UNIVERSIDAD DE SONORA

DEPARTAMENTO DE AGRICULTURA Y GANADERIA

DIVISION DE CIENCIAS BIOLOGICAS DE LA SALUD

MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA

Materia: Laboratorio de bioqumica 1

Profesora: Dra. Olivert Martnez Cruz

Practica #1 Reacciones Caractersticas para la Identificacin de

Carbohidratos

Equipo #1

Integrantes:

Itzel Guadalupe Gonzlez Crdova

Ana Elisa Garca Lagarda
Hossanna Romero Sifuentes
Cinthia Lpez Martnez

Semestre: 1

Grupo: 1

Hermosillo, Sonora a 13 de septiembre del 2017

 REACCIONES CARACTERISTICAS PARA LA IDENTIFICACION DE
CARBOHIDRATOS

Objetivo: Realizar las reacciones de identificacin de carbohidratos: Fehling,

Barfoed, Seliwanoff y de Bial.

Rx. de Fehling: identifica carbohidratos reductores en general.

Rx. de Barfoed: puede distinguir entre mono y disacridos.

Rx. de Seliwanoff: identifica carbohidratos cetohexosas.

Rx. de Bial: identifica carbohidratos aldopentosas

Antecedentes

Los carbohidratos se denominan de diferentes formas, por ejemplo, hidratos de

carbono, glcidos o simplemente azucares. Desempean una funcin fundamental
en la vida de las plantas y los animales. Su funcin ms importante es servir como
reserva de energa qumica en el organismo. Tambin existen variedades de
carbohidratos que dan estructura a la clula, tales como la quitina y la celulosa.

Con base en sus caractersticas qumicas, los carbohidratos se pueden definir como
aldehdos, cetonas de alcoholes polivalentes o sustancias que pueden generar
estos compuestos por medio de hidrolisis. Los carbohidratos se clasifican en:
monosacridos, oligosacridos y polisacridos.

Los monosacridos a excepcin de la dihidroxicetona presentan en su frmula uno

o ms carbonos asimtricos. Se clasifican con base a su grupo funcional y el nmero
de carbonos: triosa, tetrosa,pentosa,hexosa,heptosa, octanosa, nanosa. (En grupo
cetona y grupo aldehdo).

Los oligosacridos se conforman por 10 a 12 monosacaridos. Se constituyen de la

unin de un monosacrido con otro, por ejemplo: glucosa+fructosa= Sacarosa,
glucosa+glucosa=maltosa, glucosa+galactosa=lactosa. La unin de un
monosacrido y otro se llama unin glucosdica.

Los polisacridos son azucares que se encuentran abundantemente en la

naturaleza y estn constituidos por molculas complejas y grandes. Se clasifican en
nutrientes como el almidon y el glucgeno (que sirven de reserva), nutrientes
estructurales como la quitina, y estructurales como la celulosa.
Reaccin de Fehling

Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azcares reductores. El poder

reductor que pueden presentar los azcares proviene de su grupo carbonilo, que
puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo
carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder reductor.

Reaccion de Barfoed

La Reaccin de Barfoed es un ensayo qumico utilizado para identificar azcares

reductores adems se la utiliza tambin para diferenciar a los azcares
monosacridos de los disacridos mediante el tiempo de aparicin del precipitado
rojo ladrillo (Cu2O).

Reaccion de Seliwanoff

La prueba de Seliwanoff es una prueba qumica que se usa para distinguir entre
aldosas y cetosas. Los azcares son distinguidos a travs de su funcin como
cetona o aldehdo. Si el azcar contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si
contienen un grupo aldehdo, es una aldosa. Esta prueba est basada en el hecho
de que, al calentar las cetosas son deshidratadas ms rpido que las aldosas.

Reaccion de Bial

El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el cual forma complejos de

coloracin slo con las pentosas.De otro lado una propiedad importante que permite
identificar los carbohidratos, y determinar el grado de pureza de los mismos,
particularmente monosacrios es la rotacin ptica ocasionada por la presencia de
centros asimtricos o quirales en la estructura molecular, los cuales desvan el plano
de luz polarizada.
Procedimiento

Reaccin de Fehling

1. Comenzamos por reunir los materiales necesarios para la practica y su

instalacin.
2. Le vertimos agua destilada a la mitad de un vaso de 600 ml,
aproximadamente la mitad.
3. Colocamos el vaso para que hirviera y mientras llegaba a su punto de
ebullicin seguimos con el paso siguiente.
4. Pipeteamos en 5 tubos diferentes 1 ml de cada una de los siguientes
carbohidratos: glucosa, fructosa, sacarosa, lactosa, y maltosa.
5. Nombramos los tubos para no confundir los carbohidratos.
6. Cuando el agua destilada estaba a punto de llegar a su punto de ebullicin,
colocamos en cada uno de los tubos 1 ml de reactivo de Fehling.
7. Proseguimos colocando todos los tubos al mismo tiempo en el agua
hirviendo, cuidando de tomar el tiempo.
8. Tomamos el tiempo en el que tardaron en reaccionar los carbohidratos con
este reactivo.
9. Anotamos resultados.
10. Retiramos los tubos del vaso con ayuda de las pinzas.

Reaccin de Barfoed

1. Para esta segunda reaccin, ya tenamos preparado el agua hirviendo por lo

que proseguimos.
2. Pipeteamos en 5 tubos 1 ml de: glucosa, fructosa, sacarosa, lactosa y
maltosa.
3. A cada uno de los tubos con los carbohidratos les agregamos 1 ml de reactivo
de Barfoed.
4. Al igual que en la reaccin anterior, nombramos los tubos para no confundir
los carbohidratos.
5. Colocamos los tubos en el agua, todos al mismo tiempo, tomando tiempo.
6. Esperamos hasta 10 minutos para observar las reacciones.
7. Anotamos resultados.
8. Retiramos los tubos del vaso con ayuda de las pinzas.

Reaccin de Seliwanoff

1. Comenzamos con pipetear en 3 tubos distintos: 1 ml de Xilosa, 1 ml de

Glucosa y otro de Fructosa.
2. Proseguimos con pipetear a cada uno de los tubos 1 ml de reaccin de
Seliwanoff.
 3. Nombramos los tubos para no confundirnos.
4. El siguiente paso fue colocar los 3 tubos al mismo tiempo en el agua hirviendo
que utilizamos en las ultimas 2 reacciones.
5. Tomamos tiempo.
6. Anotamos resultados (lo que tardaron en reaccionar)
7. Retiramos los tubos del vaso con ayuda de las pinzas.

Reaccin de Bial

1. Para la ltima reaccin, comenzamos pipeteando en 3 tubos: 1 ml de Xilosa,

1 ml de Glucosa y otro de Fructosa, en sus respectivos tubos.
2. Agregamos 1 ml de reaccin de Bial a cada uno de los tubos.
3. Nombramos cada uno de ellos para no confundirnos.
4. Colocamos al igual que en las dems reacciones, los 3 tubos en el agua
destilada hirviendo al mismo tiempo.
5. Tomamos nota del tiempo.
6. Anotamos resultados de las reacciones.
7. Retiramos los tubos del vaso con ayuda de las pinzas y proseguimos a
guardar todo el material, para as finalizar la prctica

Diagrama de Flujo

Inicio

Rx. de Fehling Rx. de Barfoed Rx. de Seliwanoff Rx. de Bial

Preparar bao de Pipetear en 5 tubos: Pipetear en 3 tubos: Pipetear en 3 tubos:

agua destilada glucosa, fructosa, Xilosa, Glucosa y Xilosa, Glucosa y
hirviendo sacarosa, lactosa y Fructosa, Fructosa,
maltosa respectivamente respectivamente

Pipetear en 5 tubos de Nombrar/enumerar

Nombrar/enumerar Nombrar/enumerar
ensayo: glucosa, los tubos
los tubos los tubos
.
fructosa, sacarosa,
lactosa y maltosa
Agregar el reactivo
Agregar reactivo de Agregar reactivo de de Bial a c/uno de
Nombrar/enumerar Barfoed a c/uno de Seliwanoff a c/uno los tubos
los tubos los tubos de los tubos
Agregar reactivo de Colocar los 5 tubos Colocar los 3 tubos Colocar los 3 tubos
Fehling a c/uno de al mismo tiempo en al mismo tiempo en al mismo tiempo en
los tubos el agua hirviendo el agua hirviendo el agua hirviendo

Anotar tiempo Anotar tiempo Anotar tiempo

Colocar los 5 tubos
al mismo tiempo en
el agua hirviendo
Anotar resultados Anotar resultados Anotar resultados

Anotar tiempo

Sacar del bao los Sacar del bao los Sacar del bao los
tubos con las pinzas tubos con las pinzas tubos con las pinzas
Anotar resultados

Sacar del bao los

tubos con las pinzas

Fin
Fundamentos tericos

Reaccin de Fehling

Es una solucin que descubri el alemn Hermann Von Fehling y se caracteriza

fundamentalmente por su utilizacin como reactivo para la determinacin de
azcares reductores es decir demostrar la presencia de glucosa o sus derivados
como la sacarosa o la fructosa, tambin se lo conoce como licor de Fehling.

Est formado por dos soluciones acuosas que son: sulfato de cobre cristalizado y
sal seignette o tartrato mixto de potasio y sodio; es importante tener en cuenta que
ambas se guardan separadas hasta el momento en el que vayan a ser utilizadas
para de esa manera evitar la precipitacin del hidrxido de cobre.

Su accin se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehdos

el cual se oxida a cido y se reduce la sal de cobre en medio alcalino a xido de
cobre, formando un precipitado de color rojo.

El reactivo de Fehling se fundamenta principalmente, en su reaccin, la oxidacin

de cobre, el poder reductor de los azcares, sea este en monosacridos,
polisacridos, aldehdos, y en ciertas cetonas.

Reaccin de Barfoed

La Reaccin de Barfoed es un ensayo qumico utilizado para identificar azcares

reductores adems se la utiliza tambin para diferenciar a los azcares
monosacridos de los disacridos mediante el tiempo de aparicin del precipitado
rojo ladrillo (Cu2O).

0 - 5 min Azcar Monosacrido

5 - 30 min Azcar Disacrido

Se basa en la reduccin del cobre II (en forma de acetato) a cobre I (en forma de
xido).

La prueba de Barfoed, fue descrita por primera vez por el qumico dans Christen
Thomsen Barfoed y se emplea principalmente en botnica. La prueba, al ejercer
una reaccin de oxidacin de reconocimiento de azcares reductores, presenta
evidencia semejante a las reacciones de Fehling y Benedict, es decir que la
evidencia es la formacin de un precipitado color rojo ladrillo.

La composicin del reactivo de Barfoed se prepara mediante el siguiente

procedimiento: Aadiendo 2.5 ml de cido actico al 38% en agua a 100 ml de
acetato cprico al 6.6% en agua o se compone de una solucin de 0.33 molar de
acetato de cobre neutro en una solucin de 1% de cido actico. No es
recomendable guardar el reactivo, sino prepararlo previamente a su uso.

Los disacridos tambin pueden reaccionar pero de forma ms lenta, el grupo

aldehdo perteneciente al monosacrido que se encuentra en forma hemiacetal se
oxida pasando a cido carboxlico; varias sustancias como por ejemplo el cloruro de
sodio que puede interferir en la prueba o a su vez en el tamao molecular aunque
se pueden ver implicados en ciertos factores tales como una interaccin compleja
con los anillos monosacridos.

El medio alcalino facilita que el azcar est de forma lineal, puesto que el azcar en
solucin forma un anillo de piransico o furansico. Una vez que el azcar est
lineal, su grupo aldehdo puede reaccionar con el ion cprico en solucin.

En esta imagen podemos observar la formacin del precipitado xido cuproso

(Cu2O) la cual nos da una coloracin roja.
Reaccin de Seliwanoff

La prueba de Seliwanoff es una reaccin para diferenciar cetosas de aldosas;

aunque ambas dan la reaccin. Los azcares son distinguidos a travs de su funcin
como cetona o aldehdo.

En esta prueba de Seliwanoff, se utiliza el cido clorhdrico en la reaccin de

deshidratacin (del monosacrido) y el resorcinol (1,3-dihidroxibenceno) en la
reaccin de condensacin del derivado del furfural (el hidroximetilfurfural). Esta es
una prueba cualitativa; es decir el medio pasa de incoloro a rojo, para las
cetohexosas y aldohexosas.

El hidroximetilfurfural (producto de la deshidratacin) se forma ms rpidamente a

partir de cetohexosas y ms lentamente a partir de aldohexosas. El tratamiento
prolongado de ms de quince minutos de duracin, provoca la isomerizacin de la
glucosa (aldohexosa) en fructosa (cetohexosa), por lo que tambin la glucosa puede
dar la prueba positiva.

Las reacciones involucradas en la reaccin de Seliwanoff son:

Reaccin de Bial

Cuando se calientan pentosas con HCl concentrado, se forma Furfural que se

condensa con Orcinol en presencia de iones ferricos para dar un color azul verdoso.
Observaciones y resultados

DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS:

Reaccin de Fehling

Tubo Carbohidrato Precipitado (+) (-) Tiempo (min)

1 Glucosa + 39 Seg
2 Fructosa + 30 Seg
3 Sacarosa - /
4 Lactosa + 39seg
5 Maltosa + 39 seg

Reaccin de Barfoed

Tubo Carbohidrato Precipitado (+) (-) Tiempo (min)

1 Glucosa + 6.10 min
2 Fructosa + 1.40 min
3 Sacarosa - 10mi
4 Lactosa - 10 min
5 Maltosa - 10min

Reaccin de Seliwanoff

Tubo Carbohidrato Color Tiempo (min)

1 Xilosa Azul /
2 Glucosa Azul /
3 Fructosa Rojo 7.22 min

Reaccin de Bial

Tubo Carbohidrato Color Tiempo (min)

1 Xilosa Verde 11.06 min
2 Glucosa /
3 Fructosa /
Discusin

Reaccin de Fehling

La reaccin de Fehling se utiliza para el reconocer los carbohidratos reductores. El

poder reductor de los azucares viene del grupo carbonilo que se oxida a grupo
carboxilo con agentes oxidantes y si este grupo carbonilo se encuentra combinado
no tiene el agente reductor. Los resultados fueron positivos en la glucosa, fructosa,
lactosa y maltosa ya que tienen el grupo carbonilo expuesto, siendo as reductor y
dndole el color rojo ladrillo que se pudo observar. El resultado negativo de la
sacarosa se debe a que esta constituida por una molcula de glucosa y fructosa
que tienen enlaces en el primer carbono de la glucosa y en el segundo de la fructosa
dejando a la sacarosa sin grupos reductores disponibles necesarios para reaccionar
con el reactivo de Fehling.

Reaccin de Barfoed

Esta reaccin reconoce y distingue a los monosacridos de los disacridos como

tambin los carbohidratos reductores. Por esta razn se obtuvo una reaccin
positiva de la glucosa y fructosa ya que son monosacridos y azucares reductores.
Los disacridos (sacarosa, lactosa, maltosa) no cambiaron su color.

Reaccin de Seliwanoff

Se utiliza para identificar los carbohidratos cetohexosa hacindolos reaccionar con

cido clorhdrico haciendo que pierda agua. El resorcinol reacciona con la molcula
cambindola a color rojo. La fructosa es una de las cetohexosas ms comn y por
esta razn es que es el nico carbohidrato que probamos que cambia de color.

Reaccin de Bial

La xilosa es un monosacrido que contiene cinco tomos de carbono un grupo

funcional aldehdo. Esto se puede comprobar con la reaccin de Bial que realizamos
en esta prctica por que el cido clorhdrico reacciona con la aldopentosa (xilosa)
perdiendo molculas de agua y hacindose furfural que reacciona con el orcinol. Se
le aade una pequea cantidad de cloruro frrico y cambia a color verde. La xilosa
cambio a color verde al minuto 11.06 confirmando que es una aldopentosa.
Cuestionario

1. Cul es la diferencia entre el reactivo de Fehling y el de Barfoed, en cuanto

a composicin y en cuanto a su capacidad de reconocer carbohidratos?

En cuanto a composicin, en el reactivo de Fehling obtenemos como resultado

xido Cuproso que precipita dando un color rojo ladrillo caracterstico, y reactivo de
Barfoed es Acetato Cprico en cido Acetato diluido.

En cuanto a capacidad de reconocimiento, el reactivo de Fehling identifica a

carbohidratos reductores en general, mientras que la reaccin de Barfoed, aparte
de identificar carbohidratos reductores, puede distinguir entre Monosacridos y
Disacridos.

2. En la reaccin de Fehling, qu pasara sin calentamiento?

No se inestabilizara la doble ligadura del carbohidrato reductor, por tanto no

cambiara de posicin y no se desencadenara la reaccin.

3. Se podra usar la prueba de Seliwanoff para distinguir sacarosa de fructosa?

Por qu si o por qu no?

S, porque la el reactivo de Seliwanoff identifica los carbohidratos cetohexosas. Al

tomar muestras de sacarosa y fructosa, la sacarosa nos dara una reaccin
negativa, mientras que fructosa sera positiva.

4. Tengo tres frascos, uno con glucosa, otro con manosa y otro con fructosa. A
los tres les aado hidrxido de sodio 0.05 N. Qu obtengo como producto
en cada uno de los tres tubos y por qu?

En solucin alcalina diluida (NaOH 0.05 N) los monosacridos sufren

reordenamiento en torno al tomo del carbono anomrico y carbono adyacente, sin
afectar los sustituyentes presentes en los dems tomos de carbono. Este tipo de
reordenamiento es lo que en qumica orgnica se llama tautomerizacin. Intervienen
en la reaccin las formas enlicas llamadas enedioles o enodioles, de las formas
hidroxialdehdica e hidroxicetnica carbonos 1 y 2. (Vejar, 2010)
 (Vejar, 2010)

5. En un frasco tengo glucosa y en otro manosa, y los quise tratar con lcali
0.01 N, pero me equivoqu de frasco y lo que aad fue cido clorhdrico 0.01
N. Qu suceder en cada frasco?

A mayores concentraciones de lcali (NaOH 0.5 N o mayor), los monosacridos

libres sufren ulteriores reordenamientos. Es decir, la tautomerizacin no se detiene
en los carbonos 1 y 2 sino que involucra a toda molcula, dando por resultado una
fragmentacin.

La tautomerizacin total de la molcula hace que los enedioles resultantes sean

inestables en presencia de lcali y que se fragmenten fcilmente. Los fragmentos
son poderosos reductores.

Si ahora esos fragmentos reductores con iones oxidantes como Ag+, Hg++, Cu++,
se producirn por un lado los fragmentos cidos y por otro los iones reducidos. En
reaccin normal se utilizan los iones cpricos para esta oxidacin que se reducen a
iones cuprosos.

Finalmente al combinarse los iones cuprosos con el lcali, se formar hidrxido

cuproso, de color amarillo, que al calentarse se convertir en xido cuproso que
precipitar con su color caracterstico rojo ladrillo. (Vejar, 2010)

6. En el laboratorio haba un frasco rotulado lactosa + fructosa , y otro rotulado

glucosa + ribosa , pero al hacerse la limpieza del laboratorio se cayeron las
 etiquetas y ahora no sabe cul es cul. Qu se puede hacer para
etiquetarlos correctamente?

Tomara muestras de cada uno de los frascos, despus identificara y utilizara

alguna de las tcnicas de separacin de carbohidratos. Despus agregara Rx de
Bial. Esta reaccin se utiliza para identificar a los cidos Ribonuclicos, puesto que
las condiciones cidas hidrolizan al cido nuclico y las ribosas libres darn positiva
la reaccin. La muestra que reaccione ser glucosa + ribosa y la que no reaccione
ser lactosa + fructosa

7. Investigue en otros libros de texto, si es que hay otras reacciones para

identificacin de carbohidratos y mencinelas aqu.

El reactivo de prueba se prepara con una solucin de sulfato cprico alcalino.

Existen muchas variantes con respecto a la composicin exacta del reactivo de
prueba, de ah que haya muchos nombres para las diversas soluciones que se
preparan. Algunas incluso, y dada su composicin, sirven para distinguir entre
monosacridos reductores y disacridos reductores. Normalmente todos aaden un
poco de tartrato de sodio t potasio para evitar la precipitacin del hidrxido cprico.

Reactivo de Fehling: Hidrxido de sodio con sulfato cprico.

Reactivo de Benedict: Carbonato de sodio con sulfato cprico.
Reactivo de Folin: Bicarbonato de sodio con sulfato cprico.
Reactivo de Barfoed: cido actico diluido y acetato cprico.

Conclusin

Al final de la prctica hemos aprendido qu procedimientos utilizar para reconocer

los carbohidratos, ya que estos son de suma importancia porque constituyen la
mayor parte de la materia orgnica de la tierra y tienen importantes funciones que
realizan en todas las formas de vida.
Bibliografa

Vejar, E. 2010. Bioqumica I. Cap. 2: Carbohidratos. 1 Edicin. Editorial Universidad

de Sonora. Mxico. P. 43-45.

Zarza Meza, E. (2015). Introduccin a la bioqumica. 2nd ed. Mxico, DF.: Editorial
Trillas.

Corala Aguiar T. (2014). Azucares reductores. Fecha de consulta: 10 de septiembre

de 2017. URL: https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-
i/carbohidratos/reaccion-de-fehling

Fernando Carrillo. (2014). Reaccin de Oxidacin. Fecha de consulta: 10 de

septiembre de 2017. URL: https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica
/bioquimica-i/carbohidratos/reaccion-de-barfoed

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i/carbohidratos/reaccion-de-seliwanof

Carbohidratos. (2004). Fecha de consulta: 10 de septiembre de 2017. URL:

https://biologiaupc.files.wordpress.com/2012/08/lab-de-carbohidratos.pdf