UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR

DE SAN MARCOS
(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

Facultad de Ciencias Biolgicas

E.A.P. Microbiologa y Parasitologa

Aislamiento y Seleccin de Microorganismos

con Actividad Amilsica

PROFESORA: Elena Quillama Polo

CURSO: Microbiologa Industrial

INTEGRANTES: CDIGOS:

-Ascencios Gustavo 12100029

-Lopa Murillo Juan Manuel 14100134

-Mendoza Ramirez Manuel 12100035

-Ros Caballero Robin 14100041

-Yncil Puscn Gian Carlos 14100144

LIMA PER
2017 II
 INTRODUCCIN

Aqu vase Wikipedia.

 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
FLUJOGRAMA DEL AISLAMIENTO Y SELECCIN MICROORGANISMOS CON ACTIVIDAD
AMILSICA Y SU EVLUACIN DE LA ACTIVIDAD AMILSICA

1g de Muestra: Tierra
frtil de Lunahuan.

Realizar diluciones seriadas:

Solucin Salina Estril
10-1 10-2 10-3 10-4

0.1 mL en Agar Czapeck 0.1 mL en Agar Nutritivo 0.1 mL en Agar YPA pH 5.5
Dox pH 7.0 para pH 7.0 para aislamiento para aislamiento de
aislamiento de de Bacillus. Hongos.
Actinomycetes.
y y

30C por 3-5 das.

Observar caractersticas tpicas
de las colonias.
 Transferir colonias
seleccionadas a Caldo NRRL +
Almidn 1% pH 7.0 (Medio de
induccin enzimtica).

Centrifugar a 4000 rpm

por 20 minutos.

El sobrenadante centrifugado se
agrega en 3 hoyos (uno para
cada muestra) realizados en una
placa con Agar Almidn 1%.

Incubar 24 horas y observar los

halos alrededor de los hoyos.

Se mide el radio de los halos

producidos y se halla la
Actividad Especfica mediante la
frmula:
A= H ( R2r 2 ) C
 RESULTADOS

Identificacin presuntiva

Comportamiento en placa

Fig. Agar YPA pH 5.5 en el cual se sembr por

diseminacin la dilucin 10-2 (la cual no se le
aplic shock trmico) siendo incubado por 4 das
(viernes a martes) a 30 C

Fig. Agar Czapeck-Dox pH 7.0 en el cual se sembr

por diseminacin la dilucin 10-2 (la cual no se le
aplic shock trmico) siendo incubado por 4 das
(viernes a martes) a 30 C
 Fig. Agar Nutritivo + 1% de almidn, pH 7.0 en el
cual se sembr por diseminacin la dilucin 10 -3 (la
cual no se le aplic shock trmico) siendo incubado
por 4 das (viernes a martes) a 30 C

Fig. 1:

Se puede apreciar hasta 3 tipos de colonias, las que son ms grandes, rugosas,
adheridas al medio, con bordes irregulares se podra tratar de Actinomicetos; Y las
medianas, opacas, secas, con bordes irregulares, presuntivamente se podra tratar de
Bacillus. Las colonias de color blanco amarillento brilloso se podran descartar que no
es Bacillus, ni actinomicetos.

Fif.2:

En ese medio se evidencia que creci un mix de colonias. Las colonias ms grandes,
blanquecinas opacas, con bordes irregulares, textura corrugada pueden ser Bacillus o
actinomicetos, lo ms probable es que sea Bacillus porque no se encuentran muy
adheridas al medio, tambin hay colonias de menor tamao, amarillentas opacas,
bordes irregulares, secas, corrugadas, que lo ms probable es que sean Bacillus
tambin. Hay algunas colonias muy pequeas blanquecinas, con bordes enteros, que
son contaminantes.

Fig.3:

En este medio las colonias se encentran ms aisladas, son de color blanco cremoso,
grandes muy corrugadas y secas. Se podra decir tentativamente que pertenecen al
gnero Bacillus. Las otras colonias blancas, de menor tamao y textura lisa, son
bacterias que acompaan la microbiota del composto.
AGAR NUTRITIVO

Este medio posee peptona de carne 10%, extracto de carne 3.5%, cloruro de sodio 5%,
agar 18% y almidn 1%. Ajustado a un pH 7.0.

Este es un medio simple con un agregado de amidn 1% como sustrato para el

crecimiento de microorganismos amilolticos. Ajustado a un pH 7 para el crecimiento
de bacteria del gnero Bacillus.

AGAR CZAPECK DOX

Este medio posee sacarosa 30%, nitrato de sodio 3%, sulfato de magnesio 0.5%, cloruro
de potasio 0.5%, sulfato de hierro 0.01%, di hidrogeno fosfato de potasio 1%, agar 1%.
Ajustado a un pH de 7.5%.

El objetivo de este medio es permitir el aislamiento y crecimiento de actinomicetos. La

sacarosa aporta la fuente de carbono, el nitrato de sodio aporta los compuestos
nitrogenados y factores de crecimiento adicionales.

AGAR YPA

Este medio posee extracto de levadura, peptona, almidn y agar 15%. Ajustado a un pH
7.0. El almidn es el sustrato principal para la produccin de enzimas amilasas; la
peptona y las levaduras aportantes las fuente de carbono y compuestos nitrogenados
al medio. Este medio reemplaza la glucosa comnmente empleada por el almidn para
esta prctica particular.

AGAR ALMIDN

Este medio posee almidn en 4% y agar en 2%; lo cual lo hace un medio de cultivo
pobre para el crecimiento de levaduras. Ajustado a un pH de 6.0.

El objetivo de aplicar este medio es observar la hidrolisis del almidn por medio de las
enzimas amilasas que producen estos microorganismos.

CALDO NRRL

Este medio posee D-glucosa 10%, peptona de carne 5%, extracto de malta 3%, extracto
de levadura 3%, almidn 20%. Ajustado a un pH de 5.5 (hongos) o 7.0 (bacterias).
El objetivo de este medio es inducir la produccin de enzimas como las amilasas. Para
ello se incub a 37C por 24 horas. Las amilasas son enzimas extracelulares por lo que
se centrifuga a 4000 rpm por 20 minutos a fin de separarlos. Se obtiene un precipitado
celular que se descarta, quedndonos con el sobrenadante que posee las enzimas
amilasas deseadas.

REVELADOS DE LA ACTIVIDAD AMILOLITICA

A=(R^2- r^2 )h(mm)x[ALMIDON]mg/ml

R_(X= ) Radio del halo hidrolitico (mm)

r_(x )=Radio del hoyo(mm)

h=Profundidad del hoyo (mm)

DR= 25mm R_(X= ) 12.5mm

Dr=10mm rX= 5mm

A=((12.5)^2-(5)^2 )hx[A]

A=((12.5)^2-(5)^2 )5mm[A ]

A=(156.5-25)25mm[A ]

A=(131.25mm^2)5mm[A ]

EQUIVALENCIA: cm^3=1ml

A=3.1416X656.25x10^(-3) cm^3 x10mg/ml

A= 20.61675 mg/0.1ml Almidn hidrolizado

Anexo: Aplicaciones de las enzimas amilasas en la
industria
La importancia comercial de las enzimas amilolticas est ahora bien establecida y ha
impulsado una importante expansin en las industrias de procesamiento de granos y etanol
combustible. Estas enzimas catalizan las reacciones hidrolticas de amilosa (almidn no
ramificado), amilopectina (almidn ramificado), glucgeno (almidn de animales), y polmeros
de glucosa relacionados.

Tabla N1: Tipos de enzimas amilasas y sustrato sobre el que actua

La -amilasa se produce comercialmente mediante el uso de especies bacterianas y fngicas.

La amilasa fngica tiene relativamente baja estabilidad trmica y su aplicacin principal est en
la industria de la panificacin, como complemento a la variable actividad de la amilasa
presente en la harina de trigo. Las amilasas bacterianas son mucho [ 109 ] Fronteras en
Microbiologa Aplicada ms estables al calor y se utilizan en las industrias de elaboracin de la
cerveza, la de degradacin de almidn, alcohol, textiles y los detergentes.

Tabla N2: Microorganismos usas en la produccin de alfa- amilasas

Utilizacin de enzimas en los detergentes

Los detergentes constituyen una de las principales reas de aplicacin industrial de enzimas.
As, tanto en la formulacin de los detergentes para la ropa como para lavavajillas se incluyen
enzimas para facilitar la eliminacin de determinados restos de suciedad. Actualmente tambin
se utilizan enzimas en algunos productos para la limpieza de las lentes de contacto o para la
limpieza de dentaduras. Los primeros enzimas utilizados en detergentes fueron enzimas
amiloliticas para ayudar eliminar manchas de tipo proteico (restos de comida, manchas de
sangre, etc.).

La primera patente data de 1913, aunque hay que esperar hasta los aos 60 para que el uso de
enzimas en los detergentes se generalice. No obstante, en 1969-70 las ventas de enzimas
disminuyeron drsticamente. La razn fue el desarrollo de reacciones alrgicas por parte de
algunos trabajadores de las fbricas de detergentes causadas por las preparaciones de enzimas
en polvo. El problema fue rpidamente solucionado mediante el desarrollo de preparaciones
granuladas de enzimas. Generalmente, dichas preparaciones consisten en un ncleo central de
enzimas rodeado de una cubierta de material inerte a la que se adiciona algn pigmento.

La amilasa ms ampliamente utilizada son las alfa-amilasas que puede obtenerse a partir del
cultivo de la bacteria Bacillus subtilis. Actualmente, adems de amilasas, tambin se han
introducido proteasas, lipasas y celulasas en el campo de los detergentes.

Las amilasas se utilizan tambin en combinacin con proteasas para aplicaciones de limpieza, y
dentro de la gran variedad de aplicaciones que se tienen en la industria, las importantes son las
siguientes:

1. En la produccin de jarabes de diferentes granos, jarabe de glucosa y glucosa cristalina.

2. Para la produccin de jarabe de maz de alta fructosa utilizando la enzima glucosa isomerasa.

3. Para solubilizar y sacarificar almidn para la produccin de etanol en las industrias de

elaboracin de la cerveza, de destilados, y de combustibles.

4. Para modificar la viscosidad del almidn usado en el recubrimiento de papeles de impresin.

5. Para producir jarabes que contienen maltosa en las industrias de elaboracin de la cerveza.

6. Para reducir la viscosidad de los jarabes utilizados en diversos productos alimenticios y de

azcar.

7. Como un componente de ayuda en procesos digestivos.

8. Para quitar las manchas de almidn en la ropa y/o utensilios del hogar