Jeremy Israel Palma Carbo

gmd956 (050252 -0009)

Trabajo prctico de Biologa NM #4

Separacin de pigmentos fotosintticos mediante cromatografa.

Tema: Separacin de pigmentos fotosintticos mediante cromatografa.

Objetivos

Extraer los pigmentos fotosintticos y separarlos mediante una tcnica sencilla de

cromatografa en papel.

Obtener el pigmento ms abundante e identificar cul de ellos recorre una mayor y

menor distancia.

Hiptesis

En la cromatografa de papel, las hojas de color verde oscuro presentaran mayor

concentracin de los pigmentos fotosintticos Carotenos y Xantofilas; y, las hojas

armillas y rojas presentaran una cromatografa con una tincin de los pigmentos

clorofila A y B.

En la cromatografa de papel, las hojas de color verde oscuro presentaran mayor

concentracin de los pigmentos fotosintticos clorofila A y B; y, las hojas armillas y

rojas presentaran una cromatografa con una tincin de los pigmentos Carotenos y

Xantofilas.

Marco terico

La cromatografa

La cromatografa es un tipo de tcnica aplicada para la separacin de varios elementos que

conjugan a una mezcla, esta divisin se fundamenta en las caractersticas fsicas y qumicas

que posea cada elemento, haciendo nfasis en la capacidad de interaccin de cada

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componente de la mezcla o de la solucin con una sustancia. A grandes rasgos la

cromatografa se logra por medio de la utilizacin de dos fases:

Fase mvil, el cual es una solucin que est compuesta por distintos elementos

Fase estacionaria, esta se caracteriza por ser un material solido que permanecer sin

cambios antes o despus de la implementacin de la tcnica

La mezcla por estudiar permanecer con el compuesto que posea ms afinidad bien sea el que

se encuentra en fase solida o en fase mvil, de esta forma se apreciar las caractersticas

generales de cada compuesto estudiado. La cromatografa, puede ser clasificada segn la

metodologa y los materiales utilizados en:

Plana, este tipo de tcnica se realiza por medio de la utilizacin de un material slido

como un papel, gracias a esto puede sub-clasificarse en capa gruesa o capa fina,

debido a que la fase estacionaria reposa sobre soporte totalmente rgido, esta capa se

pone en contacto con la fase mvil que es lquida y el mismo comienza a ascender, de

acuerdo con la ubicacin de cada elemento en el papel puede lograr su identificacin.

Columna, en la cual se utiliza varios cilindros largos cuyo nombre es bureta como

fase estacionaria, y una mezcla liquida como fase mvil, de igual forma pueden usarse

otro estado fsico para la fase mvil, como el gas, los distintos compuestos a separar

van a ir ascendiendo de forma progresiva por la columna. (Metodologa a utilizar)

De acuerdo con el estado fsico de las fases utilizadas para el proceso la cromatografa puede

clasificarse en:

Gases, ya que su fase mvil es de carcter gaseoso.

Lquida, en la cual la fase mvil est compuesta por un agente lquido.

HPLC, posee un alto nivel de eficacia y precisin en la separacin de compuestos.

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Papel Filtro

El papel filtro, un papel que se corta en forma circular y se utiliza en procesos de filtracin en

laboratorios reteniendo impurezas insolubles y permitir el paso de la solucin filtrada a travs

de sus poros. Estas soluciones son homogneas. Por lo general, est conformado por

derivados de celulosa permitiendo que el papel filtro soporte pH de 0 hasta 12 y temperaturas

que podran llegar hasta los 120C. En esta prctica, este papel servir para filtrar los

pigmentos de las muestras que son separadas por el alcohol.

Uso del alcohol para separar pigmentos

En la tcnica antes mencionada como la cromatografa, el alcohol con los pigmentos disueltos

en l va ascendiendo por el papel como consecuencia de la capilaridad o accin capilar. Los

pigmentos de menor solubilidad y de mayor masa se quedan pegados en el papel filtro ms

abajo, mientras que aquellos pigmentos que tienen ms solubilidad y menor masa siguen

ascendiendo con el alcohol. Como cada pigmento tiene diferente masa y solubilidad, este

subir por el papel dejndolo colorado por los pigmentos.

Pigmentos Fotosintticos

Pigmento es una expresin usada para decir que una molcula absorbe luz del sol y genera un

color. El tipo de pigmentos que absorbe energa para utilizarla en la fotosntesis se encuentra

unido totalmente o en parte a las membranas tilacoides de los cloroplastos. El pigmento que

est implicado directamente en las reacciones luminosas es el pigmento conocido como

clorofila. En el caso de las plantas, se puede notar una gran variedad de colores en sus hojas

lo cual es causa de sus pigmentos fotosintticos, los cuales son los nicos que pueden obtener

energa solar y hacerla trabajar en la fotosntesis. A continuacin, se presentarn los

diferentes pigmentos en la fotosntesis que se estudiarn en esta prctica.

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Clorofila A

La clorofila A es el nico pigmento que est directamente implicado en las reacciones

luminosas. Absorbe primordialmente luz de los campos azul-violeta y rojo del espectro y es

de color verde oscuro, porque refleja principalmente la luz verde.

Clorofila B

La clorofila B por otra parte, no participa directamente en las reacciones luminosas, sino que

transmite a energa absorbida a aquellas molculas de clorofila a que estn directamente

implicadas. Por este motivo, la clorofila b se conoce como pigmento accesorio. Su color suele

ser de un verde menos intenso que el que tiene la clorofila a.

Carotenoides

Los carotenoides absorben fundamentalmente luz azul-verde y reflejan la luz amarilla o

amarilla-naranja. En los vegetales, estos pigmentos accesorios no suelen ser visibles hasta

que la clorofila se rompe, como cuando las hojas de las plantas caducifolias cambian de

color. Los carotenoides son los responsables de la coloracin otoal, despus de que los das

cortos y las fras temperaturas hayan ralentizado la fotosntesis y se haya roto la clorofila. Son

un tipo importante de pigmentos que contiene una funcin antioxidante. Por lo general estos

se pueden dividir en carotenos y xantofilas.

Carotenos

son aquellos carotenoides que suelen dar un color rojizo y anaranjado

Xantofilas

Por otro lado, las xantofilas son carotenoides que dan los colores amarillento y pardo

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Materiales de laboratorio

6 cajas Petri Reactivos

Un embudo
Alcohol de 96 %
Papel filtro
Muestras
Mortero y piln

Una regla ( 0,1 cm.) Hojas verdes (muestra 1,2 y 3)

Cronometro ( 0,1 s.) Hojas rojas (muestra 4)

Probeta de 50 ml ( 0.1 ml.) Hojas amarillas (muestra 5 y 6)

Un Erlenmeyer de 100 ml ( 0.5 ml.)

Procedimiento

Obtencin de los pigmentos fotosintticos

1. Cortar pedazos de hojas verdes sin incluir la nervadura principal y colocarlas en el

mortero.

2. Agregar 30 ml. de alcohol al 96% y una pequea cantidad de carbonato de calcio para

evitar la degradacin de los pigmentos

fotosintticos.

3. Triturar las hojas hasta obtener una

sustancia de color verde intenso.

4. Colocar el embudo en un Erlenmeyer.

5. Verter la solucin obtenida en el embudo

y dejar filtrar por la gravedad.

6. Realizar el mismo proceso con cada tipo Obteniendo los pigmentos fotosintticos.
Fotografa tomada del grupo #4.
de hojas.

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Separacin de los pigmentos fotosintticos

1. Recortar 6 tiras de papel filtro de 15x10 cm.

2. Doblar cada tira en forma de V para que se pueda mantener

firme sobre s misma.

3. Agregar la sustancia filtrada en las cajas de Petri.

4. Colocar las tiras de papel filtro recortadas en cada muestra.

5. Fijar el cronometro a 30 m y dejar las muestras reposando.

6. En el transcurso del tiempo los pigmentos se irn separando

segn su capacidad de absorcin y afinidad con el solvente. Pigmentos fotosintticos separados.

Fotografa tomada del grupo #2.

Metodologa

Una vez obtenidos realizado la separacin de los pigmentos fotosintticos, se tiene que

diferenciar que pigmento fotosinttico recorri ms distancia. Se los puede reconocer mediante

los colores, carotenos=anaranjado o rojizo; xantofilas=amarillo; clorofila A=verde claro;

clorofila B= verde oscuro.

Con una regla medir la distancia que recorrieron los pigmentos fotosintticos en el

tiempo determinado.

Medir la distancia recorrida por el eluyente (alcohol)

Calcular el valor de Rf (relacin de frentes) mediante la frmula:

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Tabulacin de datos obtenidos

Tabla #1: Distancia recorrida por los pigmentos fotosintticos en cm. (Anexo 1-6)

Pigmentos Distancia recorrida en cm. ( 0,1 cm.)

Color
fotosinteticos Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4 Muestra 5 Muestra 6
Carotenos 6,7 6,7 7 6,3 7,1 7,1
Xantofilas 1,9 1,6 1,7 2 1,9 1,9
Clorofila A 1,1 1 1,1 1,3 1,1 1,1
Clorofila B 1,7 1,5 1,6 1,5 1,3 1,3
Distancia recorrida por el eluyente: 9cm

Tabla #2: Valor Rf (relacin de frentes) de cada pigmento fotosinttico. (6 muestras)

Pigmentos Valor Rf (relacion de frentes)

Color
fotosinteticos Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4 Muestra 5 Muestra 6
Carotenos 0,74 0,74 0,78 0,7 0,79 0,79
Xantofilas 0,21 0,18 0,19 0,22 0,21 0,21
Clorofila A 0,12 0,11 0,12 0,14 0,12 0,12
Clorofila B 0,19 0,17 0,18 0,17 0,14 0,14
Distancia recorrida por el eluyente: 9cm
Nota: Datos redondeados a dos dcimas.

Tabla #3: Media aritmtica del valor Rf de las muestras. (Grafico #1)

Pigmentos
Color Media aritmetica de las muestras
fotosinteticos
Carotenos 0,76
Xantofilas 0,2
Clorofila A 0,12
Clorofila B 0,17
Distancia recorrida por el eluyente: 9cm

Nota: Datos redondeados a dos dcimas.

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Anlisis

Segn los datos obtenidos se puede hacer el siguiente anlisis:

Las muestras 1, 2 y 3 fueron realizadas con hojas verdes del mismo tipo, por lo cual llegan a

tener cierta similitud en su pigmentacin. Estas muestras al ser verdes en su totalidad poseen

bajos niveles de pigmentos secundarios y es abundante en los pigmentos primarios como la

clorofila A y B, debido a que en sus valores de Rf se obtuvieron 0,12; 0,11; y 0,12 en clorofila

A; y en clorofila B 0,19; 0,17; 0,18 respectivamente. Siendo estos valores ms altos en la tabla

en comparacin a las dems muestras. En la muestra 4, se us hojas de color rojo, por lo cual

en el papel filtro lleg a tornarse de color rojizo- anaranjado por unos 6,3 cm, lo que representa

la gran cantidad de pigmentos del tipo carotenos en estas hojas. Finalmente, en las muestras 5 y

6, se us hojas de color amarillo obteniendo mayor xantofila que las dems muestras debido a

su color amarillento, teniendo la misma cantidad de datos en cada uno de los pigmentos.

Conclusin

Debido a todos los datos obtenidos se concluye que, la primera hiptesis es falsa la cual

afirmaba: En la cromatografa de papel, las hojas de color verde oscuro presentaran mayor

concentracin de los pigmentos fotosintticos Carotenos y Xantofilas; y, las hojas armillas y

rojas presentaran una cromatografa con una tincin de los pigmentos clorofila A y B, debido

a que en las hojas de color verde sus valores de Rf fueron en mayor concentracin los

pigmentos primarios como la clorofila A y B as mismo, en las hojas rojas y amarillas se

presentaron en mayor proporcin pigmentos del tipo carotenos y xantofila respectivamente. Por

esta razn se acepta la segunda hiptesis. En la realizacin de la prctica hubo limitaciones que

impidieron llegar a datos certeros, ya que siempre existir un margen de error con los

instrumentos usados. Se recomienda al realizar esta prctica tener en cuenta el tipo de hojas a

usar y un ambiente cerrado controlando tanto la ventilacin como la temperatura.

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Anexos: 1-6

Muestras 1, 2 y 3 hechas a bases de hojas verdes. Pigmentos fotosintticos separados.

Fotografa del grupo #4

Muestras 4 hechas a bases

Muestras 5 y 6 hechas a bases de hojas verdes
de hojas oscuras. Pigmentos
amarillentas. Pigmentos fotosintticos separados.
fotosintticos separados.

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Grfico: 1

Media aritmetica del valor Rf de las muestras

segun sus pigmentos fotosinteticos.
Media aritmetica Valor "Rf"

0
Carotenos
Xantofilas
Clorofila A
Clorofila B
Carotenos Xantofilas Clorofila A Clorofila B
Pigmento Fotosintetico 0.76 0.2 0.12 0.17

Bibliografa

Definista. (19 de Octubre de 2015). Definicin de Cromatografa. Obtenido de

ConceptoDefinicion.de: http://conceptodefinicion.de/cromatografia/

QuimiNet . (30 de Diciembre de 2011). Los principales tipos de papel filtro. Obtenido de
QuimiNet: https://www.quiminet.com/articulos/los-principales-tipos-de-papel-filtro-
2655440.htm

Siari, C. N. (7 de Noviembre de 2012). La clorofila y la fotosntesis. Obtenido de Apuntes de

Fisiologa Vegetal: http://fisiolvegetal.blogspot.com/2012/11/la-clorofila-y-la-
fotosintesis.html

CRITERIOS DE EVALUACION
COMPROMISO PERSONAL EXPLORACION ANLISIS EVALUACION COMUNICACIN TOTAL
(2 PUNTOS) (6 PUNTOS) (6 PUNTOS) (6 PUNTOS) (4 PUNTOS) (24 PUNTOS)

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