TESIS
Para optar el Ttulo Profesional de Qumico-Farmacutico
AUTORES
Lima Per
2014
Dedicatoria:
A Dios por haberme permitido llegar a este punto y haberme dado la vida para
conocer su infinita grandeza, adems de su bondad y amor.
Juan Vera
Ren Abarca
Agradecimientos:
Juan y Ren
NDICE
ABREVIATURAS...1
NDICE DE TABLAS.........2
RESUMEN......3
ABSTRACT...........................4
I. INTRODUCCIN........5
1.1 Objetivo General.........7
1.2 Objetivos Especficos.........7
IV. RESULTADOS......27
4.1 Tablas.......27
4.2 Anlisis Estadstico.......34
V. DISCUSIN...............37
VI. CONCLUSIONES.....41
VII. RECOMENDACIONES........42
IX. ANEXOS.....47
ABREVIATURAS
1
NDICE DE TABLAS
Pgina
2
RESUMEN
3
ABSTRACT
4
I. INTRODUCCIN
En general, las parasitosis, al igual que otras afecciones, son controladas gracias
a la accin coordinada de mecanismos inmunes. Se debe considerar que la
respuesta inmune est dividida por etapas, adems, el control de la afeccin no
solo implica la erradicacin del patgeno, sino el evitar el desarrollo de dao
mediado inespecficamente por la respuesta inflamatoria2.
La defensa contra muchas afecciones por helmintos est mediada por anticuerpos
y eosinfilos polimorfonucleares. En este tipo de citotoxicidad celular dependiente
de anticuerpo, la IgE se une a la superficie del helminto para posteriormente unirse
a los eosinfilos que secretan las enzimas de los grnulos que destruyen a los
parsitos. La funcin y caractersticas del eosinfilo en afecciones parasitarias se
han esclarecido recientemente, se ha visto que estas clulas en presencia de
antgenos parasitarios poseen un tiempo de generacin medular menor y emergen
desde la mdula sea durante las primeras 18 horas3.
5
Segn algunos autores manifiestan que la giardiasis no produce reaccin
eosinoflica, sin embargo, existen pocos casos reportados de giardiasis asociada
con eosinofilia, ste es un tema que todava sigue siendo investigado
actualmente5.
Es por todo lo mencionado que nos proponemos explicar la relacin que existe
entre la parasitosis como enfermedad intestinal y la eosinofilia como entidad
hematolgica e inmunolgica.
6
1.1 OBJETIVO GENERAL
7
II. MARCO TERICO
2.1 ENTEROPARASITOSIS
2.1.1 Definicin
2.1.2.1 Protozoos
Son microorganismos unicelulares pertenecientes al Reino Protista, subreino
Protozoa. Se caracterizan por ser eucariotas, pueden reproducirse asexuada o
sexuadamente, tienen movilidad variable dependiendo de sus rganos de
locomocin, la mayora tienen nutricin de tipo hetertrofa.
Los organismos protozoos suelen presentar distintas estructuras en su ciclo vital.
Por un lado, las formas activas (que se alimentan) son denominadas trofozotos.
Por otro lado, las estructuras capaces de resistir las condiciones adversas del
medio externo son denominadas quistes u ooquistes.
Dependiendo de la consistencia de las heces ser ms comn encontrar unas
estructuras u otras: trofozotos en heces diarreicas y quistes en heces formadas.
8
Su ciclo vital, generalmente, no presenta hospedadores intermediarios, se
transmiten a travs de agua o alimentos contaminados, normalmente por
ingestin de quistes7.
a) Agentes etiolgicos
Patgenos primarios clsicos
- Giardia lamblia
- Entamoeba histolytica-dispar
- Cryptosporidium parvum
Oportunistas emergentes
- Cryptosporidium parvum
- Isospora belli
- Cyclospora cayetanensis
- Microsporidios
De patogenicidad discutida (comensales)
- Entamoeba coli
- Endolimax nana
- Iodamoeba butschlii
- Blastocystis hominis
- Chilomastix mesnili
- Pentatrichomonas hominis8.
9
miden de 10 a 12 de largo por 8 de ancho. Los trofozotos viven en la
submucosa del duodeno y yeyuno proximal, mientras que los quistes se forman en
intestino delgado y se excretan por las heces. Los quistes eliminados por las
heces contaminan agua, alimentos y manos, llegando por va oral al estmago
dnde se destruye la cubierta del mismo, liberndose los trofozotos que se
localizan en la mucosa del intestino delgado proximal produciendo la enfermedad
y dando lugar a la eliminacin de nuevos quistes por las heces. Tras un perodo de
incubacin de unos 5 das se inicia el perodo clnico, existiendo tres posibles
evoluciones: portador asintomtico, gastroenteritis o cuadro crnico de
malabsorcin.
Amebiasis, constituye la tercera causa mundial de muerte por enfermedad
parasitaria. La afeccin se produce al ingerir quistes del parsito, que miden de 10
a 18 y contienen 4 ncleos. Los quistes son resistentes a las bajas
temperaturas, a la cloracin de las aguas, a los cidos gstricos y enzimas
digestivas, de forma que tras la ingesta llegan al intestino delgado donde cada
quiste da lugar a 8 trofozotos, con un dimetro medio de 25 y dotados de un
solo ncleo. Los trofozotos van a colonizar la luz del colon, pudiendo invadir la
mucosa, extendindose por debajo del epitelio intestinal produciendo las
caractersticas lceras9.
2.1.2.2 Helmintos
Los metazoarios o helmintos son mucho ms complejos que los protozoos, sus
clulas se agrupan formando rganos y tejidos; se reproducen sexualmente
pudiendo ser hermafroditas o presentar sexos separados. Son ovparos con
excepcin de filarias, Dracunculus spp y Trichinella spp, que son vivparos10.
10
a) Agentes etiolgicos
Nemtodos
Limitados al tracto gastrointestinal
Enterobius vermicularis
Trichuris trichiura
Migran al pulmn
scaris lumbricoides
Afectan tejidos
Triquinosis
Toxocariasis (Larva migrans visceral)
Anisakiasis
Tremtodos
Fasciola heptica
Cstodos
Taenia saginata, Taenia solium.
Hymenolepis nana8.
b) Mecanismos de transmisin
Podemos distinguir 3 grupos:
Geohelmintos (formas infectantes en el suelo; penetran por va oral o
transcutnea); scaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Hymenolepis nana,
Strongyloides stercoralis
Helmintos de transmisin directa entre personas (ciclo fecal-oral o ano-mano-
boca); Enterobius vermicularis.
Helmintos transmitidos por carnivorismo (forma infectante en carne vacuna
poco cocida); Taenia saginata7.
11
c) Parasitosis por nemtodos
La oxiuriasis afecta entre el 40 al 50% de los nios en edad escolar. La ingestin
de huevos fecundados, libera larvas que maduran en el duodeno, localizndose
despus en la regin ileocecal. Desde aqu las hembras migran generalmente por
las noches, hasta el recto y el ano para realizar la puesta de huevos, los cuales
mediante una secrecin especial se adhieren a los mrgenes del ano y piel
circundante.
scaris lumbricoides, mide 35 cm de longitud es el nemtodo de mayor tamao,
constituyendo una infestacin muy frecuente sobre todo en reas tropicales.
Cuando los huevos frtiles son ingeridos, se produce la eclosin de las larvas que
atravesando la mucosa intestinal, alcanzan la circulacin portal llegando a la
circulacin pulmonar, y desde ah invaden los alveolos pulmonares pasando a los
bronquios. Mediante la tos y la deglucin reaparecen en el intestino delgado
transformados en adultos, dnde viven uno o dos aos, durante los cuales dan
lugar a la excrecin de huevos en heces.
Trichuris trichiura, cuyos huevos ingeridos (a travs de agua, alimentos, tierra y
manos) llegan al intestino delgado y se convierten en larvas que maduran a la vez
que descienden por el tubo digestivo, de forma que al llegar al colon ascendente
son ya adultos. All infiltran la mucosa del ciego dando lugar a inflamacin, edema
y hemorragia8.
12
sistmica, atraviesa el pulmn y termina en los msculos dnde se enquista
formando un cisticerco que a los 3 4 meses ya es infectante.
La himenolepiasis es la afeccin por cstodo ms frecuente. Se trata de un
cstodo pequeo con un ciclo biolgico complejo en el que intervienen roedores,
moscas, cucarachas y diversos insectos que van a contaminar las aguas con
huevos embrionados9.
13
alternos, recolectadas en recipientes limpios, conservadas en lugar fresco o
utilizando fijadores para evitar la destruccin de los parsitos y enviadas lo antes
posible al laboratorio, dnde las muestras son procesadas mediante concentracin
por tcnicas de sedimentacin (centrifugacin formol-ter) o flotacin (sulfato de
zinc) y a continuacin sometidas a tinciones especficas (lugol, hematoxilina-
eosina, tricrmica). Adems de la identificacin microscpica, recientemente se
han desarrollado tcnicas serolgicas de deteccin de anticuerpos, tcnicas de
deteccin de coproantgenos mediante anticuerpos monoclonales o anlisis
isoenzimtico y tcnicas de biologa molecular como la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR) para deteccin de genomas parasitarios12.
2.2 EOSINFILOS
a) Morfologa y eosinofilopoyesis
Es un tipo de leucocito que pertenece al grupo de los granulocitos, que mide de
10-15 micras de dimetro, de ncleo tpicamente bilobulado, es derivado de la
serie blanca de los leucocitos.
La eosinofilopoyesis humana es el proceso hematolgico de formacin de
eosinfilos y que requiere de una semana para completarse, la cavidad medular
de la mdula sea es una fuente rica de eosinfilos maduros. El desarrollo de
eosinfilos en la mdula sea es estimulado por tres citocinas:
a. Factor estimulador de colonias de granulocitos-macrfagos (GM-CSF)
b. Interleucina-3 (IL-3)
c. Interleucina-5 (IL-5)
La IL-5 promueve exclusivamente el desarrollo y diferenciacin terminal de
eosinfilos en la mdula sea, en contraste con IL-3 y GM-CSF que adems de
estimular la eosinofilopoyesis tambin estimulan otras lneas celulares13.
14
b) Composicin de los eosinfilos
Se conocen tres tipos de grnulos:
Grnulos primarios.
Son de tamao variable, forman cristales bipiramidales, hexagonales, estn
localizados en la membrana del eosinfilo, contienen lisofosfolipasa A, protenas
que forman los cristales de Charcot-Leyden, estn presentes en tejidos y lquidos
corporales.
Grnulos secundarios.
Formados por un ncleo cristaloide rodeado por una matriz, miden 0.3 a 1.2 nm de
dimetro y estn adheridos a la membrana, contienen 4 protenas catinicas
eosinoflicas bsicas:
-Protena bsica principal (MBP).
-Protena catinica eosinoflica (ECP).
-Neurotoxina derivada de eosinfilos (EDN).
-Peroxidasa de eosinfilo (EPO).
Grnulos pequeos.
Contienen arilsulfatasa B y fosfatasa cida14.
Cristales de Charcot-Leyden
Su presencia indica un proceso inflamatorio, usualmente alrgico, de
hipersensibilidad, en el cual est ocurriendo degranulacin de los eosinfilos, de
los basfilos o de ambos. En un examen coproparasitolgico, la presencia de los
cristales de Charcot-Leyden, podra sugerir un proceso inflamatorio agudo, esos
cristales es producto de la degradacin de eosinfilos en el intestino. Los cristales
de Charcot-Leyden obtenidos de las heces reaccionan positivamente con un
anticuerpo producido contra lisofosfolipasa15.
15
2.2.2 Activacin y reclutamiento de eosinfilos a los tejidos
a) Frmula leucocitaria
Consiste en conocer y valorar los porcentajes relativos de la distinta variedad de
glbulos blancos que se observan en los extendidos coloreados, despus del
recuento de 100 o 200 leucocitos. Es indispensable para obtener el porcentaje de
cada tipo de leucocitos que stos se hallen uniformemente distribuidos en el
extendido sanguneo. Como los granulocitos estn generalmente en los mrgenes
del extendido y los linfocitos en el centro, se recomienda la tcnica aconsejado por
16
Schilling, que consiste en tomar cuatro puntos marginales distintos recorriendo el
campo en zigzag desde el borde hacia la parte central, y contar 25 o 50 elementos
en cada uno de los cuatro puntos. Debe anotarse tambin algunos aspectos
morfolgicos de los leucocitos17.
2.2.4 Eosinofilia
a) Definicin
Se llama eosinofilia al aumento porcentual de eosinfilos, es decir que su
porcentaje dentro del total de leucocitos aumenta, el valor normal de eosinfilo en
la frmula leucocitaria es de 1 a 4% y el valor absoluto es de 50 a 500/mm3.
Si los eosinfilos superan la cifra considerada normal, ello no constituye una
enfermedad, pero puede orientarnos sobre patologas subyacentes, pues es una
respuesta inmunitaria19.
b) Causas de eosinofilia
El aumento porcentual de eosinfilos en la sangre puede deberse a
condiciones como:
- Una reaccin alrgica, asma
- Una infeccin parasitaria intestinal o de otro tipo
- Enfermedad vascular del colgeno
- Trastornos de la mdula sea
- Inflamaciones en la piel como la dermatitis
17
- Aunque menos frecuente, puede indicar tambin la presencia de clulas
anormales, como ciertos cnceres20.
2.3.1 Antecedentes
En Chile (1999). Estudios practicados a una poblacin con eosinofilia del rea
oriente de Santiago, demostraron que las enteroparasitosis son responsables
del 45% de los casos de eosinofilia en nios. De esta manera, Enterobius
vermicularis fue demostrado en el 25.8% de los caso; los histoparsitos 34.8%
de las consultas, y la infeccin con mayor frecuencia fue larva migrante visceral
con 20% de los casos21.
18
(Ancylostoma duodenale y Necator americanus) y tremtodos (Opisthorchis
viverrini y Clonorchis sinensis) 24.
19
son capaces de producir la lisis parasitaria. La protena bsica mayor (MBP)
presente en los grnulos del eosinfilo es ms txica para estos organismos que
los radicales libres y enzimas proteolticas liberadas por polimorfonucleares
neutrfilos y macrfagos27.
20
III. PARTE EXPERIMENTAL
Equipos
Microscopio ptico (Boeco-Germany)
Centrfuga (Hettich Zentrifugen)
Contador manual diferencial de clulas
Materiales
Lminas portaobjeto y cubreobjeto
Soporte de tincin
Gotero
Tubos de ensayo 13 x 100 mL
Pinzas de madera
Baguetas
Gradillas
Mechero de Bunsen
Asa de Kolle
Cinta adhesiva transparente (1 pulgada de ancho)
Guantes
21
Reactivos
Colorante de Wright
Solucin de lugol
Solucin acuosa de sulfato de zinc al 33.3% (densidad 1.180)
Suero fisiolgico
Agua destilada
3.2 PROCEDIMIENTO
3.2.1 Criterios
Criterios de inclusin.
Pacientes que se realizaron exmenes hematolgicos y parasitolgicos con
diagnstico positivo de parasitosis intestinal.
Criterios de exclusin.
Pacientes que tuvieron otras pruebas analticas que podran interferir con el
resultado de los valores de eosinfilos.
22
3.2.3 Valor referencial de eosinfilos en sangre
Tincin de Wright
Fundamento.
Esta coloracin es policromtica debido a que produce varios colores. Es una
solucin de alcohol metlico de un colorante cido (eosina) y otro bsico (azul de
metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguneo al portaobjeto. El
23
amortiguador, que consiste en una solucin tamponada, mantiene el pH del
colorante y favorece la mejor absorcin por los diferentes componentes celulares.
Procedimiento
Se realiz la tincin de Wright al frotis sanguneo fijado en una lmina portaobjeto,
coloreada segn la tcnica, se puso aceite de inmersin y se observ al
microscopio a 100X. Esto permiti evaluar el porcentaje relativo de cada tipo de
leucocito.
B) Diagnstico parasitolgico
Examen macroscpico
Permiti observar directamente las caractersticas morfolgicas de los parsitos
adultos, enteros o fraccionados, as como el aspecto de las heces eliminadas
(color, presencia de sangre y/o moco, consistencia, etc.).
Fundamento
Se basa en que los quistes y/o huevos de los parsitos flotan en la superficie por
ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%. Es til para la bsqueda de
quistes y/o huevos de parsitos y excepcionalmente se observan larvas.
24
Procedimiento
Se aplic la tcnica correspondiente a las muestras parasitolgicas seriadas, se
observ al microscopio a 40X. Esto permiti observar quistes de protozoos as
como tambin huevos y larvas de helmintos.
Tcnica de Graham
Fundamento
La hembra de Enterobius vermicularis deposita sus huevos en las mrgenes del
ano durante la noche. La tcnica de Graham tiene por objeto adherir estos huevos
a la cinta adhesiva transparente o cinta scotch, la que se extender
posteriormente en una lmina portaobjeto para su observacin microscpica.
Procedimiento
Se aplic esta tcnica para diagnosticar huevos de Enterobius vermicularis en una
muestra obtenida desde la regin perianal del paciente, dicha muestra se observ
a 10X.
25
IV. RESULTADOS
4.1 TABLAS
26
Se observa que el grupo etario ms frecuente a la enteroparasitosis es el de los
pacientes cuyas edades fluctan entre el 1 a 10 aos (72 casos), seguido de los
de 11 a 20 aos (30 casos).
27
Tabla 5. Distribucin de las diferentes especies parasitarias observadas en 177
muestras analizadas.
28
Tabla 6. Especies enteroparasitarias ms frecuentes encontrados en las muestras
analizadas.
29
Tabla 7. Niveles de eosinfilo encontrados mediante la frmula leucocitaria de
Schilling en el hemograma de los 177 pacientes con diagnstico positivo de
enteroparasitosis por protozoos y/o helmintos.
30
Se puede observar que del total de casos, un porcentaje importante
correspondiente al 81,92% tenan niveles de eosinfilos menor de 4% mientras
que el 18,08% tenan el nivel de eosinfilos mayor de 4%.
31
Tabla 10. Niveles de eosinfilos encontrados en el hemograma de los pacientes
que estuvieron parasitados por protozoos.
32
4.2 ANLISIS ESTADSTICO
Grados de libertad = 2
Tabla 11. Tabla de contingencia entre las variables de estudio tipo de parasitosis
segn nmero de agentes etiolgicos vs nivel de eosinfilos.
xcalc = 0,43
x0.95, 2 = 5,99
Resultado:
En nuestro estudio, dado que xcalc < x0.95, 2 se concluye que no hay
significancia estadstica que sugiera algn tipo de correlacin entre la cantidad de
agentes causantes de la parasitosis y los niveles de eosinfilos.
33
2.- Nivel de eosinfilos vs Tipo de agente etiolgico
Grados de libertad = 1
Tabla 12. Tabla de contingencia entre las variables de estudio agente etiolgico vs
nivel de eosinfilos.
xcalc = 18,20
x0.95, 1 = 3,84
Resultado:
En nuestro estudio, dado que xcalc > x0.95, 1 se concluye que existe
significancia estadstica lo que a su vez conlleva a pensar en algn tipo de
correlacin entre el agente etiolgico causante de la parasitosis y los niveles de
eosinfilos.
34
3.- Nivel de eosinfilos vs Tipo de protozoario
Grados de libertad = 3
Tabla 13. Tabla de contingencia entre las variables de estudio agente etiolgico vs
nivel de eosinfilos
xcalc = 2,71
x0.95, 3 = 7,82
Resultado:
En nuestro estudio, dado que xcalc < x0.95, 3 se concluye que no hay
significancia estadstica que sugiera algn tipo de correlacin entre ambas
variables.
35
V. DISCUSIN
36
nuestro pas, debido probablemente a su facilidad de transmisin y adaptacin a
climas diferentes 25.
Se report que 18,08% (32/177) del total de casos positivos tena un rango de
eosinfilos > 4%, por lo tanto no hubo muchos casos de eosinofilia asociado a
parasitosis porque la mayora de los casos parasitados eran por protozoos los
cuales carecen de reactividad eosinoflica4,8.
(Tabla 11) Hemos encontrado que no hay significancia estadstica entre las
variables nivel de eosinfilo vs el nmero de agente etiolgicos, lo que quiere
decir que no hay suficiente evidencia a partir de los valores estadsticos
obtenidos como para suponer que existe correlacin entre ambas variables.
(Tabla 12) Hemos encontrado que existe significancia estadstica entre las
variables nivel de eosinfilo vs tipo de agente parasitario, lo que equivale a decir
que hay evidencia a partir de los valores obtenidos que sugieren que hay
correlacin entre estas variables.
(Tabla13) Hemos encontrado que no hay significancia estadstica entre las
variables nivel de eosinfilo vs tipo de protozoarios, lo que de forma anloga al
primer caso analizado, no existe evidencia que sugiera una posible correlacin
entre estas variables.
37
Como resultado general se muestra que existe correlacin entre parasitosis
intestinal y eosinofilia cuando dicha parasitosis est mediada por helmintos ya que
los protozoos no tuvieron reactividad eosinoflica significativa (Tablas 9,10 y 13).
38
encontrado que el Enterobius vermicularis produjo mayor nmero de casos de
eosinofilia (Tabla 9)25.
Que por la fcil reinfeccin debido al peculiar ciclo vital de los mencionados
parsitos, haya ocurrido un proceso de desensibilizacin en estos pacientes 28.
Que estos pacientes sean de escasa reactividad inmunolgica y orgnica 30.
Que los alrgenos de los parsitos en curso no tienen suficiente poder
antignico para alterar dicha reactividad35.
39
VI. CONCLUSIONES
40
VII. RECOMENDACIONES
41
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
7. Tay, Lara. (2002). Parasitologa Mdica. 7ma ed. Mxico D.F: Mndez editores;
p.383-85.
42
10. Chester Beaver P. (1986). Parasitologa Clnica. 2da ed. Barcelona: Salvat
editores; p. 41-60.
11. Atias A. (2005). Parasitologa Mdica. 4ta ed. Santiago de Chile: Mediterrneo;
p.615.
13. Brito GF, Yamazaki MA. (2003). Eosinfilos. Rev. Mxico pediatr. Alergia,
asma e Inmunologa peditrica; 12(2): 56-62.
14. Ortiz CJ, Rivera MD. (2013). Eosinofilia y Parasitismo. Revista Gastrohnup;
15(1):41-48.
16. Valdivia BS. (2007). Los eosinfilos y la piel. Rev. Dermatologa peruana;
17(3): 83-92.
18. U.S. National Library of Medicine [sede web]. Frmula leucocitaria. Bethesda:
Medline Plus [actualizado 2 de febrero del 2013; acceso 5 de enero del 2014].
Disponible en: http:// nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003657.htm
19. Abbas AK. (2012). Inmunologa celular y molecular. 7ma ed. Madrid: Gea
consultora; p. 36-40.
43
20. Chavarra S, Quirs W. Eosinofilias: Una revisin de sus causas. Revista
mdica de Costa Rica; 2004 [acceso 5 de marzo de 2014].
Disponible en: http://binasss.sa.cr/revistas/rmcc/564/08.htm
26. Caballero Soto ML. (1998). Inmunologa de la infeccin por helmintos. Rev.
Esp. Alergol Inmunol Clin; 13(6): 297-313.
27. Ovington KS, Behm CA. (1997). Eosinophils in Helminth Infection. Faculty of
Science, The Australian National University. Mem Inst. Oswaldo Cruz, Rio de
Janeiro; 92(2): 93-104.
44
30. vila Zamora E. (1975). Exploracin hematolgica y parasitolgica en
escolares de Lima, evaluacin del ndice de eosinofilia. Tes. Bach. Med.
UNMSM.
35. Gmez EA. (1978). Parasitismo y Alergia. Rev Cubana de medicina tropical;
30(2).
45
IX. ANEXOS
46
Figura 3. Colocando muestra parasitaria sobre un portaobjeto.
47
Universidad Nacional Mayor de san Marcos
Facultad de Farmacia y bioqumica
Servicio Acadmico Asistencial de Anlisis Clnicos
Examen macroscpico________________________________________
Examen microscpico.
a) Observacin directa con sol. de lugol: __________________________
b) Tcnica de concentracin de Faust: ____________________________
48