Componentes:
- Macronutrientes: FuentesdeC, N, S, P, K y Mg, en g/l.
- Micronutrientes: Elementostraza. SalesdeFe, Mn, Ca,
Zn, Co, en mg/l.
- FactoresdeCrecimiento:vitaminas, aminocidos, acidos
grasos, etc.
Medio de Cultivo:
Conjunto denutrientes, factoresde
crecimiento y otroscomponentesquecrean las
condicionesnecesariasparael desarrollo de
losmicroorganismos.
Diversidadmetablica Diversidaddemedios
Por su composicin:
- MediosGenerales: Desarrollodegran variedaddeMO.
- MediosdeEnriquecimiento: Favorecen el desarrollode
determinadogrupodeMO.
- MediosSelectivos: Crecimientodeun tipodeMO einhiben el
desarrollodelosdems.
- MediosDiferenciales: nfasisen algunapropiedadqueun
determinadoMO posee.
Diseo del Medio
Elegir loscomponentesnecesariosparalograr el
crecimientoy formacin deproductosen el proceso.
Conocer losprocesoy operacionespreviosy conocer los
mecanismosbioqumicosqueregulan laformacin de
productos.
RequerimientosNutricionales:
Tipodemetabolismocelular:
Auttrofos: Algas, bacteriasqueobtienen C del CO2
Hetertrofos: Requieren compuestosorgnicoscomo
fuentedeC.
CondicionesdeCultivo:
Aerobio: oxigenocomoaceptor deelectrones
Anaerobio: N, SO4, NO3comoaceptor deelectrones.
Fuentes de nitrgeno:
Inorgnica u Orgnica, sntesis de protenas, cidos nucleicos,
pared celular
Macronutrientes:
P y S en forma de PO4 y SO4, para formar ADN, ARN, ,
aminocidos azufrados.
K y Mg, ligados al RNA. K acta como coenzima y Mg es
estabilizador de organelos y es cofactor.
Micronutrientes:
- Esenciales: Ca, Mn, Fe, Cop, Cu, Zn.
- Poco esenciales: Na, Al, Si, Cl, Cr, Ni, Se, Mo
Difciles de cuantificar y sus requerimientos aumentan cuando
el cultivo se somete a stress.
Factores de crecimiento:
Aminocidos, tiamina, riboflavina, niacina; la mayora son
constituyentes de coenzimas
Disponibilidad de los Componentes:
Componentes susceptibles de ser usados por la clula.
Concentracin de iones metlicos modificada por
quelacin, para controlar el fenmenos se usa agentes
quelantes, EDTA.
Se debe tener en cuenta la naturaleza de los
compuestos orgnicos que pueden actuar como
ligandos y sobre todo del ion metlico considerado, es
necesario controlar su concentracin.
Materias Primas:
Se debe considerar costos, disponibilidad y estabilidad
en su composicin qumica.
Las materias primas fundamentales son las fuentes de C
y N.
Formulacin.
- Carbono: 46 48%
- Nitrgeno: 7-12
- Fsforo: 13
- Azufre: 0.5 1
- Mg: 0.5 1
COMPONENTE ELEMENTO/FUNCION MASA. gr
Glucosa C, energa 22.7
NH4Cl N 4.37
KH2PO4 P+K 1.13
MgSO4.7H2O S + Mg 0.232
CaCl2.2H2O Ca 0.011
FeSO4.7H2O Fe 0.007
MnS.4H2O Mn 0.002
ZnSO4.7H2O Zn 0.002
CuSO4.5H2O Cu 0.0004
CoCl2.6H2O Co 0.0004
EDTA Quelante 0.394
Agua destilada 1 ml
5
6
4
Log X
3
2
T
Microbiologa Industrial
Comportamiento de microorganismo es el
resultado de la interaccin entre el MO y el
medio ambiente por los efectores: internos y
externos.
Efectores
Expresin Producto
Qumicos
(metabolitos)
(nutrientes)
Efectores Fsicos
(temperatura, agitacin, viscosidad, etc.)
Seleccin, Mantenimiento y Mejoramiento
de MO.
SELECCIN:
- Cepa genticamente estable.
- Velocidad de crecimiento alta.
- Cepa libre de contaminantes
- Requerimientos nutricionales bajos.
- Fcil conservacin por periodos largos de tiempo
- Fermentacin completa en corto tiempo.
- Alto rendimiento de producto y de fcil extraccin
AISLAMIENTO:
S
Porque y para que conservar los
cultivos?
El cultivo (cepa microbiana o viral, lnea celular,
etc), es el elemento vital de la investigacin o
produccin industrial
Conservar implica mantener la viabilidad y
propiedades genticas del cultivo durante un
determinado perodo de tiempo
Consecuencias de una adecuada conservacin:
estabilidad de las cepas de produccin, pureza,
reproductibilidad de la investigacin. Reposicin
Conservacin de cultivos
Inversin
Patente
Conveniencia logstica del almacenamiento
centralizado
Seguridad de abastecimiento del material ante
prdidas eventuales
Adecuada informacin de los riesgos ambientales y
para la salud
Seguridad en la conservacin
Esquema del proceso de conservacin y sus etapas
crticas
Aislamiento primario
Microorganismo
viable Reactivacin 3
(gentica/fenotpo)
cultivo 1 Almacenamiento
Tipo de propgulo
Estado fisiolgico Proceso de conservacin 2
Mtodos de conservacin de cultivos
1. con crecimiento
transferencia seriada
2. con metabolismo limitado
agua destilada
bajo aceite mineral (control por O2)
3. con metabolismo detenido
3.1 Congelamiento (crioconservacin)
3.2 Deshidratacin
L-drying: secado desde la fase lquida,
silicagel, celulosa (papel),suelo, perlas de porcelana
Liofilizacin (freeze-drying)
CRIOCONSERVACIN
Crioconservacin es la conservacin de
material biolgico a muy bajas temperaturas
Rango -20 C a -196 C (nitrgeno lquido)
El nitrgeno lquido es la temperatura prctica
mas baja disponible. A la temperatura de
equilibrio, la difusin molecular es
extremadamente lenta y la probablilidad de
que ocurran reacciones qumicas es
prcticamente nula
CRIOINJURIA
muestra +
vaco 30-60 militorrs
protectores
en ampollas
manifold
-70 C - 5 C
trampa de agua Bomba de vaco de aceite
congelamiento
etilenglicol + hielo seco (- 40 C)
etanol + hielo seco (-70 C)
La muestra colocada en una ampolla estril con un plug de algodn, se congela entre
- 40 C y -70 C. Una vez colocada la muestra en el manifold del equipo se comienza
con el vaco y se retira el enfriamiento. La temperatuyra sube hasta -5 C. A esta
temperatura y con un vaco entre 30 y 60 militorrs, el secado es rpido. El tiempo es
variable y depende del volumen de muestra. Al finalizar el proceso se sella la
ampolla al vaco
L-Drying
Impregnacin en
Muestra soporte
Secado sobre silicagel
Almacenamient
Mtodo Ventajas Desventajas
o (aos)
Secado del agar, baja
Simple, bajo costo,
Agar 0.5-2 estabilidad gentica, riesgo
equipamiento requerido bajo
contaminacin
Bajo riesgo de
Liofilizacin 15-20 contaminacin, buena a Alto costo de equipamiento
regular estabilidad gentica
Texto Base:
Textos Complementarios:
Ingeniera de la fermentacin.