INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS (ENCB)

La tcnica al servicio de la patria

Bioquimica General
Profa. Dra. Lourdes Vega Rasgado
Grupo 3fm1

Reporte Practica 9
Caracterizacion espectrofotomtrica del DNA

Seccion 1:

Ortega vila Rodrigo Sebastin 2014500485

Osorio Ramirez Brenda Viridiana 2010500773

Introduccion
El primer paso en cualquier anlisis gentico suele ser el aislamiento del material
gentico. Los mtodos de extraccin del DNA se remontan a 1896 cuando
Miescherconsigui extraer el esperma de salmn o de los leucocitos humanos lo que
entonces denomin nuclena y que hoy sabemos que es el DNA.
Existen numerosas variantes metodolgicas para purificar el DNAdependiendo del tipo de
material de partida (sangre, tejidos, bacterias, levaduras) basado en solubilidad o
precipitacin diferencial de DNA o basado en su afinidad a diferentes tipos de
matrices.Normalmente el DNA se extrae a partir de muestras que contienen clulas
nucleadas, ya que en el ncleo es donde est el ADN genmico. No obstante en algunos
mtodos se analiza el DNA circulante presente en elplasma, que es un DNA degradado
en forma de fragmentos del tamao de mononucleosomas, y que procede de los
fenmenos apoptticos que ocurren en distintos tejidos del organismo. Tambin la
deteccin decargas virales se realiza a partir de DNA presente en el plasma.
Objetivos
Obtener el espectro de absorcin del DNA.
Discusin de resultados
De acuerdo a lo revisado en la bibliografa, en el espectro de absorcin del ADN la
absorbancia mxima se presenta a los 260 nm. Puesto que las bases nitrogenadas de los
cidos nucleicos absorben fuertemente la luz ultravioleta en la regin de 260-280
nanmetros. Esta propiedad nos fue de gran utilidad para determinar la pureza del nuestro.
Con los datos recabados se obtuvo la pureza del DNA por un lado, al relacionar la
absorbancia a 260 y a 280 nm, cuyo valor fue menor a 1.8, indicando con ello que el DNA
obtenido no se encontraba puro y todava contena protenas, por lo que se sugiere
mezclarlo con cloroformo y alcohol isoamlico para desproteinizarlo. Y por otro lado hall
la concentracin de DNA mediante dos mtodos, uno realizando los clculos antes
mostrados y otro mediante un nomograma. Los principales datos considerados fueron, el
valor de absorbancia a 280 nm, que es en donde se encuentran las protenas y la
absorbancia a 260 nm, en donde absorben las bases nitrogenadas.
Espectro de absorcin del DNA.
LONGITUD DE ABSORBANCIA BLANCO
(Se anexa grfica y clculos). ONDA (nm)
200 0.671 0.277
205 0.673 0.250
210 0.665 0
215 0.665 0
220 0.665 0
225 0.665 0
230 0.665 0
235 0.663 0
240 0.659 0
245 0.636 0
250 0.594 0
255 0.557 0
260 0.550 0
265 0.560 0
270 0.569 0
275 0.563 0
280 0.534 0
285 0.475 0
290 0.388 0
295 0.294 0
300 0.205 0

Bibliografia

Analisis quimico cuantitativo. Daniel C. Harris, Sexta edicion, Editorial Reverte , 2007 pp 433