Biomdica 2011;31(sup.
3):425-48 XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
TESIS DE GRADO
Transmisin de la enfermedad de
Chagas congnita en zonas sin
transmisin vectorial en las ciudades
de La Paz y El Alto, Bolivia, 2009-2010
Adriana Claudia Miranda
Instituto Nacional Laboratorios en Salud, Universidad
Mayor de San Andrs, La Paz, Bolivia
Introduccin. En Amrica Latina, la enfermedad
de Chagas es el problema de salud pblica ms
importante y su lucha es un desafo. La identificacin
de esta enfermedad como una prioridad sanitaria
de Bolivia ha permitido incorporarla al Plan
Estratgico de Salud (PES) del Ministerio de Salud
y Deportes; este plan prioriza dentro del escudo
epidemiolgico.
En la situacin actual de Bolivia es necesario
considerar que la forma de transmisin
transplacentaria adquiere progresiva relevancia,
como una fuente continua de transmisin que
no puede ser prevenida, mientras la transfusin
vectorial y por transfusiones estn siendo
controladas en forma progresiva. Por otro lado,
el tratamiento precoz del nio infectado aumenta
las probabilidades de curacin parasitolgica y
serolgica, evitando posteriores secuelas.
Materiales y mtodos
Materiales biolgicos:
Muestras de sangre de cordn umbilical del recin
nacido recolectadas en tubo vacutainer de 5 ml
con EDTA.
Muestras de sangre perifrica tomadas del taln
del recin nacido recolectadas en cuatro tubos
capilares con heparina y tubo microtainer.
Mtodos:
Determinacin de IgG:
Tcnica ELISA, Trypanosoma cruzi IgG: es una
ELISA utilizada para la deteccin de anticuerpos
especficos IgG anti-T. cruzi en suero humano.
Tcnica de hemaglutinacin indirecta: es una
prueba que consiste en la suspensin estabilizada
de hemates de carnero sensibilizados con antgeno
de T. cruzi, los cuales se aglutinan en presencia
de diluciones de sueros humanos que contengan
anticuerpos especficos.
Tcnica del tubo capilar (micromtodo): es una
tcnica de concentracin de parsitos, basada en
la estratificacin de las clulas sanguneas segn
su densidad por accin de la fuerza centrfuga. La
bsqueda de parsitos se efecta en la interfaz
entre los glbulos blancos y el plasma, con la
ayuda de un microscopio.
Resultados. Se determinaron los anticuerpos
IgG anti- T. cruzi por ambas tcnicas: ELISA
y hemaglutinacin indirecta, en los hospitales
Materno Infantil, Mujer y Corea, en el perodo
2009-2010, y se obtuvo una frecuencia de 1,4 %.
Segn el resultado del microhematocrito de los
recin nacidos y los informes de los hospitales,
en el periodo 2009 a 2010 la tasa de transmisin
vertical fue de 9,7 % en todos los hospitales.
Resultados de la regresin logstica de las preguntas
del cuestionario relacionadas con la serologa
reactiva para Chagas. Con el modelo se analizaron
6.915 mujeres, con informacin completa.
Las variables siguientes no se retuvieron en el
modelo final, por ser no significativas:
1.Conoce la enfermedad de Chagas? p=0,89
2.Recibi transfusin sangunea? p=0,84
3.Viaj? p=0,61
4.Hospital de diagnstico p=0,45
Pregunta odds ratio p>z Ic95%
Tiene enfermedad de Chagas ? 39,1 <0,001 13,0-117,3
Sabe si tiene alguna enfermedad 2,3 0,02 1,1-4-5
cardiaca o digestiva?
Naci en regin endmica 4,3 <0,001 2,7-7,1
para enfermedad de Chagas?
Estuvo menos de un mes en 1,8 0,02 1,1-2,8
regin endmica?
Conclusin. Se recolectaron 11.276 muestras
provenientes de los tres hospitales del estudio,
con un universo esperado de 13.715 madres; se
encontr una tasa de infeccin materna de 1,4 %
en regin sin vector. En el caso de los resultados
de la transmisin congnita de T. cruzi, se observa
que la tasa de transmisin vertical alcanza el 9,7 %
(IC95 % 4,5-17,5), semejante a la media de regiones
endmicas, que es de 6 %.
Las preguntas anteriores permiten suponer una
fuerte probabilidad de encontrar casos verdaderos
de enfermedad de Chagas. Estos resultados
muestran que para un sistema de tamizacin por
425
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
cuestionario se pueden usar nicamente estas
cuatro preguntas para discriminar los casos
probables de enfermedad de Chagas en una regin
sin transmisin vectorial.
Efecto sobre las concentraciones
de tioles (glutatin y cistena) y
la formacin de -hematina de
compuestos aislados de Solanum
nudum (solanaceae) y actividad anti-
Plasmodium de sus derivados
Adriana Pabn
Universidad de Antioquia, Medelln, Colombia
Introduccin. De la planta Solanum nudum
Dunal se han aislado una sapogenina esteroidea
(diosgenona) y cinco anlogos estructurales con
actividad anti-Plasmodium in vitro y sin capacidad
mutgena, que presentan como caracterstica
estructural el sistema 4-en-3-ona similar a la
progesterona. Estos hechos refuerzan e impulsan
estudios para conocer la forma como los esteroides
destruyen a los parsitos, su selectividad, la
especificidad de estadio parasitario, la interaccin
con medicamentos convencionales y, tambin, para
conocer los aspectos estructurales y funcionales
involucrados en la accin antipaldica. Todos estos
son pasos importantes para elucidar su modo de
accin y mejorar su perfil farmacolgico.
Materiales y mtodos. El efecto de los esteroides
de S. nudum sobre las concentraciones de los
tioles totales, se evalu en cultivos de Plasmodium
falciparum. Se evalu su capacidad de inhibir la
cristalizacin de la de -hematina. Al SN-1 se le
busc el estadio de Plasmodium ms sensible y se
combin con medicamentos convencionales. Por
ltimo, se hicieron modificaciones en los grupos
funcionales de los esteroides y a los ms activos
se les valor su efecto teraputico in vivo.
Resultados. Se encontr que los eritrocitos
parasitados tratados con los esteroides tenan
ms glutatin total (T-GSH), en relacin con los
eritrocitos no parasitados (p<0,005). El SN-1
disminuy significativamente la concentracin de
T-GSH en los eritrocitos sincronizados en anillos
(p=0,000), pero increment el contenido de T-GSH
en comparacin con el control sin tratamiento
(p=0,000). El SN-1 inhibi la cristalizacin de la
-hematina por encima de 80 % y el trofozoto joven
fue el estadio ms sensible. Tambin se encontr
un efecto sinergista para la combinacin de SN-1
con cloroquina y quinina. Por ltimo, se encontr
426
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
prdida de la actividad anti-Plasmodium cuando se
modificaba el sistema 4-en-3-ona en los derivados.
Se consigui actividad anti-Plasmodium in vitro
mejor que la diosgenona e, in vivo, se obtuvieron
porcentajes de inhibicin de la parasitemia mayores
de 30 %.
Discusin. Los esteroides de S. nudum afectan el
contenido de los tioles en cultivos de P. falciparum.
En estas primeras exploraciones encaminadas
a establecer la relacin entre la estructura y la
actividad, se puede sugerir que el grupo carbonilo
es necesario para la actividad antipaldica de los
esteroides naturales.
Signos de peligro en el paciente con
malaria: valor pronstico de signos
clnicos y parasitolgicos
Alberto Tobn
Grupo Malaria, Universidad de Antioquia, Medelln,
Colombia
Introduccin. Los pacientes con malaria pueden
presentar complicaciones clnicas con alto riesgo
de muerte. Este desenlace se relaciona con las
dificultades de acceso a la atencin sanitaria y con
la deficiente calidad de esta atencin. Una posible
va para causar un impacto sobre la morbilidad
grave y la mortalidad, sera integrar al diagnstico
y al tratamiento de la malaria, el reconocimiento
precoz de las complicaciones clnicas, lo que
puede lograrse aplicando un protocolo para
reconocimiento de signos de peligro.
Este protocolo debe basarse en la utilidad de los
signos clnicos y parasitolgicos en el pronstico,
y centrarse en aquellos que sean fcilmente
reconocibles por personal sanitario no mdico, ya
que ms del 95 % de los diagnsticos de malaria
en Colombia lo hacen los microscopistas.
Este estudio aporta al conocimiento clnico de la
malaria en zonas de endemia baja y transmisin
inestable, y es un primer estudio sobre el tema en
estas zonas.
Materiales y mtodos. El objetivo fue conocer el
valor de los signos clnicos y parasitolgicos en
el pronstico de gravedad. El diseo del estudio
fue de cohorte prospectiva con pacientes con
malaria por Plasmodium vivax o P. falciparum, en
cinco municipios de la Costa del Pacfico y Urab
colombianos. Las complicaciones se identificaron
mediante criterios mayores (Organizacin Mundial
de la Salud) y menores de gravedad.
Resultados. Se evaluaron 730 pacientes. Las
complicaciones mayores diagnosticadas fueron:
disfuncin heptica, anemia grave, trombocitopenia
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
grave y malaria cerebral; y las menores, disfuncin
heptica, anemia, trombocitopenia, disfuncin
renal, hipoglucemia y alteracin neurolgica. Se
identificaron como signos de peligro la ictericia,
la orina oscura, la hiperpirexia, los signos de
deshidratacin, los signos neurolgicos, los
signos respiratorios, el vmito a repeticin, la
hiperparasitemia, el dolor abdominal y la palidez.
Conclusin. Se identificaron los signos asociados
con complicaciones. El mejor modelo de regresin
incluye seis signos de peligro. Se propone una
estrategia de reconocimiento de signos de peligro
en los pacientes con malaria, que se acompae de
otros elementos de la atencin, como el suministro de
un tratamiento antipaldico adecuado y oportuno.
Concordancia de la necesidad
de hospitalizacin por dengue
de pacientes peditricos, con la
nueva gua de clasificacin de la
Organizacin Mundial de la Salud
Alfredo S. Linero, Margarita M. Velasco, Lissette Chan,
Gonzalo Guerra
Universidad Libre, Cali, Colombia
Introduccin. La clasificacin y protocolo del
dengue han sido muy cuestionados. En el 2008
surgi el estudio internacional DENCO (Dengue
Control) cuyo objetivo fue encontrar una mejor
forma de clasificar la enfermedad y la necesidad
de hospitalizacin de los pacientes con diagnstico
de dengue.
Objetivo. Analizar la concordancia en la necesidad
de hospitalizacin de los pacientes peditricos
entre la anterior clasificacin del dengue y la nueva
propuesta de la Organizacin Mundial de la Salud
(OMS).
Materiales y mtodos. Se llev a cabo un estudio
descriptivo y retrospectivo en el que se incluyeron
104 historias clnicas de pacientes hospitalizados
con diagnstico clnico de dengue; se hizo un
anlisis de concordancia que consisti del ndice
Kappa, porcentaje de acuerdo entre positivos y
porcentaje de acuerdos entre negativos.
Resultados. De los pacientes con diagnstico de
dengue clsico, 30,2 % (26) no cumplan con los
criterios necesarios para su clasificacin segn
el anterior protocolo, al igual que 33,3 % (6) de
aquellos con diagnstico de fiebre hemorrgica
dengue. Siguiendo el protocolo anterior, 17,3 %
(18) no cumplan criterios para manejo hospitalario.
Segn la nueva propuesta de la OMS, 35,6 %
(37) seran clasificados como dengue sin signos
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
de alarma y, siguiendo el esquema de manejo
de la nueva propuesta, estos pacientes pueden
ser manejados en casa, lo cual sugerira que no
requeran hospitalizacin. Se obtuvo un ndice
kappa bajo (=0,22), un porcentaje de acuerdo
entre positivos de 0,52 y un porcentaje de acuerdo
entre negativos de 0,25, lo que sugera una baja
concordancia de los criterios para la hospitalizacin
de los pacientes entre los dos protocolos.
Conclusin. El valor bajo del ndice kappa se
explica por la presencia de concordancia esperada
por el azar y sugiere que se requiere una revisin
detallada de casos que identifiquen factores
causales de discordancia para subsanarlos y
generar resultados congruentes que orienten la
toma de decisiones acertadas. El gran nmero
de pacientes que no cumplan con los criterios
de hospitalizacin al aplicarse los dos protocolos,
propone que an hay dificultades para clasificar
adecuadamente los casos de dengue que
requieren hospitalizacin. Asimismo, permite
considerar la realizacin de futuros trabajos de
investigacin sobre el tema que identifiquen los
signos y sntomas que, en la prctica, motivan al
mdico a hospitalizar a un paciente.
Accin de la glibenclamida en
Leishmania spp.: estudios genticos y
resistencia
Andrea Oru
Instituto de Biologa Experimental, Universidad Central
de Venezuela e Instituto de Biomedicina, Caracas,
Venezuela
Introduccin. La leishmaniasis es una enfermedad
causada por parsitos del gnero Leishmania. El
tratamiento de esta enfermedad consiste en el
uso de antimoniales pentavalentes, muy txicos,
de mecanismo de accin desconocido y con gran
frecuencia de desarrollo de resistencia.
La evaluacin antileishmanicida de nuevos
frmacos con mecanismos de accin conocidos en
otros organismos, resulta importante, por ejemplo,
la glibenclamida, una sulfonilurea con mecanismo
de accin conocido. Hemos demostrado el efecto
antileishmanicida del frmaco y la seleccin de
lneas de parsitos resistentes.
El objetivo de este trabajo fue el estudio del
fenotipo de resistencia a glibenclamida, en un
aislamiento venezolano de Leishmania (L.)
mexicana y el potencial uso de este medicamento
en la leishmaniasis cutnea.
Materiales y mtodos. Se evalu un tratamiento
combinado de glibenclamida y glucantime en
427
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
infecciones de ratones Balb/c, causadas por L. (L.)
mexicana y aislamientos de leishmaniasis difusa,
respectivamente. El tratamiento y la medicin de
las lesiones se hicieron diariamente.
Asimismo, se compararon los mapas protemicos
de promastigotes de L. (L.) mexicana sensible y
resistente a glibenclamida, mediante electroforesis
en dos dimensiones y anlisis de MALDI-TOF.
Igualmente, se evalu in silico la presencia de
genes asociados al mecanismo de accin de la
glibenclamida en los genomas de Leishmania spp.
Resultados. El tratamiento combinado de
glucantime y glibenclamida result efectivo en las
lesiones experimentales de leishmaniasis cutnea.
El mecanismo de accin de la glibenclamida en
Leishmania spp. es desconocido; el gen que acta
como blanco en humanos no est presente en el
genoma del parsito. El estudio comparativo de los
perfiles protemicos de L. (L.) mexicana sensible
y resistente, mostr diferencias cualitativas y
cuantitativas. Se relacionaron protenas con el
fenotipo de resistencia a glibenclamida.
Conclusin. Las protenas identificadas en el
fenotipo resistente fueron: enolasa, transportadores
y nuclesido bisfotato-cinasa, entre otras.
Clonacin y caracterizacin
bioqumica de la galactocinasa de
Trypanosoma cruzi
ngel Lobo, Ana Cceres, Juan Luis Concepcin
Laboratorio de Enzimologa de Parsitos, Universidad
de Los Andes, Mrida, Venezuela
Introduccin. Trypanosoma cruzi es el agente
causante de la tripanosomiasis americana. Se
estima que existen alrededor de 7,7 millones de
personas infectadas, por lo que se considera un
problema de salud pblica.
Trypanosoma cruzi est cubierto por un glucoclix
compuesto de glucolpidos y glucoprotenas
unidas a GPI ricos en galactosa. El primer paso
del metabolismo de la galactosa es catalizado por
la galactocinasa (GalK), que fosforila el primer
carbono de este monosacrido usando ATP.
Materiales y mtodos. En el genoma de T. cruzi se
identificaron dos genes que putativamente codifican
para la galactocinasa (Galk120 y Galk110); ambos
fueron clonados mediante PCR usando oligos
especficos para cada uno y, a partir delADN genmico
del parsito, fueron secuenciados y subclonados en
el vector pET28a. Las dos protenas recombinantes
se expresaron en la bacteria Escherichia coli, cepa
BL21, y se purificaron a homogeneidad mediante
428
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
una cromatografa de unin a metales (IMAC). Se
determinaron las constantes km y Vmax para galactosa
y ATP, y se determin la localizacin subcelular en
epimastigotes de T. cruzi mediante centrifugacin
diferencial y permeabilizacin selectiva con
digitonina.
Resultados. Las secuencias de aminocidos de
las dos galactocinasas comparten un porcentaje
de identidad de 53 % y presentan una seal de
importacin al glucosoma PTS-1, ubicacin
subcelular que fue comprobada en el estadio
de epimastigote. Ambas GalK poseen un peso
molecular de alrededor de 51 kDa, aunque
presentan diferentes puntos isoelctricos (pI) de
8,11 para GalK120 y de 6,99 para GalK110. La
GalK120 se expres insoluble, mientras que la
GalK110 fue parcialmente soluble, y para esta ltima
se determinaron los valores de km para galactosa y
ATP, 100 M y 350 M, respectivamente.
Conclusin. Los epimastigotes de T. cruzi
expresan ambos genes Galk y las galactocinasas
se encuentran en el glucosoma; esta enzima podra
intervenir en la produccin de UDP-galactosa,
sustrato de las galactosil-transferasas.
Evaluacin de la protena
recombinante p20, semejante a
una calpana, como antgeno en el
diagnstico de la enfermedad de
Chagas en fase crnica
Annie Castillo, Alfredo Mijares, Juan Luis Concepcin,
Jos David Rosales
Instituto Venezolano de Estudios Avanzados, Miranda,
Venezuela
Introduccin. Los marcadores cardiacos son
sustancias liberadas hacia la sangre cuando
se produce un dao al corazn. De los pocos
utilizados, el marcador de eleccin es la troponina.
Otros marcadores cardiacos son menos especficos
de lesin cardaca y pueden aumentar, tambin, en
lesiones o enfermedades del msculo esqueltico,
y en enfermedades hepticas o renales. Sin
embargo, estos marcadores no son tiles en el
seguimiento de la evolucin de la cardiopata de la
enfermedad de Chagas que, a medida que progresa
la enfermedad, compromete la actividad cardiaca.
Esto ocurre en 20 a 30 % de los afectados. A pesar
de varios intentos de grupos de investigacin, los
resultados no han sido alentadores; hace falta
la bsqueda y estandarizacin de este tipo de
biomarcador para poder determinar a qu pacientes
se les aplicar el tratamiento. Las protenas calpain-
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
like (CALP) son protenas atpicas y son frecuentes
en todos los eucariotas inferiores. Algunas de estas
protenas poseen cambios en su sitio cataltico y
estn acompaadas del sitio de unin de calcio
o no lo estn. Este trabajo de investigacin
demuestra el uso de la calpain-like de T. cruzi en el
reconocimiento serolgico de las diferentes formas
clnicas de la enfermedad de Chagas.
Materiales y mtodos. Todos los reactivos son de
grado biologa molecular, excepto los utilizados en
los cultivos celulares. Las formas epimastigotes
de T. cruzi se cultivaron en medio LIT. Los cultivos
de tripomastigotes y amastigotes de T. cruzi se
obtuvieron a partir del cultivo de clulas Vero (Cepa
EP y la YBM). Las diferentes cepas de Escherichia
coli se cultivaron en medio LB a 37 C. Se utiliz
como vector de expresin el pET28a.
Se recolectaron 96 sueros y 56 muestras de
sangre de pacientes adscritos a los Servicios de
Cardiologa del Instituto de Medicina Tropical de
la Universidad Central de Venezuela (Dr. Juan
Mrquez y Dr. Ivn Mendoza), y del Servicio de
Cardiologa del Hospital Universitario de los Andes
(estado Mrida) (Dr. Diego Dvila).
A todos los participantes se les entreg por escrito un
consentimiento informado respetando los criterios
ticos del comit de biotica del IVIC. Todos los
pacientes se agruparon bajo la clasificacin clnica
de H. Carrasco. Despus de la recoleccin de las
muestras, se llev a cabo el serodiagnstico para
la enfermedad de Chagas.
Resultados. En este trabajo se subclon, se
hiperexpres y se purific la P20 semejante
a calpana de T. cruzi, la cual se estudi como
marcador de progresin de la lesin cardiaca
inducida por la infeccin. Se encontr una
correlacin significativa (p<0,0001) entre el
grado de lesin cardaca, el uso de frmacos
convencionales y el ttulo anti-P20 en sueros de
78 pacientes con enfermedad crnica de Chagas,
clasificadas por grupos clnicos y procedentes de
dos localidades (urbana y rural).
Conclusin. En este trabajo de investigacin se
demuestra el uso de la calpain-like recombinante
de T. cruzi en el reconocimiento serolgico de
las diferentes formas clnicas de la enfermedad
de Chagas. Este marcador podra ser utilizado
para seguir el desarrollo y la progresin del dao
cardiaco, as como el impacto del tratamiento
mdico convencional no etiolgico.
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
Estudio fitoqumico preliminar de las
flores y hojas de Acmella ciliata (HBK)
cass y evaluacin de la actividad
biolgica de los extractos y del aceite
esencial
Carlos Andrs Rincn
Universidad del Quindo, Armenia, Colombia
Introduccin. Acmella ciliata (HBK) cass es una
arvense, o mal llamada maleza, que presenta
propiedades analgsicas, antiflogsticas, antimicro-
bianas, larvicidas, anestsicas y hepatoprotectoras.
En esta investigacin se hizo la caracterizacin
fitoqumica preliminar de las flores y hojas de Acmella
ciliata (HBK) cass y se evalu la actividad biolgica
de los extractos y del aceite esencial.
Materiales y mtodos. Los extractos de los
diferentes rganos vegetales se obtuvieron por
lixiviacin, extractor Soxhlet y ultrasonido. Los
aceites esenciales de las flores y de las hojas
se extrajeron por hidrodestilacin asistida por
microondas (MWHD) e hidrodestilacin (HD) y se
analizaron por CG/MS. A los diferentes productos
extrados se les evalu su actividad antimicrobiana
con tincin de Gram y para levaduras mediante los
mtodos de difusin en disco y microtitulacin en
placa con resazurina y evaluacin de la dosis letal
media (DL50) en artema salina.
Resultados. Los diferentes extractos de la planta
presentaron gran abundancia de metabolitos polares
y apolares, destacndose entre ellos los flavonoides
y las alcamidas alifticas. La hidrodestilacin
asistida por microondas result ser la tcnica ms
efectiva para la extraccin de los aceites esenciales.
La composicin qumica del aceite esencial de las
flores y de las hojas se caracteriz por contener una
alta proporcin de sequiterpenos tales como el trans-
a-cariofileno, su componente mayoritario. Adems,
se encontr el espilantol en el perfil cromatogrfico
de las flores de A. ciliata (1,309 %).
Los extractos obtenidos presentaron una importante
actividad antimicrobiana frente a las bacterias Gram
positivas Staphylococcus aureus y Staphylococcus
epidermidis; slo el aceite esencial y la fraccin
lipdica de las flores, rica en alcamidas, presentaron
un efecto inhibidor en Candida albicans. Las DL50
estuvieron por encima de las 100 ppm, lo que
demuestra su baja toxicidad.
Conclusin. Pese a su eficaz accin antimicrobiana
frente organismos Gram positivos, los extractos
obtenidos presentaron baja toxicidad, lo cual da
campo a nuevas investigaciones en las que se les
encuentre un uso en farmacologa.
429
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
Anlisis molecular de la estructura
gentica y aislamiento por distancia
del vector primario de malaria
Anopheles darlingi en Colombia
Carol Yovanna Rosero-Galindo, Ranulfo Gonzlez
Departamento de Biologa, Facultad de Ciencias,
Universidad del Valle, Cali, Colombia
Introduccin. Anopheles darlingi Root, 1926, es
un vector primario de malaria en el neotrpico. Es
una especie no slo muy antropoflica, sino muy
eficiente en la transmisin de las especies de
Plasmodium, y se considerada como el principal
vector en la regin amaznica, medio Atrato, bajo
Cauca y casi toda la regin oriental del territorio
nacional. En Colombia esta especie puede
encontrarse en la zona de premontana de los
Andes hasta los 450 m de altitud, hecho que ha
motivado la realizacin de estudios previos en la
zona biogeogrfica del Choc y que demostraron
una pequea estructura gentica y una mayor
capacidad vectorial en algunas localidades.
Este estudio se hizo con el objetivo de determinar,
en Colombia, la existencia de la estructura
gentica entre las poblaciones del vector primario
de malaria, An. darlingi, usando para tal fin
microsatlites y el gen timeless como marcadores
genticos. Su desarrollo est justificado porque
los resultados contribuyen al esclarecimiento del
estado gentico de las poblaciones anofelinas
y rechazan la hiptesis de que las diferencias
genticas observadas se explican por el modelo
de aislamiento por distancia.
Materiales y mtodos. Se recolectaron 300
hembras anofelinas, procedentes de localidades
de seis departamentos localizados en la regin
occidental: Bet (Choc), Pueblo Nuevo (Crdoba)
y Las Margaritas (Santander), y oriental: La
Esperanza (Meta), Inrida (Guaina) y Mit
(Vaups). Las muestras se recolectaron usando
cebo humano y se preservaron a -70 C, previa
identificacin morfolgica.
Los polimorfismos de loci microsatlites se
obtuvieron por PCR, empleando cebadores
reportados por Conn, et al. (2001); el tamao de
los alelos se cuantific en geles desnaturalizadores
de poliacrilamida, por comparacin con una
escalera de 25 pb (Promega). Los polimorfismos
del gen nuclear timeless se obtuvieron por PCR
y secuenciacin, empleando cebadores aislados
para esta especie en el Laboratorio de Biologa
Molecular de Insectos del Instituto Oswaldo Cruz
en Brasil.
430
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Resultados. El anlisis con siete loci microsatlites
(STR) evidenci gran diversidad gentica, mayor en
la poblacin de Mit (Na=14, Ho=0,520), y menor
en Pueblo Nuevo (Na=12, Ho=0,457). La regin
oriental y las poblaciones de Mit y La Esperanza
presentaron el nmero ms alto de alelos privados
(Ap=30; Ap=13 y Ap= 9, respectivamente), con
frecuencias que variaron entre 0,010 y 0,097.
Se encontraron desviaciones significativas
(p<0,0001) del equilibrio Hardy-Weinberg en las
seis poblaciones de An. darlingi, hecho que puede
explicarse por el dficit de heterocigotos, asociado
con el desequilibrio de ligamiento observado en los
siete loci STR empleados (p<0,05).
El anlisis molecular de varianza (AMOVA)
demostr, en la poblacin total, una diferenciacin
gentica moderada (FST=0,063, p<0,05). Igual
diferenciacin se observ (0,063< FST >0,060,
p<0,05) en cinco de las seis poblaciones
incluidas en este trabajo y baja diferenciacin
en Las Margaritas (FST=0,023, p<0,05). Adems,
se encontr una correlacin positiva dbil y
estadsticamente no significativa, entre la distancia
geogrfica y la gentica (Z=0,3939, r=0,3648,
p=0,8963) lo que, probablemente, sugiere que la
moderada diferenciacin gentica entre las parejas
de poblaciones no puede explicarse por la hiptesis
de aislamiento por distancia.
El anlisis con el gen nuclear timeless revel una
gran diversidad haplotpica (h=0,922) y nucleotdica
(=0,005). Los valores de variaron entre 0,003
y 0,006, y fueron mayores en las localidades de
Las Margaritas, Mit e Inrida, y menores en
Pueblo Nuevo y Esperanza. La AMOVA mostr
una estructura gentica grande y equivalente
a 31,9 % (p<0,05); en el anlisis por pares de
poblaciones, se encontraron valores iguales o
superiores a lo observado para la poblacin total.
Adems, se reporta la existencia de dos haplotipos
ancestrales I y II, y cinco niveles de agrupamiento
en 48 haplotipos, de los cuales, 28 se identificaron
en el muestreo y 20 se consideraron extintos. El
agrupamiento exhibi restriccin del flujo gnico
en tres clados, lo que se explica por dos posibles
mecanismos: 1) restriccin del flujo gnico con
dispersin de los individuos, pero con algunos
individuos que tienen una larga dispersin de
distancia en las zonas intermedias no ocupadas
por la especie, o 2) flujo de genes seguido de
extincin de las poblaciones intermedias.
Conclusin. Los resultados obtenidos en esta
investigacin permiten concluir que los modelos
de distribucin neotropical podran sustentar
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
mejor la variacin gentica observada en los
datos microsatlites y gen timeless, y atribuible a
las diferencias biogeogrficas de cada localidad,
segn la clasificacin de Monrone, (2006). Por
otro lado, la baja tasa de migracin observada,
adems de las desviaciones del equilibrio Hardy-
Weinberg, no permiten concluir que las poblaciones
de An. darlingi estn en panmixia, razn por
la cual se sugiere que los planes de control se
programen diferencialmente segn la distribucin
biogeogrfica.
Finalmente, se recomienda analizar las poblaciones
consideradas en este estudio, usando genes
mitocondriales y el marcador nuclear white, para
corroborar la hiptesis de refugios, planteada
previamente por Conn y Mirabello (2007) y discutida
en esta investigacin.
Caracterizao biolgica e molecular
de cepas de Trypanosoma cruzi
procedentes de reas endmicas do
Mxico
Csar Gmez Hernndez, Eliane Lages Silva, Luis
Eduardo Ramrez
Universidade Federal do Tringulo Mineiro, Minas
Gerais, Brasil
Introduo. Durante muito tempo foi questionada
a magnitude da doena de Chagas no Mxico onde
consideravam um padecimento extico. Tendo
em conta a grande diversidade gentica existente
entre isolados de Trypanosoma cruzi, a importncia
da caracterizao biolgica destes e o escasso
nmero de informaes sobre os aspectos clnicos
e biolgicos da doena de Chagas no Mxico, o
objetivo deste trabalho foi realizar a caracterizao
biolgica e molecular de isolados de T. cruzi
procedentes de diferentes reas endmicas do
Mxico.
Mtodos. Oito cepas mexicanas de T. cruzi
foram caracterizadas biologicamente in vitro
(clulas VERO, MK2 e macrfago peritoneal
de camundongo) e in vivo (camundongos no
isognicos) e geneticamente PCR especfica para
T. cruzi, T. rangeli, e para classificao dos grupos
ou subgrupos de T. cruzi e RAPD para observao
de variabilidade gentica entre as cepas.
Resultados. Foram detectados dois tipos de
parasitemia: patente com picos mximos de
parasitemia entre 4,6 106 e 107 parasitos/ml e
subpatente. Observou-se tropismo predominante
pelo msculo estriado (cardaco e esqueltico)
e uma infectividade (de 25 a 80%) nas clulas
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
estudadas. As tcnicas de PCR do gene do mini-
xon classificaram as oito cepas como TcI, a PCR
dos hapltipos caracterizaram as mostras como
Ia e Id, porem, a banda relacionada ao hapltipo
Ia foi de tamanho diferente descrita por Herrera,
et al. (2009). A tcnica de RAPD mostrou variao
intraespecfica entre as cepas, separando as cepas
isoladas de humanos daquelas de triatomneos e
por origem geogrfica.
Concluso. Esses resultados demonstram que
as cepas de T. cruzi que circulam no Mxico tm
um tropismo tecidual predominante pelo msculo
estriado, so altamente infectantes in vitro e in vivo
e correspondem ao perfil T. cruzi I, hapltipos Ia e
Id, ressaltando-se pela primeira vez a presena de
hapltipos mistos de T. cruzi.
Modelo de un sistema de vigilancia,
prevencin y control de rabia
transmitida por murcilagos en las
reas urbanas del departamento del
Valle del Cauca
Constanza Nez Meja, Lyda Osorio
Universidad del Valle, Cali, Colombia
Introduccin. El virus de la rabia transmitido
por murcilagos urbanos afecta la salud pblica.
Actualmente, no hay vigilancia de la rabia
transmitida por murcilagos urbanos en Colombia.
El objetivo fue desarrollar un modelo de vigilancia,
prevencin y control de la rabia transmitida por
murcilagos urbanos en el departamento del Valle
del Cauca.
Materiales y mtodos. Se llev a cabo un estudio
descriptivo y retrospectivo que recopilaba y
analizaba informacin relevante para proponer un
modelo de vigilancia y control de la rabia transmitida
por murcilagos urbanos, teniendo presente los
aspectos legales y tcnicos apropiados.
Resultados. En los departamentos de Casanare,
Vichada, Cauca y Valle del Cauca, aument la tasa
de accidente rbico en humanos por murcilagos
en comparacin con los aos anteriores. Los
municipios del Valle del Cauca con aumento de los
accidentes rbicos estn ubicados en la zona norte
y centro del departamento.
Los murcilagos predominantes son Artibeus
lituratus en las zonas verdes y Molossus molossus,
invadiendo edificaciones. Se analizaron 1.321
murcilagos, de los cuales, cuatro resultaron
positivos para rabia con variantes V3/Vampiro
Desmodus rotundus y V4/insectvoro Tadarida
brasiliensis.
431
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
Se propuso un modelo de vigilancia epidemiolgica
para la rabia transmitida por murcilagos urbanos,
que integre acciones de los ministerios de Ambiente,
Salud y Agricultura. El modelo defini parmetros
para clasificar el riesgo de rabia transmitida
por murcilagos urbanos en el Valle, siguiendo
las recomendaciones previas del Ministerio
de Proteccin Social y el Instituto Colombiano
Agropecuario.
El nivel de riesgo se asign segn: 1) la calidad del
sistema de informacin y vigilancia epidemiolgica
de rabia urbana, 2) las poblaciones de murcilagos
urbanos invasores/edificaciones, 3) la calidad y
oportunidad de atencin a personas agredidas, y
4) los planes de capacitacin.
El modelo propone hacer vigilancia pasiva y
activa para rabia silvestre, en puestos centinelas
principales y satlites. Se propone que el marco
normativo incluya aspectos especficos para la
rabia silvestre en murcilagos en reas urbanas.
Aplicando este modelo en el departamento del Valle,
se determin el riesgo medio para transmisin de
la rabia por murcilagos urbanos.
Conclusin. La aplicacin de este modelo puede
ayudar a categorizar el riesgo para la rabia
transmitida por murcilagos urbanos del pas para
priorizar las acciones de vigilancia.
Efecto de promastigotes muertos,
BCG y glucantime en el tratamiento de
las lesiones causadas por Leishmania
peruviana en Mesocricetus auratus
Digenes Llanos-Rodrguez, Judith Roldn-Rodrguez,
Julissa Domnguez-Olivera
Universidad Nacional de Trujillo, Trujillo, Per
Introduccin. La leishmaniasis es una histopa-
rasitosis de importancia en salud pblica a causa de
su difcil prevencin. Su tratamiento se fundamenta,
principalmente, en el uso de antimoniales
pentavalentes, compuestos de alta toxicidad para
el organismo y que tienen uso limitado en pacientes
con cardiopata o nefropata, y en mujeres
embarazadas. Por esta razn, el desarrollo de la
inmunoterapia con la evaluacin de sustancias
con actividad adyuvante o inmunopotenciadora,
constituye una de las tendencias ms importantes
en la investigacin inmunolgica actual.
Objetivo. Evaluar el efecto de la aplicacin de
promastigotes muertos, BCG y glucantime en el
tratamiento de las lesiones causadas por Leishmania
peruviana en Mesocricetus auratus cepa sirio
dorado, inoculados experimentalmente.
432
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Materiales y mtodos. Se establecieron cinco
grupos, A, B, C, D y E, cada uno conformado por
cuatro M. auratus, a los cuales se les aplicaron 1
x 106 amastigotes/ml de L. peruviana. Cuando la
lesin era evidente (30 das), se les administr: al
grupo A, 0,1 ml de promastigotes muertos por calor,
al B, 0,2 ml de promastigotes muertos por calor
ms BCG, al C, 0,1 ml de promastigotes muertos
por calor ms 0,1 ml de glucantime (8,5 mg/kg) , al
D, slo 0,1 ml de glucantime (8,5 mg/kg) y al E, 0,1
ml de SSF; los promastigotes muertos por calor se
administraron por va intraperitoneal y el glucantime
por va intramuscular. La dosis fue una diaria,
durante 10 das consecutivos, suspendindose
por un periodo de 10 das y luego se reanud el
tratamiento por 10 das ms; se evalu el tamao
de la lesin, el diagnstico parasitolgico (cultivos,
cortes histolgicos e inoculacin) y las alteraciones
histopatolgicas.
Resultados. Los hmsters del grupo C lograron la
cura de la lesin y el diagnstico parasitolgico e
histolgico negativo, en comparacin con los otros
grupos; se encontraron diferencias estadsticas
entre ellos.
Conclusin. Los promastigotes muertos por
calor ms glucantime (8,5 mg/kg) tienen efectos
teraputicos sobre las lesiones causadas por L.
peruviana en M. auratus.
Estudio del complejo
ribonucleoproteico involucrado en la
sntesis y mantenimiento del telmero
en el parsito Plasmodium falciparum
Eliana Calvo, Moiss Wasserman
Universidad Nacional de Colombia, Bogot, D.C.,
Colombia
Introduccin. En clulas eucariontes, por cada
divisin celular se presenta una prdida de
ADN telomrico, fenmeno conocido como el
problema de la replicacin final. En ausencia de
mecanismos que compensen la prdida, luego de
un nmero determinado de divisiones celulares,
los telmeros alcanzan una longitud crtica, lo cual
causa interrupcin en el crecimiento, senescencia
y muerte. La solucin al problema es la adicin
de secuencias telomricas, llevada a cabo por
un complejo ribonucleoproteico denominado
telomerasa. En presencia de telomerasa, los
telmeros se mantienen y la clula puede seguir
replicndose indefinidamente.
Dado que la actividad telomerasa podra ser
el mecanismo que le confiere la capacidad
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
de proliferacin casi ilimitada a Plasmodium
falciparum, agente causante de la forma ms grave
de malaria humana, el presente trabajo se enfoc
en el anlisis de los componentes del complejo y
en establecer si la inhibicin de la actividad afecta
la proliferacin celular.
Materiales y mtodos. Se gener un anticuerpo
policlonal contra la subunidad cataltica TERT,
utilizando una protena recombinante como
inmungeno.
Para establecer si la inhibicin de la actividad de
la telomerasa afectaba la tasa de proliferacin,
se hizo un silenciamiento parcial y transitorio de
los genes que codifican para el ncleo cataltico,
PfTert y PfTER, mediante ARN interferente.
Resultados. El ncleo cataltico del complejo
telomerasa, la subunidad proteica (PfTERT) y
la subunidad ARN (PfTER), se detectaron en los
estadios de desarrollo intraeritroctico, pero de
manera aumentada en el estadio de trofozoto y
esquizonte, etapas de desarrollo en las que ocurren
mltiples rondas de replicacin de ADN.
El silenciamiento parcial de los dos genes ocasion
una significativa disminucin en el crecimiento
del parsito, lo que permiti sugerir que ambos
genes son esenciales para la proliferacin celular.
Adems, el parsito es sensible a inhibidores de
la actividad telomerasa, pues con slo tres das
de tratamiento con telomestatn, el crecimiento del
parsito disminuy en 90 %.
el departamento.
Epidemiologa molecular del virus del
dengue circulante en el departamento
de Sucre
Erwin Yesid Camacho, Pedro Jos Blanco, Anais
Castellar
Universidad de Sucre, Sincelejo, Colombia
Introduccin. El dengue es una de las
enfermedades de mayor importancia en salud
pblica en las reas tropicales y subtropicales
del mundo; sin embargo, existe una ausencia en
cuanto a vigilancia virolgica en el departamento
de Sucre.
El objetivo principal de esta investigacin fue
estudiar la epidemiologa molecular del virus en el
departamento de Sucre.
Materiales y mtodos. Se recolect suero y plasma
sanguneo de pacientes con diagnstico indicativo
de dengue durante 2009 y 2010. Se sometieron a
tipificacin molecular con cebadores especficos
de serotipo. Adems, se amplific un segmento de
511 bp (C/prM), el cual se someti a secuenciacin
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
para posterior anlisis filogentico con neighbor-
joining y mxima verosimilitud, para determinar
los genotipos del virus, e inferencias bayesianas,
para establecer tiempos de divergencia y tasa
de sustitucin. Se hizo el modelado molecular
comparativo de la protena C, para visualizar los
cambios de los aminocidos de las cepas del
departamento de Sucre en comparacin con otros
genotipos.
Resultados. El 54,6 % (41) de las muestras
resultaron positivas para deteccin molecular del
genoma viral: en la poblacin de menores de 10
aos de edad fue en la que se detect la infeccin
con mayor frecuencia (48,78 %).
Se detect la presencia de los cuatro serotipos del
virus con diferencias en el patrn de distribucin
espacio-temporal. El serotipo ms frecuente fue
DENV1 (43,9 %), seguido de DENV2 (39,02 %),
DENV3 (12,2 %) y DENV4 (4,87 %). En Sincelejo
se presentaron la mayora de muestras positivas
(58,53 %) y los cuatro serotipos. La cepa de
DENV1 detectada perteneca al linaje americano/
africano, relacionada con cepas de Venezuela,
y las sustituciones de aminocidos no conferan
cambios estructurales significativos en la protena
C de la cepa de Sucre.
Conclusin. Este es el primer estudio en el
departamento de Sucre que permite definir
los serotipos circulantes y las relaciones
filogenticas del genotipo de DENV1 aislados en
Uso de mtodo de biologia molecular
quantitativo (PCR real-time) na
investigao de reservatrios para
leishmaniose visceral
Fred Da Silva Julio, Cristiane Souza Nascimento,
Edson Duarte Moreira Jr.
Ncleo de Pesquisa, Instituto Federal de Educao
Ciencia e Tecnologia Baiano, Santa Ins, Bahia, Brasil
Introduao. A leishmaniose visceral uma
zooantroponose sistmica de importncia
reconhecida em sade pblica, 90% dos casos
no novo mundo so oriundos do Brasil. Os ces
domsticos e as raposas so considerados como
os principais reservatrios. A persistncia da
Leishmania em reas endmicas e o insucesso das
medidas de preveno, dirigidas exclusivamente ao
reservatrio canino, sugerem que outros animais
podem ter importncia na manuteno do ciclo de
transmisso da leishmaniose visceral.
Materiais e mtodos. Foram estudados animais
433
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
domsticos (bovinos, equdeos, caprinos e ovinos)
e animais silvestres (gamb), no municpio de
Salinas da Margarida, Bahia, de 2007 a 2009. Todos
os animais domsticos de produo mantidos e/
ou pernoitando nas reas urbanas do municpio
foram includos. Os gambs foram capturados com
armadilha animal modelo Tomahawk colocadas
no peridomiclio das residncias onde ocorreram
casos de leishmaniose visceral humana e/ou
canina na localidade de Encarnao. Nos animais
domsticos de produo foi coletado apenas
amostra de sangue perifrico e nos gambs, alm
de sangue, foi obtida uma amostra de pele atravs
de bipsia da orelha.
Em todas as amostras foi realizado PCR real-time
para investigar a presena de ADN do parasito e
estimar a carga parasitria. Os primers e sondas
utilizados foram selecionados em gene SSU rRNA,
que aparece 160 vezes no genoma de Leishmania
spp. e altamente conservado entre as espcies
de Leishmania.
Resultados. No total, foram avaliados 80 animais
domsticos (20 bovinos, 33 equdeos, 20 caprinos e
7 ovinos) e 103 gambs, todos da espcie Didelphis
albiventris. Cinco bovinos foram positivos no teste de
PCR real-time com carga parasitria variando de 12,7
a 183,5 parasitos/ml. Apenas um gamb apresentou
amostra de sangue positiva (6,0 parasitos/ml). Todos
os demais animais testaram negativo.
Concluso. A tcnica de PCR real-time pode
ser uma ferramenta til para avaliar o papel de
potenciais reservatrios domsticos e silvestres
para leishmaniose visceral. A execuo do PCR
real-time menos trabalhosa e mais prtica do
que a realizao do teste de xenodiagnstico,
alm disso, ela poder ser automatizada, permitindo
a anlise de grande nmero de amostras em
estudos epidemiolgicos. A deteco de carga
parasitria de Leishmania em sangue de bovinos,
em quantidade comparvel encontrada em ces,
sugere que eles podem ser reservatrios para
leishmaniose visceral. A relativa abundncia de
bovinos nas reas endmicas para leishmaniose
visceral, assim como as evidncias da preferncia
alimentar do vetor por estes animais, ressalta a
importncia do papel que os bovinos podem ter
na transmisso da leishmaniose visceral. Mais
trabalhos so necessrios para elucidar estas
questes.
434
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Produccin de anticuerpos IgY
contra ocho serovares de Leptospira
interrogans prevalentes en el Valle del
Cauca
I. C. Naranjo
Universidad del Valle, Cali, Colombia
Introduccin. La produccin de anticuerpos IgY
ha tomado fuerza en tratamientos profilcticos y
curativos de diversas enfermedades.
El objetivo de esta investigacin fue producir
anticuerpos IgY contra Leptospira interrogans, que
pueden reemplazar a los IgG en las pruebas de
diagnstico rpido con una mayor sensibilidad,
que serviran para desarrollar pruebas que
detecten el microorganismo en las vas urinarias
de los portadores, y que pueden utilizarse en la
produccin de vacunas contra una variedad ms
amplia de serovares, o con especificidad para
los serovares de L. interrogans circulantes en el
departamento del Valle del Cauca.
Materiales y mtodos. Se inocularon gallinas
con un antgeno de lipopolisacrido compuesto
por una mezcla de los ocho serovares circulantes
en el Valle del Cauca y con una vacuna comercial
como control de antgeno, para luego extraer
del huevo la inmunoglobulina Y por medio de
deslipidacin con cloroformo y precipitacin con
sulfato de amonio. La presencia de IgY se verific
por medio de electroforesis en poliacrilamida y en
acetato de celulosa. Finalmente, se comprob con
la prueba de microaglutinacin que los anticuerpos
de gallina haban reaccionado contra los serovares
inoculados.
Resultados. Al comparar los ttulos en sangre
con los de dializado de huevo, se encontr que en
sangre fueron ms altos y constantes para todos
los serovares evaluados, y tanto en sangre como
en huevo, la vacuna de lipopolisacridos produjo
mayores ttulos que la vacuna comercial, llegando
a ttulos mximos de 1:1.280 para los serovares
autumnalis y bratislava.
Conclusin. Se produjeron anticuerpos IgY que
son de gran utilidad para el desarrollo de pruebas
de deteccin indirecta, midiendo la respuesta
inmunitaria del organismo infectado e, incluso,
podran llegar a reemplazar el uso de antibiticos
para tratamientos de la leptospirosis.
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Evaluacin del potencial de ligandos
de TLR2, TLR3, TLR4, TLR7/8 y TLR9
como adyuvantes de una vacuna
contra leishmaniasis cutnea por
Leishmania (Viannia) panamensis
Juan Camilo lvarez, Jos Robinson Ramrez
Universidad de Antioqua, Medelln, Colombia
Introduccin. La leishmaniasis es una enfermedad
causada por protozoarios del gnero Leishmania,
la cual presenta dificultades de tratamiento,
y la vacunacin es la mayor esperanza para
controlarla. En la actualidad, no existe una vacuna
y los candidatos seguros son poco inmungenos,
requirindose de adyuvantes que potencien la
inmunidad. Recientemente, se han propuesto los
ligandos de Toll como candidatos de adyuvantes,
por lo cual nos propusimos evaluar cinco ligandos
en una vacuna contra Leishmania (Viannia)
panamensis.
Materiales y mtodos. Se vacunaron ratones
BALB/c con: antgeno de L. (V.) panamensis,
antgeno ms oligonucletidos sintticos CpG,
antgeno ms lipopolisacrido de Escherichia coli,
antgeno ms cido lipoteicoico de Staphylococcus
aureus, antgeno ms resiquimod, antgeno ms
cido poliinosnico-policitidlico y PBS como control.
Uno o tres meses despus de la vacunacin, se
hizo un reto con L. (V.) panamensis, se midieron
las citocinas (IL-4, IL10, IL-13 e INF) en ganglios
linfticos y los anticuerpos (IgG1 e IgG2a) en el
suero sanguneo, antes de la infeccin y despus
de ella, y se determin la carga parasitaria.
Resultados. La evaluacin clnica demostr
que los CpG ms antgeno protegieron ratones
infectados. Esto se correlacion con disminucin
en la carga parasitaria y la medicin de citocinas
seala que la proteccin conferida por los CpG
se produce mediante una respuesta inmunitaria
predominantemente Th1 con produccin de IFN.
Los dems ligandos indujeron una respuesta Th2
con produccin de IL-4, IL-10 e IL-13, lo cual explica
por qu slo los CpG protegen. La induccin de
la respuesta Th1 por parte de los CpG tambin
se demostr con los anticuerpos mediante una
mayor razn IgG2a/IgG1, en comparacin con los
dems.
Conclusin. Los CpG ODN mostraron ser
efectivos como adyuvantes de una vacuna contra
la leishmaniasis cutnea en un modelo de ratn,
mientras que los dems ligandos no pudieron
conferir proteccin a las concentraciones probadas.
Adems, la proteccin conferida por los CpG se
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
produce mediante una respuesta inmunitaria
predominantemente Th1, antes de la infeccin y
despus de ella.
Epidemiologa de la malaria durante el
embarazo en Urab, Colombia, 2005-
2009: una construccin biosocial
Juan Gabriel Pieros
Universidad Nacional de Colombia, Medelln, Colombia
Introduccin. La malaria es una enfermedad con
gran impacto sobre la morbimortalidad materna
y neonatal. En Colombia y Latinoamrica, donde
su transmisin es inestable y predominan los
casos por Plasmodium vivax, se desconocen su
magnitud, caractersticas clnicas, impactos y los
aspectos que la explican.
Objetivo. Estudiar la epidemiologa de malaria
durante el embarazo en tres municipios del Urab
antioqueo.
Materiales y mtodos. Se us un diseo longitudinal
prospectivo con mujeres gestantes asistentes a
los servicios de salud; en cada control prenatal
se evaluaron clnica y parasitolgicamente. En el
parto se evaluaron la madre y el neonato. Se anid
un diseo de casos y controles, para establecer
el mejor modelo epidemiolgico explicativo de la
enfermedad.
Resultados. Se incluyeron 2.117 mujeres; se
identific infeccin materna en 10,4 %, infeccin
placentaria en 6,4 % e infeccin congnita en 4,3
%. El 10,2 % fueron afebriles y 13,3 % fueron casos
graves.
El haber tenido malaria el ltimo ao (OR=10,8; IC95
: 7,3-16,0), el residir en la zona menos de 10 aos
%
(OR=1,7; IC95 %: 1,1-2,4) y la gravidez mayor de
cero (OR=1,5; IC95 %: 1,0-2,2), fueron identificados
como factores de riesgo biomdicos.
El vivir en la serrana (OR=3,1; IC95 %: 1,5-6,8),
tener algn familiar agricultor (OR=2,6; IC95 %:
1,3-5,3), la presencia de cuerpos de agua en el
peridomicilio (OR=4,6; IC95 %: 2,3-8,9), el tener
vegetacin en el peridomicilio (OR=2,9; IC95 %: 1,5-
5,7), la agua de ro para consumo (OR=7,7; IC95 %:
1,8-33,9), el cocinar con lea (OR=3,7; IC95 %: 1,9-
7,1) y el alumbrarse con vela (OR=2,7; IC95 %: 1,1-
6,7), fueron las caractersticas socioeconmicas
asociadas con la infeccin.
Las mujeres gestantes paldicas tuvieron mayor
riego de aborto (OR04,45; IC95 %: 1,54-12,83),
mortinatos (OR=4,50; IC95 %: 1,54-12,83), retardo
del crecimiento intrauterino (OR=2,01; IC95 %: 1,24-
3,26) y baja longitud al nacimiento (OR=2,54; IC95 %:
1,08-5,97). Un modelo multivariado biosocial fue el
435
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
mejor modelo explicativo de la infeccin materna.
Conclusiones. La malaria es frecuente en mujeres
embarazadas de Urab y se presenta como
infeccin afebril o malaria grave. Sus factores
de riesgo se asocian a una mayor exposicin de
la mujer gestante a la enfermedad, e impacta
significativamente el curso del embarazo y el peso
y la longitud del feto.
Obtencin y caracterizacin molecular
de clones de Trypanosoma cruzi
seleccionados mediante plaqueo
directo en medio slido del contenido
de la ampolla rectal de Rhodnius
colombiensis, R. pallescens y R.
prolixus procedentes de diferentes
regiones de Colombia
Lina Marcela Villa, Yurany Eresbey Granada, Daniel
Zabala, Daniel Alfonso Urrea, Julio Csar Carranza,
Nstor Pinto, Omar Cantillo, Felipe Guhl, Gustavo
Adolfo Vallejo
Universidad del Tolima, Ibagu, Colombia
Introduccin. Trypanosoma cruzi I puede clasi-
ficarse en cinco genotipos (TcIa-Ie) y su circulacin
relacionarse con el ciclo epidemiolgico de
transmisin. En previas caracterizaciones
moleculares del parsito se han empleado
mtodos de aislamiento que identifican finalmente
al genotipo predominante, lo cual disminuye la
posibilidad de identificar los verdaderos clones
circulantes en la naturaleza. Por lo tanto, para
lograr una aproximacin real de los genotipos
que pueden estar presentes en el contenido de
la ampolla rectal de los vectores silvestres, se
emple la tcnica de plaqueo en medio slido y
su posterior identificacin.
Materiales y mtodos. Los parsitos del
contenido de la ampolla rectal de los vectores
silvestres Rhodnius colombiensis (Tolima), R.
prolixus (Casanare) y R. pallescens (Magdalena),
se sembraron en placas de medio slido (medio
BLAB) y se incubaron a 28C durante un mes. Los
clones se aislaron individualmente para identificar
los genotipos de T. cruzi I, empleando iniciadores
especficos para SL-IR del gen miniexn y la
tcnica de RAPD. Tambin, se emplearon cepas
de T. cruzi I de humanos.
Resultados. Se demostr el perfil TcIa/TcIb/
TcId en aislamientos humanos y algunos clones,
igualmente, el predominio del perfil TcIb/TcId en
los clones silvestres. El iniciador 1A fue modificado
436
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
para identificar especficamente el genotipo TcIa,
para aislamientos de origen domstico o silvestre.
Los RAPD mostraron la presencia de dos nodos:
uno correspondiente a clones de R. colombiensis y
R. pallescens, y otro con aislamientos humanos. El
genotipo de TcIe se report en este trabajo.
Conclusin. El empleo del iniciador 1Am y los
RAPD plantean la posible existencia de dos
grandes grupos de T. cruzi I, uno relacionado con
el ciclo domstico (TcIa) y otro con el ciclo silvestre
(TcIb/TcId). Posiblemente, en SL-IR existen copias
mltiples en tndem de secuencias repetidas y
variables, que privilegian en algunos casos la
deteccin del genotipo con mayor nmero de
copias.
Variabilidad morfolgica entre
poblaciones de Triatoma dimidiata
(Latreille, 1811) procedentes de cuatro
departamentos de Colombia
Lyda Esteban
Universidad Industrial de Santander, Piedecuesta,
Colombia
Introduccin. Despus de la descripcin de Latreille
(1811) y del estudio de Lent y Wygodzinsky (1979),
ste es el primer trabajo que incluye el estudio de
la variabilidad morfolgica y la genitalia externa
de cuatro poblaciones de Triatoma dimidiata de
diferentes regiones geogrficas en Colombia, que
permitir caracterizar sus poblaciones morfolgicas
en el pas y contribuir con la taxonoma de la
especie; adems, orientar futuras investigaciones
sobre el comportamiento epidemiolgico y estudios
moleculares.
Materiales y mtodos. Se estudiaron poblaciones
de T. dimidiata del oriente (Santander-Boyac/Zona
Andina) y noroccidente de la Cordillera Oriental
(Cesar y Magdalena/Sierra Nevada de Santa Marta),
mediante descripcin morfolgica de los caracteres
cualitativos y cuantitativos, morfologa de la genitalia
externa y patrones de coloracin.
Variacin morfolgica de la genitalia del macho.
Se hicieron descripciones morfolgicas de las
siguientes estructuras genitales: vesica, proceso
del endosoma, falosoma, soporte del falosoma
y pigforo. Los dibujos de la genitalia fueron
escaneados y digitalizados utilizando el programa
Adobe Ilustrator CS4 y se realizaron mediciones
con el analizador de imgenes Sigma Scan Pro,
versin 5.
Para la descripcin de la morfologa externa se
seleccion un grupo de caracteres cuantitativos y
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
cualitativos, segn los trabajos de Latreille (1811),
Usinger (1941, 1944), Lent y Wygodzinsky (1979)
y Zeledn (1981).
Las variables mtricas se analizaron mediante
un ANAVA y una prueba de comparacin mltiple
de Tukey-HSD, utilizando SPSS, versin 13. La
coloracin se estudi mediante presencia/ausencia.
Resultados. Morfologa externa de la genitalia. Se
observ gran variabilidad dentro de la poblacin en
las estructuras estudiadas; la de la Sierra Nevada
de Santa Marta posee un mayor nmero de
dentculos en el proceso del endosoma. El anlisis
estadstico agrup las poblaciones por procedencia
geogrfica.
Patrones de coloracin. La descripcin de
los caracteres cualitativos mostr variaciones
individuales; solamente la coloracin del pronoto
mostr un patrn que fue acorde con la ubicacin
geogrfica; Sierra Nevada de Santa Marta, negro
1+1 manchas amarillas laterales y, en la zona
andina, negro-pceo.
Tamao corporal y proporciones. Se observ
similitud en los valores promedios del hbito para
las poblaciones de los cuatro departamentos (31,02-
32-14 mm), aunque se presentaron variaciones
individuales.
Las poblaciones del oriente (Santander y Boyac)
se caracterizaron por tener cabezas ms largas
y delgadas (LTC/ACD) con ojos ms pequeos
(DOD/SY y ACL/LO) y ocelos ms grandes
(OC/OC1), contrario a lo que se encontr en el
occidente (Cesar y Magdalena). Esto se debi a
las diferencias significativas en la longitud de los
siguientes caracteres: LTC, DOD, LO, OC y OC1.
Conclusin. En este estudio, las proporciones
mtricas de la cabeza, la coloracin del pronoto
y la genitalia externa revelaron un patrn de
distribucin geogrfica y, quiz, tambin ecolgica, proceso de degradacin de nutrientes, penetracin
como se ha visto en otros triatominos, lo que
sugiere la existencia de dos poblaciones: al oriente,
originarias de cuevas, y al occidente, originarias
de palmas; los factores ecolgicos o geogrficos,
probablemente, participan en dicha diferenciacin.
Las caractersticas morfolgicas presentadas aqu
evocan las diferencias caractersticas morfolgicas
para T. dimidiata por Usinger (1944), que podran
estar relacionadas con las caractersticas
epidemiolgicas y que debern ser abordadas en
nuevos estudios.
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
Caracterizacin de las protenas de
excrecin y secrecin del nematodo
parsito Mammomonogamus
laryngeus
Mara Isabel Giraldo, Jhon Carlos Castao
Universidad del Quindo, Armenia, Colombia
Introduccin. Mammomonogamus laryngeus,
nematodo parsito hematfago, afecta las vas
respiratorias de mamferos domsticos. Se han
reportado ms de 100 casos de infeccin en
humanos en la literatura cientfica. En Colombia,
reportamos en el 2006 el primer caso de infeccin
en humanos en el departamento del Quindo y, en
2010, una prevalencia en bovinos de 14,5 %.
Materiales y mtodos. El perfil de protenas de
excrecin y secrecin se determin por SDS-
PAGE y se caracteriz mediante zimograma,
usando casena y gelatina. Para evaluar el tipo de
proteasa, se hizo un zimograma con inhibidores de
proteasas (leupeptin, EDTA, pepstatin A, AEBSF
y TPCK) y sin ellos Se llevaron a cabo ensayos
a diferentes pH y temperaturas. Posteriormente,
se hizo la inmunolocalizacin de cada una de las
protenas en el tejido del parsito.
Resultados y discusin. Los productos de excrecin
y secrecin mostraron actividad proteasa, cuyas
bandas presentan masas moleculares de 94,4 kDa,
la ms abundante, y una serie difusa de bandas de
122 kDa, 108 kDa y 72 kDa. Se observ actividad
de metaloproteasa por inhibicin con EDTA. Su
actividad ptima se produjo a pH 7,4. Las proteasas
permanecieron activas a temperaturas entre 4 y 42 C
y fueron indetectables a 55 C. La inmunolocalizacin
confirm que cada metaloproteasa se localiza en
diferentes partes del parsito.
Estos hallazgos sugieren que las protenas de
excrecin y secrecin estn involucradas en el
de tejidos o evasin del sistema inmunitario. Por
lo tanto, es necesario obtener ms informacin
sobre este parsito, para el entendimiento de sus
procesos infecciosos.
Distribucin espacial de poblaciones
de Triatoma dimidiata y Panstrongylus
geniculatus (Hemiptera: Reduviidae:
Triatominae) en Santander, Colombia
Mnica Flrez
Universidad Industrial de Santander, Piedecuesta,
Colombia
Introduccin. Se pretendi establecer la distribucin
espacial de Triatoma dimidiata y Panstrongylus
437
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
geniculatus en el departamento de Santander, y su
correlacin con variables ambientales obtenidas
de sensores remotos para la construccin de un
modelo bioclimtico pronstico.
Materiales y mtodos. Se construy un sistema
de informacin geogrfica a nivel de veredas,
con informacin obtenida de los programas de
vigilancia de la enfermedad de Chagas (1996-2008)
de Santander y con datos obtenidos de trabajo de
campo (vigilancia comunitaria, bsqueda activa
hora/hombre, trampa de luz y bsqueda pasiva
con cebo animal).
Las veredas se digitalizaron y referenciaron geogr-
ficamente partir de mapas anlogos y digitales.
Se utilizaron 60 variables ambientales: mnimos,
mximos, promedios y varianza de seis bandas
espectrales y dos productos operativos (NDVI, EVI)
del sensor remoto MODIS terra (lpdaac.usgs.gov),
un modelo de elevacin digital, y se calcularon
mnimos, mximos y promedios de nueve ndices de
vegetacin, en el anlisis multivariado discriminante
por pasos, utilizando 18 matrices con diferentes
criterios para escoger el mejor modelo bioclimtico.
Resultados. Se ha reportado T. dimidiata en 120
veredas y 13 cascos urbanos de 32 municipios
de Santander. Su modelo bioclimtico discrimin
la temperatura diurna mxima de la superficie y
el NDVI mximo, clasificando correctamente 73
% de las presencias y 99 % de las ausencias. Se
ha registrado P. geniculatus en 125 veredas y 12
cascos urbanos distribuidos en 40 municipios. El
modelo obtenido para esta especie mostr como
factores, que explican 92 % de las presencias y
95 % de las ausencias, a la temperatura nocturna
mxima de la superficie y diurna promedio y al
mnimo del ndice de vegetacin EVI.
Conclusin. Se establecieron reas con registros
reales y potenciales de presencia de estos vectores,
mediante la construccin de mapas temticos
de distribucin espacial y modelos bioclimticos
predictivos, cuyos resultados pueden orientar las
acciones de prevencin y control de la enfermedad
de Chagas en el departamento de Santander.
Polimorfismos de un solo nucletido
(Single Nucleotide Polymorphism)
en secuencias de ADN de trans-
sialidasa y proteasa de cistena de
epimastigotes de Trypanosoma cruzi
Mnica L. Cruz, Nelson A. Salazar
Universidad Militar Nueva Granada, Bogot, D.C.,
Colombia
438
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Introduccin. La enfermedad de Chagas es una
zoonosis causada por el protozoario flagelado
Trypanosoma cruzi, transmitido al husped
vertebrado por vectores insectos de la familia
Reduviidae.
Esta enfermedad presenta tres etapas: la aguda,
la indeterminada y la crnica, que se caracteriza
por lesiones en el miocardio o en el sistema
digestivo pasados algunos aos. Se considera una
enfermedad desatendida por el poco inters que
presentan la industria farmacutica y los gobiernos,
en su investigacin y desarrollo de nuevos
medicamentos, y porque afecta a la poblacin ms
pobre de Amrica; esto ltimo es consecuencia del
hbitat del vector, el cual coincide con los techos
de paja y grietas de las paredes de las viviendas
precarias.
Posee un DALY (Disability-Adjusted Life Year)
(aos de vida ajustados por discapacidad) de
649.000 y, segn la Organizacin Mundial de la
Salud, cada ao se registran 13.000 muertes.
Por lo anterior, el desarrollo de nuevos
medicamentos, seguros, poco costosos, que
tengan pocos efectos secundarios y que sean
efectivos durante la etapa indeterminada y crnica
de la enfermedad, es una necesidad actual. Una
de las estrategias ms atractivas es el desarrollo
de medicamentos dirigidos hacia los factores de
virulencia y a las molculas involucradas en los
procesos de invasin del parsito, a partir de lo
cual se reducen los efectos secundarios.
En este trabajo se busca estudiar la variabilidad
gentica de T. cruzi a nivel molecular de dos de
los ms importantes factores de virulencia: la
enzima trans-sialidasa y la proteasa de cistena
(cruzipana) debido al papel que cumplen durante
la infeccin y la supervivencia del parsito dentro
del husped, respectivamente. Esto se hizo
mediante la bsqueda de polimorfismos de un
solo nucletido (Single Nucleotide Polymorphism,
SNP) que pueden determinar el comportamiento
de dichas molculas.
Materiales y mtodos. Se cultivaron 17 aisla-
mientos colombianos de T. cruzi,que se obtuvieron
de pacientes con enfermedad de Chagas
provenientes de diferentes regiones geogrficas
del pas. En el caso de la proteasa de cistena,
solamente se usaron cinco de estos aislamientos.
Se hicieron ensayos de metaciclognesis, de
infeccin a clulas Vero, de extraccin de ADN y de
amplificacin de un fragmento de secuencia, que
contenan motivos importantes de cada enzima.
Despus de purificar y secuenciar estos fragmentos,
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
se usaron herramientas bioinformticas para sus
anlisis.
Se hizo el anlisis de sustitucin con el programa
Bioedit 7.0 para el clculo del punto isoelctrico.
Se utiliz el programa Expasy para determinar las
relaciones filogenticas y alineamientos mltiples
a partir de secuencias reportadas en la base de
datos GenBank. Para las dos enzimas, se utiliz
el programa MAFFT 6. Para los anlisis de RFLP
in silico, se utiliz pDRAW32 1.0 y, para los
anlisis estadsticos, G-Stat-Student 2.0 y SPSS
Statistics, 17.0.
Resultados. A partir de las secuencias obtenidas
para cada fragmento estudiado de trans-sialidasa
y proteasa de cistena, se hicieron anlisis de
sustitucin, en el que se encontr que la proporcin
de transicin/transversin de 2:1 corresponda a lo
reportado en la literatura cientfica.
En lo que respecta al punto isoelctrico, su clculo
demostr variacin en todos los aislamientos para
la trans-sialidasa, debido a que la mayora de
los cambios no eran conservativos, mientras que
para la proteasa de cistena la variacin no fue
relevante.
Para las relaciones filogenticas y RFLP in silico,
en las que se calcul el coeficiente de semejanza
con la frmula utilizada por Nei y Li (1979) F=2Nxy/
(Nx+Ny), se encontr que los grupos formados en
el rbol filogentico mediante el mtodo neighbour
joining, compartan los valores ms altos de
semejanza.
Mediante la prueba exacta de Fisher se relacio-
naron los polimorfismos con el sitio de origen del
aislamiento, infeccin en clulas Vero y procesos
de metaciclognesis desarrollados en este trabajo.
Asimismo, se relacionaron los ensayos de infeccin
en ratones ICR y los anlisis histopatolgicos
reportados en otros estudios, y se encontr que
la mayora de los polimorfismos no presentan
ninguna relacin con los resultados obtenidos en
estos ensayos.
En cuanto a la funcin cataltica de las enzimas, no se
encontraron cambios de aminocidos involucrados
directamente en el sitio activo o cambios en los
diferentes motivos caractersticos de la trans-
sialidasa, como la tirosina en la posicin 342, el
motivo VTVXNVFLNR importante para la unin del
parsito a clulas mamferas, las cajas de Asp con
funcin estructural y el eptopo IYNVGQVSI para
clulas T CD8+ que se mantienen conservados en
todos los aislamientos. Igualmente, se identificaron
16 eptopos CD8+ conservados para todos los
aislamientos de proteasa de cistena .
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
Conclusiones. Trypanosoma cruzi presenta una
gran variabilidad gentica, pero algunos de sus
genes que codifican para factores de virulencia
(trans-sialidasa y proteasa de cistena ), todava
conservan secuencias que son relevantes para
funciones como la adherencia, la penetracin y la
supervivencia en las clulas mamferas.
La mayora de las sustituciones encontradas
para el fragmento estudiado de trans-sialidasa,
corresponden a la regin C-terminal, por lo que la
actividad cataltica de la enzima no est afectada, al
estar localizada en la regin N-terminal. Asimismo,
la regin ms conservada para proteasa de cistena
corresponde al sitio cataltico.
No se encontr ninguna correlacin entre las
cepas y sus lugares de origen en la organizacin
del rbol obtenido a partir de las secuencias de los
fragmentos estudiados de trans-sialidasa y cistena
proteasa.
Aunque a partir de la prueba exacta de Fisher
se lograron relacionar algunos cambios de
aminocido con los resultados obtenidos en
los ensayos de infeccin, metaciclognesis y
anlisis histopatolgicos, estos resultados no son
concluyentes debido al bajo nmero de aislamientos
analizados.
La trans-sialidasa y la proteasa de cistena
conservan eptopos para clulas T CD8+ en
los aislamientos estudiados y las secuencias
reportadas en la base de datos GenBank, por lo
que podran ser secuencias que deben incluirse en
el diseo de nuevas vacunas contra la enfermedad
de Chagas.
Deteccin de mutaciones en los
genes gyrA y rrs de Mycobacterium
tuberculosis resistente a los
medicamentes de primera lnea y su
relacin con la resistencia fenotpica
a aminoglucsidos y fluoroquinolonas
en aislamientos de Medelln, 2004-2009
N. lvarez1,2, E. Zapata1, G. I. Meja1,2, T. Realpe1,2, J.
Robledo1,2
1
Corporacin para Investigaciones Biolgicas,
Medelln, Colombia
2
Universidad Pontificia Bolivariana, Medelln, Colombia
Introduccin. Las fluoroquinolonas y aminoglu-
csidos son la base del tratamiento de la
tuberculosis resistente a los medicamentos de
primera lnea. El blanco de las fluoroquinolonas es
la girasa de ADN codificada por los genes gyrA y
439
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
gyrB y, para los aminoglucsidos, es el rARN 16
codificado por el gen rrs. Las mutaciones en estos
genes son el principal mecanismo de resistencia.
La deteccin molecular de resistencia a estos
medicamentos facilitara el tratamiento oportuno
de la tuberculosis resistente a los medicamentos
de primera lnea..
Objetivos. Evaluar la sensibilidad de Mycobacterium
tuberculosis resistente a los medicamentos de
primera lnea a fluoroquinolonas y aminoglicsidos,
y buscar las mutaciones responsables de la
resistencia.
Establecer la relacin molecular entre las fluoro-
quinolonas con la girasa de ADN de aislamientos
con mutaciones en gyrA, mediante anlisis
bioinformtico de la relacin entre estructura y
actividad.
Metodologa. Se evaluaron aislamientos de M.
tuberculosis resistente a los medicamentos de
primera lnea por el mtodo de proporciones
mltiples. Se amplificaron y secuenciaron los genes
gyrA y rrs. Se usaron softwares especializados
para el anlisis de interacciones moleculares.
Resultados. De los aislamientos, 13 % (4/31) fue
resistente a fluoroquinolonas, dos con mutacin
en el gen gyrA. Se encontraron polimorfismos
no asociados con resistencia en los codones 21
(100 %) y 95 (97 %) de gyrA. El 15 % (3/20) de
los aislamientos fue resistente a aminoglucsidos,
todos con mutacin en la posicin 1401 del gen rrs.
No se encontraron mutaciones en los aislamientos
sensibles. A partir del modelo computacional, se
plante la hiptesis de que la levofloxacina acta
como un competidor del ADN por el sitio cataltico
de la girasa de ADN.
Conclusiones. La correlacin entre la resistencia
fenotpica y la presencia de mutaciones en los
genes gyrA y rrs nos permite contribuir con
investigaciones mundiales sobre la interaccin entre
las micobacterias y los antibiticos, para el desarrollo
de nuevos compuestos antimicobacterianos. Deben
buscarse mutaciones en otros genes.
Se debe buscar otras mutaciones en aislamientos
fenotpicamente resistentes y sin mutaciones en
gyrA y rrs. La relacin entre estructura y actividad
es una buena herramienta para evaluar las
interacciones entre los medicamentos y su blanco
de accin.
440
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Funcionalidad de linfocitos T CD4+/
CD8+ doblemente positivos en
pacientes con enfermedad de Chagas
Nicols A. Giraldo1, Natalia I. Bolaos1, Adriana
Cullar2, Fanny Guzmn3, Ana Mara Uribe4, Astrid
Bedoya5, Natalia Olaya6, Zulma M. Cucunub7,
Nubia Roa4, Fernando Rosas8, Vctor Velasco8,
Concepcin J. Puerta9, John M. Gonzlez1
1
Grupo de Ciencias Bsicas Mdicas, Facultad
de Medicina, Universidad de los Andes, Bogot, D.C.,
Colombia
2
Grupo de Inmunobiologa y Biologa Celular, Facultad
de Ciencias, Pontifica Universidad Javeriana, Bogot,
D.C., Colombia
3
Ncleo Biotecnologa Curauma, Pontificia
Universidad Catlica de Valparaso, Valparaso, Chile
4
Facultad de Medicina, Pontificia Universidad
Javeriana, Bogot, D.C., Colombia
5
Grupo de Infeccin y Cncer, Facultad de Medicina,
Universidad de Antioquia, Medelln, Colombia
6
Instituto de Patologa, Facultad de Medicina,
Universidad de Antioquia, Medelln, Colombia
7
Grupo de Parasitologa, Instituto Nacional de Salud,
Bogot, D.C., Colombia
8
Clnica Abood Shaio, Bogot, D.C., Colombia
9
Laboratorio de Parasitologa Molecular,
Departamento de Microbiologa, Facultad de Ciencias,
Pontifica Universidad Javeriana, Bogot, D.C.,
Colombia
Introduccin. Los linfocitos T CD4+/CD8+ doble-
mente positivos se han descrito en individuos sanos
y en pacientes con enfermedades autoinmunitarias
o infecciones crnicas. Esta subpoblacin ha
demostrado funcionar como clulas de memoria
efectora especficas de antgeno. En este trabajo
se evala la funcionalidad de esta subpoblacin en
pacientes con enfermedad de Chagas.
Materiales y mtodos. Se estudiaron 17
pacientes con enfermedad crnica de Chagas (7
asintomticos y 10 sintomticos), 12 donantes
no infectados y 12 pacientes con cardiopata que
no era debida a la enfermedad de Chagas. Las
clulas de sangre perifrica se marcaron con
anticuerpos contra CD3, CD4, CD8, HLA-DR, CD38
y perforina intracelular. La especificidad antignica
se determin usando el tetrmero HLA*A0201
con el eptopo K1 de T. cruzi o MP-Flu del virus
de la influenza. Las clulas doblemente positivas
de 11 pacientes con enfermedad de Chagas se
estimularon con el pptido K1 o con enterotoxina B
para medir la expresin de CD107 de superficie e
IFN- intracelular. Finalmente, el tejido cardiaco de
un paciente con enfermedad crnica de Chagas se
ti para CD4 y CD8 por inmunohistoqumica.
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Resultados. El porcentaje de linfocitos doblemente
positivos en los pacientes con enfermedad crnica
de Chagas (2,1 0,9 %) fue superior que en
individuos sanos (1,1 0,5 %) y pacientes con
cardiopata no chagsica (1,2 0,4 %, p=0,0017).
Los pacientes con enfermedad de Chagas
presentaron frecuencias mayores de linfocitos
doblemente positivos expresando HLA-DR, CD38
y perforina, y especificidad por K1. La produccin
de IFN- en las clulas K1-especficas fue superior
en los pacientes asintomticos, mientras que la
degranulacin fue mayor en el grupo sintomtico.
Estos linfocitos infiltraron el tejido cardiaco de un
paciente con enfermedad crnica de Chagas.
Conclusiones. Los pacientes con enfermedad
crnica de Chagas tienen un mayor porcentaje de
linfocitos T doblemente positivos, que expresan
marcadores de activacin y molculas con
potencial efector, al igual que presentan mayor
especificidad de clase I contra T. cruzi. Estos
linfocitos especficos contra K1 producen pocas
cantidades de IFN-, pero muestran una gran
capacidad citotxica en los pacientes sintomticos.
Finalmente, esta subpoblacin puede migrar al
tejido cardiaco.
Estudio molecular y bioinformtico
de un canal inico en Leishmania
braziliensis
scar Parada-Parra, Martha Posada, Marcela
Camacho
Centro Internacional de Fsica, Universidad Nacional de
Colombia, Bogot, D.C., Colombia
Introduccin. La supervivencia de Leishmania
durante su ciclo de vida depende de su capacidad
para adquirir nutrientes y regular su pHi y su
osmolaridad. Para hacerlo, el parsito utiliza
bombas de protones dependientes de ATP
acopladas funcionalmente al transporte de cloruro
a travs de su membrana plasmtica. Mediante
microinyeccin de ARNm de promastigotes de
Leishmania spp. en ovocitos de Xenopus laevis y
registros de voltage clamp, se detectaron corrientes
de cloruro dependientes del voltaje. Por lo tanto,
en este trabajo se buscaron secuencias putativas
para canales de cloruro dependientes del voltaje en
el genoma de Leishmania braziliensis que dieran
origen a las corrientes descritas.
Materiales y mtodos. Se disearon oligonu-
cletidos cebadores para amplificar el gen LbrM33_
V2.1260 por PCR convencional, lo que codificara
un canal de cloruro putativo. Se extrajo ARN total
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
de L. braziliensis y se sintetiz ADNc mediante
RT-PCR. Los amplificados se comprobaron por
electroforesis en geles de agarosa. El anlisis
funcional pronstico de la secuencia de aminocidos
putativa codificada por este gen, se hizo mediante
herramientas bioinformticas.
Resultados. Se obtuvo un producto amplificado
de 2.736 pb, peso esperado, correspondiente
al gen LbrM33_V2.1260. La secuencia putativa
de aminocidos codificada por este gen predice
un canal de cloruro dependiente del voltaje.
Filogenticamente, se agrupa con canales de
cloruro en especies cercanas evolutivamente y
canales de tipo CLC-6, que en los mamferos
estn ubicados en lisosomas y cotransportan H+.
Tiene dominios que podran estar asociados con
la regulacin o la ubicacin celular. La prediccin y
el modelado de estructura terciaria son confiables
en ~87 % y muestran que la protena putativa
tendra dominios transmembrana compatibles con
el transporte de cloruro.
Conclusin. Este es el primer reporte de la
expresin del gen LbrM33_V2.1260 en L.
braziliensis, cuya secuencia parcial tiene ~97 % de
identidad con la reportada en las bases de datos.
El anlisis pronstico muestra que la protena
que codifica este gen se comportara como un
cotransportador Cl-/H+ dependiente del voltaje,
funcin que sera determinante y necesaria para la
supervivencia de Leishmania spp.
Cytotoxic and pro-apoptotic activities
of Ancylostoma ceylanicum antigens:
implications into the modulation
of immune response of hookworm
infection
Pedro Henrique Gazzinelli-Guimares, Elaine Souza-
Fagundes, Guilherme Canado, Virgillio Martins, Lucas
Dhom-Lemos, Natasha Ricci, Jacqueline Fiza, Silvia
Regina Costa Dias, Lilian Lacerda Bueno, Rodrigo
Rodrigues de Cambraia Miranda, Silvia Guatimosim,
Andra Gazzinelli, Rodrigo Correa-Oliveira, Daniella
Castanheira Bartholomeu, Ricardo Toshio Fujiwara
Universidade Federal de Minas Gerais, Minas Gerais,
Brazil
Introduction. Hookworm infection is one of
the most prevalent parasitic diseases, infecting
an estimated 740 million people in tropical and
subtropical regions of the world. A robust but largely
ineffective immune response, characterized by
the ablation of parasite-specific T cell proliferative
response (hyporesponsiveness), is often observed
in the hookworm infection, resulting in long-term
441
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
parasite survival in host intestinal lumen. While
several mechanisms of modulation have been
demonstrated for hookworm and other neglected
tropical infections, the influence of apoptosis in the
immunomodulation of hookworm infection is still
poorly understood.
Methodology. We demonstrated the cytotoxic
and pro-apoptotic activity of hookworm excretory/
secretory products and adult crude extract in Jurkat
T cells, mesenteric lymph nodes lymphocytes of
healthy and hookworm-infected hamsters and
during human natural infection by MTT assay and
flow cytometry, respectively.
Results. Our results showed that in vitro stimulation
of Jurkat T cells with hookworm antigens induces a
significant dose-dependent decrease of cell viability
leading to a relevant increase of DNA fragmented
apoptotic cells. Similar results were also observed
in experimental conditions for both healthy and
hookworm-infected hamsters lymphocytes, with
significant levels of apoptotic cells in mesenteric
lymph nodes of the later group after antigenic
stimulation.
Flow cytometric analysis demonstrated that
hookworm-infected patients presented a significant
increase of CD4+, CD8+, and CD19+ lymphocytes
in early and/or late apoptotic stage when compared
with non-infected individuals.
Finally, the down-modulation of TNF receptor
family members (death receptors), as well as the
up-regulation of the pro-apoptotic genes belonging
to the BCL-2 and P53 families, observed by qPCR
analysis, suggest that hookworm antigens induced
apoptosis by an intrinsic mitochondrial pathway.
Conclusion. Taken together, our results suggest
that apoptosis induced by hookworms may
contribute to down-modulate hosts immunity
and act as a sophisticated strategy to safeguard
parasite long-term survival in their hosts.
aireacin, con pH neutro con tendencia alcalina
Caracterizacin de criaderos naturales
del gnero Lutzomyia (Diptera:
Psychodidae) recuperados en reas
de transmisin de leishmaniasis en
Colombia
Rafael J. Vivero, Horacio Cadena, Eduar E. Bejarano,
Sandra I. Uribe, Carolina Torres, Carlos E. Muskus
Programa de Estudio y Control de Enfermedades
Tropicales, Universidad de Antioquia, Medelln,
Colombia
Introduccin. Los criaderos naturales donde
se desarrollan los ejemplares inmaduros de
442
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
las especies del gnero Lutzomyia, son poco
conocidos debido al pequeo tamao de las larvas
y su preferencia por lugares con materia orgnica
en descomposicin de difcil percepcin. Para suplir
este vaco de informacin, es necesario abordar y
determinar las caractersticas de los microhbitats
que favorecen y regulan la reproduccin,
abundancia y distribucin de los flebotomneos,
para tratar de controlarlos posteriormente.
Materiales y mtodos. Se examinaron 160 sitios
potenciales de cra en reas con transmisin
de leishmaniasis en los departamentos de
Antioquia, Sucre y Choc, mediante bsqueda
directa, incubacin y trampas de emergencia. Los
ejemplares inmaduros se identificaron por medio
de la obtencin de adultos en laboratorio y con el
anlisis molecular del gen COI. La evaluacin de
los parmetros fisicoqumicos de los sustratos y la
identificacin de las especies arbreas asociadas,
se llevaron a cabo en los sitios positivos con
ejemplares inmaduros.
Resultados. En 38 sitios de cra se recuperaron
142 individuos, entre larvas, pupas, exuvias y
adultos emergidos. Los ejemplares inmaduros se
encontraron principalmente en races tabloides
(n=51), bases (n=35) y huecos de rboles (n=20).
Se identificaron 16 especies de flebotomneos,
la mayora luego de emerger a estado adulto,
resaltando la identificacin de 18 ejemplares
inmaduros que no completaron su ciclo de vida con
el gen COI.
Algunos factores, como el nmero de races
tabloides (Rt 711n=44 inm), el tipo de corteza
(lisan=51 inm; fisuradan=15 inm; laminarn=31 inm) y
las especies arbreas ornamentales/alimenticias,
resultaron determinantes en la agregacin de
flebotomneos.
El anlisis fisicoqumico sugiere que los criaderos
corresponden a suelos hmedos, francos con
y con alto grado de nutrientes disponibles para la
alimentacin de las larvas.
Conclusin. Es factible recuperar los ejemplares
inmaduros de flebotomneos en sus sitios de
cra, mantenerlos hasta adultos en laboratorio
e identificarlos con el gen COI. La informacin
obtenida permitir evaluar medidas de intervencin
sobre los criaderos para el control vectorial y
para realizar inventarios completos de la fauna
de flebotomneos en los focos de transmisin de
leishmaniasis.
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Evaluacin de las tcnicas PCR en
tiempo real, Speed-Oligo y Western
blot para el diagnstico confirmatorio
de toxoplasmosis congnita en
recin nacidos remitidos al Centro de
Investigaciones Biomdicas entre 2009
y 2011, Armenia, Colombia
Ral Eduardo Rivera, Jorge Enrique Gmez, Nstor
Ivn Cardona, Fabiana Mara Lora
Universidad del Quindo, Armenia, Colombia
Introduccin. La infeccin primaria con Toxo-
plasma gondii durante el embarazo puede resultar
en una infeccin congnita del recin nacido.
Cerca de 90 % de los recin nacidos infectados no
desarrollan sntomas y entre 30 y 40 % no desarrollan
anticuerpos IgM ni IgA en el nacimiento.
El reporte de las tcnicas, que generalmente son
pruebas serolgicas, muestran que en 20 a 30
% de los nios no se hace el diagnstico, pero
tienen un gran riesgo de desarrollar la enfermedad
durante su primer ao de vida si no se les brinda
un tratamiento inmediato. Por esta razn, nuestro
objetivo fue evaluar las tcnicas de PCR en tiempo
real, el estuche comercial Speed-Oligo (Vircell,
Espaa) y el estuche comercial de Western blot
IgG/IgM/IgA (LD-Bio, Francia) para el diagnstico
confirmatorio de toxoplasmosis congnita.
Materiales y mtodos. Se utilizaron muestras
de sangre de nios recin nacidos con sospecha
de infeccin congnita por T. gondii, en quienes
se usaron tcnicas convencionales para su
diagnstico (ELISA y PCR-avidez IgG, IgM e ISAGA
IgA); su estado de infeccin se defini segn los
criterios de la Red Europea de Toxoplasmosis
Congnita, que son: el aumento en los ttulos
de IgG en los primeros 12 meses de vida con
signos clnicos de la trada clsica (coriorretinitis,
hidrocefalia y calcificaciones intracraneales) o sin
ellos; persistencia de IgG positiva en los primeros
12 meses de vida con signos clnicos de la trada
clsica o sin ellos; IgM positiva en los primeros seis
meses de vida, e IgA positiva en los primeros seis
meses de vida. A estos nios se les practicaron
las pruebas de PCR en tiempo real, Speed-
Oligo y Western blot IgG, IgM, IgA, a las que
se les determin sensibilidad, especificidad y valor
diagnstico positivo y negativo.
Resultados. De acuerdo con los criterios de la
Red Europea de Toxoplasmosis Congnita, de 87
casos estudiados, 19 (21,8 %) se consideraron
como verdaderos positivos para toxoplasmosis
congnita. De ellos, slo 68,4 % (13/19) fue
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
diagnosticado por la combinacin de las pruebas
convencionales y los datos clnicos en los tres
primeros meses de vida y 31,5 % (6/19) slo pudo
ser diagnosticado hasta el ao de vida.
Con las pruebas convencionales practicadas y los
datos obtenidos para el ndice de avidez, se obtuvo
un nuevo punto de corte para esta tcnica que
mejora su sensibilidad en el diagnstico durante
el primer mes de vida (62,5 %; IC95%: 58-66). En
las pruebas evaluadas se obtuvo una sensibilidad
de 37% (IC95%: 32-42) para el diagnstico de
toxoplasmosis congnita en el primer mes de vida
con la PCR en tiempo real; 66 % (IC95%: 63-69) con
el Speed-Oligo; con el Western blot IgG 50 %
(IC95 %: 44-55); IgM, 45 % (IC95%: 39-51) e IgA,
70 % (IC95%: 64-75); y para el uso combinado de
Western blot IgG/IgM IgG e IgM, 80 % (IC95 %: 75-
84); y Western blot IgG/IgA, 71 % (IC95%: 66-76).
Conclusin. En este trabajo se demuestra la
importancia y la necesidad de realizar el seguimiento
durante el primer ao de vida de los nios con
sospecha de infeccin congnita, dado que las
pruebas convencionales utilizadas no presentan
una sensibilidad ptima para el diagnstico precoz
de toxoplasmosis congnita. Sin embargo, tambin
se encontr que la prueba de PCR-avidez puede
llegar a ser una buena tcnica para la confirmacin
del diagnstico temprano de esta enfermedad, al
igual que la deteccin combinada de anticuerpos
IgG e IgM mediante Western blot.
Efecto de los inhibidores de anhidrasa
carbnica en ejemplares inmaduros
y adultos de Anopheles albimanus:
alternativa de control para la malaria
Ral Leonardo Rocha, Carolina Torres, Wilmer Soler,
Sara Mara Robledo
Programa de Estudio y Control de Enfermedades
Tropicales, Universidad de Antioquia, Medelln,
Colombia
Introduccin. Entre las nuevas aproximaciones para
reducir la transmisin de la malaria se encuentran los
compuestos bloqueadores de la transmisin, siendo
los ms promisorios aquellos que inhiben enzimas
clave en los procesos involucrados en el desarrollo
de Plasmodium, como la familia de las anhidrasas
carbnicas. En el sistema digestivo del mosquito,
las anhidrasas carbnicas estn involucradas
en el mantenimiento del pH, y su inhibicin tiene
implicaciones en procesos fisiolgicos importantes
en el intestino posterior, donde se almacena y se
digiere la sangre.
443
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de cuatro
inhibidores de anhidrasa carbnica: acetazolamida,
metazolamida, etoxzolamida y dorzolamida, sobre
larvas y adultos de Anopheles albimanus.
Materiales y mtodos. En larvas de tercer estadio
de Anopheles albimanus (cepa Cartagena), se
evalo la mortalidad 24, 48 y 72 horas despus
de la exposicin a una concentracin de 50 g/ml
de inhibidores de anhidrasa carbnica, siguiendo
la metodologa de la Organizacin Mundial de
la Salud. En adultos, se usaron dos ensayos de
alimentacin artificial con sangre no infectada
combinada con acetazolamida, metazolamida,
etoxzolamida y dorzolamida a tres concentraciones,
para determinar la recuencia de alimentacin,
fecundidad y supervivencia. Adems, se aislaron
intestinos obtenidos de adultos para medir la
actividad esterasa de la anhidrasa carbnica y su
inhibicin con tres concentraciones de inhibidores
mediante un mtodo espectrofotomtrico.
Resultados. Los inhibidores de la anhidrasa
carbnica mostraron un efecto letal sobre las larvas
con rangos que oscilaban entre 30 % y 97 % de
mortalidad 72 horas despus de la aplicacin. En
adultos, los inhibidores de la anhidrasa carbnica
fueron inocuos, no afectaron la alimentacin,
la fecundidad ni la supervivencia despus de
dos ingestiones sanguneas. La actividad de
las anhidrasas carbnicas en el intestino medio
fue inhibida por acetazolamida, metazolamida y
dorzolamida, a una concentracin de 10 mM.
Conclusin. Nuestros resultados aportan bases
importantes para postular a los inhibidores de
la anhidrasa carbnica como una alternativa de
bloqueo de la transmisin para el control de la
malaria.
Determinacin de la variabilidad
gentica entre poblaciones de Aedes
aegypti (Diptera: Culicidae), vector del
virus del dengue, en los municipios de
Sincelejo y Guaranda, departamento
de Sucre
Sandy Caldera1, Cristina Jaramillo1, Suljey Cochero2,
Alveiro Prez-Doria1, Eduar Bejarano1
1
Grupo de Investigaciones Biomdicas, Universidad de
Sucre, Sincelejo, Colombia
2
Departamento Administrativo de Seguridad Social en
Salud de Sucre, Sincelejo, Colombia
Introduccin. El dengue constituye un problema
prioritario en salud pblica y actualmente la principal
alternativa de control es la vigilancia entomolgica
444
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
de Aedes aegypti, pero poco es lo que se conoce
sobre la variabilidad gentica de este insecto en
el pas y su adaptacin a los ambientes urbanos
sobre los cuales se ejercen constantes presiones
selectivas.
Entre stas se incluye el uso de insecticidas y, debido
a ello, nuestro principal objetivo fue determinar la
variabilidad gentica de las poblaciones de Aedes
aegypti de Sincelejo y Guaranda, usando el gen
mitocondrial ND4.
Materiales y mtodos. Se hizo un muestreo
aleatorio recolectando larvas de tercer y cuarto
estadio de Ae. aegypti, que fueron sometidas a
condiciones estndares de cra hasta completar
su desarrollo. Posteriormente, se observaron
bajo estereomicroscopio para su determinacin
taxonmica. A las hembras se les extrajo ADN y se
amplific un fragmento de 380 pb del gen ND4 por
PCR. Los productos amplificados fueron secuenciados
y, mediante la comparacin de las secuencias, se
hizo el anlisis de la variabilidad gentica.
Resultados. Se obtuvieron 36 secuencias de 281
pb y se detectaron 10 haplotipos. En la poblacin
de Guaranda, se observ un mayor nmero de
haplotipos. El haplotipo 1 es el ms frecuente.
Las pruebas de neutralidad demostraron que el
polimorfismo gentico sigue la teora neutral de
la evolucin molecular. El AMOVA mostr un alto
componente de variacin equivalente a 85 %,
que se atribuye a la variacin gentica dentro
de la poblacin, mientras que, entre poblaciones
present 15 % de variacin. Los valores de
estructura gentica (Fst=0,15) y flujo gentico
(Nm=1,40) mostraron una gran diferenciacin
gentica y la existencia de flujo gentico limitado
entre ambas poblaciones.
Conclusin. Este estudio ha reunido un conjunto
de hallazgos que demuestran que entre las
poblaciones de Ae. aegypti de Sincelejo y
Guaranda existe variabilidad gentica, llegando a
estar genticamente diferenciadas.
Clonacin, expresin y evaluacin de
protenas antignicas recombinantes
de Leishmania infantum
Sasha Silva-Barrios, Limari Gonzlez, Elizabeth
Mrquez, Ana Cceres, Juan Luis
Concepcin
Laboratorio de Enzimologa de Parsitos,
Departamento de Biologa, Facultad de Ciencias,
Universidad de Los Andes, Mrida, Venezuela
Introduccin. La leishmaniasis visceral es una
enfermedad parasitaria producida por Leishmania
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
infantum y representa un problema de salud pblica.
El diagnstico serolgico de esta enfermedad se
hace mediante diversas pruebas, las cuales, en su
mayora, tienen baja sensibilidad y especificidad
debido a la calidad de los antgenos empleados.
Con el propsito de identificar nuevos antgenos,
se clon, secuenci, sobreexpres y purific la parsito, que sean capaces de estimular la
regin repetida de la cinesina K346 (LinJ16.1750)
de L. infantum.
Materiales y mtodos. La capacidad antignica
de la protena recombinante se evalu mediante
las tcnicas ELISA y MABA, frente a sueros de
leishmaniasis visceral y enfermedades bacterianas,
virales y parasitarias. Adems, se uso como
patrn de referencia una variante del antgeno
recombinante rK39 (rK26).
Resultados. Se encontr que ambas protenas son
antignicas frente a los sueros con leishmaniasis
visceral; con las ELISA practicadas en sueros
humanos se obtuvo una sensibilidad de 100 %, tanto
para la protena rK26 como para la mezcla de rK26
y rK346, mientras que para rK346 la sensibilidad
fue de 59,3 % y la especificidad de 94,4 %. En los
sueros caninos se obtuvo una sensibilidad de 91 %
para rK346 y de 100 % para rK26 y para la mezcla;
la especificidad fue de 100 % para los antgenos
por separado y de 88 % para su mezcla. Con la
tcnica MABA en sueros humanos se obtuvo una
sensibilidad de 91 % para rK346, y de 100 % para la
mezcla y para rK26, mientras que la especificidad
para todos los antgenos fue de 100 %. Frente a
los sueros caninos, la sensibilidad y especificidad
fueron de 100 % para los diferentes antgenos.
Conclusin. Los valores del ndice kappa
obtenidos indican que existe concordancia entre
los diferentes ensayos realizados. Las protenas
recombinantes presentaron un carcter antignico,
y fueron sensibles y especficas para el diagnstico
de la leishmaniasis visceral de humanos y perros,
empleando las tcnicas ELISA y MABA.
lumbricoides se hizo mediante la tcnica ELISA.
Estudio de la respuesta de anticuerpos
especficos de tipo IgE contra Ascaris
lumbricoides en comunidades rurales
del estado Miranda
Sonia Pestana
Instituto de Inmunologa, Facultad de Ciencias,
Universidad Central de Venezuela, Caracas, Venezuela
Introduccin. La ascaridiasis es una infeccin
cuyo agente etiolgico es el parsito Ascaris
lumbricoides, el cual es el ms grande de los
nematodos que parasita el intestino humano. En
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
Venezuela, la infeccin por A. lumbricoides es la
geohelmintiasis de mayor importancia en salud
pblica debido a su gran frecuencia y morbilidad.
Adems, la infeccin induce gran produccin de
IgE y manifestaciones alrgicas.
La identificacin de antgenos derivados del
respuesta inmunolgica de tipo IgE en poblaciones
endmicas, permitira estudiar la respuesta de
anticuerpos, que ha sido reportada por algunos
autores como protectora, y diferenciar los individuos
resistentes de los sensibles. La investigacin en
nuestro pas sobre este aspecto ha sido poco
explorada. Estos resultados permitiran desarrollar
nuevas tcnicas de diagnstico y estudiar ms
a fondo la relacin del parsito, la induccin de
alergias y su posible papel protector.
En este trabajo se estudi la respuesta especfica
de anticuerpos de tipo IgG e IgE contra extractos de
vermes adultos de A. lumbricoides en el suero de
117 individuos que habitaban en zonas rurales; de
ellos, 95 % eran nios de comunidades rurales del
estado Miranda y de dos hospitales de Caracas.
Materiales y mtodos. Se evaluaron 117
individuos que habitaban en comunidades rurales
del estado Miranda, Venezuela, de los cuales 111
eran nios con un rango de edad de 3 a 16 aos,
57 individuos del sexo femenino y 54 individuos del
sexo masculino.
El perfil proteico se determin usando extractos
solubles de A. lumbricoides, mediante una
electroforesis en geles de poliacrilamida al 10 %
SDS-PAGE. Dichos geles se tieron con azul de
Coomasie o se transfirieron a membranas de PVDF.
Las protenas inmungenas reconocidas por los
anticuerpos de tipo IgG e IgE, presentes en el
suero de individuos infectados, contra los extractos
de A. lumbricoides, se identificaron por Western
blot. La medicin de la respuesta especfica de
anticuerpos contra las protenas de extractos de A.
Resultados. De los 117 individuos estudiados,
74 fueron positivos para A. lumbricoides y 40
ellos posean otras parasitosis en las siguientes
porcentajes: Trichuris trichiura, 28 %; Blastocystis
hominis, 23 %; Giardia duodenalis, 19 %;
Entamoeba histolitica/dispar y E. coli, 13 %, y,
finalmente, 2 % parasitados con Strongyloides
stercolaris y huevos de anquilostomidios.
El perfil proteico mostr al menos 16 bandas con
masas moleculares de 148, 101, 95, 75, 67, 60, 56,
53, 51, 41, 39, 34, 32, 31 y 26 kDa. Por Western Blot
se detectaron protenas inmungenas de 41, 30 y
445
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
29 kDa para la respuesta IgG, mientras que para
IgE se identificaron antgenos de 52, 49, 41, 29 y
26 kDa, respectivamente. La protena de 41kDa se
report recientemente como la tropomiosina en el
suero de pacientes infectados.
Las pruebas ELISA que medan los niveles
de anticuerpos IgE anti-Ascaris permitieron
diferenciar mejor los grupos seropositivos de los
seronegativos.
Sin embargo, algunos individuos positivos en heces
mostraron bajos niveles de anticuerpos IgE, tal vez
como seal de una infeccin primaria o reciente.
Conclusin. Este trabajo nos permiti identificar,
al menos, 16 bandas proteicas entre 148 y 26 kDa,
de las cuales fueron identificadas varias protenas
inmungenas para IgG e IgE. Se destacaron
principalmente cinco protenas (52, 49, 41, 39 y
31 kDa) que podran asociarse a la presencia del
parsito; adems, se identificaron componentes
antignicos para el diagnstico o en el contexto
de lo reportado por algunos autores donde la
respuesta IgE especfica podra ser protectora.
fueron abordadas en esta investigacin.
Comparacin del comportamiento
de anticuerpos especficos frente a
antgenos de helmintos en nios de
comunidades rurales de Venezuela:
influencia de la etnia
Tatiana Giusti
Universidad Central de Venezuela, Caracas, Venezuela
Introduccin. Las helmintiasis intestinales continan
siendo unas de las enfermedades ms prevalentes
y representan un obstculo para el desarrollo de
las poblaciones rurales en pases tropicales. En
vista de la multiplicidad de etnias de la poblacin
venezolana, se plantea la investigacin de factores
que expliquen la diversidad observada en la
respuesta inmunitaria frente a parsitos intestinales,
en comunidades de diversos grupos tnicos.
Materiales y mtodos. Se hizo una evaluacin
clnica integral a todos los nios (n=193) que
acudieron a la convocatoria en cada comunidad,
acompaada de una evaluacin de los factores
socioeconmicos, socioambientales, biomdicos,
inmunolgicos y culturales de cuatro grupos tnicos
venezolanos (mestizos, afroamericanos e indgenas
panare y warao), en busca de explicaciones para las
diferencias observadas en el patrn de su infeccin
parasitaria y su respuesta inmunitaria.
Resultados. Los cuatro grupos presentaron altas
prevalencias de helmintos, pero bajas cargas
parasitarias. En todos los grupos las condiciones
446
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
socioeconmicas, socioambientales y biomdicas
distan de ser las ideales. Sin embargo, el grupo
afroamericano, que fue el de menor riesgo
global, present las mayores prevalencias e
intensidad de infeccin de Ascaris lumbricoides y
Trichuris trichiura. El grupo panare, que present
la mayor presencia de factores de riesgo, fue el
grupo con menor prevalencia parasitaria; sin
embargo, present una prevalencia llamativa de
anquilostomdeos.
Conclusin. Los resultados de este trabajo
demuestran que la influencia de la etnia sobre la
respuesta inmunitaria frente a helmintos intestinales
es multifactorial. Los factores determinantes
genticos, probablemente variables de un grupo
tnico a otro, parecen ser modulados por las
caractersticas de su modo de vida y la exposicin
a estadios infecciosos de helmintos intestinales, las
cuales se agruparon en este trabajo como factores
socioeconmicos, socioambientales, biomdicos
y culturales. Futuros estudios podrn demostrar
las diferencias genticas entre los grupos que no
Sin embargo, por primera vez en nuestra poblacin,
se demostr que los factores determinantes
exgenos son capaces de modular la expresin de la
respuesta inmunitaria frente a helmintos intestinales.
Ms an, se demostr que entre poblaciones rurales
con nivel similar de pobreza, variables adicionales a
las descritas clsicamente en la literatura cientfica
pueden estar modulando la prevalencia e intensidad
de infecciones parasitarias.
Estos hallazgos justifican que se incluya en un
programa de control la determinacin del perfil
inmunolgico de cada comunidad para predecir el
xito de las intervenciones que se programen en
cuanto a tratamiento antihelmntico.
Por otro lado, la evaluacin de los factores sociales
y culturales, particulares de cada comunidad,
permitira el diseo adecuado de intervenciones
de promocin y educacin para la salud. De esta
forma, se lograra la incorporacin profunda de la
informacin y la participacin comunitaria en el
diseo de soluciones, para que sean sentidas como
propias y se incorporen paulatinamente en la cultura
de las poblaciones afectadas, sin menosprecio de la
cultura autctona.
Por ltimo, es necesario destacar que los organismos
no son perfectos y que han sido seleccionados para
responder, en forma ptima, a los desafos y las
condiciones encontradas por sus ancestros.
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
Tratamiento fotodinmico con
nuevos derivados porfirnicos en
el tratamiento de la leishmaniasis
cutnea
Viviana Milena Taylor1, David Leonardo Cedeo2, Ivn
Daro Vlez1, Sara Mara Robledo1
1
Programa de Estudio y Control de Enfermedades
Tropicales, Universidad de Antioquia, Medelln,
Colombia
2
Chemistry Departament, Illinois State University,
Normal, IL, USA
Introduccin. El tratamiento fotodinmico surge
como una alternativa prometedora, con menor
toxicidad y resultados cosmticos favorables, en el
tratamiento de la leishmaniasis cutnea.
Materiales y mtodos. La citotoxicidad de
cetales, benzodiazoloporfirinas, acenaftoporfirinas
y formulaciones liposmicas de los mismos, se
evalu in vitro en clulas U937 y macrfagos
peritoneales de hmster por MTT.
La efectividad se evalu en amastigotes de
Leishmania por MTT, citometra de flujo o -lacta-
masa, segn la especie evaluada. La eficacia in
vivo se evalu en hmsters dorados infectados con
Leishmania amazonensis y tratados con los nuevos
compuestos, con y sin exposicin a luz visible.
La toxicidad in vivo se evalu segn qumica
sangunea, cuadro hemtico e histopatologa. La
toxicidad drmica aguda se evalu siguiendo el
protocolo OECD 402.
El mecanismo de accin de los compuestos se
determin segn el aumento en la produccin de
ROS en promastigotes de Leishmania panamensis
por citometra de flujo. La actividad antiinflamatoria
se evalu segn los niveles de MCP-1, COX-2,
TGF-1 e IFN- en fibrocitos humanos y el
potencial cicatrizante se evalu en clulas BHK-21
por CytoselectTM.
Resultados. Los derivados porfirnicos fueron
activos in vitro contra amastigotes, demostrndose
el efecto fotodinmico. Aunque se observ
toxicidad, tanto en presencia como en ausencia de
liposomas, la toxicidad fue menor para macrfagos
peritoneales de hmster que para U937. In vivo,
los compuestos mostraron eficacias entre 50 y 100
% y poca toxicidad. Se observ induccin de estrs
por oxidacin, por aumento en la produccin de
superxido y perxidos mitocondriales, con dao
y muerte del parsito. El aumento en valores de
MCP-1, COX-2, TGF-1, la disminucin de IFN-
y la rpida migracin de las clulas en respuesta
al estmulo de los compuestos, sugieren un papel
antiinflamatorio y cicatrizante de los compuestos.
XV Congreso Colombiano de Parasitologa y Medicina Tropical
Conclusin. Los nuevos derivados porfirnicos
poseen potencial para su uso en el tratamiento
fotodinmico de la leishmaniasis cutnea. Es
necesario trabajar en estudios de bioequivalencia
que permitan su posterior evaluacin en estudios
clnicos en la poblacin afectada.
Evaluacin de la rifampicina de la
infeccin por Trichinella spiralis
en la fase intestinal en el modelo
experimental de ratn
Zuleika Quiroz, Claudia Maldonado, Jos Jess Muoz,
Mara Alejandra Moreno
Universidad Autnoma de Zacatecas, Zacatecas,
Mxico
Introduccin. La triquinelosis es una enfer-
medad parasitaria de distribucin mundial
que, infortunadamente, sigue vigente y no se
ha establecido un tratamiento eficiente y sin
complicaciones para el husped. Actualmente,
el tratamiento utilizado para la triquinelosis es la
administracin de mebendazol y albendazol, los
cuales son efectivos contra el parsito slo si
se administran por periodos prolongados, lo que
causa reacciones secundarias en el husped.
Objetivo. Evaluar la utilidad de la rifampicina en la
infeccin por Trichinella spiralis en la fase intestinal
en el modelo experimental de ratn,
Material y mtodos. Se infectaron 50 ratas Long
Evans de dos meses y medio de edad, con 500
larvas, y se dividieron en cinco grupos: grupo uno
(control de infeccin), con 10 ratas sin tratamiento
de rifampicina; grupo dos, con 10 ratas con
tratamiento de rifampicina con dosis ajustada de
humanos para ratas (5 mg/kg de peso para todos
los grupos por diez das), el cual se inici el primer
da de la infeccin; grupo tres, con 10 ratas con
tratamiento de rifampicina el cual se inici al
sptimo da despus de la infeccin; grupo cuatro,
con 10 ratas con tratamiento de rifampicina, el cual
se inici al da quince despus de la infeccin,
y grupo cinco, con 10 ratas con tratamiento de
rifampicina treinta das despus de la infeccin.
Todos los grupos se sacrificaron veinte das
despus de terminar el tratamiento.
Los parmetros evaluados fueron: peso corporal
y talla (al inicio del experimento y al sacrificio de
los animales en todos los grupos en estudio),
toma de muestra sangunea antes de la infeccin
con T. spiralis y al momento del sacrificio, carga
parasitaria mediante la tcnica directa de digestin
artificial, caractersticas de la clula nodriza
447
XX Congreso Latinoamericano de Parasitologa
mediante la tcnica de compresin de tejido,
digestin artificial y tincin de hematoxilina-eosina
y la respuesta inmunolgica mediante las tcnicas
de microinmunodifusin doble (MIDD) y Western
blot..
Resultados. En la compresin en placa, en el
grupo control se observ la clula nodriza bien
definida y dentro de ella la larva infecciosa con sus
caractersticas propias en espiral. En los grupos
tratados se destac la ausencia de la clula nodriza
con alteraciones y modificacin morfolgica de
la larva infecciosa. En la digestin artificial, en el
grupo control se observaron las larvas infecciosas
con su morfologa en espiral, su esticosoma y su
parte posterior y anterior bien definidas. En los
cuatro grupos tratados se observaron fragmentos
del parsito, salida de su contenido interior y
prdida de su morfologa caracterstica en espiral.
En la tincin de hematoxilina y eosina, en el grupo
control infectado se observ T. spiralis dentro de
la clula nodriza, as como presencia de clulas
polimorfonucleares. En los cuatro grupos tratados,
se observaron modificaciones de la clula nodriza
448
Biomdica 2011;31(sup.3):425-48
y de la larva infecciosa, incluso ausencia de
sta y regeneracin del tejido muscular. En la
microinmunodifusin doble en el grupo control se
observaron dobles bandas de precipitacin de la
interaccin antgeno-anticuerpo en los grupos uno y
tres se observaron dobles bandas de precipitacin,
y los grupos dos y cuatro tuvieron un escaso doble
bandeo de precipitacin. En el Western blot se
observ el triplete caracterstico de la parasitosis
de T. spiralis, 42, 45 y 48 kDa.
El presente estudio se analiz con el programa
Strargraphics, versin 5.1, en el cual se obtuvo el
resultado del anlisis de varianza para determinar
un resultado estadsticamente significativo sobre
viabilidad. El valor de p fue de 0,001, lo que
demuestra que este factor es estadsticamente
significativo sobre el efecto de viabilidad con un
nivel de confianza de 95 %.
Conclusin. La rifampicina fue efectiva contra T.
spiralis en los diferentes estadios de su desarrollo,
fue estadsticamente significativa sobre la viabilidad
y no present efectos colaterales visibles.