Materi Treponema Pallidum

Sifilis adalah penyakit yang disebabkan oleh subspesies Treponema pallidum (ssp.) Pallidum. Istilah
"aktivitas serologis" dipertimbangkan dalam menggambarkan sifilis, untuk menunjukkan tingkat antibodi
terhadap Treponema pallidum ssp. Pallidum dalam darah manusia. Reaksi serologis positif palsu tidak
jarang terjadi karena reaksi silang dengan penyakit bersamaan atau kesalahan teknis1-3. Sejak tahun
1990, ada kecenderungan meningkat pada kejadian sifilis yang didapat dan bawaan di negara-negara
Eropa, terutama di Eropa Timur. Memang, kejadian sifilis telah meningkat di seluruh dunia, dan
fenomena ini jelas terkait dengan pergaulan bebas seksual dan tujuan wisata seksual4. Kejadian sifilis di
Latvia telah terjadi Terus menurun dalam beberapa tahun terakhir, namun tetap tinggi dibandingkan
dengan negara maju lainnya. Sebagai infeksi sifilis dapat menghasilkan berbagai variabel pada manusia,
tes laboratorium sering diperlukan untuk mendiagnosis infeksi secara pasti.

Infeksi dimulai saat Treponema Pallidum ssp Pallidum memasuki jaringan melalui Microabrasi dermal
atau dengan penetrasi Mukosa utuh, biasanya menghasilkan satu Chancre di lokasi inokulasi. Yang
utama Chancre berkembang setelah inkubasi rata-rata Jangka waktu 3 minggu Chancre biasanya
sembuh secara spontan dalam 4-6 minggu, tapi mungkin begitu Masih dapat dilihat pada sekitar 15%
pasien di Permulaan sifilis sekunder7. Dalam beberapa jam Setelah inokulasi, dan selama evolusi Tahap
utama, Treponema pallidum ssp. Pallidum menyebar luas dan bisa masuk Di organ manapun
Manifestasinya sekunder Sifilis biasanya berkembang dalam waktu 12 minggu Infeksi awal Yang paling
umum Manifestasi sifilis sekunder adalah Lesi mukokutan yang disebarluaskan. Itu Lesi sifilis sekunder
berangsur-angsur sembuh Secara spontan dalam 12 minggu penampilan. Individu yang tidak diobati
memasuki periode variable Infeksi laten, yang tidak bersifat klinis Manifestasi terbukti. Sifilis laten
adalah Dibagi menjadi dua tahap: awal (high likelihood Kambuh) atau terlambat (kambuh tidak
mungkin), berbasis Pada perkiraan durasi infeksi. Untuk Tahun pertama setelah infeksi, pasien berada
Dianggap memiliki sifilis laten awal dan ke atas Sampai 25% pasien mungkin mengalami rekurensi
Manifestasi sekunder8 . Sifilis laten akhir Didefinisikan sebagai infeksi asimtomatik untuk a Periode lebih
dari satu tahun atau tidak diketahui lamanya. Tes serologis pada akhir laten Tahap positif, tapi transmisi
seksualnya tidak sepertinya. Organisme bisa menumbuhkan aliran darah Sebentar-sebentar selama
sifilis laten dan bias Menginfeksi janin selama kehamilan Skematis Diagram sifilis yang tidak diobati
ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1 Riwayat alami sifilis yang tidak diobati

Penentuan stadium penyakit ini Penting, karena kepekaan dan Spesifisitas nilai diagnostik yang
diterapkan Metode bervariasi sesuai dengan tahapan yang berbeda Dari penyakit dan prognosis dan
hasilnya Pengobatan tergantung pada stadium penyakit9, 10. Treponema pallidum ssp. Pallidum
Genom, yang diketahui berukuran kecil11, 12, adalah Dikonfirmasi oleh Genome Sequencing Project
Sebagai 1,14 Mb dan mengkodekan 1041 putatif Protein13. Genom Treponema pallidum Urutan tidak
mengungkapkan klasik yang jelas Faktor virulensi yang bisa dipertanggungjawabkan Tanda dan gejala
sifilis14. tidak seperti Terkait spirochetes Treponema denticola15 dan Borrelia burgdorferi16, tidak ada
sistem genetic Manipulasi Treponema pallidum belum Ada Karena kerapuhan luarnya Membran,
manipulasi genetic Treponema pallidum mungkin terbukti tidak mungkin. Ekspresi heterogen pada
organisme terkait seperti Treponema denticola mungkin paling banyak Cara praktis untuk mempelajari
Treponema pallidum Gen dan memajukan pemahaman kita tentang ini Organisme misterius14

Spirochaete Treponema pallidum ssp. Pallidum Milik keluarga bakteri berbentuk spiral Spirochaetaceae
(spirochaetes), dan ada Terkait dengan treponema patogen lainnya itu Menyebabkan penyakit non-
kelamin. Treponema itu Subspesies pallidum hampir identic Berdasarkan morfologi mereka, antigenic
Properti, dan homologi DNA; meskipun Bukti lebih baru menunjukkan bahwa mungkin ada Menjadi
tanda tangan molekuler daripada yang bisa digunakan Membedakan subspesies17. Treponema Pallidum
tidak memiliki lipopolisakarida Endotoksin, yang ditemukan di bagian luar Membran banyak bakteri
gram negative Yang menyebabkan demam dan pembengkakan. Namun, Treponema pallidum memang
menghasilkan angka Lipoprotein yang bisa menyebabkan ekspresi Mediator inflamasi melalui tol
Reseptor 2 (TLR2) pengakuan18. Antibodi Biasanya diproduksi baik melawan Treponema Pallidum ssp
Pallidum atau bagiannya komponen. Antigen dasar, faktor penentu Treponema pallidum ssp. Pallidum
adalah Komponen dari lapisan triple di luar dinding dan Dalam kasus terpisah berbentuk kapsul
Mucopolysaccharides coupler Yang paling Menyelidiki antigen protein Treponema Pallidum ssp
Pallidum, yang mengandung a Fraksi diketahui umum terjadi pada keduanya - Treponema patogenik dan
saprofitik, dan Antibodi dinaikkan melawan antigen ini. Mereka juga mengandung pecahan yang spesifik
Hanya untuk treponema patogenik. Komponen dari Treponema pallidum ssp. Protein pallidum Memiliki
imunogenisitas tinggi. Jahat Treponema pallidum ssp. Pallidum menginduksi Sel endotel berbudaya
untuk mengekspresikan Molekul adhesi ICAM-1, VCAM-1 dan Eselection. Ini juga diaktifkan oleh 47-kDa
T. pallidum lipoprotein TpN4719. Dibandingkan dengan Kekayaan informasi tentang diseasecausing
Mekanisme banyak bakteri Patogen, sedikit yang diketahui tentang bagaimana T. Pallidum
menyebabkan manifestasi protean sipilis. Dengan tidak adanya sitotoksin dan lainnya Faktor virulensi
yang diketahui, peradangan dan Selanjutnya respon imun adaptif terhadap Treponema pallidum ssp.
Pallidum mungkin Menyebabkan karakteristik kerusakan jaringan Infeksi sifilis Treponema Spesifik
Pallidum ssp Molekul pallidum yang dimilikinya Telah ditunjukkan untuk merangsang sel dendritic
Lipoprotein TpN17 dan TnN47, tidak Terletak di permukaan. Inisiasi dari Lipoprotein sinyal sel dendritik
tidak Kemungkinan terjadi sampai organisme itu berada Dirusak, memperlihatkan lipoprotein ke
Reseptor TLR2 Teori ini mendukung Pengamatan bahwa waktu yang lebih lama diperlukan untuk
Treponema pallidum ssp. Pallidum untuk merangsang Sel dendritik1. Penundaan sel dendritic
Pematangan, mengakibatkan inflamasi lebih lambat Respon, bisa memungkinkan diseminasi dini Dari
Treponema pallidum ssp. Pallidum, yang mana Memberi kesempatan kepada organisme untuk
menembus Organ dan jaringan sebelum aktif Respon inflamasi telah dipasang oleh sang penyelenggara.

Investigasi bakteriologis dalam kasus Syphilis tidak mungkin dilakukan karena Treponema Pallidum ssp
Pallidum tidak tumbuh Media buatan Dua metode dasarnya adalah Diterapkan dalam diagnosis rutin
sifilis - Mikroskop (eksudat dari ulkus, erosi atau Tanda baca yang diperoleh dari kelenjar getah bening)
menggunakan Bidang visual gelap dan serologi. Mikroskopi Menunjukkan Treponema pallidum ssp.
Pallidum di semua Lesi awal dan akhir, tapi tidak dalam laten sipilis. Pada manusia, infeksi dengan
Treponema Pallidum ssp Hasil pallidum cepat Produksi dua jenis antibodi (nonspesifik Dan spesifik) di
akhir Masa inkubasi atau selama minggu pertama setelahnya Onset ulcus durum. Metode serologisnya
Untuk diagnosis sifilis diklasifikasikan sebagai Tidak spesifik (non-treponemal) dan spesifik (Treponemal).
Dalam tes non-spesifik, nontreponemal Antigen disebut cardiolipin, yaitu Diambil dari otot jantung sapi
yang digunakan. Ini adalah tes flokulasi, dimana Membentuk kompleks "antigen + antibodi" Terdiri dari
serpih. Di Latvia yang tidak spesifik Tes, kebanyakan tes Rapid Plasma Reagin (RPR) Digunakan Tes non-
treponemal banyak digunakan Untuk skrining, meski tidak bisa diandalkan Sendiri untuk mengkonfirmasi
diagnosis sifilis. Menurut pedoman Eropa, nontreponemal Tes digunakan untuk pemantauan Aktivitas
serologis dan pengobatan Sifilis9.
Antibodi terhadap antigen spesifik Treponema Pallidum ssp Pallidum dalam serum darah dan / atau
Plasma terdeteksi dengan tes spesifik. Sistem uji coba yang tersedia secara komersial digunakan Tenggiri
Nichol TpN15, TpN17 dan TpN47 Antigen rekombinan dan peptida sintetis TmpA. Antigen rekombinan
lainnya seperti Tp0453, Tp92 dan Gpd juga bisa digunakan20, Meskipun sistem uji semacam itu tidak
Tersedia secara komersial. Di Latvia, TPHA (Treponema pallidum hemaglutination test) Dan ELISA
(Enzim-linked immunosorbent Assay) digunakan baru-baru ini. Yang disebutkan di atas Tes treponema
spesifik digunakan untuk mengkonfirmasi diagnosis sifilis dan diferensial Diagnostik9, 21. Secara historis,
untuk mengkonfirmasi penyembuhan sifilis, di Selain tes non-treponemal, reaksinya Reaksi pelengkap
mengikat (Wasserman) Dan Imobilisasi Treponema pallidum Reaksi (TPIR) atau uji Nelson, keduanya Tes
spesifik, digunakan Saat ini tes ini Tidak digunakan secara rutin, meski TPIR itu Diterapkan di
laboratorium khusus di Latvia. Nilai diagnostik antibodi non-spesifik Terbatas: pertama, pada awal
penyakit primer, Antibodi antilipoidal mungkin tidak dikembangkan Dan pada akhir sifilis (laten dan
tersier), naik Sampai 30% individu mungkin kekurangan Antibodi antilipoid dan kedua, nontreponemal
Tes sangat sensitive Sifilis sekunder, namun dalam bentuk lain Sensitivitas tidak mencukupi (Tabel 1)10.
Oleh karena itu, sangat penting untuk mengetahui dengan sangat baik Tes sensitif dalam memantau
serologis Aktivitas dan kemanjuran pengobatan dalam kasus Dari sifilis laten.

(Ozoli, Katkovska and Bobojeda, 2009)

Sifilis adalah infeksi menular seksual yang dapat disembuhkan yang disebabkan oleh bakteri Treponema
Pallidum; Infeksi juga bisa ditularkan dari ibu ke janinnya saat hamil. Diagnosis sifilis didasarkan pada
evaluasi klinis, deteksi organisme penyebab, Dan konfirmasi penyakitnya dengan serodiagnosis. T.
pallidum tidak dapat dibudidayakan di Laboratorium, namun dapat diidentifikasi pada lesi dengan
menggunakan mikroskop medan gelap atau fluoresensi atau oleh Teknik molekuler. Sebagian besar
individu yang terinfeksi tidak memiliki gejala atau mengalami transien Lesi dan oleh karena itu tes
serologis harus digunakan untuk menyaring infeksi.

Serologi masih merupakan metode yang paling andal untuk diagnosis laboratorium sifilis, terlepas dari
Tahap infeksi. Tes serologis dibagi menjadi tes nontreponemal dan treponemal, Tidak sendirian saja
sudah cukup untuk didiagnosis. Diagnosis serologis konvensional menggunakan dua tahap Pendekatan,
skrining pertama dengan metode nontreponemal, dan kemudian menggunakan tes konfirmasi Yang
menggunakan metode berbasis antigen treponemal untuk mengkonfirmasi hasil tes skrining positif. Uji
nontreponemal juga berguna untuk memantau respons pengobatan. Tes serologis pertama untuk sifilis
adalah tes Wassermann yang dikembangkan pada tahun 1906. Itu adalah a Tes fiksasi komplemen dan
antigen yang digunakan adalah ekstrak hati dari bayi baru lahir yang Telah meninggal karena sifilis
kongenital. Landsteiner menunjukkan bahwa jaringan lain, seperti daging sapi Hati yang diekstrak dalam
alkohol, bisa digunakan sama baiknya dengan antigen. Kolesterol dan lesitin Ditambahkan untuk
meningkatkan sensitivitas antigen. Pada tahun 1922, Kahn memperkenalkan flokulasi Tes tanpa
komplemen yang bisa dibaca makroskopis dalam beberapa jam. Pada tahun 1941, Pangborn diisolasi
dari jantung daging sapi komponen antigenik aktif cardiolipin. Yang murni Fosfolipid cardiolipin
dikombinasikan dengan lesitin dan kolesterol bisa distandarisasi Secara kimiawi dan serologis,
memastikan reproduktifitas hasil tes yang lebih baik baik di dalam maupun di dalam Antara
laboratorium. Pada tahun 1946, Harris, Rosenberg dan Riedel mengembangkan Penyakit Veneral
Laboratorium Penelitian (VDRL) dan Rapid Plasma regain (RPR) dikembangkan pada tahun 1957,
Keduanya masih digunakan saat ini. Penambahan kolin klorida dan EDTA ke VDRL Antigen meningkatkan
reaktivitas uji dan menstabilkan suspensi antigen (Larsen et Al., 1995).

T. pallidum diidentifikasi pada tahun 1905, dan tes pertama mengidentifikasi antibodi treponemal
Dikembangkan pada tahun 1949 oleh Nelson dan Meyer. Uji imobilisasi T. pallidum (TPI) menggunakan
T.pallidum (strain Nichols) yang tumbuh pada testis kelinci sebagai antigen dan didasarkan pada
kemampuan antibodi pasien dan pelengkap untuk melumpuhkan treponema hidup, seperti yang diamati
oleh darkfield. mikroskopi. Uji antibodi treponemal fluorescent (FTA) dikembangkan pada tahun 1957,
Yang kemudian diperbaiki dengan prosedur penyerapan (FTA-ABS) pada tahun 1964 (Larsen et al.,1995).

Veldkamp dan Visser mengenali potensi tes imunosorben enzim T.pallidum yang otomatis pada tahun
1970an (Veldkamp & Visser, 1975). Sejak itu, beberapa AMDAL menggunakan antigen T.pallidum asli
atau rekombinan telah dikembangkan dan banyak tersedia secara komersial. EIA yang dilaporkan dalam
literatur telah menggunakan pendekatan yang berbeda untuk menentukan sensitivitas dan spesifisitas.
Beberapa penelitian menggunakan panel spesimen positif anti-treponemal dari pasien yang stadium
penyakit dan status perawatannya diketahui dan serum negatif dari donor darah kesehatan. Penelitian
lain telah mengevaluasi kinerja tes baru dengan membandingkan hasil tes laboratorial konvensional
yang digunakan untuk diagnosis sifilis. Secara umum, AMDAL menghadirkan sensitivitas dan spesifisitas
yang lebih tinggi.

Captia Syphilis G (Trinity Biotech, mantan Centocor) adalah tes tidak langsung untuk deteksi

Antibodi treponemal. Tes ini menggunakan pelat microtitration atau strip yang dilapisi dengan antigen
T.pallidum sonicated. Antibodi treponema IgG manusia yang bereaksi terdeteksi oleh antibodi
monoklonal IgG antihuman yang diberi label dengan streptavidin berlabel biotin dan lobak kuda (HRP)
dan diindikasikan oleh substrat tetramethylbenzidine (TMB). Sensitivitasnya berkisar antara 92,4%
sampai 100% dan spesifisitas dari 98,2% sampai 99,3% (Halling et al., 1999; Silletti, 1995; Young et al.,
1989; Young et al., 1998). Captia yang lebih baru pilih Syph-G EIA (Trinity Biotech) menggunakan
antibodi monoklonal anti-human IgG berlabel HRP sebagai a Konjugat bukan sistem biotin-streptavidin
memiliki sensitivitas dan spesifisitas masing-masing 99,0% dan 98,0% (Woznicova & Valisova, 2007).

Sifilis Enzygnost (Dade Behring) adalah satu langkah EIA kompetitif dengan antigen ekstrak detergen
T.pallidum Nichols. Antibodi spesifik T.pallidum, IgG dan / atau IgM yang terkandung dalam sampel dan
konjugasi (antibodi anti-Tp berlabel HRP) bersaing untuk tempat pengikatan antigen T.pallidum yang
dilapisi ke pelat mikrotitrasi. Reaksi diwahyukan dengan substrat TMB. Intensitas warna resultan
berbanding terbalik dengan konsentrasi antibodi anti-treponemal pada sampel. Enzygnost Syphilis
menunjukkan sensitivitas yang bervariasi dari 98,2% sampai 100% dan spesifisitas dari 96,8% sampai
100% (Cole et al., 2007; Gutierrez et al., 2000; Maidment et al., 1998; Marangoni Antonella et al., 2009;
Viriyataveekul Et al., 2006).

Bioelisa Sifilis (Biokit) adalah uji kompetitif dengan menggunakan seluruh antigen T.pallidum untuk
melapisi

Baik dari piring Antibodi treponemal pada serum uji bersaing dengan HRP berlabel

Antibodi anti-treponemal manusia. Dalam pengujian ini, pengikatan konjugat ke spesifik

Antigen, ditentukan dengan mengukur intensitas warna substrat (TMB), berbanding terbalik

Sebanding dengan jumlah antibodi spesifik dalam sampel uji. Dibandingkan dengan FTAABS

Dan TPHA, uji ini memiliki sensitivitas 99,5% dan spesifisitas 99,4% (Ebel et al.,

1998). Versi lain dari uji ini, Bioelisa Syphilis 3.0 (Biokit) adalah rekombinan dua langkah

EIA menggunakan antigen rekombinan (TpN15 dan TpN17) untuk melapisi fasa padat dan HRP

Antigen rekombinan terkonjugasi untuk mendeteksi IgG dan IgM anti-treponemal. Pengujian ini

Menunjukkan sensitivitas 97,4%, dan spesifisitas 100%. Namun, tingkat deteksi yang lebih rendah pun

Diamati pada sampel dari pasien dengan sifilis primer yang tidak diobati (Cole et al., 2007).

ICE Syphilis (Murex) adalah sandwich rekombinan dua langkah AMDAL menggunakan tiga T. pallidum

Antigen rekombinan (TpN15, TpN17 dan TpN47) dilapisi ke sumur pelat microtiter

Strip; Sumur juga dilapisi dengan anti-human immunoglobulin G (IgG) dan M (IgM). Jika

Antibodi terhadap T.pallidum hadir dalam spesimen (serum atau plasma) yang ditangkap

Antigen di piring Sebagai tambahan, proporsi IgG dan IgM total spesimen yang diuji

Ditangkap oleh antibodi anti-manusia. Komponen anti-treponemal yang tertangkap

Antibodi terdeteksi oleh antigen rekombinan (TpN15, TpN17 dan TpN47) yang diberi label HRP.

Intensitas substrat enzim TMB berbanding lurus dengan konsentrasi

Antibodi yang bereaksi dengan antigen T.pallidum rekombinan. Kisaran sensitivitas dan

Spesifisitas untuk uji Sifilis ICE masing-masing adalah 98,2% sampai 100% dan 99,2% sampai 100% (Cole
et al., 2007; Lam et al., 2010; Viriyataveekul et al., 2006; Young et al., 1998). Penelitian lain untuk

Evaluasi Sifilis ICE (Murex) sebagai tes skrining sifilis, sensitivitas pada primer

Sifilis adalah 84% (48/50) (Manavi & McMillan, 2007) dan 77,2% (61/79) (Young et al., 2009).
Trep-Chek (Phoenix) adalah tes tidak langsung untuk mendeteksi antibodi anti-treponemal. Itu

Sumur microplate dilapisi dengan antigen treponemal rekombinan tertentu. Anti-treponemal

Antibodi yang ada dalam sampel serum berikatan dengan antigen immobilisasi. Anti manusia

Antibodi IgG berlabel HRP dan substrat TMB digunakan untuk mendeteksi antitreponemal spesifik

Antibodi hadir dalam sampel pasien. Bila dibandingkan dengan hasil

Uji serologis konvenional, sensitivitas dan spesifisitas untuk Trep-chek adalah 85,3% dan

95,6%, masing-masing (Tsang et al., 2007); Studi lain menemukan sensitivitas 98,9% dan spesifisitas

Dari 95,6% dibandingkan dengan hasil FTA-ABS (Binnicker et al., 2011).

Trep-Sure (Phoenix) adalah sandwich rekombinan dua langkah AMDAL untuk deteksi antitreponemal

Antibodi IgG dan IgM. Pengujian ini menggunakan treponema rekombinan tertentu

Antigen diimobilisasi pada sumur lempeng mikro. Antibodi anti-treponemal dari pasien

Sampel berikatan dengan antigen immobilisasi, yang dideteksi dengan HRP terkonjugasi

Antigen treponema dan substrat TMB. Trep-Sure memiliki sensitivitas dan spesifisitas 98,9%

Dan 94,3%, masing-masing (Binnicker et al., 2011).

Captia Syphilis M (Trinity, mantan Centocor) adalah ELISA yang menangkap menggunakan piring
mikrotitrasi

Dilapisi dengan anti-manusia rantai antibodi spesifik, yang mengikat IgM hadir dalam serum. Pelacak

Kompleks digunakan untuk mendeteksi antibodi IgM anti-treponemal yang ditangkap di piring. Itu

Kompleks pelacak terdiri dari antigen T. pallidum, monoklonal antiaxial biotinilasi

Antibodi IgM, dan streptavidin terkonjugasi dengan peroksidase lobak. Enzimnya

Substrat TMB menghasilkan produk berwarna dan intensitas warnanya proporsional dengan

Konsentrasi antibodi (Lefevre et al., 1990); Versi yang lebih baru dari tes ini menggunakan HRP

Antigen rekombinan terkonjugasi dan bukan kompleks pelacak (Rotty et al., 2010). AMDAL ini

Dirancang khusus untuk diagnosis sifilis kongenital, namun dapat digunakan untuk deteksi

Infeksi primer Sensitivitasnya adalah 94% untuk sifilis primer, 85% untuk sekunder, dan 82%

Untuk sifilis laten awal (Lefevre et al., 1990). Ini IgM menangkap AMDAL juga berguna untuk
Pemantauan respon pengobatan pada sifilis dini (McMillan & Young, 2008; Rotty et al., 2010).

Schmidt dkk melakukan evaluasi komparatif AMDAL yang berbeda untuk penentuan

Antibodi terhadap T.pallidum pada pasien dengan sifilis primer dengan menguji 52 sera

Negatif di TPHA Kepekaan untuk Captia Syphilis M adalah 86,5% (45/52) dan tes lainnya

Untuk deteksi IgG dan IgM, seperti ICE Syphilis (Murex), Enzygnost Syphilis (Berhing)

Dan Bioelisa Sifilis (Biokit) menunjukkan sensitivitas 75,0% (39/52), 69,2% (36/52) dan 67,3

(24/41), masing-masing (Schmidt et al., 2000).

(Sato and Paulo, 2011)

PRINSIP PENGUJIAN

Layar Treponema pallidum ELISA Kit adalah alat uji imunosorbent enzyme-linked fase padat (ELISA).

Sumur mikrotiter sebagai fasa padat dilapisi dengan antigen treponemal rekombinan tertentu.

Spesimen dan kontrol siap pakai dikuburkan ke dalam sumur ini. Selama inkubasi Treponema pallidum-
spesifik

Antibodi spesimen dan kontrol positif terikat pada antigen immobilisasi.

Setelah dilakukan langkah pencucian untuk menghilangkan sampel dan zat pengikat yang tidak terikat
lobak peroksidase terkonjugasi treponema

Antigen disalurkan ke dalam sumur. Selama inkubasi kedua konjugat ini mengikat secara khusus antibodi
yang dihasilkan

Dalam pembentukan kompleks imun terkait enzim.

Setelah langkah pencucian kedua untuk menghilangkan konjugasi tak mengikat, kompleks imun
terbentuk (jika terjadi hasil positif)

Dideteksi dengan inkubasi dengan media TMB dan pengembangan warna biru. Warna biru berubah
menjadi kuning dengan berhenti

Reaksi indikator enzimatik dengan asam sulfat.

Intensitas warna ini berbanding lurus dengan jumlah antibodi spesifik Treponema pallidum di
contoh. Absorbansi pada 450 nm dibaca menggunakan pembaca piring microtiter ELISA.

(Alpco, 2011)

Sifilis adalah penyakit multistage kronis yang disebabkan oleh spirochaete Treponema

Pallidum subsp. Pallidum, dan biasanya ditularkan melalui kontak seksual atau kongenital

(1). Sifilis telah menjadi masalah kesehatan masyarakat dalam dua dekade terakhir, dengan

Diperkirakan 12 juta kasus baru terjadi per tahun di seluruh dunia (2). Selanjutnya,

Sifilis telah dianggap sebagai salah satu faktor untuk memfasilitasi infeksi HIV dan

Transmisi, dan sifilis kongenital menyebabkan lebih dari setengah juta kelahiran mati atau

Kematian neonatal setiap tahun (3). Di Cina, Sifilis telah menjadi salah satu dari lima besar paling
banyak

Melaporkan penyakit menular dan yang paling sering dilaporkan menular secara seksual

Penyakit (STD), kejadian yang meningkat dari 7,12 kasus per 100.000 orang

Pada tahun 2004 menjadi 22 kasus per 100.000 orang di tahun 2008 (4, 5).

Tes imunosorben terkait enzim (ELISA) yang menggunakan lipoprotein nonspesifik,

Ekstrak utuh dari T. pallidum, atau protein rekombinan sebagai antigen

Penyaringan sifilis telah banyak digunakan di laboratorium klinis, karena mudah dilakukan

Dan cepat untuk melakukan dan juga berpotensi untuk otomatis (11, 12). Beberapa T.

Protein pallidum telah diuji termasuk TpN15 (Tp0171), TpN17 (Tp0435),

TpN44.5 (TmpA, Tp0768), TpN47 (Tp0574), Tp0453, Tp92 (Tp03266), dan Tp0965

(13-17). Meskipun antigen rekombinan ini kadang digunakan dalam kombinasi di

Tes komersial dan menunjukkan sensitivitas tinggi, tidak semua antigen ini dapat digunakan untuk
mendeteksi sifilis tahap awal. Sangat penting untuk mengevaluasi lebih spesifik

Fic dan rekombinan rekombinan sensitif untuk serodiagnosis sifilis.

(Jiang et al., 2013)

Sifilis, yang disebabkan oleh spirochete Treponema Pallidum subsp. Pallidum, adalah infeksi bakteri
kronis Yang tetap menjadi perhatian kesehatan masyarakat di seluruh dunia. Itu WHO memperkirakan
bahwa 12 juta kasus baru dari venereal Sifilis terjadi pada tahun 1999, lebih dari 90% di antaranya
Negara berkembang, dengan jumlah yang meningkat pesat Kasus di Eropa Timur (1,2). Sifilis kongenital
adalah Perhatian khusus di negara-negara berkembang sebagaimana mestinya Menyebabkan aborsi
spontan, lahir mati, kematian Neonatus, atau penyakit pada bayi; Laporan terbaru dari Tanzania
memperkirakan bahwa sampai 50% kelahiran mati Disebabkan oleh sifilis (3). Sangat penting untuk
Kesehatan di seluruh dunia adalah pengakuan bahwa sifilis Infeksi sangat meningkatkan transmisi dan
akuisisi Dari human immunodeficiency virus (HIV) (4,5).

Faktor-faktor ini, seiring dengan sifatnya yang sangat merusak Penyakit terlambat, membuat sifilis
menjadi kesehatan masyarakat yang penting perhatian. Terlebih lagi, wabah baru - baru ini telah
dilaporkan terjadi di Indonesia Beberapa kota di Eropa dan Amerika Utara di antara manusia Yang
berhubungan seks dengan pria (LSL) (6-8). Wabah di antara MSM dikaitkan dengan peningkatan seksual
yang tidak aman Perilaku, mungkin konsekuensi dari peningkatan ARV Pengobatan untuk HIV dalam
survei terbaru; 37-52% dari MSM melaporkan beberapa perilaku berisiko (6-9). Deteksi serologis
antibodi spesifik terhadap T. pallidum sangat penting dalam diagnosis Sifilis, sebagai jalur alami infeksi
Ditandai dengan periode tanpa manifestasi klinis (10,11). Tes serologis dibagi menjadi nontreponemal
Dan tes treponemal dan tidak sendirian saja sudah cukup Diagnosis, karena tes nontreponemal bisa
digunakan Terapi monitor, namun karena spesifisitasnya yang rendah Hasil positif yang diperoleh
dengan metode ini perlu dilakukan Dikonfirmasi dengan tes treponemal. Sebaliknya, sebagai Positif pada
tes treponemal berlangsung sepanjang hidup,

Tes treponemal tidak dapat digunakan dalam tindak lanjut Pasien. Akibatnya, pencarian metode
diagnostik yang sederhana, andal, dan hemat uang terus berlanjut. Nontreponema Tes meliputi
Penelitian Penyakit Venereal Laboratorium dan kartu Rapid Plasma Reagin (RPR) Tes. Tes treponema
meliputi neon serum Uji absorpsi antibodi treponemal, T. pallidum Tes hemaglutinasi (TPHA) (Radim,
Pomezia, Italia), Immunoassay terkait enzim (ELISA), dan Western Blot (WB) assay; Baik ELISA maupun
WB Tes dapat didasarkan pada lisat sel utuh (12-15) Atau antigen treponema rekombinan (16-20). Lebih
Baru-baru ini, immunoassay chemiluminescent dipasang Dengan antigen rekombinan telah dievaluasi
(21,22). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi Kinerja diagnostik Enzygnost Syphilis (Dade
Behring, Marburg, Jerman) dibandingkan dengan ARSITEK Sifilis TP (Abbott Japan Co., Tokyo, Jepang).
Kedua tes sepenuhnya otomatis, namun berbeda Komposisi antigen dan prinsip metode. Sebagai tes
konfirmasi, TPHA dan WB digunakan. Sebuah penelitian retrospektif dilakukan dengan tiga panel Sera:
yang pertama termasuk 244 klinis dan serologis Ditandai serapan sifilis, sedangkan yang kedua termasuk
74 sampel diperoleh dari pasien yang menderita Dari penyakit yang berpotensi mengganggu. Akhirnya,
kami mengevaluasi Pertunjukan Sifilis Enzygnost menggunakan yang ketiga Panel dari 129 sera dipilih
dari antara 9.210 Sampel dikirim antara tanggal 1 Februari 2007 dan 30 April 2007 ke Laboratorium
Mikrobiologi PT Rumah Sakit St. Orsola di Bologna untuk pemutaran rutin Untuk sifilis: semua 129 sera
telah dinilai reaktif oleh ARSITEK Sifilis TP, tapi negatif oleh TPHA Dan WB.
Enzygnost Sifilis adalah enzim satu langkah yang kompetitif Immunoassay untuk penentuan antibodi in
vitro Untuk T. pallidum T. pallidum-spesifik antibodi (IgG dan / atau IgM) yang terkandung dalam sampel
dan Antibodi yang mengandung kontras peroksidase bersaing Mengikat antigen treponema dilapisi ke
Sumur piring Antibodi serum tak terikat Dan antibodi konjugasi dicuci dan Aktivitas enzim dari konjugat
terikat adalah bertekad. Intensitas warna yang dihasilkan adalah Berbanding terbalik dengan konsentrasi
T. pallidum antibodi dalam sampel. Pengujian itu Diproses dengan instrumentasi otomatis (Genesis RSP
200 / BEP III) dan hasilnya ditafsirkan sebagai berikut Instruksi pabrikan.

(Marangoni et al., 2009)

Sifilis, yang dulu dikenal dengan Great Pox, terus berlanjut Tantang dokter dengan nuansa diagnosis dan
Manajemen [1]. Atas dasar tes Wasserman Diperkenalkan 1100 tahun yang lalu [2], diagnosis sifilis
berlanjut Untuk mengandalkan tes serologis karena Treponema Pallidum tidak bisa dibiakkan secara in
vitro. Selanjutnya langsung Visualisasi spirochete membutuhkan lesi dan Baik antibodi neon atau
mikroskop medan gelap, Yang tidak mungkin tersedia. T. pallidum Uji amplifikasi asam nukleat tidak
banyak tersedia Untuk digunakan oleh laboratorium klinis. Dengan demikian, tes serologis adalah Dasar
pengelolaan sifilis, dan pengetahuan Keterbatasan diagnosis mereka sangat penting bagi dokter.
Beberapa tes serologis sifilis telah dibersihkan Gunakan di Amerika Serikat oleh Food and Drug Ad
Gristration (FDA) sebagai diagnostik, konfirmatori, dan Tes skrining donor darah Namun, lebih banyak
sifilis Tes tersedia secara komersial, terutama karena Prosedur yang kurang ketat untuk perkembangan
mereka secara internasional [3]. Berbeda dengan metode yang lebih tua, seperti Tes reagen plasma
cepat (RPR), yang menggunakan fosfolipid (Nontreponemal) antigen, tes serologis yang lebih baru
Gunakan antigen spesifik T. pallidum. Teknologi baru ini Telah membanjiri pasar internasional karena
Otomasi mereka Meskipun sebagian besar tidak dibersihkan oleh FDA, tes ini bisa digunakan setelah
memvalidasi Kinerja dibandingkan dengan standar referensi. Tes khusus treponemal baru telah
menggantikan nontreponemal Tes untuk pemeriksaan di beberapa laboratorium dan Memiliki potensi
untuk membingungkan manajemen klinis. Ini Review berfokus pada tes serologis baru yang telah ada
Paling banyak dievaluasi untuk skrining noncongenital sipilis

(Sea, White and Sparling, 2010)

Enzim immunoassay (EIA) dan enzyme-linked immunosorbent Assay (ELISA) keduanya banyak digunakan
sebagai alat diagnostik di Indonesia Obat-obatan dan sebagai tindakan pengendalian mutu di berbagai
industri; Mereka juga digunakan sebagai alat analisis dalam penelitian biomedis Untuk deteksi dan
kuantifikasi antigen atau antibodi spesifik Dalam sampel tertentu. Kedua prosedur ini serupa
Prinsip dasar dan berasal dari radioimmunoassay (RIA). RIA pertama kali dideskripsikan oleh Berson dan
Yalow (Yalow dan Berson, 1960), dimana Yalow dianugerahi Hadiah Nobel Pada tahun 1977, untuk
mengukur insulin plasma endogen. RIA saat itu Dikembangkan menjadi teknik baru untuk mendeteksi
dan mengukur biologis Molekul hadir dalam jumlah sangat kecil, paving Cara untuk analisis dan deteksi
biologi lainnya yang tak terhitung jumlahnya Molekul, termasuk hormon, peptida, dan protein.

Karena kekhawatiran keamanan mengenai penggunaan radioaktivitasnya,

Uji RIA dimodifikasi dengan mengganti radioisotop dengan a

Enzim, sehingga menciptakan EIA modern dan ELISA.

PRINSIP-PRINSIP UMUM

EIA / ELISA menggunakan konsep imunologi dasar antigen Mengikat antibodi spesifiknya, yang
memungkinkan pendeteksian sangat Sejumlah kecil antigen seperti protein, peptida, hormon, Atau
antibodi dalam sampel cairan. EIA dan ELISA memanfaatkan Antigen enzim enzim dan antibodi untuk
mendeteksi biologis Molekul, enzim yang paling umum digunakan Alkaline phosphatase (EC 3.1.3.1) dan
oksidase glukosa (E.C.1.1.3.4). Antigen dalam fase fluida tidak bergerak, biasanya di Piring microtiter 96-
well. Antigen diijinkan untuk mengikat a Antibodi spesifik, yang kemudian dideteksi oleh a Sekunder,
enzim-coupled antibody. Substrat kromogenik Untuk enzim menghasilkan perubahan warna yang
terlihat atau fluoresensi, Menunjukkan adanya antigen. Kuantitatif atau Pengukuran kualitatif dapat
dinilai berdasarkan kolorimetri tersebut bacaan. Substrat fluorogen memiliki sensitivitas yang lebih
tinggi dan Dapat secara akurat mengukur tingkat konsentrasi antigen dalam mencicipi. Prosedur umum
untuk ELISA diuraikan pada Gambar 1. Berbagai jenis ELISA telah digunakan dengan modifikasi Langkah-
langkah dasar yang dijelaskan pada Gambar 1. Langkah kunci dalam uji ELISA adalah deteksi langsung
atau tidak langsung antigen oleh Menaati atau melumpuhkan antigen atau penangkapan spesifik
antigen Antibodi, masing-masing, langsung ke permukaan sumur. Untuk Pengukuran sensitif dan kuat,
antigen bisa secara khusus Dipilih dari sampel antigen campuran melalui antibodi "capture". Antigen
dengan demikian "terjepit" antara Antibodi penangkapan dan antibodi deteksi. Jika antigen Yang diukur
berukuran kecil atau hanya memiliki satu epitope Untuk mengikat antibodi, metode kompetitif
digunakan di mana Baik antigen diberi label dan bersaing untuk yang tidak diberi label Pembentukan
kompleks antigen-antibodi atau antibodi diberi label Dan bersaing untuk antigen terikat dan antigen
dalam sampel. Masing-masing teknik ELISA yang dimodifikasi ini dapat digunakan untuk a

Tujuan kualitatif dan kuantitatif.

Gambar 1. Teknik uji imunosorbent enzyme-linked enzyme (ELISA) yang digunakan Untuk mendeteksi
antigen pada sampel tertentu. Antigen (dalam fase cair) adalah Ditambahkan ke sumur, di mana ia
melekat pada dinding. Antibodi primer berikatan Khusus untuk antigen. Antibodi sekunder terkait enzim
ditambahkan Yang bereaksi dengan kromogen, menghasilkan perubahan warna secara kuantitatif atau
Secara kualitatif mendeteksi antigen

Sandwich ELISA

Teknik sandwich digunakan untuk mengidentifikasi antigen sampel tertentu. Permukaan sumur
disiapkan dengan kuantitas terikat yang diketahui Antibodi untuk menangkap antigen yang diinginkan.
Setelah mengikat nonspesifik Situs diblokir menggunakan albumin serum sapi, antigen yang
mengandung Sampel diaplikasikan ke piring. Antibodi primer yang spesifik Kemudian ditambahkan
bahwa "sandwich" antigen. Enzim-linked sekunder Antibodi diterapkan yang mengikat antibodi primer.
Gabungan enzim antibodi tak terikat dicuci. Substrat Ditambahkan dan secara enzimatik diubah menjadi
warna yang bisa jadi Kemudian dihitung. Canady dkk. (2013) menganalisa sera pasien Metode sandwich
untuk mendeteksi peningkatan pertumbuhan keratinosit Faktor (KGF) dalam sera pasien keloid dan
scleroderma Dibandingkan dengan kontrol sehat untuk mengukur KGF manusia (Gambar 3). Salah satu
keuntungan menggunakan antibodi spesifik yang dimurnikan untuk ditangkap Antigen adalah bahwa ia
menghilangkan kebutuhan untuk memurnikan antigen dari a Campuran antigen lain, sehingga
mempermudah pengujian dan peningkatannya Spesifisitas dan sensitivitasnya.
(Gan and Patel, 2013)

Enzyme linked Immunosorbent Assay (ELISA) adalah alat diagnostik klinis yang banyak digunakan

Mendeteksi berbagai macam penyakit dari penyakit menular hingga biomarker kanker. Hal ini
digambarkan sebagai a

Metode diagnostik yang tepat, sensitif, serbaguna dan kuantitatif [1]. Meski ada bermacam-macam

Kit uji skrining untuk deteksi antigen / antibodi, mereka memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang lebih
rendah dibandingkan dengan

Sandwich ELISA assay [2,3]. Sebagai contoh, tes ELISA dengue konvensional dari Standard

Diagnostics Inc. memiliki sensitivitas 98,8% dan spesifisitas 99,2%, sedangkan rapid test kit

Dari perusahaan yang sama memiliki sensitivitas 94,2% dan spesifisitas 96,4% sesuai data dari

Spesifikasi produk Standard Diagnostics. Namun, tes ELISA konvensional memakan waktu lama,

Membutuhkan peralatan laboratorium khusus dan keahlian penting untuk dilakukan. Oleh karena itu,
saat ini, mereka

Tidak layak untuk diterapkan dalam pengujian cepat dan diagnosis perawatan titik. Untuk alasan ini,
peneliti adalah

Mencoba miniatur seluruh prosedur ELISA di Lab-on-a-Chip (LOC) atau Lab-on-Compact Disc

(LOCD) platform.

(Thiha and Ibrahim, 2015)

Agen etiologi sifilis adalah Treponema pallidum. Sifilis memiliki manifestasi klinis yang beragam dan
memiliki banyak gambaran klinis dengan penyakit treponemal dan nontreponemal lainnya. Oleh karena
itu, adalah wajib bahwa diagnosis klinis selalu didukung oleh tes laboratorium yang sesuai dan bahwa
hasil tes ditafsirkan dengan mengacu pada riwayat pasien dan temuan pemeriksaan fisik. Sifilis
berkembang melalui stadium primer, sekunder, laten dan tersier yang berbeda. Ulkus yang muncul pada
sifilis primer dan sekunder kaya akan treponema; Transmisi kelamin terjadi melalui kontak langsung
dengan lesi ini. Tahap penyakit di mana pasien hadir memiliki implikasi untuk diagnosis dan pengobatan.
Pada beberapa tahap, penyakit ini mungkin tidak bergejala, dan ada masalah dalam mendiagnosis sifilis
dini, neurosifilis, sifilis kongenital asimtomatik dan sifilis pada pengguna narkoba suntikan dan orang
koinfeksi dengan agen reaksi dan antibodi serologis.
Meskipun T pallidum tidak dapat tumbuh dalam budaya, ada banyak tes untuk diagnosis sifilis langsung
dan tidak langsung. Meski begitu, tidak ada satu tes optimal. Metode diagnostik langsung meliputi
deteksi T pallidum dengan pemeriksaan mikroskopis cairan atau smear dari lesi, pemeriksaan histologis
jaringan atau metode amplifikasi asam nukleat seperti polymerase chain reaction (PCR). Diagnosis tidak
langsung didasarkan pada tes serologis untuk mendeteksi antibodi. Tes serologis terbagi dalam dua
kategori: tes nontreponemal untuk skrining, dan tes treponemal untuk konfirmasi (Gambar (Gambar1)
.1). Semua tes nontreponemal mengukur antibodi antiphospholipid baik imunoglobulin (Ig) G dan IgM
yang dibentuk oleh inang dalam menanggapi materi lipoidal yang dilepaskan oleh sel inang yang rusak di
awal infeksi dan lipid dari permukaan sel treponema itu sendiri. Semua tes treponemal menggunakan T
pallidum atau komponennya sebagai antigen. Jika eksudat lesi atau jaringan tersedia, pemeriksaan
langsung dilakukan, diikuti dengan tes serologi nontreponemal. Tes nontreponemal reaktif kemudian
dikonfirmasi dengan tes treponemal. Hasil uji serologis yang dikonfirmasi menunjukkan adanya antibodi
treponemal namun tidak menunjukkan stadium penyakit dan, tergantung pada tesnya, mungkin tidak
membedakan antara infeksi masa lalu dan saat ini. Terlepas dari kekurangan dan kompleksitas
penafsirannya, tes serologis menjadi andalan dalam diagnosis dan tindak lanjut sifilis. Sifilis laten hanya
bisa didiagnosis dengan tes serologis. Sebenarnya, di Amerika Utara, sebagian besar kasus sifilis
diidentifikasi pada tahap laten dengan tes serologis. Sensitivitas dan spesifisitas tes serologis bervariasi
tergantung pada jenis tes dan stadium penyakit (Tabel (Tabel 1) .1). Penerapan berbagai uji diagnostik
pada berbagai tahap sifilis dan interpretasi mereka dirangkum dalam (Tabel (Tabel 2) 2) dan (Tabel
(Tabel 3), 3), masing-masing. Tidak ada metode laboratorium rutin yang andal untuk membedakan
treponema patogen lain satu sama lain atau dari sifilis. Uraian rinci tentang prosedur diagnostik yang
umum digunakan untuk sifilis dapat ditemukan dalam edisi terbaru manual laboratorium.

Untuk pemeriksaan langsung, eksudat dari lesi sifilis kongenital primer, sekunder dan awal adalah yang
paling berguna. Penting untuk mengumpulkan cairan seret yang jelas bebas dari eritrosit, reruntuhan
jaringan dan organisme lainnya. Abrasi lesi yang lembut mungkin diperlukan untuk mengekspresikan
cairan serentak yang jelas. Lesi harus dibersihkan dengan air garam atau air sebelum mengumpulkan
spesimen. Hal ini sangat penting saat mengumpulkan spesimen dari daerah seperti di bawah preputium,
dimana treponema nonpathogenic ada. Untuk mikroskop lapangan gelap, cairan harus dikumpulkan
pada slide, ditutup dengan coverlip dan diperiksa dalam 20 menit. Untuk pengujian antibodi fluorescent
langsung, apusan harus dilakukan pada slide dan kemudian dikeringkan dengan udara.

Sementara plasma dapat digunakan dalam beberapa tes serologi nontreponemal, serum adalah
spesimen pilihan untuk tes serologis nontreponemal dan treponemal. Spesimen yang hemolyzed,
terkontaminasi bakteri, chylous, keruh atau mengandung partikulat tidak memuaskan. Perhatian harus
diberikan dalam pengiriman seluruh spesimen darah untuk mencegah hemolisis. Tes serebrospinal fluid
(CSF) diindikasikan pada sifilis kongenital dan tersier dan saat ada gejala neurologis. Kontaminasi darah
CSF harus dihindari karena dapat menyebabkan hasil CSF positif palsu. Pada sifilis kongenital, sampel
vena dari ibu dan anak harus diuji.
Sejumlah tes EIA treponemal tersedia secara komersial (10), termasuk Captia syphilis G, Captia Syphilis
M dan Captia pilih Syph-G (Trinity Biotech, Irlandia), tes sifilis SpiroTek (Organon Teknika, AS), Enzygnost
Syphilis (Dade Behring, Jerman), dan Bio-Rad Sifilis G (Laboratorium Bio-Rad, AS). Tes Captia Syphilis G
mendeteksi antibodi IgG, dapat digunakan baik sebagai tes skrining dan tes konfirmasi, dan merupakan
pengganti yang tepat untuk uji MHA-TP (8). Tes Captia Syphilis M dirancang untuk mendeteksi antibodi
IgM pada sifilis kongenital, dan mungkin lebih sensitif daripada tes IgM FTA-ABS 19S (11); Hal ini juga
dianggap cocok untuk deteksi sifilis dini. Tes sifilis SpiroTek memiliki sensitivitas tertinggi dari semua tes
treponemal (terutama pada sifilis primer yang tidak diobati) dan direkomendasikan sebagai tes
konfirmasi oleh CDC (1). Tes AMDAL terbukti sama dengan atau lebih baik daripada tes FTA-ABS dan TP-
PA secara keseluruhan sensitivitas dan spesifisitas dan lebih bermanfaat pada orang dengan koinfeksi
HIV (12-14). Selain itu, AMDAL dapat diyakinkan untuk otomasi, menghilangkan variasi dan subjektivitas
pembaca manusia. Sementara sejumlah laboratorium telah beralih ke AMDAL treponemal untuk
skrining, kekurangannya adalah bahwa tes treponema umumnya tetap reaktif seumur hidup pada
sebagian besar pasien seperti yang dibahas di bagian 'uji serologis Treponemal pada kertas saat ini, dan
ini bisa menyesatkan Individu yang tidak lagi memiliki penyakit aktif. Ada juga isu lain yang muncul.
Sensitivitas AMDAL mungkin tidak lebih besar dari MHA-TP pada sifilis primer, dan proporsi yang
meningkat mungkin hanya memiliki hasil reaktif EIA (V Paus, CDC, komunikasi pribadi). Untuk alasan ini,
CDC saat ini merekomendasikan bahwa, jika AMDAL digunakan untuk skrining, uji RPR harus dilakukan
pada semua reaktan AMDAL, dan uji treponema kedua seperti TP-PA atau FTA-ABS harus digunakan
untuk konfirmasi jika Tes RPR bersifat reaktif.

(Ratnam, 2007)

Sifilis adalah infeksi yang membingungkan yang disebabkan oleh spirochete

Treponema pallidum, yang ditularkan terutama melalui

Kontak seksual Ini berkembang melalui beberapa tahap klinis, dengan

Ciri khas klinis termasuk chancre keras selama primer

Sifilis, diikuti oleh ruam dan limfadenopati umum

Selama sifilis sekunder. Setelah resolusi tahap sifilis ini,

Infeksi memasuki fase laten asimtomatik yang berlangsung lama

Bulan sampai puluhan tahun. Gejala yang beragam dan kronis muncul selama

Sifilis tersier, termasuk neurosifilis, keterlibatan kardiovaskular,

Dan gummas.1

Diagnosis laboratorium sifilis bergantung pada penggunaan a

Banyak tes serologis karena fakta bahwa T. pallidum tidak bisa

Dibiakkan secara in vitro; 2,3 ini berbeda dengan kebanyakan penyakit bakteri,

Dimana diagnosis pasti bisa dilakukan dengan deteksi langsung

Patogen Tes serologis umum untuk diagnosis

Sifilis dibagi menjadi dua kategori: tes non-treponemal dan

Tes treponemal Tes non-treponemal, seperti yang cepat

Tes reagen plasma (RPR) dan penelitian penyakit kelamin

Laboratorium (VDRL), digunakan terutama untuk menentukan aktivitas serologis dan untuk memantau
efek terapeutik. Meskipun

Keuntungan dari tes ini, yang banyak tersedia, murah,

Dan mudah dilakukan, hasilnya membutuhkan konfirmasi lebih lanjut

Skrining untuk mendeteksi antibodi spesifik Treponema. Itu

Tes treponemal, seperti aglutinasi partikel T. pallidum

(TPPA), uji T. pallidum hemaglutination (TPHA), dan

Uji absorpsi antibodi treponemal fluoresen (FTA-ABS)

Digunakan untuk mendeteksi antibodi treponema spesifik. Namun,

Tes ini sangat padat karya dan bergantung pada operator.

Selanjutnya, mereka menunjukkan sensitivitas yang buruk dalam deteksi

Dari sifilis awal.

Dalam beberapa tahun terakhir, immunoassays enzim otomatis (EIAs) dan

Chemiluminescence immunoassays (CIA) juga telah dikembangkan

Untuk serodiagnosis sifilis. Tes ini, menggunakan satu atau

Lebih banyak protein T. pallidum rekombinan TpN15 (Tp0171),

TpN17 (Tp0435), TpN44.5 (TmpA, Tp0768), dan TpN47

(Tp0574), 5,6 telah mendapatkan minat peneliti di lapangan

Diagnosis sifilis karena bersifat obyektif, dapat direproduksi,

Otomatis, dan terkomputerisasi.7 Lebih penting lagi, tes ini

Telah membawa beberapa laboratorium besar di Amerika Serikat untuk menyaring pasien

Dengan algoritma sebaliknya, yang dimulai dengan uji treponemal;

Tes reaktif diikuti dengan tes kuantitatif non-treponemal

Dan sampel sumbang harus direkreen ulang dengan yang kedua dan

Tes treponema yang berbeda.8,9 Meskipun protein ini telah ada

Digunakan dalam serodiagnosis sifilis, tidak umum

Kesepakatan tentang mana protein antigen yang terbaik dalam hal

Serodiagnostik, dan protein yang terpapar permukaan mungkin terjadi

Memiliki sensitivitas yang superior terhadap protein yang saat ini digunakan karena

Paparan langsung mereka terhadap sistem kekebalan tubuh. Oleh karena itu, itu

Sangat penting untuk mengevaluasi antigen rekombinan baru dengan

Diagnosis yang sangat akurat untuk digunakan dalam pengujian serologis untuk

sipilis.

ELISA

Protein rekombinan Tp0663 diencerkan dalam buffer karbonat

(0,1 M, pH 9,6), kemudian 96-piring sumur (Corning Costar, New York,

USA) dilapisi dengan 100 ml per sumur semalam pada suhu 4 8C. Dengan

Campur mencuci, piring diblokir selama 2 jam di kamar

Suhu dengan 200 ml PBSTM. Sampel serum diencerkan

1: 100 dengan PBSTM, dan 100 ml ditambahkan ke masing-masing sumur. Setelah

Inkubasi selama 2 jam pada suhu 37 C, lempeng dicuci secara ekstensif

Dengan PBST. IgG anti-human kambing terkonjugasi HRP digunakan pada a

Pengenceran 1:10 000, dan kemudian 100 ml ditambahkan ke masing-masing sumur. Itu

Campuran diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37 8C. Pelat dikembangkan oleh
Menambahkan 100 ml tetramethylbenzidine substrat ke masing - masing sumur dan

Diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit. Reaksi itu

Dihentikan dengan penambahan 100 ml asam sulfat 1 M. Itu

Absorbansi dibaca pada 450 nm. Setiap sampel diuji di

duplikat. Nilai kerapatan optik rata-rata untuk yang tidak terinfeksi

Sera kontrol ditentukan dengan diagnosis klinis ditambah dua kali lipat

Standar deviasi dianggap sebagai nilai cutoff untuk ditentukan

Positif pada setiap sampel. Nilai cutoff dari ELISA adalah

0,4121. Nilai serapan kurang dari atau sama dengan nilai cutoff

Ditentukan menjadi negatif, sedangkan yang lebih besar dari pada

Nilai cutoff didefinisikan sebagai positif.

(Xu et al., 2016)

PRINSIP PENGUJIAN:

Metode ELISA didasarkan pada reaksi antibodi di

Sampel diuji dengan antigen yang teradsorpsi pada

Permukaan polistiren Imunoglobulin yang tidak terikat dicuci

mati. Enzim globulin anti-manusia bertipe enzim mengikat antigen-

Kompleks antibodi pada tahap kedua. Setelah langkah pencucian baru,

Konjugat terikat dikembangkan dengan bantuan substrat

Larutan (TMB) untuk membuat produk yang larut dalam warna biru

Yang berubah menjadi kuning setelah menambahkan larutan asam berhenti.

(Vircell, 2014)

Sifilis merupakan penyakit ulseratif genital, merupakan hal yang penting

Penyebab penyakit menular seksual yang juga

Merupakan masalah kesehatan masyarakat yang besar di keduanya

Negara berkembang dan negara maju. Infeksi dengan

Human Immunodeficiency Virus (HIV) pada orang dewasa di Indonesia

India didominasi oleh heteroseksual

Transmisi1

. Ulserasi dan peradangan terjadi

Oleh sifilis bertindak sebagai faktor risiko yang penting untuk

Transmisi serta akuisisi HIV dan keduanya

Infeksi tampak berkembang dengan cepat saat terjadi

Bersama.

Uji serologis masih menjadi alat penting dalam

Diagnosis laboratorium sifilis Tidak treponemal

Uji antibodi seperti VDRL (Venereal Disease Research

Laboratorium) dan Rapid Plasma Reagin (RPR) adalah

Berguna untuk penyaringan massal sifilis3

. Berpendar

Penyerapan Antibodi Treponemal (FTA-ABS) atau

Treponemal pallidum Haemagglutination (TPHA) atau

Uji immunosorbenr enzim terkait enzim (ELISA),

Khusus untuk sifilis lebih bermanfaat untuk menghindari kesalahan

Hasil positif3,4. Mengingat hal ini, penelitian ini

Dilakukan untuk mengetahui prevalensi sifilis di Indonesia

Pasien sero reaktif HIV dan untuk membandingkan efikasi

Tes untuk skrining.

(A et al., 2014)

RINSIP PROSEDUR

Sifilis Total Ab menggunakan tiga antigen rekombinan dalam uji sandwich. Antigen akan mendeteksi

T. pallidum spesifik IgG, IgM, dan IgA; Memungkinkan tes untuk mendeteksi antibodi selama semua
tahap

infeksi.

Sumur dilapisi dengan campuran antigen rekombinan TBC 15Kd, 17Kd, dan 47Kd T. pallidum.

Antibodi spesifik dalam spesimen serum atau plasma digabungkan dengan antigen ini dan dengan

Antigen yang sama dikonjugasikan ke lobak peroksidase bila konjugasi ditambahkan ke sumur di mana

Spesimen telah diinkubasi. Setelah bahan yang tidak bereaksi dibuang dengan cara mencuci,

Adanya enzim terikat, menunjukkan adanya spesimen antibodi spesifik

Terungkap dengan perubahan warna pada campuran substrat / kromogen. Intensitas warnanya

Dibandingkan dengan di sumur kontrol untuk mengetahui ada tidaknya antibodi spesifik.

(BIO-RAD, 2014)

EIA (Enzim Immunoassay) adalah enzim

Immunoassay dan seorang wakil dari generasi baru

Tes yang andal dan cepat untuk deteksi spesifik

Antibodi IgG dan IgM.

Hal ini efisien dalam pengujian sejumlah besar od

Spesimen. Sekarang, ini tersedia secara luas dan semakin banyak

Digunakan untuk skrining Tesnya otomatis, tapi

mahal. Tes AMDAL sangat sensitif dalam deteksi

Sifilis primer dan sekunder dengan IgM EIA

Menjadi tes pertama yang positif dalam beberapa kasus (11). Di

Diduga sifilis primer suatu IgM harus diminta,

Karena antibodi ini dapat dideteksi pada akhir

Minggu kedua setelah infeksi, sedangkan antibodi IgG adalah

Terdeteksi 4 - 5 minggu setelah infeksi.

Tes AMDAL telah ditunjukkan sama dengan atau

Lebih baik dari FTA-ABS dan tes TPPA secara keseluruhan

Sensitivitas dan spesifisitas dan lebih bermanfaat untuk HIV

Orang koinfeksi (12). Ada beberapa versi

Dari immunoassays, tergantung pada metode

Deteksi, seperti immunoassay chemiluminescent

(CIA), dan immunoassay microbead (MIA). Ini

Immunoassay dapat mendeteksi IgG, IgM atau kedua IgG

Dan antibodi IgM, diproduksi melawan Treponema

Pallidum.

Kriteria diagnostik serologis untuk

sipilis

Dalam skrining, jika hanya tes serologis treponemal

Digunakan, mereka mengidentifikasi orang-orang dengan sukses sebelumnya

Pengobatan sifilis, serta orang-orang yang tidak diobati

sipilis. Tes Treponemal tidak bisa dibedakan

Infeksi sebelumnya dari infeksi saat ini. Karena itu,

Kombinasi tes spesifik dan non spesifik

Direkomendasikan Jika screening dimulai dengan spesifik

Uji serologis (misalnya AMDAL), maka perlu dilakukan a

Tes spesifik baru untuk mengkonfirmasi (misalnya TPHA) diagnosisnya

Dari sifilis Jika kedua tes itu positif, maka kuantitatif

Uji tidak spesifik diperlukan (VDRL atau RPR).

Jika tes treponema konfirmasi positif

Dan tes non-treponemal negatif, pada pasien dengan dugaan sifilis dini, tes EIA-IgM mungkin

Digunakan (8). Namun, perkembangan IgM dan nya

Kegigihan setelah tahap awal laten sifilis tidak

dimengerti. Diperlukan penelitian lebih lanjut

Uji IgM dapat direkomendasikan untuk penggunaan rutin

Pengujian orang dewasa (17).

Jika pemutaran dimulai dengan yang tidak spesifik

Uji serologis, maka temuan kuantitatif positifnya

Perlu dikonfirmasi dengan tes tertentu. Jika yang utama

Skrining terdiri dari nonspesifik dan spesifik

Tes, perlu untuk mengukur titer dari nonspesifik

Tes, terutama jika tes spesifiknya positif

(14). Temuan uji non-spesifik (VDRL atau RPR)

Dengan titer lebih besar dari 1:16, dan / atau IgM positif

Tes, umumnya menunjukkan sifilis aktif dan harus

Diobati, meski serologi harus ditafsirkan masuk

Terang sejarah pengobatan dan temuan klinisnya.

VDRL / RPR dan EIA-IgM sering kali negatif

Sifilis terlambat, tapi ini tidak mengecualikan kebutuhan

Pengobatan (15).

(Goluin et al., 2016)

DAPUS

A, C. K., S, P. S., Ameeta, J. and Abhay, C. (2014) Brief Communication: Serodiagnosis of syphilis in HIV
Sero-reactive Patients ., (June), pp. 108110.

Alpco (2011) Corticosterone ( Mouse / Rat ) ELISA For the quantitative determination of corticosterone
in rat and mouse serum or plasma, pp. 18. Available at: www.alpoco.com.

BIO-RAD (2014) Syphilis Total Ab. Available at: http://www.bio-

rad.com/webroot/web/pdf/inserts/CDG/en/883679_EN.pdf.

Gan, S. D. and Patel, K. R. (2013) Enzyme Immunoassay and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,
Journal of Investigative Dermatology. Elsevier Masson SAS, 133(9), pp. 13. doi: 10.1038/jid.2013.287.

Goluin, Z., Jovanovi, M., Mati, M., Vujanovi, L., Ro, T. and Jeremi, B. (2016) Serological Tests for
Acquired Syphilis in Immuno-competent Patients, Serbian Journal of Dermatology and Venereology,
8(2), pp. 7987. doi: 10.1515/sjdv-2016-0007.

Jiang, C., Zhao, F., Xiao, J., Zeng, T., Yu, J., Ma, X., Wu, H. and Wu, Y. (2013) Evaluation of the
recombinant protein TpF1 of Treponema pallidum for serodiagnosis of syphilis, Clinical and Vaccine
Immunology, 20(10), pp. 15631568. doi: 10.1128/CVI.00122-13.

Marangoni, A., Moroni, A., Accardo, S. and Cevenini, R. (2009) Laboratory diagnosis of syphilis with
automated immunoassays, Journal of Clinical Laboratory Analysis, 23(1), pp. 16. doi:
10.1002/jcla.20268.

Ozoli, D., Katkovska, S. and Bobojeda, L. (2009) Internet Journal of Medical Update Screening Assays to
find out Late Latent Syphilis Cases Which is, 4(2), pp. 2935.

Ratnam, S. (2007) The laboratory diagnosis of syphilis., The Canadian journal of infectious diseases &
medical microbiology = Journal canadien des maladies infectieuses et de la microbiologie medicale /
AMMI Canada, 16(1), pp. 4551. doi: 10.1016/0197-1859(94)90004-3.

Sato, N. S. and Paulo, S. (2011) Laboratorial Diagnosis of Syphilis, p. 130. Available at:
www.intechopen.com.

Sea, A. C., White, B. L. and Sparling, P. F. (2010) Novel Treponema pallidum Serologic Tests: A
Paradigm Shift in Syphilis Screening for the 21st Century, Clinical Infectious Diseases, 51(6), pp. 700
708. doi: 10.1086/655832.

Thiha, A. and Ibrahim, F. (2015) A Colorimetric Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Detection
Platform for a Point-of-Care Dengue Detection System on a Lab-on-Compact-Disc, Sensors (Basel,
Switzerland), 15(5), pp. 1143111441. doi: 10.3390/s150511431.

Vircell (2014) SYPHILIS ELISA IgG + IgM, pp. 14. Available at:
http://www.peramed.com/peramed/docs/T1060_EN.pdf.

Xu, M., Xie, Y., Jiang, C., Xiao, Y., Kuang, X., Zhao, F., Zeng, T., Liu, S., Liang, M., Li, L., Wang, C. and Wu, Y.
(2016) A novel ELISA using a recombinant outer membrane protein, rTp0663, as the antigen for
serological diagnosis of syphilis, International Journal of Infectious Diseases, 43, pp. 5157. doi:
10.1016/j.ijid.2015.12.013.