Jamur tirosinase: Prospek Terbaru

tirosinase, juga dikenal sebagai polifenol oksidase, adalah enzim yang mengandung tembaga,
yang secara luas didistribusikan di mikroorganisme, hewan, dan tumbuhan. Saat ini jamur
tirosinase telah menjadi
populer karena sudah tersedia dan berguna dalam sejumlah aplikasi. Karya ini menyajikan
studi tentang pentingnya tirosinase, terutama yang berasal dari jamur, dan menggambarkan
karakter biokimia dan penghambatan dan aktivasi dengan berbagai bahan kimia yang
diperoleh dari asal-usul alam dan sintetis dengan kepentingan klinis dan industri dalam
prospek baru-baru ini.

PENDAHULUAN
Jamurtelah dikonsumsi oleh manusia sejak zaman kuno tidak hanya sebagai bagian dari diet
normal, tetapi juga sebagai makanan lezat karena rasa yang diinginkan mereka dan aroma.
Penggunaan jamur dengan sifat terapeutik berkembang dari hari ke hari karena berbagai efek
samping yang disebabkan oleh obat-obatan konvensional. Di antara produk alami, jamur
telah diakui sebagai kandidat kuat dalam studi klinis karena mereka mudah diperoleh dalam
jumlah yang relatif besar dan murah. Selama 30 tahun terakhir enzim tirosinase (polifenol
oksidase, EC 1.14.18.1) telah menerima banyak perhatian sebagai alat yang sangat diperlukan
dalam pelaksanaan studi tentang berbagai topik. Sejak investigasi biokimia pertama
dilakukan pada tahun 1895 dijamur nigricansRussula,potongan daging yang ternyata merah
dan kemudian hitam pada paparan udara(1),sejumlah studi telah dilakukan untuk menemukan
pelakunya terutama bertanggung jawab untuk warna perubahan, yang secara luas
didistribusikan melalui skala filogenetik dari rendah ke bentuk kehidupan yang lebih
tinggi(2-6),meskipun, dalam beberapa kasus, tidak terdeteksi karena inhibitor endogen(7,
8).Enzim ini kemudian diidentifikasi sebagai tirosinase, situs aktif yang berisi cluster
tembaga binuklir di jamur umum(Agaricusbisporus)dan melanoma maligna tirosinase
manusia(9, 10).Pada tumbuhan yang lebih tinggi dan jamur, tyrosinases terjadi di berbagai
isoform seperti belum matang, dewasa laten(11, 12)dan bentuk aktif; Namun, deskripsi
biokimia mengenai karakterisasi kinetik dan hubungan antara isoform ini adalah belum
dibentuk. The biosintesis jalur untuk pembentukan melanin, yang beroperasi di serangga,
hewan, dan tumbuhan, sebagian besar telah dijelaskan oleh Raper(13),Mason(14),dan Lerner
et al.(15).Pertama dua langkah di jalur adalah hidroksilasi monophenol ke o-diphenol
(monophenolase atau kegiatan cresolase) dan oksidasi diphenol ke o-quinones (diphenolase
atau kegiatan catecholase), baik menggunakan molekul oksigen diikuti oleh serangkaian
langkah nonenzimatik dihasilkan dalam pembentukan melanin(13, 16, 17)seperti yang
ditunjukkan dalam Skema1,yang memainkan peran protektif penting melawan
fotokarsinogenesis kulit. Produksi melanin pigmentasi abnormal (melasma, bintik-bintik,
ephelide, lentigines pikun, dll) adalah masalah estetika yang serius pada manusia(18).Dalam
jamur, peran melanin berkorelasi dengan diferensiasi organ reproduksi dan
pembentukan spora, virulensi jamur patogen, dan perlindungan jaringan setelah
cedera(19-21).Selain itu, tirosinase bertanggung jawab untuk pencoklatan enzimatis yang
tidak diinginkan dari buah-buahan dan sayuran(22)yang berlangsung selama penuaan atau
kerusakan pada saat penanganan pascapanen,
yang membuat identifikasi inhibitor tirosinase baru sangat penting. Namun, selain peran ini di
pencoklatan yang tidak diinginkan, aktivitas tirosinase diperlukan dalam kasus lain (kismis,
kakao, fermentasi daun teh) di mana ia menghasilkan sifat organoleptik yang berbeda. Jamur
tirosinase sangat populer di kalangan peneliti seperti yang tersedia secara komersial dan
murah dan juga ada alat yang mudah untuk menyelidiki fitur dari enzim ini. Di antara jamur
A. bisporus adalah spesies yang paling umum dikonsumsi di seluruh dunia, dan juga
merupakan wakil dari keluarganya; untuk alasan ini sebagian besar pekerjaan
penelitian sedang dilakukan pada spesies tertentu. Selain itu, semua tyrosinases
diperoleh dari berbagai spesies jamur memiliki sifat yang mirip, sehingga sebagian
besar studi yang dilaporkan dalam makalah ini terkait dengan A.bisporus.Namun,
tidak dapat dihindari bahwa kita akan selektif dalam cakupan kami, tetapi upaya akan
dilakukan untuk menangani berbagai aspek jamur tirosinase termasuk karakteristik
biokimia, inhibitor, dan aktivator dari berbagai sumber dan pentingnya klinis dan
industri dalam prospek baru-baru ini.

KARAKTERISTIK biokimia DARI JAMUR tirosinase

Sejumlah makalah penelitian dan ulasan(4, 6, 23)memiliki sudah diterbitkan pada aspek
struktural dan kinetik enzim tirosinase; Oleh karena itu, di bawah bagian ini kita akan
membahas secara singkat karakter biokimia dalam kaitannya dengan domain struktur,
mekanisme reaksi, dan spesifisitas substrat dengan referensi khusus untuk A.bisporus.

Struktur domain
tirosinase dari A. bisporus adalah dilaporkan menjadi heterotetramer terdiri dari dua berat (H)
dan light (L) rantai dengan massa molekul 120 kDa(24).Kemudian, Robb dan
Gutteridge(25)mengidentifikasi dua jenis rantai berat HR dan H untuk isozim, H2 RL2 dan
H2 L2, sesuai untuk R dan ,masing-masing. Kedua isoform monomer dengan kedua
kegiatan catecholase dan cresolase diisolasi dari tubuh buah jamur(26)dan terjadi sebagai
monomer polipeptida rantai tunggal dengan massa molekul 47 kDa dalam kondisi asli.
Urutan lengkap tirosinase sebuah clone untuk A. bisporus telah ditetapkan oleh Wichers et al.
(27);itu menunjukkan tingkat tinggi kesamaan dengan jamur tirosinase urut. Pada dasarnya,
enzim tirosinase memiliki tiga domain, dimana domain pusat berisi dua Cu mengikat situs,
disebut Cua dan Cub. Beberapa urutan dilestarikan ditemukan untuk hadir dalam tyrosinases
dari sumber yang berbeda sebagai ditunjukkan pada Gambar1.Bahkan, ketika semua urutan
tirosinase yang dibandingkan, hanya domain dilestarikan tampaknya menjadi domain
tembaga mengikat pusat, yang juga berbagi urutan homologi dengan hemocyanins (HCS),
operator oksigen yang mengandung tembaga dari yang hemolymph banyak moluska dan
arthropoda(28).Enam residu histidin dilestarikan(29)mengikat sepasang ion tembaga di situs
aktif dari tirosinase enzim, yang berinteraksi dengan kedua molekul oksigen (Gambar2)dan
fenolik substrat nya. Lokasi sistein (Cys) juga memainkan peran penting dalam pembentukan
hubungan disulfida, yang menstabilkan protein struktur. Jumlah residu Cys bervariasi dari
satu organisme yang lain, seperti di sepanjang bagian N-terminal dan pusat dari protein,
manusia dan tikus tyrosinases memiliki 17 residu Cys dan tanaman memiliki 11, sedangkan
domain C-terminal berisi 1 residu Cys. Menariknya, A.bisporus, Neurosporacrassa,dan
tirosinase prokariotik mengandung 0 atau 1 Cys protein matang. Di jamur tirosinase urut
hanya 2 residu Cys dilaporkan dalam domain C-terminal(6).Berbagai inhibitor dan aktivator
memodulasi aktivitas enzim dengan mengikat di situs ini. Untuk binuklir tembaga situs aktif,
sejumlah studi kinetik dengan beberapa senyawa (CN-, fenol, azida, atau mimosine)
dilakukan, dan ditemukan bahwa ligan berukuran besar memiliki afinitas yang lebih tinggi
untuk situs aktif dibandingkan dengan yang lebih kecil(30, 31).Selanjutnya, ini juga didukung
oleh adanya beragam dan berukuran besar substrat / inhibitor dari tirosinase enzim(6).

Mekanisme reaksi
tirosinase mengkatalisis dua yang berbeda reaksi oksidasi seperti yang ditunjukkan dalam
Skema2.Pada siklus I, tirosinase menyelesaikan oksidasi monophenols oleh oksigen karena
melewati empat negara enzim (Edeoxy, Eoxy, Eoxy-M, dan Emet-D); pada siklus II, o-
diphenols dioksidasi sebagai enzim melewati lima negara enzim (Edeoxy, Eoxy, Eoxy-D,
Emet, dan Emet-D). Dua siklus mengarah pada pembentukan o-quinones, yang spontan
bereaksi satu sama lain untuk membentuk oligomer (23, 32).Sebuah fitur karakteristik dari
tirosinase adalah lag khas waktu yang terkait dengan kegiatan monophenolase nya.
hidroksilasi yang dari monohydroxyphenols oleh tirosinase adalah sebagai berikut: 2
monohydroxyphenols + O2 + AH2 f 2 o-dihydroxyphenols + H2O + A, di mana AH2)
reduktor. Tirosinase memiliki dua terpisah situs mengikat di tengah aktif, satu untuk substrat
(monohydroxyphenol) dan satu lagi untuk reduktan(o-dihydroxyphenol atau eksogen
menambahkan AH2)(33).Ketika eksogen AH2 adalah tidak ditambahkan, reaksi hidroksilasi
ditandai dengan lag periode, yang merupakan keseimbangan dinamis antara enzimatik yang
dan langkah-langkah kimia untuk mendapatkan steady state sehubungan dengan konsentrasi
diphenol(23, 34);untuk mencapai konsentrasi seperti itu, sejumlah kecil enzim harus hadir
dalam bentuk oxy (35).Periode lag merupakan mekanisme autocatalytic, yang tergantung
pada elaborasi dopa ketika tirosinase bekerja pada
tirosin sebagai substrat(36).Selain eksogen yang pereduksi (askorbat, hydroxylamine, dan
hydroquinone) juga dapat memperpendek periode lag tapi kurang efektif daripada
odihydroxyphenols(37).Selanjutnya, lag tergantung pada berbagai faktor seperti substrat dan
enzim konsentrasi, sumber enzim, pH medium, kehadiran donor hidrogen seperti L-dopa atau
katekol lain dan ion-ion logam transisi(34).Tidak adanya periode lag untuk kegiatan
diphenolase dapat diuraikan oleh mengikat dan transformasi o-diphenols ke o-quinones oleh
Emet dan Eoxy bentuk, yang hadir dalam aktivitas tirosinase beristirahat(23).

Substrat stereospesifisitas
Substrat endogen utama jamur tirosinase adalah L-tirosin, p-aminophenol,
dan produk kondensasi dengan glutamat, -glutaminyl- 4-hydroxybenzene (GHB), semua
berasal dari jalur shikimate(38).Menurut Jimenez dan Garcia-Carmona(39)
pencoklatanenzimatik selama jatuh tempo atau kerusakan pada saat penanganan pascapanen,
yang menyebabkan kerugian ekonomi yang parah untuk industri jamur. Inhibitor yang paling
umum diterapkan dari
proses perubahan warna saat ini sulfit, yang, bagaimanapun, adalah memenuhi meningkatnya
resistensi(43).Selanjutnya, inhibitor tirosinase dapat klinis digunakan untuk pengobatan
beberapakulit
gangguanyang terkait dengan melanin hiperpigmentasi dan juga penting dalam kosmetik
untuk efek pemutih kulit(44-46),sehingga ada kebutuhan untuk mengidentifikasi senyawa
yang menghambat aktivitas tirosinase jamur. Sejumlah inhibitor tirosinase dari kedua sumber
alami dan sintetis (Gambar3)yang menghambat monophenolase, diphenolase, atau kedua
kegiatan ini(Tabel 1 dan 2)telah diidentifikasi.

Inhibitor dari Sumber Alam

Sebagai tanaman merupakan sumber yang kaya bahan kimia bioaktif, yang sebagian besar
bebas dari efek samping yang berbahaya, ada upaya terus menerus untuk mencari inhibitor
tyrosinase dari mereka. Sebuah spektrum yang luas dari senyawa telah diperoleh dari produk
alami dan diselidiki untuk aktivitas penghambatan jamur tirosinase; senyawa ini berbeda satu
sama lain dalam potensi dan jenis inhibisi dikenakan pada enzim yang diwakili pada Tabel1.

Inhibitor dari Tanaman Tinggi

Sebuah tinjauan literatur menunjukkan bahwa inhibitor dikategorikan ke dalam dua sub
kelompok utama, yaitu, polifenol dan aldehida dan derivatif lainnya.

Polifenol
Polifenol adalah kelompok senyawa kimia yang luas di alam dan juga dikenal sebagai tanin
sayuran karena mereka bertanggung jawab untuk warna dari banyak bunga. Beberapa dari
mereka adalah senyawa kompleks hadir di kulit, akar, dan daun tanaman, sedangkan yang
lain adalah senyawa simpl hadir dalam buah-buahan yang paling segar, sayuran, dan teh.
Beberapa ampuh flavanoides penghambatan tirosinase seperti kaempferol(47-
49),quercetin(50, 51),kurarinone, dan kushnol F(52)telah diisolasi dari berbagai tanaman.
Banyak pekerjaan yang telah dilakukan oleh Kubo et al.(53)untuk mengidentifikasi dan
mengkarakterisasi inhibitor dari sumber-sumber alam dan untuk membangun hubungan
antara aktivitas penghambatan mereka dan struktur. Menurut mereka, semua flavanoides
menghambat enzim karena kemampuan mereka untuk khelat tembaga di situs aktif. Namun,
kondisi ini hanya berlaku jika kelompok 3-hidroksi bebas. Mereka lebih lanjut dijelaskan
bahwa kelompok 3-hidroksi bukan merupakan persyaratan penting untuk penghambatan
sebagai jenis lain dari flavonoid seperti luteolin 4 -O-glucoside dan luteolin 7-O-glucoside,
kurang kelompok 3-hidroksi ini, masih menunjukkan aktivitas inhibisi (48).Baru-baru ini,
Badria dan el Gayyar(54)menemukan bahwa flavonoid yang mengandung gugus R-keto
memiliki aktivitas penghambatan tirosinase ampuh. Hal ini dapat dijelaskan dalam hal
kesamaan antara kelompok dihydroxyphenyl di L-Dopa dan kelompok R-keto flavonoid.
Hasil penelitian ini mengungkapkan tipe baru inhibitor tyrosinase darialam.
asal Penerapan senyawa ini selanjutnya akan diperiksa
untuk pengobatan hiperpigmentasi. Senyawa lain yang penting
dari kelompok ini adalah asam gallic, yang terjadi karena beberapa
ester dengan D-glukosa, dan ester mereka secara luas digunakan sebagai
aditif dalam industri makanan. Berbagai turunan asam galat
telahdiisolasi dari teh hijau(55)dan Galla rhois (56),dan
beberapa dari mereka diidentifikasi inhibitor tirosinase kuat.
Studi menunjukkan bahwa flavon-3-ol kerangka dengangalloyl
bagiandi 3-posisi merupakan syarat struktural penting
untuk penghambatan optimal aktivitas tirosinase. Sangat menarik
untuk dicatat bahwa 1,2,3,4,6-penta-O-galloyl--D-glukosa (PGG),
senyawaaktif yang diisolasi dari G. rhois (56),memilikiampuh,
aktivitas penghambatan tirosinase meskipun hal ini tidak konsisten dengan
laporan sebelumnya bahwa kekuatan penghambatan tirosinase
asamkarboksilat aromatik menurun dengan esterifikasi,
hidroksilasi, atau metilasi dari cincin benzena(57, 58).
Namun, asam galat dan alkil pendek (<C10) ester rantai
yang teroksidasi oleh tirosinase sebagai substrat, menghasilkan kuning,
produkoksidasi tapi alkil panjang (> C10) rantai ester
menghambat enzim tanpa menghasilkan produk berpigmen,
menunjukkan bahwa karbon panjang rantai terkait denganmereka.
aktivitas penghambatan tirosinase Dalam kata lain, gallates dengan
meningkatnya hidrofobik dari molekul menjadi lebih
tahan terhadap yang teroksidasi oleh enzim karena terganggunya
struktur tersier enzim(59).Dalam berbagailain
konstituen bioaktifseperti derivatif cardol(60),penambahan
gugus hidroksi meningkat sedangkan penambahan metil
guguspenurunan aktivitas penghambatan, dan juga tak jenuh
rantai samping alkil dipamerkan penghambatan kuat dibandingkan dengan
yang jenuh. Diamati bahwa pasam -coumaric(61)
dihambat baik monphenolase dan diphenolase kegiatan dan
kelompokhidroksi polar pada posisi para meningkatkanmonophenolase,
aktivitas penghambatan sedangkan itu berkurang diphenolase
aktivitas penghambatan. Kuat aktivitas penghambatan tirosinase
dilaporkanoleh oxyresveratrol(62),karena kehadiran
sejumlahmaksimum gugus hidroksi di atas ring. Namun,

penjelasan yang jelas mengenai aktivitas dan struktur penghambatanmereka

kriteriakurang.
(ii) Aldehid dan Derivatif lainnya. Sejumlah besar
aldehida dan turunan lainnya juga diisolasi dan ditandai
sebagai inhibitor jamur tirosinase seperti transcinnamaldehyde
(63),(2E)-alkenals(64),2-hidroksi-4-Methoxybenzaldehyde
(65),anisaldehida(66), cuminaldehyde dan
asam cumic(67),dan asam 3,4-dihydroxycinnamic dan 4-hidroksi
asam 3-methoxycinnamic(68).Sebagai kelompok aldehida
diketahuibereaksi dengan kelompok nukleofilik biologis penting
seperti sulfhidril, amino, dan gugus hidroksi, sehingga telah
diusulkan bahwa efek penghambatan adalah karena pembentukan
basisSchiff dengan kelompok amino utama enzim.
Perbandingan aktivitas penghambatan berbagai aldehid dan
senyawa terkait erat seperti asam sinamat, asam Anisic,
asam cumic, dan asam benzoat terbukti cuminaldehyde menjadi
inhibitor terkuat(67).Sangat menarik untuk dicatat bahwaelectrondonating
kelompok(isopropil dan metoksi) pada posisi para
di cuminaldehyde memberikan stabilitas ke dasar Schiff di
situsaktif enzim melalui efek induktif. Dalam
kasus(2E)-alkenals yang hidrofobik panjang rantai alkil dari
kelompokEnal hidrofilik tampaknya terkait denganpenghambatan
potensimereka,yang mungkin karena asosiasi yang lebih baik dari panjang
rantaialkildengan saku protein hidrofobik dekat denganyang
binuklirsitus tembaga(69-71).Kecuali untuk 2-hidroksi-4-Methoxybenzaldehyde,
aldehid aromatik di atas mengindikasikan
digambarkansebagai inhibitor tirosinase nonkompetitif oleh Kubo dan
Kinst-Hori(64, 66, 67).Namun, pernyataan kontradiktif
modus penghambatan aldehida mengenai baru-baru ini
dilaporkan oleh Jimenez et al.(72),yang menurut semua
turunan benzaldehida 4 tersubstitusi berperilaku sebagaikompetitif
inhibitordari oksidasi L-dopa. Dalam kasus turunan asam,
mekanisme penghambatan melibatkan pembentukan coppercarboxylic
kompleksasamdi lokasi tembaga binuklir
enzim(71);substitusi lebih lanjut dari kelompok fenolik pada para
posisimeningkatkan tingkat inhibisi(70).
Sebagian besar penelitian penghambatan atas dibuat atas
dasarnilai-nilai ID50, konstan untuk menentukan sejauh inhibisi,
yang menunjukkan konsentrasi inhibitor diperlukan untuk 50%
penghambatan. Namun, itu bukan parameter yang valid untuk beberapa
jenistirosinase inhibitor(73)dan juga terkait dengan hanya
aktivitas diphenolase. Oleh karena itu, parameter kinetik lebih handal
yang diperlukan untuk mengevaluasi baik mono dan diphenolase
kegiatan tirosinase.
3.1.2. Inhibitor dari Jamur. Selain tanaman lebih tinggi, beberapa
senyawa dari sumber jamur juga telah diidentifikasi dan
dilaporkan untuk aktivitas penghambatan mereka terhadap jamur tirosinase.
Madhosingh dan Sundberg(74)diisolasi, dimurnikan, dan
ditandai dua inhibitor dari jamur Agaricushortensis.
Inhibitor Ia menghambat enzim kompetitif, sedangkan Ib
tak bersaing menghambat enzim, seperti yang diungkapkan oleh
plot Lineweaver-Burk. Metallothionein dari Aspergillus niger
(75)memiliki aviditas yang kuat untuk khelat tembaga di situs aktif dari
jamur tirosinase, sehingga bertindak sebagai inhibitor kuat.
Mekanisme lain yang mungkin untuk efek penghambatan tersebut
dapatdijelaskan oleh adanya asam amino sulfhidril diyang
metallothionein, mengikat dengan o-quinones untuk membentukberwarna.
thioesters Laporan terbaru menunjukkan bahwa agaritine dari A. bisporus
terhambat jamur tirosinase in vitro dan ditampilkankompetitif
penghambatandari L-dopa dan penghambatan kompetitif dari
L-tirosin, menyiratkan agaritine yang dimetabolisme oleh
aktivitas monophenolase(76).
3.2. Inhibitor dari Asal Sintetis. Berbagai inhibitor
dilaporkan dari asal sintetis tercantum pada Tabel2.Menariknya,
beberapa inhibitor ini dari narkoba, sedangkan lainnya adalah
bahan kimia sederhana.
(i) Obat. Captopril, obat antihipertensi [(2S)-1- (3-
mercapto-2-methylpropionyl) -L-prolin], mampu mencegah
pembentukan melanin(77)oleh ireversibel menghambat keduamonoand
kegiatandiphenolase jamur tirosinase di kompetitif
dan sopan santun kompetitif, masing-masing, serta dengan
pembilasan dihasilkanyang o-quinones untuk membentuktidak
konjugatberwarna.Penghambatan baik monophenolase dan diphenolase
kegiatan tirosinase oleh kaptopril menunjukkan positif kinetik
co-operativity, yang muncul dari perlindungan baik substrat
dan o-quinone terhadap penghambatan oleh kaptopril. Bentuk-bentuk obat
kedua kompleks tembaga-kaptopril dan ikatan disulfida antara
kaptopril dan domain kaya sistein di situs aktif
enzim.Obat antitiroid, methimazole (1-metil-2-mercaptoimidazole),
yang bertindak sebagai inhibitor tirosinase mempengaruhi baik
mono dan dihydroxyphenolase kegiatan jamur tirosinase
(78).Sangat menarik untuk dicatat bahwa kedua obat berinteraksi
dengan jamur tirosinase dengan cara yang sama tetapi jenis
inhibisi berbeda.

Bahan kimia. Sejumlah bahan kimia seperti hidrogen

peroksida, hydroxylamine, Tiron, tiol, dankarboksilat aromatik
asamtelah dilaporkan untuk kegiatan anti-tyrosinase mereka.
Selain ini, beberapa bahan kimia lainnya juga dilaporkan dan
diklasifikasikan sebagai inhibitor mengikat lambat tergantung padaaksi
mekanismemereka.Hidrogen peroksida (H2O2) menginaktivasi jamur
tirosinase dengan cara biphasic, dengan tingkat yang lebih cepat
dalamtahap pertama dari pada kedua(79).Inaktivasi enzim
tergantungpada konsentrasi H2O2 dan independen dari pH, dan
penghambatan lebih cepat di bawah kondisi anaerob dari bawahaerobik.
satu Chelators tembaga (tropolone dan natrium azida) dan
analog substrat (L-mimosine, L-fenilalanin, p-fluorophenylalanine,
dan natrium benzoat) melindungi enzim terhadap
inaktivasi oleh H2O2, menunjukkan bahwa Cu2 + pada situs aktif dari
jamur tirosinase sangat penting untuk inaktivasi oleh H2O2.
Inhibitor lain, hydroxylamine, pada konsentrasi rendah (33 mM)
memperpendek periode lag tirosin hidroksilasi, sedangkan
konsentrasiyang relatif tinggi (> 20 mM) menghambat o-dihydroxyphenolase
aktivitasdan menurunkan tingkatpigmen
produksiakhir,tingkat inaktivasi menjadi lebih cepat di bawahanaerob.
kondisi Ditemukan bahwa NH2OH mengubah spektrum
o-quinones, yang dikaitkan dengan pembentukan oxime. Akibatnya,
jelas penghambatan diberikan oleh NH2OH pada o-dihydroxyphenolase
activiy adalah karena kedua perubahan spektral dalamberpigmen
pembentukan produkdan inaktivasi enzim oleh NH2OH
(80).Inhibitor tirosinase paling kuat di antara tersubstitusi-N
N-nitosohydroxylamines ditemukan untuk N-cyclopentyl-
N-nitrosohydroxylamine (IC50) 0,6 M). Penghapusan
nitroso atau hidroksi bagian mengakibatkan total kerugian darienzim,
aktivitas penghambatan menunjukkan bahwa kedua kelompok ini sangat
penting untuk aktivitas, mungkin dengan berinteraksi dengantembaga
iondi situs aktif enzim(81).Senyawa Tiron
telah menunjukkan beberapa efek pada jamur tirosinase pada berbagai
konsentrasi. Pada konsentrasi rendah, Tiron bertindak sebagailemah
reduktordibandingkan dengan L-dopa, sehingga mencegah beberapaL-dopa
molekulendogen terbentuk selama tirosin hidroksilasi
mengakses enzim, yang dibutuhkan sebagai reduktor untuk
reaksi hidroksilasi(82),dengan demikian memperpanjang periode lag
tirosin hidroksilasi. Namun, pada konsentrasi yang lebih tinggi itu
bertindak sebagai reduktor yang efektif, sehingga memperpendek periode lag
tirosin hidroksilasi(83).
Sistein dan berbagai asam karboksilat aromatik yang
inhibitor untuk kegiatan murni komersial jamur
tirosinase. Kompetitif, kompetitif, campuran, atau uncompeti-
hambatan tive diperoleh tergantung pada sifat daridan
inhibitor metode yang digunakan untuk penentuan
aktivitasenzim(58).Lindbladh et al.(84)mempelajari
pengaruhkatalase pada inaktivasi tirosinase oleh asam askorbat,
sistein, dan glutathione. Asam askorbat tidak aktif tirosinase,
tapi penambahan katalase dicegah inaktivasi ini dan itu
ditemukantergantung pada oksigen, sedangkan inaktivasi oleh
sistein dan glutation adalah independen dari oksigen dan
penambahan katalase meningkat inaktivasi enzim padathiol tinggi
konsentrasidan inaktivasi itu independen oksigen.
Sejumlah besar albumin serum dilindungi tirosinase dari
inaktivasi oleh asam askorbat namun tidak mencegah inaktivasi
oleh sistein / glutation. Benzoic acid menghambat R, ,dan
isozim A.bisporus tirosinasekompetitif untukcresolase,
reaksi tetapi menunjukkan inhibisi kompetitif parsial untuk R dan
isozim dan penghambatan kompetitif sederhana untuk isozim
reaksi catecholase(57).Asam Dihydroxybenzoic (DBA)
seperti 3,4-DBA, 3,5-DBA, dan 2,4-DBA menghambatL-dopa
oksidasioleh jamur tirosinase(85).2,3-DBA dan 2,5-DBA
pada konsentrasi yang relatif rendah memiliki efek sinergis pada
reaksikarena kemampuanmereka o-quinonesuntuk mengoksidasi DLdopa
nonenzymetically, sedangkan pada konsentrasi yang lebih tinggi mereka
menghambat laju oksidasi DLdopa.
Kelompok lain senyawa seperti L-mimosine(86),kojic
asam(87),tropolone(88),dan resorcinols 4 tersubstitusi(73),
memiliki kesamaan struktural untuk substrat fenolik dan menunjukkan
penghambatan kompetitif terhadap substrat ini, adalah dikenal
sebagai inhibitor mengikat lambat(89-91).Mekanisme reaksi
inhibitor ini diwakili dalam Skema 4 menurut
yangsemua ini inhibitor mengikat lambat bersaing dengan
molekul keduaL-dopa untuk mengikat bentuk oxy dari enzim,
yang merupakan perantara wajib dalam omset katalitik,
dan sehingga kehadiran substrat diperlukan untuk
mekanisme aksiinhibitor mengikat lambat. Baru-baru ini, dimetil
sulfida (DMS) juga dilaporkan sebagaikompetitif mengikat lambat
inhibitorjamur tirosinase dan merupakanpertama
inhibitorvolatiletirosinase akan ditandai(92).DMS memiliki
peranfisiologis dalam jaringan tanaman sebagai konsentrasi tinggi
menghambat tirosinase endogen, sehingga melindungi tanaman dari
oksidasi fenolik dini.
3.3. Pentingnya Jamur tirosinase Inhibitors.
3.3.1. Industri makanan. Browning dalam buah-buahan dan sayuran adalah
perhatianbesar bagi petani dan industri makanan karena merusak
sifat organoleptik produk. Tingkatenzimatis
pencoklatantergantung pada konsentrasi tirosinase danaktif,
fenolik senyawa ketersediaan oksigen, pH, dansuhu
kondisidalam jaringan(22).Dengan demikian, perlu untuk mengidentifikasi
berbagai metode untuk menghentikan pencoklatan enzimatis disebabkan oleh tirosinase.
Teknik-teknik konvensional saat ini untuk menghindari pencoklatan
termasuk penggunaan autoclave dan blanching metode untuk menonaktifkan
tirosinase, tetapi proses ini menyebabkan berat badan danpenting
nutrisi kerugiandalam produk(93).Pendekatan Alternatif lain
adalah penggunaan energi gelombang mikro, tetapi juga menderita
kelemahanutama yang gradien suhu yang dihasilkan
dalam sampel(94),yang menyebabkan inaktivasi enzim dalam
daerah panas saja dan di daerah dingin enzim mungkin
tidak sepenuhnya tidak aktif ; apalagi, hal itu menyebabkanair
penguapaninternalterkait kerusakan tekstur jamur
(95).Penerapan microwave-panasair dikombinasikan
pengolahansedikit lebih baik dalam hal kualitas produk akhir(96).
Dalam kasus apapun, microwave blanching tidak sangat sukses dalam
industrimakanan kecuali untuk beberapa aplikasi terisolasi. Berbagai
bahan kimia seperti garam halida, asam karboksilat aromatik(97,
98)dan senyawa lain dengan mengurangi sifat seperti sulfit
(99),asam askorbat dan turunannya(100, 101),dantiol
senyawaseperti sistein(102, 103)diketahui menghambat
tirosinase. Pengaruh asam askorbat, natrium bisulfat, dan
agen pereduksi lainnya di tyrosinase telah menjadi kontroversi selama
bertahun-tahun(104);apalagi, penggunaan sulfit menjadi lebih
dan lebih terbatas karena potensi bahaya kesehatan(43).lainnya
Metode alternatifjuga diusulkan seperti formulasi
tanpa sulfit(105)atau produk baru dengan bentuk stabil dari
asam askorbat dan -cyclodextrins(106)dansulfhidril tanaman
protease(107).Saat ini, penggunaan 4-hexylresorcinol
dianggapaman dalam industri makanan dan cukup efektif
dalam pencegahan udang melanosis(108, 109)dan untukkecoklatan
kontroldi iris buah segar dan kering(110).Namun, seperti keselamatan
adalah perhatian utama untuk inhibitor untuk digunakan dalam industri makanan,
ada pencarian konstan untuk inhibitor yang lebih baik darialami
sumberkarena mereka sebagian besar bebas dari efek samping berbahaya. Banyak
dari inhibitor yang dijelaskan dalam ulasan ini adalah bumbu rasa
dan terdaftar sebagai bahan bumbu makanan di Fenaroli Handbook
dari FlaVatau Bahan (111),yang membuat mereka gunakan menguntungkan
dalam industri makanan.
3.3.2. Industri kosmetik. Penggunaan inhibitor tirosinase
menjadisemakin penting dalam industri kosmetik
karenaefek pemutih kulit mereka. Sejumlah inhibitor tirosinase
dilaporkan dari sumber alami dan sintetik, tetapi
hanyasedikit dari mereka yang digunakan sebagai agen pemutih kulit, terutama
karenaberbagai masalah keamanan. Sebagai contoh, asam linoleat, hinokitiol,
asam kojic, alami hydroquinon, dan katekol
dilaporkan menghambat aktivitas enzim tetapisamping juga dipamerkan
efek(46).Saat ini, arbutin dan aloesin digunakan dalam
industrikosmetik sebagai pemutih agen karena mereka menunjukkanyang kuat
penghambatanterhadap enzim tirosinase, yang bertanggung jawab
untuk pigmentasi pada manusia. Arbutin,
glikosida hydroquinone,dan aloesin, sebuah chromone C-glikosilasi, diisolasi
dari daun GVae grsi dan Aloe V,eramasing-masing, dan
dipelajari untuk efek penghambatan mereka(112).Arbutin
dilaporkanmenghambat aktivitas enzim kompetitif(113),sedangkan dalam
laporan kontras lain Funayama et al.(114)menyarankan bahwa
dua bentuk arbutin hanya -arbutin menghambat baik tirosinase
kegiatan dari jamur dan melanoma tikus tak bersaing
dan bahwa R-arbutin menghambat hanya tirosinase dari
melanoma mouse dengan tipe campuran penghambatan. Selain itu, Jin et
al.(115)mempelajari pengaruh cotreatment dari aloesin dan arbutin
dan menemukan bahwa kedua menghambat aktivitas tirosinase sinergis
secaradengan bertindak melalui mekanisme yang berbeda; aloesin menghambat
nonkompetitif, sedangkan arbutin menghambat kompetitif. Secara
bersama-sama mereka menghambat produksi melanin secara sinergis dengan
mekanismegabungan hambatan nonkompetitif dan kompetitif.
Dengan demikian, semua temuan di atas menunjukkan bahwa itu bermanfaat
untuk menggunakan aloesin dan arbutin sebagai campuran untuk efek depigmentasi
karena pemotongan cotreatment bawah dosis efektif ini
agenuntuk efek penghambatan yang sama pada aktivitas tirosinase dan
dapat mengurangi efek samping yang merugikan.