Practica #1:
Integrantes:
Oscar Abel Crdenas Garca
Abril Espaa Fonseca Len
Nancy Elizabeth Garca Diaz
Daniela Del Roco Gonzlez Ramrez
Juan Manuel Herrera Zamora
Fernando Osuna Lpez
Jennifer Ploneda Espndola
13- septiembre-2017
Resumen
En esta prctica se busc obtener o determinar el factor de calibracin para evaluar la
actividad enzimtica de una enzima de inters clnico, en este caso la fosfatasa alcalina con
el kit de spinreact, se llev a cabo el procedimiento que marcaba el inserto de spinreact para
estas valoraciones, se sabe que esta enzima se encuentra en diversos tejidos del organismo y
que su concentracin es alta en ciertos rganos, los valores de esta enzima se pueden ver
afectados de distintas maneras y es de importancia clnica valorarlos, los valores de referencia
de esta enzima van de 218-280 UI/L, comparando nuestros resultados obtenidos en la prctica
se observa un valor dentro de los valores de referencia.
Introduccin
En las pruebas enzimticas, la carencia o difcil acceso a estndares o calibradores
enzimticos, obliga al empleo de un factor de calibracin, el cual es proporcionado por el
fabricante del reactivo y aparecen en el inserto de los mismos. Antes de aplicar el factor en
el trabajo rutinario debe evaluarse empleando un suero valorado y realizar la modificacin
del mismo en base al valor de actividad enzimtica esperada. Del clculo correcto de dicho
factor depender la exactitud de los resultados. Este ajuste del factor lleva implcitas las
caractersticas del equipo empleado y de las condiciones de analticas y ambientales de cada
laboratorio.
En las mediciones de actividad enzimtica, se emplean mtodos cinticos, el delta de
absorvancia representa la aparicin del producto o la desaparicin del sustrato y es
directamente proporcional al tiempo, en este caso en factor de calibracin ser AEcal/Acal
(AEcal=actividad enzimtica del calibrador, Acal=delta de absorbancia del calibrador)
Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los tejidos del
organismo, siendo particularmente alta su presencia en huesos, hgado, placenta, intestinos y
rin. Tiene importancia clnica tanto su aumento como su disminucin de los niveles en
plasma. (Wenger C. 1984)
Las causas ms probables de aumento del nivel de FAL: Enfermedad sea de Paget,
obstrucciones hepticas, hepatitis, hepatotoxicidad por medicamentos y osteomalacia.
Causas ms probables de disminucin del nivel de FAL: Cretinismo y dficit de vitamina
C1,5,6. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y
de laboratorio. (Young DS, 2001).
Marco terico
Los estudios enzimticos se emplean en muchos laboratorios clnicos para el diagnstico de
numerosas enfermedades, observando velocidades de reaccin anormales o bien observando
niveles enzimticos inadecuados en el plasma y otros tejidos.
En esta prctica se desea obtener el factor de calibracin para evaluar la actividad enzimtica
de una enzima de inters clnico, ya que existe una carencia o es de difcil acceso la obtencin
de estndares o calibradores enzimticos.
Es por eso que generar un factor de calibracin es la mejor manera que se tiene para
estandarizar los mtodos y obtener un punto de referencia para unos resultados fiables.
(Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular)
Desarrollo
1. Preparar Multicalibrador, muestras y suero control
2. Realizar cuidadosamente las determinaciones de una enzima, siguiendo las instrucciones
del fabricante. (Fosfatasa alcalina de spinreact)
RT (mL) 1,2
Muestra (L) 20
Clculos
Informe
1. Calcular la actividad del suero valorado empleando el factor que sugiere el fabricante
2. Calcular el nuevo factor (recordar que si el equipo est bien calibrado y tiene la
sensibilidad adecuada, el factor resultante deber ser semejante al del inserto del
reactivo).
3. Calcular la actividad enzimtica del suero problema y del control con el nuevo factor.
Resultados
Los resultados obtenidos durante la prctica fueron los siguientes:
Inserto
AE muestra= (3300) (0.035) = 115.5 U/L
AE control= (3300) (0.050)= 165 U/L
AE calibrador= (3300) (0.1036)= 341.88 = 342 U/L
Conclusiones
Las fosfatasas alcalinas son parte de los exmenes de chequeo habitual (perfil bioqumico,
pruebas hepticas). Su elevacin puede indicar una enfermedad heptica, pero tambin
pueden elevarse en otras enfermedades o incluso ser parte de fenmenos fisiolgicos como
crecimiento y embarazo.
Cuestionario
1. En las determinaciones enzimticas que sugiere un delta de absorbancia
igual a cero? cmo se procede cuando se presenta esta situacin durante el
anlisis de la actividad enzimtica de una muestra?
Que no existe actividad enzimtica, se tiene que revisar de manera detallada el procedimiento
del inserto de los reactivos, desde los volmenes que requiere, as como las condiciones en
las que se debe trabajar y verificar que los reactivos estn en buen estado, la temperatura de
incubacin, ya que esta modifica la actividad enzimtica, adems espectro debe estar
calibrado correctamente, de lo contrario las absorbancias estarn alteradas.
2.Cmo se clasifican los mtodos de ensayo de enzimas?
3. Cmo se
calcula la actividad enzimtica?
Se puede determinar la actividad enzimtica analizando:
La aparicin de algn producto
La desaparicin del sustrato
La variacin de un cofactor o de algn componente de la reaccin En definitiva, la actividad
de una enzima se mide mediante la determinacin de la cantidad de sustrato formado por
unidad de tiempo, en condiciones exactamente definidas (pH, T) y estrictamente
controladas. (Dr. CARMEN)
4. En qu unidades se expresa la actividad enzimtica?
- Efecto del pH
Las enzimas actan dentro de lmites estrechos de pH (pH ptimo de la reaccin). Por
ejemplo, la pepsina (enzima estomacal) tiene un pH ptimo de 2, al graficar su actividad
enzimtica para valores crecientes de pH, comenzando desde la zona cida, se obtiene una
curva en forma de campana. El mximo de la curva corresponde al pH ptimo en el cual la
enzima tiene su mxima actividad. En medios muy cidos o muy alcalinos, la enzima se
desnaturaliza y se inactiva. Otras enzimas en cambio tienen una actividad ptima a pH
alcalino como la tripsina (enzima intestinal) (Figura 1). (reservados, 2017)
- Temperatura
Bibliografa
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reservados, D. (2017). BLOG DE BIOLOGIA. Obtenido de
https://www.blogdebiologia.com/factores-que-afectan-la-actividad-enzimatica.html