CIDO RICO Liquiform
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Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema enzimtico para determinacin del cido rico por
reaccin del punto final en muestras de sangre, orina y lquidos
(amnitico y sinovial).
[Solamente para uso diagnstico in vitro]
Principio . El cido rico es determinado de acuerdo con las
siguientes reacciones:
Uricasa
cido rico + O2 + H2O Alantona + CO2 + H2O2
Peroxidasa
2H2O2+ DHBS + 4-aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4 H2O
El cido rico es oxidado por la uricasa, la alantona y el perxido de
hidrgeno. El perxido de hidrgeno, en la presencia de la peroxidasa,
reacciona con el DHBS y con 4-aminoantipirina, que forman el
cromgeno antipirilquinonimina. La intensidad del color rojo formado es
directamente proporcional a la concentracin del cido rico en la
muestra.
Caractersticas del sistema . La dosificacin del cido rico que
utiliza la reaccin de Trinder se caracteriza por ser un mtodo directo, de
fcil aplicacin en sistemas automticos, que tiene la especificidad de la
uricasa. Muchos productos utilizan fenol como reactivo de acoplamiento.
Sin embargo, la baja sensibilidad de fenol y la incompatibilidad del pH
ptimo entre la uricasa de origen animal y la peroxidasa generan serios
obstculos para la fiabilidad del mtodo.
Labtest, como sistema cido rico Liquiform, supera estas dificultades
mediante la sustitucin del fenol por el cido 3,5-dicloro-2-
hidroxibenzeno sulfonato (DHBS), que es 4 veces ms sensible, lo que
permite una relacin apropiada entre las muestras e los reactivos,
asimismo permite obtener una sensibilidad ptima con relacin a una
baja concentracin de analito.
El reactivo se suministra bajo la forma lquida y se distribuye en dos
reactivos, que permiten su utilizacin en sistemas automticos, y facilita
la eliminacin de la accin de interferentes.
La metodologa monorreactiva puede aplicarse con la utilizacin de un
Reactivo de Trabajo, que es estable hasta la fecha de caducidad de los
reactivos que lo conforman, si se mantiene entre 2 y 8 C. El Reactivo de
Trabajo obtiene un rendimiento adecuado mismo en situaciones de bajas
demanda de la prueba. El sistema permite an preparar el volumen del
Reactivo de Trabajo necesario para una medicin de la concentracin del
cido rico.
La linealidad del mtodo es de 20 mg/dL, lo que disminuye la necesidad
de efectuar diluciones en un nmero significativo de muestras.
01 Espanhol - Ref.: 140
Ref.
Se ha desarrollado el reactivo con un conjunto especial de surfactantes
que promueven la clarificacin de la turbidez causada por lpidos, lo que
reduce significativamente la interferencia causada por la hiperlipemia en
la determinacin de la concentracin de cido rico.
El mtodo propuesto es de fcil aplicacin en gran parte de los
analizadores automticos y semiautomticos capaces de mensurar una
reaccin de punto final entre 490 y 540 nm.
Metodologa . Enzimtico- Trinder
Reactivos
1. 1 - Reactivo 1 - Almacenar entre 2 - 8 C
Contiene tampn 155 mM, 4-aminoantipirina 0,1 mM, peroxidasa
1000 U/L, azida sdica 0,02% y agentes tensioactivos.
2. 2 - Reactivo 2 - Almacenar entre 2 - 8 C
Contiene tampn 155 mM, DHBS 2,5 mM, uricasa 300 U/L, azida
sdica 0,02% y agentes tensioactivos.
3. - Estndar - Almacenar entre 2 - 8 C
Contiene cido rico 6,0 mg/dL. Almacenar bien sellado para evitar la
evaporacin.
Los reactivos no abiertos, si se almacenan en las condiciones
especificadas, son estables hasta la fecha de caducidad impresa en la
etiqueta. Durante el manejo, los reactivos estn sujetos a las
contaminaciones de naturaleza qumica y microbiana que pueden causar
reduccin de la estabilidad.
Preparo del reactivo de trabajo . El conjunto de un envase de
Reactivo 1 y un envase de Reactivo 2 permite preparar el Reactivo de
Trabajo. Transferir el contenido de un envase de Reactivo 2 para un
envase de Reactivo 1 y homogeneizar suavemente. Identificar el envase
del Reactivo de Trabajo y apuntar la fecha de caducidad.
El reactivo de trabajo es estable por 14 das a condicin de que se
mantengan entre 2 y 8 C, en un recipiente cerrado y cuando no hay
contaminacin qumica o microbiana. El desarrollo de coloracin
ligeramente rosado en el Reactivo de Trabajo es normal y no afecta su
rendimiento.
Opcionalmente, puede prepararse menor volumen del Reactivo de
Trabajo utilizando la proporcin de 4 volmenes del Reactivo 1 y 1(un)
volumen del Reactivo 2. Para preparar el volumen de reactivo necesario
para llevar a cabo la prueba, mezcle 0,8 mL del Reactivo 1 y 0,2 mL del
Reactivo 2.

Precauciones y cuidados especiales
No se puede utilizar el reactivo cuando su absorbancia medida contra
agua en 505 nm es igual o superior a 0,300, o si se muestra turbio y con
signos de contaminacin.
Los cuidados habituales de seguridad deben aplicarse en el manejo de los
reactivos. Los reactivos contienen azida sdica que es txica. No beba y,
en caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y abundantemente
con agua y acdase a un mdico. La azida puede formar compuestos
altamente explosivos con tuberas de plomo o cobre. Por lo tanto, utilice
grande volumen de agua para desechar los reactivos.
Cuidados con el tiempo de reaccin, temperatura de trabajo y pipeteado
son extremadamente importantes para la obtencin de resultados
correctos.
Los reactivos se deben manejarse siguiendo las buenas prcticas de
laboratorio que incluyen evitar la ingestin y el contacto con la piel,
mucosas y ojos.
Material necesario y no fornecido
1. Bao mara o incubadora mantenido a una temperatura constante de
(37 C).
2. Fotmetro capaz de mensurar con precisin la absorbancia entre
490 y 540 nm.
3. Pipetas para medir las muestras y los reactivos.
4. Cronmetro.
Influencias preanalticas . El cido rico se incrementa en las 24
horas que siguen a la ingestin de alcohol.
Las concentraciones sricas de cido rico presentan grandes
variaciones en el da a da y estacional en el mismo individuo. El cido
rico se eleva con el estrese, estados de ayuno prologando y aumento del
peso corporal.
El cido ascrbico (vitamina C), por ser una sustancia reductora,
consume el perxido de hidrgeno, y conduce a la obtencin de
resultados falsamente reducidos. Se debe orientar al paciente a no ingerir
alimentos o utilizar frmacos que contienen cido ascrbico hasta 48
12
horas antes de la realizacin del anlisis .
Muestra
Usar suero, plasma (EDTA Heparina), orina y lquidos (amnitico y
sinovial). El analito es estable 3 das entre 2 a 8 C y 6 meses a 10 C
negativos.
Debe generarse un Procedimiento Operativo Estndar (POP) para la
recogida, preparacin y almacenaje de la muestra. Se destaca que los
errores debido a la muestra, pueden ser superiores a los errores que han
ocurrido durante el procedimiento analtico.
Puesto que ninguna prueba conocida puede asegurar que las muestras de
sangre no transmiten infecciones, todas ellas se deben considerar como
potencialmente infecciosos. Por lo tanto, al manejarlas, se deben cumplir
las normas establecidas para la bioseguridad.
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Para desechar los reactivos y el material biolgico, se sugiere la
aplicacin de las normas locales, estaduales o federales de proteccin
ambiental.
Interferencias
La utilizacin de plasma con fluoruro conduce a la obtencin de
resultados falsamente reducidos. El fluoruro acta como inhibidor de la
uricasa.
En la metodologa birreactiva se debe considerar los siguientes valores
para interferentes.
Valores de bilirrubina hasta 5 mg/dL y hemoglobina hasta 200 mg/dL y
muestras con triglicridos hasta 1200 mg/dL, no producen interferencias
significativas.
En la metodologa monorreactiva debe considerarse los siguientes
valores para interferentes:
Valores de bilirrubina hasta 5 mg/dL y hemoglobina hasta 50 mg/dL y
muestras con triglicridos hasta 1200 mg/dL, no producen interferencias
significativas.
Para valorar la concentracin de la hemoglobina en una muestra
hemolizada puede llevarse a cabo de la siguiente forma: Disolver 0,04 mL
de la muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) y medir la
absorbancia entre 405 o 415 nm y ajustar el cero con agua desionizada o
destilada.
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbancia405 x 601
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbancia415 x 467
Procedimiento
Muestras: Suero, plasma (EDTA Heparina), orina y lquidos (amnitico y
sinovial).
Orina . Homogeneizar la orina, separar 10 mL, ajustar el pH entre 7,0 y 9,0
con NaOH 5% y calentar 10 minutos a 56 C para disolver los cristales de
urato y cido rico. Diluir la orina 1:10 (0,1 mL de orina + 0,9 mL de agua
destilada). Multiplicar el resultado obtenido por 10.
Procedimientos para la realizacin del ensayo
Tome 3 tubos de ensayo y proceda de la siguiente manera:
Blanco Test Estndar
Muestra 0,02 mL
Estndar (N 3) 0,02 mL
Reactivo del Trabajo 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Mezclar e incubar en bao mara a 37 C durante 5 minutos. El nivel de
agua en el bao debe ser superior al nivel del reactivo en los tubos de
ensayo. Determinar las absorbancias de la prueba y estndar en 505 nm o
filtro verde (490-540 nm) y ajustar el cero con el blanco. El color es
estable durante 30 min.
El procedimiento sugerido para la medicin es adecuados para Calibrador: usar calibrador de protena. La concentracin de cido rico
fotmetros cuyo volumen mnimo de solucin para lectura es igual o en el calibrador Calibra H - Labtest es trazable al SRM 913 del NIST.
menor que 1,0 mL. Se debe efectuar una verificacin sobre la necesidad
de ajuste del volumen para el fotmetro utilizado. Los volmenes de las Intervalo de calibraciones
muestras y reactivos pueden modificarse proporcionalmente sin afectar Cuando indica el control interno de la calidad;
el rendimiento de la prueba, adems el procedimiento del clculo Si se utiliza un nuevo lote de reactivos;
Si se utiliza nuevos envases de reactivos de un mismo lote, y en caso de
permanece sin cambio. En el caso de reduccin de los volmenes es
que se realice una nueva calibracin durante la utilizacin del envase
fundamental que se observe el volumen mnimo requerido para la lectura
anterior.
fotomtrica. Volmenes de muestra menores que 0,01 mL son crticos en
aplicaciones manuales y se deben usar con precaucin, ya que aumentan
la inexactitud de la medicin. Linealidad
El resultado de la medicin es lineal hasta 20 mg/dL. Cuando se obtiene
Clculos un valor igual o mayor que 20 mg/dL, disolver la muestra con NaCl
150 mmol/L (0,85%), realizar nueva medicin y multiplicar el resultado
Absorbancia de la Prueba
cido rico (mg/dL) = x6 por el factor de dilucin.
Absorbancia del Estndar
Orina . Disolver la muestra (con pH entre 7,0 y 9,0 y calentada 10 minutos
Ejemplo a 56 C) 1:20 o 1:40 con agua destilada o desionizada y repetir la
medicin. Multiplicar el resultado obtenido por 20 (veinte) o 40
Absorbancia de la Prueba = 0,214 (cuarenta), segn dilucin previamente utilizada.
Absorbancia del Estndar = 0,163
Control interno de calidad . El laboratorio debe mantener un
programa de control interno de calidad que defina claramente los
0,214 reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos y criterios para los
cido rico (mg/dL) = x 6 = 7,9
pliegos de calidad y lmites de tolerancia, acciones correctivas y registro
0,163
de las actividades. Los materiales de control deben utilizarse para evaluar
El resultado tambin puede obtenerse con la utilizacin del factor de la inexactitud y desviaciones de la calibracin.
calibracin.
Se sugiere que los pliegos para el coeficiente de variacin y el error total
9,10
6 se basen en los componentes de la variacin biolgica (VB) .
Factor de Calibracin =
Absorbancia del Estndar Se recomienda utilizar las preparaciones estabilizadas de la lnea
Qualitrol H - Labtest para el control interno de calidad en los ensayos de
Ejemplo qumica clnica.

6
Intervalo de referencia . Los intervalos se deben usar apenas
Factor de Calibracin = = 36,8
0,163 como gua. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
intervalos de referencia en la poblacin atendida.

cido rico (mg/dL) = 0,214 x 36,8 = 7,9 Suero (mg/dL)

11 Hombre 1,5 a 6,0
Nios
Mujer 0,5 a 5,0
mg/dL x volumen urinario (mL)
Hombre 2,5 a 7,0
Orina (mg/24 horas) = Adultos
100 Mujer 1,5 a 6,0

Calibracin Orina . 250 a 750 mg/24 horas

Trazabilidad del sistema
El estndar es trazable al Standard Reference Material (SRM) 913 del
National Institute of Standards and Technology (NIST).
Calibraciones manuales
Obtener el factor de calibracin al usar un nuevo lote de reactivos, o si se
indica el control interno de la calidad.
Sistemas automticos
Blanco de reactivo: agua desionizada o solucin de cloruro de sodio
150 mmol/L (0,85%);
Conversin . Unidades convencionales (mg/dL) x 59,5 = Unidades SI
(mmol/L).
13
Caractersticas del desempeo
Estudios de recuperacin . En dos muestras con concentracin
de cido rico iguales a 5,9 y 6,3 mg/dL, se han aadido cantidades
distintas del analito, as se obtiene recuperaciones entre el 99,6 y el
100,2%.

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El error sistemtico total medio obtenido en una muestra con valor de Efectos de la dilucin de la matriz . Dos muestras con valores
cido rico de 8,0 mg/dL fue igual 0,01 mg/dL o el 0,15%. El error iguales a 24,9 y 23,2 mg/dL se han utilizado para evaluar la respuesta del
sistemtico total obtenido es inferior al error sistemtico total de la sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%). Con
especificacin deseable basada en los componentes de la Variacin la utilizacin de los factores de dilucin que variaron de 2 a 16, se han
Biolgica que es 4,9%. encontrado un promedio de recuperaciones del 101%. El error
sistemtico total obtenido es inferior al error sistemtico total de la
Estudios contrastivos de mtodos . El mtodo propuesto ha especificacin deseable basada en los componentes de la Variacin
sido contrastado con otro producto de metodologa anloga, y se han Biolgica que es 4,9%.
obtenido los siguientes resultados:
Significado clnico . Numerosas enfermedades, condiciones
Mtodo Mtodo fisiolgicas, alteraciones bioqumicas, factores sociales y ambientales
Comparativo Labtest estn asociados a elevaciones en la concentracin rico plasmtico.
Nmero de muestra 40 40 Entre las etiologas de la hiperuricemia estn: insuficiencia renal, cetosis,
Intervalo de concentraciones exceso de lactato, uso de diurticos y en todas las patologas en las que la
1,92 - 15,79 1,99 - 16,27 destruccin de nucleoprotenas est aumentada. El aumento del cido
(mg/dL)
Mtodo Labtest (mg/dL) = 1,0322 x rico est positivamente relacionado a la hiperlipemia, obesidad,
Ecuacin da regresin arteriosclerosis, diabetes mellitus e hipertensin, aunque los
contrastivo - 0,0844
Coeficiente de correlacin 0,9995 mecanismos de estas alteraciones todava no se entiendan muy bien.

La gota, manifestacin clnica de la hiperuricemia, es clasificada como

El error sistemtico total verificado en los niveles de decisin 2,0; 8,0 y
10,7 mg/dL fueron iguales a 0,02; 0,17 y 0,26 o 1,00; 2,17 y el 2,43%,
respectivamente.
El error sistemtico total obtenido es inferior al error sistemtico total de la
especificacin deseable basada en los componentes de la Variacin
Biolgica que es 4,9%.
primaria, secundaria o idioptica. Es importante recordar que la gota
secundaria es una complicacin poco comn cuando relacionada a la
frecuencia de la hiperuricemia. Se destaca que la colchicina, utilizada en
los casos de gota aguda, no modifica los valores de cido rico. Son poco
frecuentes las causas de hipouricemia: ocurre en la sndrome de Fanconi,
enfermedades malignas como linfoma de Hodgkin y carcinoma
broncognico.

Estudios de precisin . Se han realizado los estudios de precisin Observaciones

con la utilizacin de 40 muestras con un promedio de concentraciones
iguales a 2,1, 8,6 y 11,7 mg/dL. 1. La limpieza y secado adecuadas del material utilizado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtencin de
Repetitividad - imprecisin intra-ensayo resultados correctos.

N Media DE CV (%)
2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada a
Muestra 1 40 2,3 0,02 0,97
cada aplicacin. Por lo cual, para preparar reactivos y usarla en las
Muestra 2 40 9,5 0,07 0,85
mediciones debe tener resistividad 1 megaohm o conductividad
Muestra 3 40 11,1 0,09 0,82
1 microsiemens y concentracin de silicatos <0,1 mg/L (agua tipo II).
Para el enjuague de la vidriera, el agua puede ser del tipo III con
resistividad 0,1 megaohms o conductividad 10 microsiemens. En el
Reproducibilidad - imprecisin total enjuague final utilizar agua tipo II. Cuando la columna desionizadora est
N Media DE CV (%) con su capacidad saturada, se produce agua alcalina con liberacin de
varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidacin o
Muestra 1 40 2,3 0,03 1,48
reduccin que deterioran los reactivos en pocos das o incluso horas,
Muestra 2 40 9,5 0,09 1,14
alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual, es
Muestra 2 40 11,1 0,09 1,14
fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua.

El error total (error aleatorio + error sistemtico) estimado en Referencias

concentraciones iguales a 2,0, 8,0 y 10,7 mg/dL son iguales al 3,45%,
4,04% y al 4,32%, respectivamente.
Los resultados sealan que el mtodo cumple con la especificacin
deseable para el error total ( 12,4%) basada en los componentes
deseables de la Variacin Biolgica.
1. Duncan PH, Gochman N, CooperT, Smith E, sayze D. Clin Chem
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3. Inmetro - Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao

Sensibilidad metodolgica . Se ha utilizado una muestra que no
para Avaliao, Qualitymark ed.,Rio de Janeiro, 1997.
contena cido rico para calcular el lmite de deteccin del ensayo, en la
cual se ha encontrado un valor igual a 0,02 mg/dL, equivalente al 4. Kabasakalian P, Kalliney S, Westcott A. Clin Chem 1973;19:522.
promedio de 10 ensayos ms tres desviaciones estndar.

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1972. 140-1/100 2 1 x 20 mL
cido rico 1 x 5 mL
7. Trivedi RC, Rebar L, Berta E, Stong L, Clin Chem 1978;241908.
Liquiform 1 1 x 200 mL
8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981,27:493- 140-1/250 2 1 x 50 mL
501. 1 x 5 mL

9. Ricos C, Desirable Specifications for Total Error, Imprecision, and Bias,

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Laboratoriais. In: Leo E, Corra EJ, Viana MB, Mota JAC (Ed).
Pediatria Ambulatorial. 3a. edio Belo Horizonte: Coopmed, 1988:
837-848.
[Trminos y Condiciones de Garanta]
Labtest garantiza la correcta performance del equipo hasta su fecha de
vencimento se ha sido conservado de acuerdo a las instrucciones que
figuram en el rtulo.

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CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
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Edicin: Abril, 2013 Copyright by Labtest Diagnstica S.A.

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