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AULA 1(2015)

AULA 1 DE MICRO Por Carolina Isidoro


Estrutura e Organizao da Clula Bacteriana

Inicialmente os seres eram classificados como animais ou vegetais de acordo


com a capacidade de se mover. Em 1876 foi proposto que os seres microscpicos
fossem agrupados em um reino prprio e no mais classificados como vegetais ou
animais. Esse reino recebeu o nome de protista e inclua todos os seres microscpicos,
sejam eles unicelulares ou multicelulares. Essa proposta permaneceu vivel por muito
tempo, mas com desenvolvimento da tecnologia, com as tcnicas de observao e
estudo da natureza, verificou-se que esses seres do reino protista apresentavam uma
diferena bsica em relao organizao da clula. A partir dessas diferenas
qualitativas no desenho da clula foram institudos dois grandes nveis de
complexidade: os EUCARIOTOS e os PROCARIOTOS.
EUCARIOTOS: so clulas que apresentam ncleo verdadeiro. So
caracterizados por uma srie de propriedades que os procariotos no apresentam. Os
eucariotos apresentam ncleo individualizado, bem definido com uma membrana a sua
volta que delimita e separa o espao nuclear do citoplasma a sua volta. Os cromossomos
que compem o material gentico presente no ncleo so mltiplos e apresentam um
aparelho mittico que no momento da diviso celular separa esses cromossomos em
dois grandes grupos para formar as clulas-filhas. No prprio cromossomo encontramos
os ntrons, regies no traduzidas em protenas, mas consideradas muito importantes
para modular a expresso gentica. Os ribossomos das clulas eucariotas no ficam
livres e sim aderidos ao retculo endoplasmtico. No citoplasma h numerosas organelas
membranosas que possuem funes especficas, como a produo de energia. As clulas
apresentam ainda citoesqueleto composto por protenas (actinina, miosina) que do a
forma que a clula possui. Essas protenas do citoesqueleto atuam de forma coordenada
e permitem clula a emisso de pseudpodes em uma direo especfica. Permitem
ainda a formao de vesculas endocticas e o movimento da clula.
As clulas eucariticas possuem tamanhos variveis (10-100m), mas so bem
maiores que as clulas procariticas. Existem limitaes ao tamanho das clulas
procariticas que chegam ao mximo a 2m. As clulas procariticas no possuem
DNA envolvido por uma membrana, no possuem organelas membranosas, no
possuem citoesqueleto e os ribossomos ficam livres no citoplasma. Deste modo, a
caracterstica central de uma clula eucaritica a compartimentalizao das funes
celulares. Existem locais definidos para execuo de cada funo celular. A clula
procaritica evolutivamente mais primitiva que uma celula eucaritica tpica. Essas
clulas so to distintas que certamente entre elas existiu um perodo de tempo
considervel que permitiu a ocorrncia de um processo evolutivo.
Esse processo evolutivo que levou ao surgimento do eucarioto foi descrito e
denominado como endosimbiose. Temos evidncias slidas que permitem a
confirmao da existncia desse mecanismo. Uma mitocndria possui DNA em seu
interior, que nada mais que um resqucio de DNA de um procarioto primitivo que foi
incorporado por alguma outra clula procaritica maior e a clula procaritica menor
permaneceu no seu interior. Essa associao foi benfica para ambas as clulas, e essa
clula procaritica que foi incorporada se diferenciou para assumir uma funo
especializada que a produo de energia. Em troca ela recebia nutrientes. Assim foi
surgindo a clula eurcaritica que vemos atualmente.
Hoje em dia ainda existem evidncias que apontam para existncia desse
processo. Como por exemplo:
1) A digesto da celulose por insetos (cupins). Os cupins no degradam celulose
para produzir glicose para sua nutrio. Essa degradao da celulose no ocorre atravs
das enzimas digestivas dos cupins e sim atravs de bactrias e protozorios que vivem
no interior do intestino desses animais que processam a celulose e liberam a glicose.
Tpico exemplo de endosimbiose. Os cupins reciclam o carbono.
2) A produo de luz por peixes, moluscos e crustceos que vivem na
profundidade. Essa luz no uma produo prpria. Na verdade, feita por bactrias
que produzem luz que usada para comunicao, para caa e para reproduo.
evolutivamente vantajoso ter essa produo de luz local e por isso essa endosimbiose.
3) Fixao de nitrognio na raiz das leguminosas. As leguminosas apresentam
ndulos em suas razes nos quais vivem bactrias que fixam nitrognio utilizado para
nutrio da planta. Se voc tratar com antibitico e matar essas bactrias, as plantas no
evoluem por deficincia nutritiva.
4) A nutrio de moluscos e crustceos que habitam fontes termais nas
profundidades ocenicas.
Desde o surgimento da clula eucaritica nunca mais houve mudana na histria
da evoluo do desenho celular. Depois do desenho celular estabilizado todo resto da
evoluo no passa de uma composio de agregao celular, diferenciao celular e
especializao.
O fato dos procariotos serem claramente, do ponto de vista evolutivo, mais
primitivos no significa que eles sejam atrasados. Eles se estabilizaram em uma fase
primitiva, porm altamente eficiente, visto que as bactrias so os seres-vivos em maior
quantidade no planeta. Obviamente, no esto margem da evoluo. A prova disso so
as bactrias patognicas, um exemplo tpico da evoluo atuando sobre procariotos.
Apenas uma frao mnima de bactrias patognica, no entanto sempre esto surgindo
espcies novas com novas formas de agresso. Um exemplo claro da evoluo das
bactrias no campo da microbiologia mdica aquisio de resistncia pelas mesmas a
determinados antibiticos. O surgimento dessa resistncia a uma droga nada mais que
uma resposta da presso evolutiva atuando sobre esses seres, selecionando os mais
aptos, aqueles que adquirem mutaes que os tornam capazes de escapar. Portanto, os
procariotos tambm sofrem evolues, adquirem e trocam informaes genticas,
adquirem genes de virulncia.
Como as bactrias se organizam e so definidas do ponto de vista taxonmico?
A primeira proposta aceita foi a dos cinco reinos (Monera, Protista, Fungi, Plantae e
Animalia). As bactrias foram colocadas no Reino Monera. Essa proposta foi aceita por
um tempo, porm na dcada de 80 surgiu uma nova classificao. A evoluo
tecnolgica foi muito grande e com isso trouxe novos conhecimentos e teorias. A nova
proposta enquadra todos os seres vivos em trs domnios:
EUBACTRIA: formada por procariotos tpicos
ARCHEA: formada por procariotos extremfilos, que habitam e so
adaptados a ambientes extremos, agressivos.
EUCRIA: inclui todos os animais e plantas.
Os seres do domnio Archea foram por muito tempo confundidos com bactrias,
mas so na verdade seres especializados. No so exatamente bactrias e vivem em
ambientes extremos, como muito cidos ou muito alcalinos; outros crescem em
ambientes muito quentes (110C) ou muito frios. Esses procariotos do ponto de vista
gentico so mais semelhantes com os eucariotos.
Do ponto de vista evolutivo, as primeiras formas bacterianas ambientalmente
relevantes foram as cianobactrias (bactrias verdadeiras), que produzem O2 a partir da
sua oxidao, e so as grandes responsveis pela vida na terra, pois produziam oxignio
quando a atmosfera era completamente livre do mesmo. Grande parte do O2 que existe
hoje no planeta fruto de ao biolgica que foi se acumulando ao longo de milhares de
anos e foi continuamente renovado a partir da produo biolgica por microorganismos.
Hoje produzido pelas plantas e bactrias, mas inicialmente era produzido somente
pelas cianobactrias.
Como classificamos uma bactria? O homem conhece cerca de 4 mil espcies de
bactrias, mas existem muito mais. A tarefa de classificar as bactrias muito
complicada, j que nem todas podem ser cultivadas em laboratrio o que torna invivel
sequenciar o DNA.
As bactrias patognicas, que so aquelas que produzem doenas, representam
uma frao mnima das bactrias existentes. Elas so o objeto de estudo da
microbiologia mdica. A maioria das bactrias destituda de virulncia. Ser patognico
no para qualquer bactria. Para isso preciso ter um conjunto de propriedades que
permitam a elas invadir o hospedeiro, sobreviver em seu organismo e causar doena.
Saber o que torna uma bactria virulenta essencial, pois nos permitem construir
mecanismos de defesa, como vacinas e drogas.
Como nomear uma bactria? Existem regras especficas. Primeiro a ordem para
nomear obedece a uma hierarquia que a seguinte: Famlia Gnero Espcie. A
famlia Enterobacteriacea contm vrios gneros, dentre eles o gnero Escherichia, e
dentro desse gnero encontramos vrias espcies, como a coli. Portanto, o nome que
geralmente colocamos Escherichia coli ou E.coli. Dentro da espcie existem variantes,
as subespcies. A E.coli pode ser subdividida em vrias subespcies em funo de
outras caractersticas.

CITOLOGIA BACTERIANA
O dimetro da clula bacteriana extremamente varivel, podendo variar entre
0,5 a 5m, mas geralmente o tamanho de 2 a 3m. A sua estrutura interna muito
simples. Todos os procariotos so praticamente iguais internamente, caracterizados pela
ausncia de ncleo, ribossomos livres e ausncia de organelas membranosas. A
estrutura externa razoavelmente complexa, pois atravs dela esses seres-vivos se
relacionam com o ambiente a sua volta. Do ponto de vista evolucionrio, a diversidade
est fora da clula e no no seu interior, no nas funes que ela executa dentro de si,
mas sim como ela se relaciona com o ambiente a sua volta, como com as
imunoglobulinas ou como com os leuccitos. As variaes na estrutura externa que
explicam porque uma bactria fagocitada e outra no ou porque uma sofre ao do
anticorpo e a outra no. A variabilidade externa essencial para sobrevivncia desse
ser. A mais importante, a marca registrada, a presena de parede celular.

PAREDE CELULAR
A morfologia da clula bacteriana resulta da forma dessa parede celular. Tm-se
basicamente duas formas sobre as quais a bactria pode se organizar:
1) Forma cilndrica e suas variantes (bastonetes, bacilos).
2) Forma esfrica e suas variantes (coco).
Alm da forma bsica das clulas individuais, essas clulas podem ter arranjos
diferentes. Podem se arranjar dois a dois ou em grupos de quatro, trs. Cada um desses
arranjos cria variaes. As formas dos arranjos das bactrias so determinadas
geneticamente porque so resultados da existncia da parede celular. A parede celular
produzida na superfcie da clula bacteriana e constituda de protenas. A informao
para codificar essas protenas est no genoma da clula bacteriana. A parede celular
determinada geneticamente, porm as clulas bacterianas tm a capacidade de
expressarem fenotipicamente ou no essa caracterstica geneticamente determinada. Por
exemplo, uma bactria que geneticamente um coco e se arranja em grupos de cinco,
nascida em um ambiente desfavorvel, ela pode deixar de expressar a parede celular
para se defender ou ainda pode se tornar bactrias individualizadas. O genoma continua
o mesmo, mas a expresso fenotpica do gene desligada para que ela se adapte
rapidamente ao ambiente. A variabilidade das clulas procariotas muito maior, so
capazes de modular rapidamente as suas expresses genticas. Existe muita
flexibilidade.
A parede celular bacteriana ausente constitucionalmente em algumas espcies
e, dessa maneira, s podem viver em ambientes especiais, extremamente especficos. Se
forem retiradas desse ambiente elas morrem. Entre elas, destacam-se os Mycoplasmas
produtores de nefrites, pneumonias e infeces urinrias. Existe outra situao em que
podemos nos deparar com bactrias sem parede celular. Os Mycoplasmas no
apresentam os genes que codificam a parede celular, mas j nessa outra situao a
ausncia da parede ocorre em algumas condies extremas, nas quais a ausncia da
parede vantajosa. Por exemplo, numa infeco urinria a bactria Proteus, causadora
da infeco, pode parar de expressar a parede celular para fugir da ao do antibitico
utilizado pelo hospedeiro para combater a infeco. O antibitico usado no caso atua em
estruturas da parede celular bacteriana. Se a mesma no mais expressa, o
medicamento torna-se ineficaz.
Quais so as funes e caractersticas da parede celular bacteriana?
1) Proteger as bactrias contra lise osmtica e injria mecnica. Isso importante
porque a bactria no escolhe onde ela fica.
2) A parede celular uma armadura constantemente renovada. A todo tempo ela
catabolizada e ressintetizada. uma estrutura dinmica.
3) Existem dois grandes grupos de bactrias que so determinados pela
constituio da parede celular: as bactrias gram-negativas e bactrias gram-positivas.
A tcnica de colorao GRAM que permite dividir as bactrias nesses dois
grupos. As bactrias so classificadas de acordo com o corante que elas retm. Nesse
mtodo utilizam-se dois corantes numa seqncia definida. A diferente colorao que as
bactrias adquirem devido estrutura distinta de suas paredes celulares. Isso tem
importncia do ponto de visto clnico, visto que bactrias gram-negativas e gram-
positivas tm comportamentos distintos com relao resposta ao uso de antibiticos ou
ainda com relao ao prognstico. Infeces macias por bactrias gram-negativas
podem levar ao choque sptico, enquanto as infeces por gram-positivas raramente
levam a essa condio.
Dois exemplos clssicos: o Staphylococcus aureus uma bactria gram-positiva
e por isso se cora em AZUL pelo mtodo de GRAM. Esta espcie est envolvida em
infeces piognicas. J a Escherichia coli uma bactria gram-negativa e por isso se
cora em VERMELHO. encontrada em diversas infeces humanas, como intestinais.
Na primeira etapa do mtodo de GRAM adiciona-se o corante cristal violeta,
corando todas as bactrias de violeta/azul. Em seguida, na etapa dois utiliza-se Iodina
para fixar o corante da etapa anterior. O prximo passo a etapa chave e consiste na
utilizao de um descolorante que pode ser acetona, lcool, ter ou uma mistura dos
mesmos. Todas essas solues so solventes de lipdios e, portanto, por conta da
presena de lipdios na parede gram-negativa, as mesmas perdem o corante. J a gram-
positiva permanece azul. Na ltima etapa adiciona-se o corante Safranina vermelho que
acaba sendo captado pela parede das gram-negativas. Como as gram-positivas j esto
coradas elas no captam o corante vermelho. a presena ou no de lipdios na parede
celular bacteriana que define se uma bactria gram-positiva ou gram-negativa.

PAREDE CELULAR GRAM-POSITIVA


espessa e unilaminar. A espessura dela est em torno de 20 a 25 nm. A
parede celular tem cerca de quatro vezes a espessura da membrana plasmtica
bacteriana. Essa nica lmina formada por um complexo glicoprotico constitudo de
murena (tambm chamado de peptideoglicano ou mucopeptdeo). Esse complexo
formado por aminocidos, alguns de forma D, que so raros na natureza, e outros na
forma L-, a mais comum, alm de dois aminoacares: a N-acetilglicosamina e o N-
acetil muramico. Alm disso, essa camada espessa e unilaminar de murena envolvida
mais externamente por uma fina camada de cidos teicicos, que muito importante
para relao da bactria com o meio-ambiente. O cido teicico ancorado na parede e
se apresenta no exterior para manter as interaes entre bactria-meio externo. Existe
ainda uma substncia adicional, o cido lipoteicico, que serve para unir a parede
celular membrana plasmtica, impedindo o rompimento.
A membrana plasmtica bacteriana bem semelhante a das clulas eucariticas:
bilaminar, contm protenas inseridas e algumas protenas transmembranas.
O peptideoglicano formado por dois aminoacares, como j foi dito acima,
que se ligam um a outro e entre eles existem cadeias peptdicas que tambm se ligam.
Essa organizao tridimensional e foi desenhada para sua funo. como um
conjunto de fios ligados entre si, garantindo a flexibilidade e a elasticidade. No se
rompe com facilidade e se distende quando preciso. Dessa forma, a parede oferece
proteo contra lise osmtica e o choque mecnico.

PAREDE CELULAR GRAM-NEGATIVA


um tipo de parede mais complexa e sofisticada. muito mais delgada, no
entanto ela apresenta uma segunda camada tornando-se bilaminar. Essa segunda camada
possui caractersticas particulares. Portanto, a parede gram-negativa formada por duas
camadas: a primeira de mucopeptdeo (idntica a gram-positiva, porm mais fina) e a
segunda camada chamada de membrana externa.
A membrana externa tem a funo de peneira molecular, regulando (permitindo
ou no) a difuso de substncias do meio ambiente para o interior da clula bacteriana.
Por isso bactrias gram-negativas so, em geral, mais resistentes a antimicrobianos
devido a essa passagem seletiva. Por exemplo, antibiticos que so absolutamente
eficazes contra bactrias gram-positivas, como a penicilina, so ineficazes contra gram-
negativas porque a membrana externa impede a passagem da penicilina para o interior.
Essa membrana externa composta por uma matriz fosfolipdica e uma camada
lipopolissacardica (LPS). Apresenta ainda protenas especializadas flutuando, as
porinas, que so responsveis por esse processo de difuso seletiva. As porinas
apresentam na poro externa um canal. A passagem atravs dos canais regulada
atravs do tamanho e carga eltrica das substncias. Alm disso, possuem uma
substncia chamada lipopolissacardeo que projeta pro exterior uma longa cadeia de
acares. este lipopolissacardeo, em especial sua poro lipdica, que responsvel
pelo chamado choque endotxico.
Portanto, a parede celular gram-negativa evolutivamente mais aperfeioada
que a gram-positiva, o que no significa que as ltimas sejam mais primitivas, pois elas
funcionam muito bem.
Porque as bactrias gram-negativas se coram em vermelho no mtodo de
GRAM? Justamente por conta dessa camada lipdica externa. Quando se adiciona o
lcool ou acetona ocorre a solubilizao do lipdio fazendo com que ocorra remoo do
corante cristal violeta. A adio do corante vermelho na etapa seguinte que os torna
coradas de vermelho.
Caractersticas relevantes da Membrana Externa
Bloqueia passagem de molculas de grande dimenso
Contribui para impermeabilidade a vrias drogas e a enzimas hidrolticas,
algumas delas secretadas pelo nosso prprio organismo, como lisozima.
Choque endotxico devido parte lipdica do LPS

CPSULAS E MICROCPSULAS
Nem todas as bactrias possuem cpsula ou microcpsulas. Existem vrias
bactrias que no possuem e vivem muito bem sem elas. As microcpsulas so bem
finas, de pequena dimenso enquanto que a cpsula maior e mais longa e se localiza
mais externamente. uma estrutura frouxa e hidratada e so muito mal-coradas na
microscopia convencional, sendo necessrias tcnicas especializadas. A cpsula no
apresenta uma estrutura delimitada.
So formadas, geralmente, por polissacardeos com gua retida no seu interior,
como se fosse uma esponja mais frouxa. As funes das cpsulas so vrias:
1) As bactrias podem capturar nesses bolses lquidos, entre as fibras de
polissacardeos, nutrientes.
2) Bactrias de outros grupos, especialmente as patognicas para humanos, usam
as cpsulas na defesa contra fagocitose. A cpsula tem carga eltrica negativa assim
3) como a superfcie dos polimorfonucleares. Cargas eltricas iguais se repelem.
Desse modo, a bactria se afasta do fagcito impedindo a fagocitose. A que entra o
anticorpo: o anticorpo, ao opsonizar uma bactria, muda sua carga eltrica permitindo a
fagocitose.

FLAGELOS
So estruturas proticas responsveis pela mobilidade. Nem toda bactria possui
flagelos. Existem bactrias mveis flageladas e mveis destitudas de flagelos. Podem
ser observados por microscopia eletrnica ou coloraes especiais. formado por um
filamento e por um conjunto motor. O conjunto motor inserido na estrutura da clula
bacteriana e o filamento se projeta para o exterior. A rotao do filamento motivada
pelo motor faz com que a bactria se mova.
Os flagelos so longos e giram ao invs de baterem. Ao girar a bactria se
desloca pela direo escolhida pela bactria atravs dos sinais que chegam aos seus
receptores na sua superfcie. Existem receptores nos plos das bactrias aos quais
chegam informaes que so interpretadas pela bactria. Se por acaso, ela percebe
que nesse plo h uma concentrao aumentada de uma substncia que favorvel, ela
se desloca em direo a esse plo. Ao contrrio, se ela nota contrao aumentada de
uma substncia deletria ela se desloca em direo oposta. o processo de quimiotaxia.
Quimiotaxia positiva, quando se desloca em direo a fonte e quimiotaxia negativa
quando se afasta da fonte.

FIMBRIAS OU PILI
Nem todas as bactrias possuem. So constitudas por uma protena especial
chamada de pilina. Parecem-se com flagelos, mas no se destinam a mobilidade. So
estruturas cilndricas, rgidas, muito delgadas, de tamanhos variveis e que se encontram
em dezenas ou at centenas na clula. Esto envolvidas na aderncia a substratos e na
colonizao de mucosas por bactrias patognicas e no-patognicas. Existem vrias
classes de pili e algumas delas esto associadas virulncia em humanos.
Fimbria do tipo P: encontrado em E.coli causadora de infeces urinrias,
especialmente nas afeces altas. Este pili reconhece nas clulas do tecido renal uma
substncia que faz a ligao atravs do pili a esse epitlio, colonizado a superfcie.
Famlia de pili tipo IV: possuem a mesma funo de colonizao. Ocorrem nas
uretrites, infeces intestinais etc.
A colonizao das mucosas humanas ou animais no um processo ao acaso.
Ocorre porque as bactrias expressam molculas/protenas como essas que identificam
receptores presentes no epitlio. Se no existir o pili ou o receptor no haver
colonizao, que o primeiro passo para infeco.

ESPOROS
Nem todas as bactrias possuem esporos. Aquelas que possuem so chamadas de
esporozorias. Os esporos so formas de resistncia e dormncia. As bactrias
normalmente se apresentam na forma vegetativa ou replicativa na qual elas esto se
dividindo. Porm, algumas bactrias capazes de produzir esporos, quando o ambiente
torna-se desfavorvel, produzem no interior da sua clula um cisto que o esporo.
uma regio com alta concentrao de protena e DNA. O resto da clula bacteriana
morre e eliminado permanecendo apenas o esporo dormente, logo que no se replica, e
altamente resistente a uma srie de agentes qumicos e fsicos como a desidratao, ao
calor, a radiao e ao congelamento.
O esporo vivel aquele que quando o ambiente torna-se novamente favorvel
capaz de germinar gerando clulas replicativas. O importante saber que os esporos
so formas de resistncia bacteriana de maior relevncia e inclusive com impacto na
medicina. O ttano uma doena causada por uma bactria esporozoria chamada de
Cloristridium tetani, por exemplo. Por isso que o material cirrgico deve ser submetido
auto-clavagem, pois esse um procedimento capaz de eliminar esporos.