 3 4

Grfico 7. Variacin del tiempo y la concentracin de enzima a 60C de temperatura sobre


el porcentaje (%) de extraccin de aceite.
Evaluacin del rendimiento
Para determinar el tratamiento que mayor rendimiento proporcion se aplic el diseo
experimental trifactorial, con 3 niveles para la temperatura, 3 niveles para el tiempo de
hidrlisis enzimtica y 3 niveles para la concentracin de enzimas, con 3 repeticiones.
Los resultados son mostrados en la tabla 6 con los cuales se evaluar el efecto de la
temperatura, tiempo y concentracin de la enzima comercial Viscozyme L. sobre el
rendimiento de extraccin de aceite de semillas de girasol (Helianthus annuus L.).
Factor A = Temperatura C
Factor B: Tiempo de hidrlisis enzimtica: en horas
Factor C: Concentracin de Enzima/
[1] : concentracin de enzima 0,4% (p/p)
[2] : concentracin de enzima 0,6% (p/p)
[3] : concentracin de enzima 0,8% (p/p)
Tabla 6. Rendimiento promedio de la extraccin enzimtica en peso y porcentaje.

RENDIMIENTO DE ACEITE
FACTOR FACTOR
FACTOR C EXTRAIDO
A B
PESO (g) (%)
40 2 [1] 6.5 32.5
40 3 [1] 8.06 40.3
40 4 [1] 8.4 42.0
50 2 [1] 6.9 34.5
50 3 [1] 8.7 43.5
50 4 [1] 8.9 44.5
60 2 [1] 4.08 20.4
60 3 [1] 6.2 31.0
60 4 [1] 6.5 32.5
40 2 [2] 6.9 34.5
40 3 [2] 8.2 41.0
40 4 [2] 8.28 41.4
50 2 [2] 8.5 42.5
50 3 [2] 9.5 47.5
50 4 [2] 9.7 48.5
60 2 [2] 5.78 28.9
60 3 [2] 7.0 35.0
60 4 [2] 7.3 36.5
40 2 [3] 7.16 35.8
40 3 [3] 8.08 40.4
40 4 [3] 8.48 42.4
50 2 [3] 8.9 44.5
50 3 [3] 10.02 50.1
50 4 [3] 10.5 52.5
60 2 [3] 6.62 33.1
60 3 [3] 7.68 38.4
60 4 [3] 7.9 39.5
IV. DISCUSIONES
Al caracterizar se obtuvo un rendimiento de 53.4% de parte comestible de semillas de
girasol, cuyo valor es muy importante para los clculos de rendimiento del aceite en el
proceso de extraccin. As mismo, el contenido de grasa de 40.30 % que se muestra en la
tabla 3 se encuentra dentro del rango indicado en la tabla 1, Lpez (2002), lo que le
convierte en una materia prima de inters para la industria aceitera.
el contenido de protena es de 23.75% y el contenido de fibra es de 8.43 % (tabla 3) estn
dentro de los rangos segn tabla 1, factor importante en el proceso de extraccin, debido
a que la extraccin enzimtica se lleva a cabo a temperaturas bajas, las protenas son
degradadas para dejar salir al aceite y dar la mayor extraccin; la celulosa, lignina y
hemicelulosa como lo menciona Kirk (1996) componente que es parte del sustrato sobre
el cual van a actuar los enzimas, con el fin de facilitar la recuperacin del aceite contenido
en las semillas.
El pH obtenido fue de 5.9 (tabla 4) que est dentro del rango del pH de trabajo que es de
4 a 6, rango de pH indicado por el fabricante Novozyme. De acuerdo a Koolman (2005),
la actividad de la enzima depende del valor del pH, donde solo son activas en un rango
limitado, al igual que otras protenas, las enzimas poseen muchos grupos ionizables de
forma que los cambios de pH puedan alterar su conformacin.
Se observa en la tabla 5 que estos valores son similares a los reportados por Bailey (2001).
De los resultados mostrados en los grficos 1 a 7, se puede decir que la enzima Viscozyme
L. est actuando con la temperatura a la que logra su mxima actividad, tal como menciona
Barreiro, J. et al. (2006), las enzimas tienen una temperatura ptima para su accin. Esto
se debe a que como menciona Koolman ( 2005), cuando aumenta la temperatura se
observa una aceleracin inicial de la reaccin debido al aumento del calor generado por el
movimiento de las molculas, este aumento de la temperatura aumenta la velocidad de
reaccin enzimtica, hasta la temperatura de 50 C.
En los grficos 1, 5, 6 y 7 se observa que al pasar el tiempo la curva muestra un incremento
de 2 a 3 horas y de 3 a 4 horas un incremento pero cada vez decreciente, la temperatura va
relacionada con el tiempo debido que al pasar el tiempo su accin disminuir debido a la
disminucin de su estabilidad, esto concuerda con lo mencionado por Quinteros (1987).

Con respecto a la concentracin de la enzima en los grficos 2, 3, 4, 5, 6 y 7 se observan un


aumento del rendimiento cada vez que se incrementa la concentracin, por lo que es necesario
conocer no solo que la enzima est presente sino tambin en qu cantidad. Concordando con lo
mencionado por Mayes (1988), donde indica que la velocidad de una reaccin catalizada por una
enzima ser directamente proporcional a la cantidad de enzima presente.
Podemos decir que las enzimas que presentan esta actividad celuloltica y hemiceluloltica
sern las ms adecuadas para degradar la pared y aumentar la extractividad del aceite, de
acuerdo a los estudios realizados, las enzimas que presentan diversas actividades, son las
ms efectivas para degradar las estructuras y liberar el aceite que las enzimas puras.

V. CONCLUSIONES
Durante el tratamiento enzimtico se evaluaron temperaturas de 40, 50 y 60 C a un
tiempo de 2, 3, y 4 horas a las concentraciones de 0.4, 0.6 y 0.8 % de enzima Viscozyme
L. produciendo un efecto de incremento del rendimiento de extraccin de aceite de
semillas de girasol (Helianthus annuus L.).
La composicin qumica proximal para la semilla de girasol fue de 40.30 % de aceite,
23.75% para la protena y 8.43 para la fibra, se acondicion las semillas de girasol
ajustando la relacin slido/lquido a 1:6, obteniendo una solucin acuosa de 60 % de
humedad con un pH de 5.9.
En el proceso de extraccin enzimtica los rendimientos expresados como porcentaje del
total de aceite extrado de la semilla de girasol a las diferentes concentraciones
incrementan a medida que aumenta la temperatura pero solo hasta el nivel de 50 C,
adems el rendimiento es mayor cuando se aplica mayor concentracin de enzima y mayor
tiempo de extraccin, lo que corrobora la hiptesis planteada.
El rendimiento fue evaluado mediante un anlisis estadstico trifactorial y prueba Tukey
al 5 % cuando se aplica el enzima comercial Viscozyme L., los parmetros obtenidos del
tratamiento enzimtico fueron 50 C para la temperatura, 4 horas para el tiempo y 0.8 %
de concentracin de la enzima Viscozyme L. que corresponde a 52.5 % de aceite extrado
enzimticamente.
El aceite resultante tuvo un peso especfico a 20 C (g/cc) de 0.921, ndice de refraccin
(20 C) de 1.4736, ndice de acidez (mg de KOH/g de aceite) de 1.85, cidos grasos libres
de 0.93, ndice de yodo de 130g I/100g de grasa, ndice de saponificacin de 189 mg KOH
g-1, ndice de perxidos 3.3 meq Kg-1 y las caractersticas sensoriales se mantuvo estable,
ya que durante la extraccin enzimtica puede liberarse compuestos antioxidantes a travs
de la membrana semipermeable

VI. AGRADECIMIENTO
A Qumica Suiza quien nos proporcion el enzima Viscozyme L. para el trabajo de
investigacin.
VII.BIBLIOGRAFIA
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