J78LEPIDPTERO

El lepidptero adulto se identifica con facilidad por la presencia de dos pares de alas
membranosas cubiertas de escamas aplanadas, peculiaridad de la que deriva el nombre
del orden. Puede existir espiritrompa o no, ya que sta falta en los grupos basales del
Orden as como, por prdida o reduccin secundaria, en diversas familias. Las larvas, de
tipo eruciforme (orugas) y con cpsula ceflica generalmente bien esclerosada,
presentan cinco pares de falsas patas (aunque hay excepciones) en los segmentos
abdominales tercero a sexto y dcimo. Tcnicamente la monofilia del Orden se justifica
por numerosas apomorfas (hasta 27) que no siempre comprenden caractersticas fciles
de identificar en un estudio superficial. Algunas de las ms evidentes son: 1, cabeza sin
ocelo medio; 2, palpos labiales con rgano de vom Rath (invaginacin con sensilos
sensibles quimiorreceptores); 3, mesotrax con apodema tergo-pleural corpo-tentorial
(rea dorsal de la sutura pleural mesotorcica); 4, tibia del primer par de patas con
epfisis mvil en su cara interna, y provista a lo sumo de un espoln; 5, cercos ausentes
en ambos sexos; 6, palpos maxilares de las larvas con menos de cinco artejos; 7, alas
cubiertas de escamas (macrosedas aplanadas, peculiaridad de la que el Orden toma su
nombre, pero tal vez homoplstica) (detalles en Hennig, 1981; Kristensen, 1981, 1984a,
1984b, 1985, 1999; Lukhtanov, 2000).

METODOLOGIA DE LEPIDOPTERA

MATERIALES Y MTODOS

Este estudio se realiz en el Invernadero de Investigacin, en el Laboratorio de

Biocontroladores, en el Laboratorio de Biologa y en el Laboratorio de Docencia de
Cultivo de Tejidos del Centro de Investigacin en Biotecnologa (CIB) de la Escuela de
Biologa del Instituto Tecnolgico de Costa Rica (ITCR), en Cartago.

COLECTA EN CAMPO

Durante los meses de junio a noviembre del 2007, en diferentes partes del pas se
efectu colectas manuales de los insectos en plantaciones de maz, especficamente
sobre aquellas plantas que presentaban en las hojas apicales signos de defoliacin y
restos de excrementos del gusano plaga.

CRIANZA CON DIETA NATURAL

Las larvas colectadas se transfirieron a una micro jaula plstica rectangular (Figura 1A)
en la que previamente se haba colocado hojas tiernas de maz que sirvieran de alimento
a las larvas colectadas, pudiendo transportarlas vivas desde el campo hasta el
laboratorio. Al llegar al CIB, las larvas colectadas fueron individualizadas en micro
jaulas de desarrollo larval (Figura 1B) que estaban rotuladas con el cdigo de ingreso;
en ellas se introdujo pedacitos de hojas tiernas de maz que les sirvieron de alimento y
que fueron cambiadas todos los das hasta que las larvas llegaron a la etapa de pupa. Las
jaulas fueron colocadas en un estante de madera a una temperatura promedio de 19,5C,
con una humedad relativa promedio del 48% durante el da y del 67% en la noche. En la
bitcora de trabajo se anot las observaciones importantes de cada ejemplar, tales como
cambio de instar, presencia de exuvia, as como el da en que cada larva pas a la fase
de pupa y la fecha de emergencia de los adultos, para determinar la duracin promedio
de cada etapa en das segn la dieta y el sexo de los ejemplares evaluados.
Estadsticamente, se aplic un anlisis de varianza (ANOVA) de una variable con el
programa Statistix 7. Una vez que las larvas de S. frugiperda alcanzaron la fase de pupa,
se prepar las jaulas de apareamiento a partir de potes cilndricos de plstico de 14,0 cm
de dimetro en la base y 24,5 cm de altura. En stas se coloc hembras y machos, y se
introdujo una pequea planta de maz para favorecer la oviposicin de las hembras
sobre las hojas de la planta. Despus de la oviposicin, se quit la tapa de la jaula y se
extrajo la planta de maz para la revisin, conteo, identificacin y colecta de las masas
de huevos sin eclosionar, las cuales fueron separadas y colocadas en microjaulas de
desarrollo larval. En la bitcora se anot la fecha de cruce y el nmero de identificacin
de cada individuo, para determinar la duracin del ciclo de vida segn el sexo en las
larvas alimentadas con dieta natural. Crianza con dieta artificial En una segunda etapa
del Proyecto, se prob la dieta artificial BIO-MIX H-89 modificada (BIO SERV., INC.
1976) reportada por Navarro y Doreste (1995) para la cra del gusano elotero (Heliothis
zea). A partir de la tercera generacin de larvas de S. frugiperda reproducidas en
laboratorio, se implement la dieta artificial colocndole a cada larva individualizada
una porcin de 1 cm3 del medio tres veces por semana, hasta que completara su etapa
de pupa o crislida en una micro jaula de desarrollo larval (Figura 1C), para ser
transferidas a una jaula ms grande hasta que ocurriera la emergencia de los adultos. Al
emerger los adultos, tanto hembras como machos fueron transferidos a una jaula de
copulacin (Figura 1D), la cual se forr previamente por dentro con hojas de papel bond
de 20 grs, blanco, para reciclaje (incluyendo la tapa), para evitar que las posturas de
huevos quedaran adheridas a las paredes de la jaula, permitiendo as la manipulacin de
las masas de huevos. A los adultos colocados dentro de la jaula de copulacin, se les dio
un seguimiento diario de su comportamiento para controlar la oviposicin. Cada da la
jaula fue revisada, recortndose los trozos de papel que contenan las masas de huevos,
para colocarlas en bolsas plsticas transparentes. Cuando ocurri la eclosin de las
larvas del primer instar y con la ayuda de un pincel de cerdas finas, fueron transferidas a
microjaulas plsticas que previamente contenan dieta artificial para reiniciar otro ciclo
generacional del hospedante Identificacin de posibles microorganismos
biocontroladores En el pie de cra establecido se empez a observar el deceso de
individuos en estadio larval, cuyo segmento abdominal se tornaba necrtico, disminua
su tamao y presentaba crecimiento microbiano con apariencia polvosa y algodonosa en
algunos casos. Estas larvas sintomticas fueron separadas del resto. Los
microorganismos con posible actividad biocontroladora fueron aislados en la cmara de
flujo laminar del CIB y colocados en placas Petri con los siguientes medios de cultivo
selectivo: seis placas con V8, cuatro con PDA, dos con pulido de arroz (A), dos con un
medio de zanahoria (Z), dos con el medio Jofee (J) y dos con medio DC. Las muestras
aisladas fueron incubadas a temperatura ambiente y en oscuridad por 48 horas en el
Laboratorio de Biocontroladores. Bajo condiciones aspticas, se tom cinco
portaobjetos, uno por cada hongo por identificar. Se agreg dos gotas de toluidina, una
en cada lado del gotero y con un asa bacteriolgica previamente desinfectada, se tom
una pequea muestra del cultivo fngico en PDA y se coloc sobre una de las gotas de
toluidina, se esparci suavemente y se le puso un cubre objetos a la muestra. Luego se
flame el asa y se efectu el mismo procedimiento para montar la muestra del cultivo en
V8. Con ayuda de un microscopio ptico en 10, 20, 40 y 100X, se caracteriz los
cuerpos fructferos de los hongos y se los clasific segn el manual de los hongos
comunes que atacan en Amrica Latina (Finch y Finch, 1990).

Finch, H. y Finch, A. 1990. Los hongos comunes que atacan cultivos en Amrica
Latina. Mxico, D.F. Editorial Trillas. 187 p.