FOTOSNTESIS.

I. INTRODUCCIN:

La Fotosntesis, es un proceso en el que los organismos con clorofila, como las plantas verdes,
las algas y algunas bacterias, capturan energa en forma de luz y la transforman en energa
qumica. Prcticamente toda la energa que consume la vida de la biosfera terrestre (la zona del
planeta en la cual hay vida) procede de la fotosntesis.

Este proceso permite que organismos como los vegetales desarrollen infinidad de molculas
orgnicas a partir de compuestos inorgnicos, de all que todos los dems organismos no
auttrofos obtienen las biomolculas necesarias para la vida.

El proceso de fotosntesis es vital para el crecimiento y desarrollo de una planta, por tanto es
importante comprender las rutas que siguen todos los compuestos que ingresan al vegetal; como
as los factores que favorecen o afectan a la fotosntesis, de esa forma podemos comprender
mejor las condiciones necesarias para una produccin vegetal ptima, que es a lo que todo
profesional quiere llegar.

La fotosntesis se realiza en dos etapas: una serie de reacciones que dependen de la luz y son
independientes de la temperatura, y otra serie que dependen de la temperatura y son
independientes de la luz. La velocidad de la primera etapa, llamada reaccin lumnica, aumenta
con la intensidad luminosa (dentro de ciertos lmites), pero no con la temperatura. En la segunda
etapa, llamada reaccin en la oscuridad, la velocidad aumenta con la temperatura (dentro de
ciertos lmites), pero no con la intensidad luminosa.

II. OBJETIVOS:

Extraer y separar de las hojas los pigmentos involucrados en la fotosntesis: clorofila a,

clorofila b, caroteno y xantofila.
Determinar algunas de sus propiedades como: color, fluorescencia y espectro de
absorcin.
Observar cualitativamente los efectos de la ausencia o presencia de la luz sobre el
proceso de la fotosntesis.
Distinguir la distribucin de los tejidos y estructuras en cortes de hojas de plantas C3,C4
y CAM.

III. FUNDAMENTO TERICO:

La fotosntesis es el proceso por el cual las plantas, cianobacterias y bacterias fotosintticas

convierten la energa luminosa en energa qumica y es la base de todas las cadenas
alimenticias de los animales y humanos. Para que la energa lumnica pueda ser utilizada,
primero debe ser absorbida y quienes realizan esta funcin son los pigmentos fotosintticos.
 En las plantas, la clorofila a es el pigmento involucrado directamente en la transformacin de la
energa lumnica en energa qumica, las clulas fotosintticas casi siempre contienen un
segundo tipo de clorofila, la clorofila b y otro grupo de pigmentos llamados carotenoides. Uno de
los carotenoides que se encuentran en las plantas es el -caroteno; los carotenoides son
pigmentos rojos, anaranjados o amarillos, que en las hojas verdes estn enmascarados por las
clorofilas, que son ms abundantes; sin embargo en algunos tejidos, como los del tomate
maduro, predominan los colores reflejados por los carotenoides.

Las otras clorofilas y los carotenoides pueden absorber luz de longitudes de onda diferentes de
las que absorbe la clorofila a. Estos pigmentos actan como pantallas que transfieren la energa
a la clorofila a, extendiendo as la gama de luz disponible para la fotosntesis.

Los carotenoides son colorantes amarillos y rojos, el sistema de dobles enlaces conjugados est
formado exclusivamente por tomos de carbono, en general consisten de una cadena larga de
hidrocarburo, por esto son compuestos insolubles en agua, pero s en solventes grasos. Se
dividen en Carotenos que son hidrocarburos insaturados y en Xantofilas que son derivados
oxigenados de los anteriores.

Los pigmentos accesorios actan como antena, conduciendo la energa que absorben hacia el
centro de reaccin. Una molcula de clorofila en el centro de reaccin puede transferir su
excitacin como energa til en reacciones de biosntesis.

IV. PROCEDIMIENTO:

Experimento 1: EXTRACCIN DE PIGMENTOS FOTOSINTTICOS

Solventes orgnicos

Extracto de acetona
M: Metanol
EP: ter de petrleo
EE: ter etlico

Extracto acetnico que contiene

los pigmentos fotosintticos.
a

Agua EP (clorofila a y b,
caroteno y xantofila)
5 ml. Acetona
5 ml. EP
Acetona
En un tubo de ensayo agregar 5 ml. de ter de petrleo,
Separar las dos capas y
5ml. de extracto de acetona y agua.
eliminar la capa de acetona
Agitar fuertemente por unos segundos.
 Tubo A
Agua

EP (clorofila a
Agregar 5 ml.
y caroteno)
deMetanol

EP (clorofila a y b, M (clorofila b
caroteno y xantofila) y xantofila)

EP (clorofila a
y caroteno)

Tubo B
Agua

Agregar 5 ml. EE (clorofila b

de ter etlico y xantofila)

M (clorofila b
y xantofila)

Se separa el ter etlico

Tubo B Tubo A
Agregar a cada tubo
5 ml. de metanol
KOH 30 %

EE (clorofila b EP (clorofila a
y xantofila) y caroteno)
V. RESULTADOS:

EE (xantofila)

EP (caroteno)
Clorofila b y
Metanol
Clorofila a y
Metanol

Tubo B
Tubo A

FLUORESCENCIA:

Luego de separar los pigmentos, se lleva a una cmara con luz

ultravioleta.

Se observar claramente como

la clorofila a y la clorofila b, se
torna color rojo; mientras que
la xantofila y el caroteno no
varan de color.
 Experimento 2: IMPORTANCIA DE LA LUZ PARA LA FOTOSNTESIS

Cubrir completamente una hoja con un

recorte de cartulina negra, de tal
manera que no ingrese nada de luz ni
por el haz, ni por el envs.

En otras dos hojas cubrir con la

cartulina el haz de las hojas, pero
con una ligera modificacin,
recortar la figura de un tringulo en
una y un cuadrado en la otra.

Esto permitir que la luz penetre

solamente a travs del corte.

Elegir dos hojas ms:

Cubrir una de ellas solo por el haz y

el otro solo por el envs.
 Estas hojas cubiertas con las
cartulinas, sern mantenidas en la
misma planta, por lo menos tres
das.

Cortar las muestras de las hojas

cubiertas y una que no haya sido
cubierta, para realizar la prctica en
el laboratorio.

PROCEDIMIENTO:

A continuacin
saque las de hojas
y colquelas en
otro vaso de
precipitacin.
Sumerja las hojas en agua Hervir en etanol 96 % para
hirviendo durante un par de extraer los pigmentos.
minutos, para ablandar el tejido.

Lavar con agua de cao y

observar que aparezcan zonas Una vez decoloradas, cubrir las hojas con
negruzcas. una solucin diluida de lugol durante un
par de minutos.
 Experimento 3: ANATOMIA FOLIAR EN PLANTAS C3, C4 Y CAM

Muestras de cortes transversales de hojas

de plantas C3, C4 y CAM.

Observar las muestras en el microscopio.

RESULTADOS:

Epidermis

Parnquima clorofiliano
esponjoso.

Parnquima clorofiliano
en empalizada.

Foto del corte transversal de la hoja pjaro bobo (planta C3)

 Parnquima clorofiliano
del mesfilo.

Estructura de kranz

Epidermis

Foto del corte transversal de la hoja de maz (planta C4)

Parnquima clorofiliano
con vacuolas grandes.

Foto del corte transversal de la hoja de Crassula(planta CAM)

VI. DISCUCIONES:

Los pigmentos de algas verdes y plantas superiores son compuestos solubles en solventes no
polares y se localizan formando complejos pigmento-protena, en la fase lipdica de las
membranas tilacoidales de los cloroplastos. Por esta razn los pigmentos no pueden ser
extrados del tejido foliar con soluciones buffer acuosas pero es relativamente fcil extraerlos con
un solvente orgnico. (REDES, 2006)

Es por eso que utilizamos la tcnica mencionada en la gua, con diferentes compuestos
orgnicos de solubilidad y afinidad qumica diferentes como teres y alcoholes, para separar la
clorofila a y caroteno en un mismo tubo (tubo A) y la clorofila b con la xantofila (tubo B).

La energa de la luz en longitudes de onda de 400 a 700 nm es absorbida por la clorofila y puede
seguir tres caminos: i) ser usada para dirigir la fotosntesis (procesos fotoqumicos), ii) disipada
como calor o iii) reemitida en pequeas pero detectables cantidades de radiacin de longitud de
onda ms larga (rojo/rojo lejano) (procesos no fotoqumicos), esta emisin de luz es llamada
fluorescencia de la clorofila a. Los tres procesos se dan en competencia, as que incrementos en
la eficiencia de alguno puede inducir decrecimiento en los otros dos. De esta manera midiendo el
rendimiento de la fluorescencia de la clorofila a se proporciona informacin sobre cambios en la
eficiencia de la fotoqumica y la disipacin de calor (Maxwell y Johnson 2000).

La fluorescencia de la clorofila a (se torna a color rojo) es una herramienta muy til en la
evaluacin de la calidad fisiolgica de plantas tanto en invernadero como en campo. Esto
permite abarcar mediciones de muchas plantas, permite seleccionar genotipos, evaluar la
variabilidad gentica y la respuesta de las plantas a varios estreses ambientales y biticos.

VII. CONCLUSIONES:

Se extrajo y separ de las hojas los pigmentos involucrados en la fotosntesis, clorofila a,

clorofila b, caroteno y xantofila.
Los pigmentos cloroflicos (las clorofilas y los carotenoides) son solubles (afinidad
qumica) en solventes orgnicos como por ejemplo alcohol etlico y acetona.
La clorofila a y los carotenos se disolvieron preferentemente en la fase del ter de
petrleo, mientras que la clorofila b y la xantofila se disolvern en la fase del alcohol
metlico (metanol).
La clorofila absorbe luz ultravioleta y emite luz por fluorescencia de color rojo
(justamente la zona menos energtica del visible), por lo tanto se determin su
propiedad de fluorescencia.

VIII. BIBLIOGRAFA:

Manual de Prcticas de Fotosntesis - Redes Garcia , Rosa y Collazo Ortega, Margarita .UNAM.

Maxwell, K.; Johnson, GN (2000). "Chlorophyllfluorescence--a practical guide". Journal of

Experimental Botany51 (345): 659668
CUESTIONARIO 1:

1. Qu diferencia existe entre espectro de absorcin y espectro de accin de la

fotosntesis?
Espectro de absorcin: Son las longitudes de onda que entran a la planta (todas
menos verde)
Espectro de accin: son las longitudes de onda con las que se hace la fotosntesis (roja
y azul)

2. Dibuje el espectro de absorcin de las clorofilas a y b, caroteno y xantofila.

3. En qu consisti el experimento de Julis Sachs. Esquematizar en un grfico

sencillo y claro.
 4. Qu diferencia existe entre fluorescencia y fosforescencia?

La Fluorescencia es el fenmeno en el cual ciertas sustancias tienen la propiedad de absorber

energa y almacenarla, para emitirla despus en forma de luz. El mecanismo fsico que rige este
comportamiento es el mismo que para la fluorescencia, no obstante la principal diferencia con
sta es que hay un retraso temporal entre la absorcin y la reemisin de los fotones de energa.
En la fosforescencia, las sustancias continan emitiendo luz durante un tiempo mucho ms
prolongado, an despus del corte del estmulo que la provoca, ya que la energa absorbida se
libera lenta (incluso muchas horas despus) y continuamente.

5. Represente los resultados del experimento de la importancia de la luz en la

fotosntesis en esquemas y comntelos.

HOJA CONTROL HOJA CUBIERTA TOTALMENTE

La hoja control se observa con manchas negruzcas en comparacin a la hoja totalmente

cubierta, esto es debido a que se destaca la presencia de almidn en la hoja,ya que la tincin
con lugol nos permite revelar las zonas donde se ha producido fotosntesis.
 HOJA CUBIERTA POR EL HAZ HOJA CUBIERTA POR EL ENVS
La hoja que fue cubierta por el haz se nota ligeramente ms claro que la hoja que fue cubierta
por el envs; pero en ambos casos se observa manchas negruzcas.

HOJA CON UNA FIGURA DE TRINGULO HOJA CON UNA FIGURA DE CUADRADO
POR DONDE INGRESABA LA LUZ POR DONDE INGRESABA LA LUZ

El lugol ha teido el rea que no ha sido privada de luz solar, por lo tanto slo ah hay almidn
producido por fotosntesis, en el resto de la hoja no ha habido funcin fotosinttica. Por lo que
podemos asegurar que el factor condicionante ha sido la luz solar.
CUESTIONARIO 2:

1. Grafique los cortes anatmicos de las hojas observadas de las plantas C3, C4, y CAM

Pajaro bobo -C3

Crassula -CAM

Maiz C4

2. Cules son las diferencias morfolgicas y fisiolgicas entre las clulas del mesfilo
y las clulas envolventes del haz conductor en plantas C4?
Diferencias morfolgicas

Clulas del mesfilo Clulas envolventes de haz conductor

- No presentan tilacoides grnales, solo
- Presentan cloroplastos normales con
presentan el fotosistema I
abundantes granas, conteniendo de
- Se encuentra la ribulosa fosfato
esta manera los fotosistemas I y II
carboxilsa
- Carecen de RuBisCO
- Existe muy poco oxgeno
- Clulas en empalizadas
- Clulas cilndricas

Diferencias fisiolgicas

Clulas del mesfilo Clulas envolventes de haz conductor

- Fijacin del CO por la enzima PEP en forma
de una acido de cuatro carbonos OAA,
Malato y Aspartato (CARBOXILACION)
- Baja concentracin de CO
- Se regenera el aceptor inicial del CO, PEP
- No realizan ciclo de Calvin
- DESCARBOXILACION del cido de
cuatro carbonos
- Alta concentracin de CO
- El CO liberado es fijado por la RuBisCO
- Ciclo de Calvin y formacin de azucares

En las plantas C4 a diferencia de las plantas C3

(las C3 presentan un nico tejido fotosinttico con
dos morfologas distintas) presentan una
anatoma en las hojas que consiste en dos tejidos
con diferente morfologa y diferente fisiologa.
Vemos de esta manera que las existen las
clulas que rodean al haz conductor (clulas de
la vaina) y por otro lado las clulas del mesfilo
que rodean a la vaina.
En las plantas C4 la fotosntesis se basa en la
cooperacin de los dos tejidos para bombearCO2
a la rubisco, la cual se encuentra en las clulas
de la vaina mientras que la PEPC se encuentra
en las clulas del mesfilo.

Diferencias Morfolgicas
Clulas del mesfilo:
Se han asociado alrededor de los haces vasculares formando una vaina espesa que se
conoce como estructura de kranz.
Presentan cloroplastos normales con abundantes granas, conteniendo de esta manera
los fotosistemas I y II Clulas envolventes del haz conductor:
No presentan tilacoides granales, solo presentan el fotosistema I.
Se encuentra la ribulosa fosfato carboxilsa.
Existe muy poco oxgeno.
Diferencias fisiolgicas
Clulas del mesfilo:
Al contener los fotosistemas I y II estas pueden generar ATP y NAPH
Asimilan el CO2 el cual se transforma por hidratacin a HCO3 que se fija al
Fosfoenolpirvatocarboxilasa para dar oxalacetato.-
Recibe los cidos C3 (piruvato o alanina) que provienen de las clulas del haz
conductor, regenerando el aceptor inicial, fosfoenolpiruvato. (durante la fotosntesis).
Clulas envolventes del haz conductor:-

Aqu ocurre la descarboxilacin de los cidos C-4(mlico o asprtico provenientes del

mesfilo) y generacin de CO2 que van al ciclo de Calvin.-
La accin de la oxigenasa es prcticamente nula; pues la mayor parte de la rubisco se
encuentra aqu, anulando casi por completo la fotorrespiracin

3. Esquematice las rutas metablicas de los ciclos de Calvin y Korstchack y Hatch y Slack
en plantas C3, C4 y CAM.

Es necesario mencionar que las plantas C3 viven en ambientes templados, quiz por ello sean el
tipo de organismo que mejor conocemos, pero hay otras que viven en ambientes secos y clidos
tienen mecanismos que les permiten fijar inicialmente el CO2 por una de dos vas, y as logran
minimizar la prdida de agua. Estas vas se conocen como la va de cuatro carbonos, o C4 y la
va de las plantas CAM.

En las llamadas plantas C4, la enzima Fosfoenolpiruvatocarboxilasa une primero el dixido de

carbono al Fosfoenolpiruvato para formar un compuesto de cuatro carbonos, el Oxalacetato.
Aunque las plantas C4 gastan ms energa para fijar Carbono, en ciertas condiciones su
eficiencia fotosinttica neta puede ser superior a la de las plantas C3 descritas anteriormente
debido aciertas caractersticas clave que diferencian a las enzimas Rubisco (presente tanto en
las plantasC3 como en las C4) y Fosfoenolpiruvato carboxilasa (presente en lasC4), ya que no
realizan la fotorespiracin, donde se pierden carbonos en forma de CO2 por la respiracin.

En las plantas CAM (palabra que alude al metabolismo cido de las crasulceas) aasimilacin
del CO2 tiene lugar de noche, cuando a pesar de estar abiertos los estomas, la prdidade agua
debida a la transpiracin es mnima. En definitiva los distintas formas dela asimilacin deCO2, es
resultado como un mecanismo de adaptacin evolutiva al ambiente en que se encuentrala
plantas, para hacer frente a las necesidades presentadas por estas.

Plantas C3, Ciclo de Calvin

Plantas C4: ciclo de Calvin ruta Hatch y Slack

Plantas CAM:

4. Haga un cuadro de comparacin entre plantas C3, C4 y CAM indicando las diferencias
resaltantes entre ellas.

DIFERENCIAS ENTRE LAS PLANTAS C3, C4 Y CAM

C3 C4 CAM

Especies ms Papa, chirimoya, pjaro Maz, caa de azcar, Pia, opuntia, crasula,
conocidas. bobo, trigo, cebada, sorgo, mijo perla. nopal.
frijol, arroz, tomate.
Tipo de hbitat De amplia distribucin En sitios clidos y Sitios seridos y
en el mundo. praderas. epifiticos.

Primer producto que PGA Malato Malato

establece la fijacin de
CO2.

Abertura de los Abiertos durante el da Abiertos durante el da. Abiertos durante la

estomas. noche y cerrados en el
da.
Anatoma. Vaina del haz vascular Vaina del haz vascular Soculencia celular o de
no presente o sin con cloroplasto (kranz). los tejidos.
cloroplasto.
Fotorespiracin. Hasta el 40% de la No detectable. No detectable.
fotosntesis.
CARACTERSTICAS C3 C4 CAM
1 en la noche a
Fijacin de CO2 En el mesfilo de 1 en el mesfilo travs del ciclo C4
la hoja 2 en la estructura 2 en el da a travs
de Kranz del ciclo C3

Primer producto estable de PGA Malato Malato

la fijacin del CO2
Presenta los haces
Presenta los haces Presenta a las vasculares inmersos
Anatoma conductores estructuras de en el parnquima
inmersos en el Kranz inmersas en esponjoso, sin
parnquima el parnquima espacios areos y en
lagunar esponjoso cada clula una gran
vacuola

Temperatura ptima ( C) 15-25 25 Ms de 30

Fotorrespiracin Hasta 40% de la No detectable No detectable

fotosntesis neta

Tropicales y
Regin climtica Templada subtropicales Desrticas