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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA

DE ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA

GUA DE
LABORATORIO DE
BIOLOGA

2013
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INDICE ---------------------------------------------------------------------------- 2

INTRODUCCION ---------------------------------------------------------------- 3

NORMAS GENERALES DE LABORATORIO ----------------------------------- 4

LABORATORIO 1 ----------------------------------------------------------------- 6
Caractersticas y funcin del microscopio.

LABORATORIO 2 ----------------------------------------------------------------- 13
La clula.

LABORATORIO 3 ----------------------------------------------------------------- 20
Macromolculas.

LABORATORIO 4 ----------------------------------------------------------------- 29
Membranas biolgicas y procesos de transporte.

LABORATORIO 5 ----------------------------------------------------------------- 37
Accin enzimtica.

LABORATORIO 6 ------------------------------------------------------------------ 43
Divisin celular: Mitosis.

LABORATORIO 7 ------------------------------------------------------------------ 48
Divisin celular: Meiosis.

BIBLIOGRAFA -------------------------------------------------------------------- 54
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INTRODUCCION

Este manual de laboratorio ha sido hecho con el propsito de recopilar prcticas

relacionadas al rea de biologa que ayuden a los estudiantes de primer
semestre de medicina a clarificar los conceptos ms bsicos y fundamentales.

Las prcticas escogidas poseen tcnicas experimentales usadas para ensear

biologa en varias partes del mundo.

Este documento pretende, tambin, ayudar en el desarrollo de habilidades y

destrezas de los estudiantes, factor indispensable para la enseanza-
aprendizaje no solo en los primeros niveles, sino durante todo el proceso de
formacin y desempeo profesional.

MSc. Rosa Ins Colina C.

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NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

1. CONSEJOS GENERALES

Estudie detenidamente cada ejercicio de la prctica (remitindose a la

programacin), antes de llegar a clase.
Use una libreta para sus anotaciones , observaciones y resultados.
Jams saque del laboratorio, equipos, materiales o cultivos.
Sea cuidadoso. Recuerde que usted es responsable del equipo y
materiales con los que trabajar. Si rompe o pierde tendr que
devolverlos.
El uso de celulares est prohibido, apagarlo antes de ingresar a clase de
laboratorio.
Durante las prcticas debe existir disciplina para realizar un trabajo
organizado y con buenos resultados.

2. Limpieza

Todo el lugar de trabajo debe estar limpio y ordenado antes, durante y

despus de cada actividad en el laboratorio.
Los desechos contaminados deben dejarse en los lugares previamente
establecidos al igual que los no contaminados.
Si se ha roto algn material de vidrio o se ha regado alguna sustancia
sobre la superficie de trabajo o el piso hay que recogerlos
inmediatamente.
Al final de la prctica limpiar las lentes de los microscopios si los ha
usado.

3. Las personas

Debe usar mandil blanco de manga larga, limpio y correctamente

abotonado.
Los guantes son indispensables en las prcticas con material biolgico.
Lave sus manos con agua y jabn antes y despus de cada sesin de
laboratorio.
No se permite comer, beber, fumar en el laboratorio.
No se lleve a la boca material que ha sido usado en el laboratorio.
No usar zapatos abiertos dentro del laboratorio

4. Las sustancias.

Considere toda sustancia como toxica por lo tanto maneje con cuidado.
No olfatee ninguna de las sustancias a menos que se lo pide .
No pipetee con la boca para evitar aspiraciones innecesarias.
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5. En caso de accidentes.

Notifique inmediatamente al instructor si ocurre algn accidente.

Si existe derramamiento de alguna sustancia sobre su persona o ropa
hay que lavar inmediatamente con abundante agua.
En caso de heridas lavar desinfectar y cubrir el rea.
Si el accidente es muy grave acudir al centro de salud.
En caso de incendio usar el extintor que existe siempre en un laboratorio
y pedir ayuda.
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LABORATORIO N 1

CARACTERISTICAS Y FUNCION DEL MICROSCOPIO

INTRODUCCIN

EL microscopio ha cumplido un papel muy importante en el avance de la ciencia

a partir del conocimiento profundo de todo aquello que el ojo humano no
puede mirar.
No se sabe con exactitud cuando el ser humano descubri por primera vez que
un espejo curvo y las esferas con agua aumentaban las imgenes, pero es a
partir de esto que se van inventando los lentes de aumento. En las primeras
dcadas del siglo XVII se inician.experiencias con lentes e instrumentos para
aumentar la visin y su uso se hace progresivo.
Los primeros microscopios fueron sencillos estaban formados por un lente
montado, posteriormente se fueron complicando por que combinaron lentes, el
primero de estos fue inventado por Zacharias Jansen en 1590 en Holanda
(figura 1.1).
El microscopio se fue perfeccionando con gran lentitud, ms sin embargo el
avance realizado hasta nuestros das ha sido enorme, el microscopio cuntico
de efecto tnel es uno de ellos. (figura 1.2)

Figura1.1 Microscopio compuesto de Zacharias Janssen. 1590, Midelburg,

HOLANDA.

Imagen tomada d http://www.revista.unam.mx/vol.6/num7/art70/art70-1.htm

Figura 1.2 Microscopio efecto Tunel, inventado en 1982 por Binning y Rohrer.

Imagen tomada de http://200.33.120.206:8080/mod/resource/view.php?id=284.

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En esta practica vamos ha usar microscopios compuestos binoculares (figura 1.

3), llamados as porque poseen dos lentes oculares, esto presenta ventajas
tales como mejor percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se
perciben con mayor nitidez los detalles.

Figura 1.3 Microscopio ptico compuesto con sus partes

Imagen tomada de http://www.flickr.com/photos/reparacionesbiomecanicas/

Las partes de un microscopio compuesto son:

a) Sistema mecnico:
BASE: Soporta todo el peso del aparato, asegurando la estabilidad del mismo.
BRAZO: Este elemento relaciona el cabezal del microscopio con el pie y sostiene
la platina y el condensador. De esta parte se sostiene el microscopio cuando se
lo traslada de un lugar a otro.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular o
binocular.
REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar
los objetivos.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin se halla sujeta al brazo y
posee adems una abertura para el paso de luz.
Las platinas tienen dos pinzas sujetadoras, dos tornillos que permiten
desplazar las placas y unas reglillas llamadas Escalas de Vernier, que
sirven para tomar las coordenadas sobre la localizacin de clulas o estructuras
de inters.
TORNILLOS DE ENFOQUE: son dos, macromtrico que permite acercar la
muestra hacia el lente objetivo y micromtrico, de mayor precisin que es el
que define la imagen.

b) Sistema ptico:
OCULAR: Lente que se encuentra prximo al ojo, amplifica la imagen producida
por el objetivo y su aumento es de 10X.
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OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin su funcin es ampliar la

imagen. En un microscopio estn insertados en una pieza llamada revolver en
un nmero de 4 generalmente. Los lentes objetivos ms comunes son los de
4X o 5X, 10X, 40X y 100X. El lente de 100X se usa nicamente con aceite de
inmersin por lo que es llamado lente de inmersin y los dems se llaman
lentes en seco.
La amplificacin total o magnificacin total resulta de la accin combinada del
ocular y objetivo, se calcula multiplicando estos dos valores. Ej.: ocular 10X,
objetivo 10X, amplificacin total 100X.
A medida que el poder de amplificacin o la magnificacin del microscopio
aumentan, el espacio observado bajo el campo ptico disminuye.
Lo ms importante de un microscopio no es el aumento en s mismo, sino el
poder separador tambin llamado a veces poder de resolucin. El poder de
resolucin es una cualidad del microscopio, y se define como la capacidad de
distinguir como imgenes distintas dos cercanas. El ojo normal no puede ver
separados dos puntos cuando su distancia es menor a una dcima de milmetro.

c) Sistema de iluminacin:
CONDENSADOR: contiene varias lentes que concentran la luz en el objeto a
estudiarse.
DIAFRAGMA: Esta junto al condensador y regula la cantidad de luz que entra
en el condensador.
FOCO o FUENTE DE LUZ: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador,
usualmente posee tambin un regulador de intensidad.

La unidad bsica de longitud que se utiliza con el microscopio de luz es el

micrmetro o micra (m).
1 mm = 1000 m
1m = 1000 nm
1m = 10000 A

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

Para manejar el microscopio de una manera correcta debe seguir ciertas

recomendaciones:

1. Antes de empezar su trabajo verifique que el objetivo de menor aumento

este en posicin de empleo y la platina completamente abajo.
2. Conecte el microscopio y encindalo.
3. Coloque la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas
metlicas y ubique la muestra en el haz de luz que sale a travs de la
platina.
4. Subir la platina, con la ayuda del tornillo macromtrico, hasta que la
muestra este lo mas cerca del lente objetivo. Esto debe hacerse mirando
directamente y no a travs del ocular.
5. Regule la apertura de los lentes oculares segn la apertura de sus ojos,
para su mayor comodidad.
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6. Mirando a travs de los oculares regule la cantidad de luz y defina la

imagen con la ayuda del micromtrico. La imagen debe quedar ntida.
7. Gire el revolver para seguir pasando a los otros lentes. No necesita bajar
la platina en ningn momento si es que consigui un buen enfoque al
inicio. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es
preferible volver a enfocar con el objetivo anterior.
8. Una vez finalizada la observacin se baja la platina y se coloca el objetivo
de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede
retirar la preparacin de la platina.
9. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento
en posicin de observacin.
10. Cubrir el microscopio.

ENFOQUE CON LENTE INMERSION

Antes de poner el aceite debe haberse enfocado en un lente de menor

aumento.

1. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio

camino.
2. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre la muestra
enfocada. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la
preparacin ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona,
pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo se
debera regresar al de menor aumento.
3. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo
de inmersin.
4. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico.
5. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y
se limpia el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel
especial.

RECOMENDACIONES GENERALES

1. Cuando traslade el microscopio hgalo siempre con las dos manos. Tome
el brazo con una mano y coloque la otra debajo de la base para
sostenerlo. Mantngalo en posicin vertical.
2. Colquelo sobre una superficie plana y slida, por lo menos a 10 cm del
borde de la mesa.
3. Antes de comenzar a usarlo revise el estado del microscopio ( le
explicar el instructor )
4. Limpie los lentes del microscopio antes y despus de usarlo con papel
especial para lentes o con un pedazo de tela sin pelusa de uso exclusivo
para esto. Nunca toque el lente con los dedos.
5. Mientras realiza la observacin mantenga los dos ojos abiertos.
6. Los lentes y la platina deben ser protegidos de materiales que pueden
ser corrosivos.
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1.1 OBJETIVOS.
Valorar la importancia del microscopio en el estudio y la
investigacin.
Conocer las partes principales de un microscopio compuesto
Aprender el uso correcto del microscopio compuesto.
1.2 PRCTICA

1.2.1 Ejercicio N 1 USO DEL MICROSCOPIO

Materiales
Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos
Papel para lentes
Gotero
Hojas de elodea.
Procedimiento
a) Fijarse que el portaobjetos y el cubreobjetos estn limpios antes
de usarlos.
b) Colocar una gota de agua sobre el portaobjetos, colocar la
muestra (hoja de elodea) y luego el cubreobjetos. Este tipo de
preparacin, se llama preparacin hmeda porque se usa un
lquido junto con la muestra.
c) Observar al microscopio bajo los tres objetivos en seco siguiendo
el mtodo de enfoque descrito en la Introduccin de esta prctica.
d) Dibujar lo observado con los lentes objetivos excepto el de
inmersin.

1.2.2 Ejercicio N 2 OBSERVACION CON LENTE INMERSIN.

Materiales
Microscopio
Placas preparadas de frotis de sangre humana
Aceite de inmersin
Papel para lentes

Procedimiento
a) Colocar en posicin el frotis sanguneo sobre la platina del microscopio.
b) Observar al microscopio siguiendo, en su totalidad, el mtodo de
enfoque hecho en el ejercicio anterior, para cuando vaya a colocar el
lente de inmersin su instructor le indicar o en caso contrario siga lo
descrito en la introduccin de esta prctica.
c) Identificar y dibujar un campo representativo del frotis sanguneo.
Asegurndose de aprender a manejar el lente de inmersin.
d) No se olvide de rotular toda clula o estructura observada.
e) Al terminar, asegurarse de limpiar bien los lentes, dejar apagado el
microscopio, enrollar el alambre y dejar el microscopio en su lugar.
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1.3 ENLACES
http://www.youtube.com/watch?v=sROLbj701ns se presentan videos
con partes del microscopio.
http://tq.educ.ar/tq03027/tipos.htm : Como usar el microscopio, tipos,
generalidades.
http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas Pgina con atlas de imgenes
obtenidas en diferentes tipos de microscopios.
www.biologia.edu.ar/microscopia/microscopia1.htm se da informacin
sobre microscopios y ptica.
http://micro.magnet.fsu.edu/primer/ind .html: Una de las mejores
pginas sobre microscopa, con amplios textos sobre los diversos tipos
de microscopios y su funcionamiento. Numerosos tutoriales en java
sobre el manejo de distintos microscopios. Se puede descargar un
completo manual sobre microscopa en formato Acrobat.
http://www.linkpublishing.com/video-transport.htm Tiene buenos de
videos de microscopio, clulas, organismos de agua, transporte

GALERIA DE IMGENES
Partes del Microscopio

Revolver y lentes objetivos Platina, objetivos y revolver

Imagen tomada de Imagen tomada de

http://www.flickr.com/photos/thaismaciel/ http://www.flickr.com/places/Mexico/Puebla/Puebla
Lentes oculares Botones macromtrico y micromtrico

Imagen tomada de Imagen tomada de

http://www.flickr.com/photos/8782449@N06/ http://www.flickr.com/photos/27690919@N04
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CELULAS SANGUINEAS

Imagen tomada de: http://www.etitudela.com/profesores/rma/celula/images/frotissanguineo.jpg

AGUA EMPOZADA
VORTICELA DIATOMEA PARAMECIO AMEBA Y EUGLENA
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LABORATORIO N 2

LA CLULA

INTRODUCCIN
El nombre de clula (del griego micros, pequeo, y skopein, ver) fue usado por
primera vez por Robert Hooke en 1665 (Robertis, 2005) cuando con la ayuda
de un microscopio miro un trozo de corcho y encontr una especie de
celdillas de panal de abejas a las que llamo clulas (Karp, 2008).
La clula es la unidad morfolgica y funcional presente en todo ser vivo. Segn
el nmero de clulas que posean los organismos estos pueden ser:
unicelulares como por ejemplo: las bacterias y protistas o pluricelulares
como los vegetales, animales y hongos.

El conocimiento de la clula fue avanzando segn avanzaba la microscopia y es

as como se va estableciendo La Teora celular que surge como producto de
estudios realizados por Schwann, Schleiden, Virchow, y tiene como principales
enunciados lo siguiente: 1) Todos los organismos estn compuestos de una o
mas clulas, 2) La clula es la unidad fisiolgica de la vida, 3) Las clulas solo
pueden originarse por divisin de una clula preexistente.

Las clulas son de dos tipos: procariotas y eucariotas. Las clulas

procariticas (figura 2.1), son estructuralmente mas simples, presentan su
material gentico concentrado en una regin determinada del citoplasma no
definida por una membrana, esta regin se denomina nucleoide, la mayora
no presenta sistema de endomembranas pero si el organelo ribosoma. Un
ejemplo de estas clulas encontramos en las bacterias.
Las clulas eucariotas pueden ser vegetales y animales. Sus caractersticas
principales son: tener un ncleo rodeado de una membrana nuclear,
citoesqueleto, sistema de endomembranas. Los protistas (Reino protista),
hongos (Reino Fungi), plantas (Reino Vegetal) y animales (Reino Animal) estn
formados de clulas eucariotas (ver figuras 2.2 y 2.3).

Figura 2.1 Esquema de una clula procariota.

Imagen tomada de http://micro-eee.blogspot.com/2008/08/estructura-celular.html

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Figura 2.2. Representacin de una clula eucariota animal

Imagen tomada de http://matragut.wordpress.com/2008/09/30/celulas-procariotas-y-

eucariotas/

Figura 2.3 Representacin de una clula eucariota vegetal.

Imagen tomada de http://matragut.wordpress.com/2008/09/30/celulas-procariotas-y-

eucariotas/

Ninguna clula puede ser considerada tpica y dentro de la gran variedad de

clulas todas comparten la presencia de tres caractersticas estructurales: 1) la
membrana plasmtica que define el lmite del material vivo, 2) la regin del
DNA que almacena la informacin gentica y 3) el citoplasma o regin
contenida dentro de la clula que no incluye la regin del DNA.

2.1 OBJETIVOS.
Reconocer las estructuras bsicas que existen en todas las clulas.
Observar al microscopio ejemplos de clulas eucariotas y procariotas.
Desarrollar algunas tcnicas bsicas de preparacin de muestras para
observacin microscpica.
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2.2 PRCTICAS
2.2.1 Ejercicio N 1 CELULAS PROCARIOTES

Bacterias:

Materiales
Cultivos de Bacterias
Portaobjetos
Cubreobjetos
Azul de metileno
Asas bacteriolgicas
Goteros
Papel filtro
Microscopio
Aceite inmersin
Mechero

Procedimiento

a) Verificar que el portaobjetos este limpio. Marcar en el extremo

izquierdo del portaobjeto, para saber con qu muestra est
trabajando. Colocar una gota pequea de agua en el centro de
cada portaobjeto.
b) Encender el mechero. Esterilizar el asa bacteriolgica en la llama
hasta que la punta se torne roja incandescente. Dejar que se
enfre retirndola de la llama, pero mantenindola junto a la
misma (en el aire), sin que tope nada.
c) Con el asa fra y estril, transferir una cantidad pequea de cada
cultivo bacteriano al portaobjeto, mezclando bien con la gota de
agua y distribuir sobre el portaobjeto de manera que forme una
pelcula delgada (frotis).
d) Pasar el portaobjetos entre 4 y 6 veces por la llama para fijar las
clulas al vidrio.
e) Cuando est del todo fro, cubrir completamente el frotis con azul
de metileno. Esperar un minuto y lavar suavemente con agua
corriente.
f) Secar cuidadosamente, mediante presin, con papel filtro.
g) Observar al microscopio bajo el lente de inmersin (100X).
h) Hacer dibujos de lo que observa, destacando la forma de
agrupacin y tamao.

2.2.2 Ejercicio N 2 CELULAS EUCARIOTAS.

REINO PROTISTA.

Materiales
Agua empozada
Aceite de inmersin
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Portaobjetos
Cubreobjetos
Papel para lentes

Procedimiento

a) Colocar sobre un portaobjetos limpio una gota de agua empozada y

tapar la preparacin con un cubreobjetos de manera que no queden
burbujas de aire.
b) No se olvide de seguir el mtodo de enfoque aprendido en la prctica
anterior.
c) Hacer grficos que indiquen la morfologa y las estructuras observadas.
Ver galera de imgenes.

REINO VEGETAL.

Materiales
Muestra de Elodea y/o epitelio de cebolla
dH2O (agua destilada)
Pinzas
Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Colorante (azul de metileno, gimsa o cristal violeta)

Procedimiento

a) Remover una hoja joven de la punta de una planta de Elodea y/o epitelio
de cebolla, sobre la elodea poner una gota de agua y un cubreobjetos.
Sobre la hoja de cebolla colocar una gota de colorante y el cubreobjetos.
b) Observar al microscopio. Localizar ncleo, citoplasma, pared celular, etc.
c) Dibujar lo observado, y poner nombre a toda estructura observada.

Ver galera de imgenes.

REINO ANIMAL. Epitelio bucal

Materiales
Portaobjetos
Cubreobjetos
Palillos de dientes
dH2O
Azul de metileno
Papel filtro
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Procedimiento

a) Poner una gota de azul de metileno en el centro de un portaobjetos

limpio.
b) Con la ayuda de un palillo de dientes, raspar ligeramente el interior de su
mejilla.
c) Colocar esta muestra sobre la gota del colorante. Descartar el palillo.
d) Cubrir con un cubreobjetos y observar al microscopio.
e) Rotular las estructuras que pudieron ser observadas.
f) Al final del trabajo hacer un cuadro en el que enumere los
organelos observados en cada clula, diferencias entre clulas
vegetales , animales y entre clulas procariotas y eucariotas.
Esta informacin debe salir solamente de sus observaciones.
Ver galera de imgenes.
2.3 ENLACES
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/Temas/tema_1.htm#Objetivos%
20previstos tiene fotos e informacin resumida sobre todo lo
concerniente a la clula vegetal.
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/Temas/tema_1.htm Temas
varios de biologa sobre todo clulas.
http://www.biology.arizona.edu/cell_bio/tutorials/pev/main.html
Informacin sobre clulas, clasificacin, fotografas y esquemas.
GALERIA DE IMGENES
CELULAS PROCARIOTAS
TIPOS DE BACTERIAS

Imagen tomada de http://www.dialogica.com.ar/medline/2007/09/la-era-de-las-

bacterias.html
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Ejemplos de Bacterias vistas por el microscopio.

E. coli B. subtilis

Imagen izquierda tomada de http://www.flickr.com/photos/22235036@N05/archives/date-

posted/2008/01/18/
Imagen derecha tomada de faculty.mc3.edu/jearl/ML/ml-5-2.htm
CELULAS EUCARIOTAS
Reino protista
Paramecio

Imagen izquierda tomada de http://www.flickr.com/photos/tags/microscope/clusters/

Imagen derecha tomada de www.unad.edu.co/curso_biologia/protozoos.htm
Ameba

Imagen izquierda tomada de www.biologianet.galeon.com/webs/mundo.html Imagen derecha

tomada de: www.aldia-iq.com/.../Autora:Nicole Mitidieri
 19

Ejemplos de protozoarios presentes en agua empozada.

Vorticella Diatomeas Paramecio

Imagen tomada de:http://plantphys.info/organismal/lechtml/images/vorticella.jpg

Reino Vegetal
Elodea
a) Planta de Elodea b) Clulas de hoja de Elodea

Imagen izquierda tomada de www.ppws.vt.edu/scott/weed_id/eldde.htm

Imagen derecha tomada de http://grandpacliff.com/Trees/AutLeaves-8.htm

Reino Animal
Epitelio de la boca
a) Clulas epiteliales de boca sin tincin b) Epitelio de boca con tincin

Imagen a tomada de inakiresa.wordpress.com/2007/11/ Imagen b tomada de

www.papquick.com/es_galeria.html
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LABORATORIO N 3

MACROMOLCULAS

INTRODUCCIN

Dentro de la clula existe varios tipos de molculas, las mas abundantes son
las llamadas macromolculas que estn formadas de docenas hasta millones
de carbonos. Su funcin es formar la estructura de la clula y ejecutar tareas
con gran precisin otorgando a los organismos la propiedad de la vida.
Estas grandes molculas se pueden dividir en cuatro grupos: carbohidratos,
protenas, lpidos y cidos nucleicos (ver figura 3.1).

Figura 3.1 Molculas existentes en la clula.

Imagentomadadehttp://www.cancerquest.org/printfriendly.cfm?printsub=20&lang=spanis
h
Los carbohidratos, glcidos, hidratos de carbono o sacridos, estn formados
de carbono, hidrgeno y oxgeno. Son la principal fuente de energa que se
almacena y consume, son solubles en agua y forma parte de ciertas
estructuras biolgicas como la pared de las clulas vegetales.
Se clasifican en monosacridos, disacridos, oligosacridos y polisacridos. Los
monosacridos son los ms simples, estn formados por una sola molcula y
no pueden ser hidrolizados en molculas ms pequeas, ejemplo la glucosa.
Los disacridos esta formados por dos monosacridos unidos por enlaces
covalentes llamado enlace glucosdico, ejemplo la sacarosa. Los
oligosacridos estn formados por tres o hasta nueve molculas de
monosacridos, normalmente se une a protenas formando las glicoprotenas,
ejemplo rafinosa. Los polisacridos son cadenas ramificadas o no de ms de
diez monosacridos, ejemplo almidn, glucgeno, celulosa y quitina.
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Los lpidos, formados por carbono e hidrogeno en menor cantidad oxigeno y

tambin pueden tener fsforo, azufre y nitrgeno. Cumplen varias funciones
como reserva de energa (triglicridos), funcin reguladora (esteroides) y
funcin estructural (fosfolpidos de bicapa).
La mayora de lpidos son anfipticos, tienen una estructura polar o hidroflica y
una gran parte apolar o hidrofbica.
Los lpidos importantes en la funcin celular son: grasas, esteroides y
fosfolpidos.
Las grasas formadas de tres cidos grasos y glicerol; los esteroides formado de
un esqueleto de cuatro anillos de hidrocarburos, y los fosfolpidos formado de
dos cidos grasos y un glicerol.

Las protenas, Son largas cadenas formadas de la unin de aminocidos,

determinan las actividades estructurales y funcionales de los sistemas celulares,
forman gran parte de la estructura celular en las membranas y organelas y
adems, las protenas actan como catalizadores biolgicos (enzimas), regulan
funciones celulares y tisulares (hormonas), combaten enfermedades infecciosas
(anticuerpos), participan en la contraccin de msculos (actina y miosina).
Las protenas son molculas gigantes, tremendamente complejas formadas de
carbono, hidrgeno, oxgeno y tambin contienen nitrgeno. Tienen un rango
amplio de pesos moleculares.

Los cidos nucleicos, Son macromolculas formadas por monmeros

llamados nucletidos unidos entre si por medio de enlaces fosfodiester.
Cada nucletido consiste de tres unidades: un azcar, un fosfato y una base
nitrogenada.
La funcin principal es transmitir informacin a otras partes de la clula y son
responsables de la herencia.
Existe dos tipos principales cidos nucleicos: ADN (localizado en el ncleo y en
el citoplasma de determinadas clulas) y ARN (localizado en el nucleolo y en el
citoplasma). El ADN es capaz de replicarse por si mismo. El ARN es utilizado por
los organismos para leer la informacin codificada por el ADN y usarla para
hacer protenas.
Ver galera de imgenes.

3.1 OBJETIVOS.
Analizar la importancia de las macromolculas en la clula.
Identificar cualitativamente algunas de las macromolculas existentes en
la clula.

3.2 PRCTICAS

3.2.1 Ejercicio N 1 Carbohidratos

Materiales
Reactivo de Benedict
Tubos de ensayo
Morteros
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Papas
Bulbos de cebolla
dH2O
Bao mara
Solucin de azcar
Lugol
Caja petri

Procedimiento A
Prueba de Benedict con cebolla
La prueba de Benedict es una prueba para azcares reductores y permite
probar la presencia o ausencia de los mismos. Se basa en que los
monosacridos y algunos disacridos tienen un grupo aldehdo libre y reducen
fcilmente los agentes oxidantes. En esta reaccin el grupo aldehdo del azcar
se oxida en solucin salina y el agente oxidante se reduce.

H O
Benedict + C=O --------- Benedict + R -----C----OH
Forma Azcar Forma Azcar
Oxidada reductor reducida cido

Este ejercicio probar la presencia o ausencia de azcares reductores en la

cebolla y en la papa.

a) Marcar tres tubos de ensayo a 1cm y 2cms desde la base. Identificar

como A, B, C.
b) En un mortero, macerar un pequeo pedazo de cebolla y recoger el
sumo resultante en el tubo A hasta la marca de 1cm.
c) Macere una papa y su sumo ponga en el tubo B hasta la marca de 1 cm.
d) En el tubo C poner agua destilada hasta la marca de 1 cm.
e) Agregar a los tres tubos (A, B, C) el reactivo de Benedict hasta llegar a la
marca de 2 cms. y mezclar bien.
f) Coloque los tres tubos de ensao en un bao de agua hirviendo por tres
minutos.
g) Saque los tubos del agua y observe los cambios de color. El cambio de
azul claro a naranja o marrn indica abundancia de azcares reductores.
Un cambio a verde indica la presencia de una pequea cantidad d azcar
reductor.
h) Dibuje sus observaciones.

3.2.2 Ejercicio N 2 Protenas

Materiales
Tubos de ensayo
Albmina de huevo 1%
dH2O
Solucin de azcar o Almidn 1%
CuSO4 0.5% e NaOH concentrado
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Procedimiento
Prueba de Biuret
Esta prueba se fundamenta en la interaccin entre los iones de cobre del
reactivo de Biuret y los grupos amino de los enlaces peptdico de los
aminocidos que forman las protenas. Al haber reaccin, el color cambia de
azul a violeta.

a) Marque tres tubos de ensao A, B, C.

b) Cada tubo marca a 3cms y 5cms desde la base del tubo.
c) Al tubo A, poner la solucin de albmina hasta la marca de 3cms. En el
tubo B, poner el agua hasta la marca de 3cms y en el C la solucin de
almidn o la solucin de azcar.
d) Aadir NaOH concentrado hasta la segunda marca de cada tubo y
mezcle. El NaOH es peligroso, quema fuertemente, por lo tanto,
manjelo con cuidado. Si se derrama accidentalmente sobre la piel o
ropa, lave inmediatamente en abundante agua fra.
e) Aadir cinco gotas de sulfato de cobre al 0.5% y mezclar.
f) Poner los tubos sobre una superficie blanca. Observar el cambio de
color. En la presencia de protena, la solucin se volver violeta.
g) Registre sus observaciones.

3.2.3 Ejercicio N 3 Lpidos

Materiales
Sudn
Pinzas
Papel filtro
Pipetas o goteros
Aceite de mesa
Crema de leche
Albmina de huevo 1%
dH2O
Etanol
Caja Petri
Procedimiento

Las pruebas con SUDAN III se basan en la deteccin de grupos

hidrocarbonados libres despus de la condensacin entre el glicerol y los
cidos grasos en la formacin de un lpido. El tinte coloreado y los grupos
hidrocarbonados son no polares y se pegan fuertemente en su ambiente polar,
llevando a cabo una interaccin hidrofbica.
En presencia de lpidos el SUDAN da una coloracin naranja.

a) Tome un crculo de papel filtro

b) Ponga nmeros del 1 al 5 en los bordes del crculo de manera
que queden distribuidos equitativamente y bajo ellos dibuje
crculos pequeos de 1cm. De dimetro ms o menos.
 24

c) Con una pipeta o gotero coloque una gota de los siguientes

elementos: en el crculo 1 aceite, en el 2 crema de leche, en el
3 albmina, en el 4 agua destilada y en el 5 etanol. Procure
que las gotas no se salgan de los crculos dibujados.
d) Deje secar.
e) Ponga el papel filtro dentro de una caja Petri y vierta sudan
hasta cubrir el papel filtro. Espere tres minutos.
f) Con una pinza tome el papel filtro y enjuague bajo la llave de
agua.
g) Evale la intensidad de tincin naranja: 0 no hay color,1
naranja plido y 2 naranja definido.
h) Establezca sus resultados y dibuje sus observaciones

3.2.4 Ejercicio N 4 Estructura de los cidos Nucleicos

Materiales

Para este ejercicio cada grupo de trabajo preparar piezas que representen los
monmeros de los cidos nucleicos. Las piezas deben acoplarse para as crear
cadenas de ADN y ARN y deben respetar las principales reglas qumicas de
acoplamiento.

3.3 ENLACES
http://rincones.educarex.es/ccnn/index.php?option=com_content&task=
view&id=219&Itemid=237 recurso para entender con explicaciones
sencillas, juegos, preguntas y estructuras tridimensionales las
biomoleculas, sus interacciones y funciones.
http://gened.emc.maricopa.edu/bio/bio181/BIOBK/BioBookTOC.html
Curso general sobre biologa.
www.apinguela.com/enlacesmundo/.../biologia.htm Bioelementos,
biomolculas, conceptos, clasificacin, explicaciones sencillas.
GALERIA DE IMGENES
CARBOHIDRATOS.

MONOSACARIDOS. Ejemplos:
 25

Imgenes tomadas de
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_01_03.htm

ENLACE GLUCOSIDICO.

Imagen tomada de
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_01_03.htm

POLISACARIDO. Ejemplo:

Imagen tomada de
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_01_03.htm
 26

PROTENAS

ENLACE PEPTIDICO. ESTRUCTURA DE UN AMINOCIDO

Imagen izquierda tomada de http://biomodel.uah.es/en/model1/contents.htm Imagen derecha

tomada de : http://preupsubiologia.googlpages.com/2preupsubiologi.

NIVELES DE ORGANIZACIN DE PROTENAS.

Imagen tomada de http://biologia-jct.iespana.es/curtis/libro/c3c.htm

LIPIDOS
Carcter anfiptico

Imagen tomada de www.apinguela.com/enlacesmundo/.../biologia.htm

 27

Estructura de triglicridos

Imagen tomada de http://cienciasbiologiafisicaquimica.blogspot.com/2008/01/fotosntesis.html

Esteroides

Imagen tomada de
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_01_10.htm

ACIDOS NUCLEICOS
Nucletido

Imagen tomada de:

http://ciam.ucol.mx/villa/materias/RMV/biologia%20I/apuntes/1a%20paracial/mole%20orga/biomolecula
.htm
 28

Acido desoxiribonucleico (ADN) y cido ribonucleico (ARN)

Imagen tomada de http://www.maph49.galeon.com/arn/rnamol.html

 29

LABORATORIO N 4

MEMBRANAS BIOLGICAS Y PROCESOS DE TRANSPORTE.

INTRODUCCIN

La presencia de membrana celular en la clula permite que se cree dos tipos de

compartimentos; el intracelular y el extracelular. Cada uno tiene
concentraciones moleculares y cargas elctricas diferentes, lo que lleva al
intercambio de molculas entre los dos compartimentos.

El paso de las molculas y de iones se lo hace a travs de la membrana celular

que selecciona que entra o sale y esto depende de la carga, el tamao y la
concentracin de molculas. Por esto se dice que la membrana es selectiva y
semipermeable.
Hay dos tipos de transporte para el paso de molculas, el transporte activo y el
transporte pasivo.

El transporte pasivo es un proceso que no requiere de energa se hace desde

una zona de concentracin de solutos elevada a otra de concentracin de
solutos baja, por esto se dice que es a favor de un gradiente de concentracin.
Dentro de este tipo tenemos la difusin simple y la facilitada (figura 4.1).

El transporte activo ocurre en contra del gradiente de concentracin, y por

lo tanto, necesita energa (ATP). Las protenas transportadoras que intervienen
se llaman bombas. (figura 4.1).

Figura. 4.1: Diferentes tipos de transporte a travs de la membrana plasmtica.

Imagen tomada de http://www.educarchile.cl/psu/estudiantes/Contenidos.

 30

Dentro de las molculas que atraviesan la membrana con facilidad, est el

agua. El agua (solvente universal) es muy importante para la clula, se
transporta a travs de la membrana plasmtica por un mecanismo llamado
osmosis (mirar galera de imgenes), que es un tipo de difusin hecha solo
por molculas de agua. Este movimiento esta determinado por la presin
osmtica, que es producida por la diferencia de concentraciones de solutos a
ambos lados de la membrana. Va haber movimiento neto de agua hacia dentro
o fuera de la clula dependiendo si el medio donde se encuentra la clula es
hipotnico o hipertnico.

Se llama hipotnica cundo en un medio, el total de la concentracin molar es

menor que otra. O cuando la concentracin interna celular es menor. (figura
4.2)
Se llama hipertnica cuando la concentracin molar del medio es mayor que
otro (figura 4.2)
Se llama Isotnica cuando dos medios tienen la misma concentracin de
solutos disueltos. (figura 4.2)

Figura 4.2. Esquemas representativos de soluciones hipotonicas, isotonicas e

hipertonicas

Imagen tomada de http://www.maph49.galeon.com/memb1/solutions.html

El flujo de agua y de otras substancias puede dar el cambio de morfologa

celular presentando diferentes tipos de fenmenos.

Cuando en el interior de la clula hay mayor concentracin de solutos

(hipertnica) en comparacin al medio donde esta inmersa, va ha existir el paso
de agua hacia el interior para tratar de igualar la concentracin, ejerciendo ms
presin del agua sobre la membrana. A esta gran presin dentro de la clula se
lo conoce como Turgencia. El movimiento neto del agua termina cuando se
alcanza el equilibrio o la clula estalla.

En el caso de los vegetales la clula soporta esta presin por la presencia de la

pared celular, adems que le permite ser rgida y, por lo tanto, determinar la
forma de la planta.

Cuando la clula no presenta la proteccin de una pared celular rgida el agua

entra sin control al interior, la clula estalla al no soportar tanta presin. A este
 31

fenmeno se lo conoce como Plasmptisis, cuando este fenmeno ocurre en

clulas sanguneas se llama hemlisis.

Se habla de Plasmlisis cuando una clula vegetal es sometida en un medio

hipertnico, entonces el agua empieza a salir del citoplasma hacia el exterior de
la clula quedando la membrana y el citoplasma encogido, pero la forma
inalterada debido a la proteccin de la pared. En el caso de clulas animales,
protistas y bacterias (stas ltimas tambin protegidas por la pared celular)
cuando son sometidas al mismo medio hipertnico, se habla de crenacin
cuando el agua se difunde desde el citoplasma hacia el exterior y se encoge.
Existen varios autores que se refieren nicamente al trmino plasmlisis para
nombrar al efecto de encogimiento por prdida excesiva de agua en cualquier
tipo de clula.
Ver galera de imgenes.

4.1 OBJETIVOS.

Comprobar los transportes a travs de la membrana celular.

Demostrar la importancia que tiene la concentracin de las soluciones
sobre las clulas.
Diferenciar los fenmenos de difusin, smosis, turgencia, plasmlisis,
plasmptisis y transporte activo.

4.2 PRCTICAS

4.2.1 Ejercicio N 1 Difusin

Materiales
Recipiente pequeo de vidrio.
Rojo congo
dH2O

Procedimiento
a) Llenar de agua hasta la mitad un recipiente de vidrio pequeo. Dejar
caer en su interior de quince a veinte gotas de tinte rojo congo. No
mezclar.
b) Observar lo que sucede media hora .
c) Graficar lo observado.
4.2.2 Ejercicio N 2 smosis y Dilisis

Materiales
Membrana de dilisis
Cuerda o hilo
Vasos de precipitacin
Solucin de almidn
Lugol
dH20
 32

Hay que tomar en cuenta para este experimento que el lugol detecta la
presencia de almidn colorendolo de color morado obscuro hasta negro.
Procedimiento
a) Recortar 6 cms. de membrana de dilisis.
b) Remojar en agua destilada, antes de usarla, por unos diez minutos.
c) Amarrar fuertemente uno de los extremos.
d) Abrir el otro extremo y colocar solucin de almidn.
e) Cerrar el extremo restante fuertemente. Tomar la forma de un
caramelo.
f) Meter este caramelo en un vaso de precipitados que tenga agua con
lugol. Lo suficiente que cubra el caramelo.
g) Dejar 10 minutos y verificar lo que pasa.
h) Dibujar sus resultados.

4.2.3 Ejercicio N 3 Turgencia, Plasmlisis y Plasmptisis.

Materiales
Lanceta
Alcohol antisptico
Solucin de NaCl al 0.9% (suero fisiolgico) y 5%
Portaobjetos
Cubreobjetos
Microscopios
Procedimiento A

a) Marque cuatro portaobjetos como: 1, 2, 3,4.

b) Obtener sangre de la yema del dedo, usando una lanceta estril.
c) Sobre cada portaobjetos ponga una gota de sangre.
En el portaobjeto 1 coloque el cubreobjeto. En el portaobjeto 2 coloque
una gota de NaCl al 0.9% (suero fisiolgico) y el cubreobjeto. En el
portaobjeto 3 aada una gota de NaCl al 5% y un cubreobjeto. En el
portaobjeto 4 aada una gota de agua destilada y cubreobjeto.
d) Observe todas las placas con lente de 100X y compare con las grficas
de galera de imgenes para identificar los diferentes fenmenos.
e) Dibujar en detalle a los glbulos rojos con los diferentes cambios.

Procedimiento B (para trabajar en casa)

a) Cinco das antes de la prctica, poner dos huevos de codorniz en jugo
de limn o vinagre como se ve en la figura 4.3. El jugo sacara la cscara
externa dura dejando la membrana interna. Este proceso demora de 2h.
a 12h.
 33

Figura 4.3 A. Huevo de codorniz en jugo de limn. B. Huevo de codorniz sin

cscara externa.

A B

Imagen derecha tomada de

http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/veterinaria/2006359/lecciones/cap5/16.htm

b) Inmediatamente luego de descalcificar (sacar la cscara externa), poner

un huevo en un recipiente con miel y al otro en un recipiente con agua.
Mirar figura 4.4

Fig. 4.4 A. huevo en miel. B huevo en agua.

A B

c) Dejarlos por el tiempo restante (ms o menos 4 das).

d) Traerlos a clase para discutir sobre los resultados.
e) Dibujar los resultados

4.2.4 Ejercicio N 4 Transporte Activo

Materiales
Matraces o vasos de precipitados
Levadura
Carbonato de sodio (Na2CO3) 0.75%
Plancha trmica
Rojo neutro 0.02%
En este ejercicio, se analizar este fenmeno en la levadura, un hongo unicelular. La
sustancia a ser transportada es el ROJO NEUTRO, un tinte que es rojo en solucin
cida y amarillo en solucin bsica. Se utilizar Carbonato de sodio (Na2CO3) para
hacer bsica a la solucin inicialmente. Las condiciones en el interior de las clulas
vivas son relativamente cidas. Las clulas en el matraz A son hervidas y por lo tanto
 34

sus membranas son permeables a todas las molculas. En el matraz B estn vivas y
sus membranas pueden ser permeables o impermeables al colorante.

Procedimiento

a) Rotule dos matraces o vasos de precipitados como A y B. Para cada uno

pese 2gr. de levadura. Aada luego 10 ml de agua destilada tibia a cada
matraz y espere por 10 minutos.
b) En el matraz A ponga 20 ml de Na2CO3 0.75% y mezcle bien. Haga
hervir esta mezcla por 2 minutos y djela enfriar (las clulas estn
muertas). Aada 20 ml de rojo neutro 0.02%, cuando enfre.
c) En el matraz B ponga 25 ml de Na2CO3 0.75% y 25 ml de rojo neutro
0.02%. Agite el frasco y observe la diferencia de color con el matraz A.
d) Dibuje sus observaciones

4.3 ENLACES
http://preupsubiologia.googlepages.com/celula existe informacin
escrita y de imgenes con respecto a la clula y su fisiologa.
http://www.linkpublishing.com/video-transport.htm videos sobre osmosis
y los efectos de las concentraciones de sustancias sobre los glbulos
rojos y elodea.
http://herb.biol.uregina.ca/liu/bio/idb.shtml Motor de bsqueda de
informacin relacionada con las plantas en la red. Contiene numerosos
enlaces.
http://www.biologia.edu.ar/animaciones/temas/ciclos/osmosis.html
Pgina en espaol de la Universidad Nacional del Noreste, en Argentina,
que nos muestra una animacin sobre los procesos de smosis adems
de una serie de hipertexto sobre el rea de biologa.

GALERIA DE IMGENES
Difusin, dilisis y osmosis.

Imagen tomada de http://www.h2onew.com

 35

Glbulos rojos: Plasmolisis (crenacin), turgencia, hemlisis (plasmoptisis)

Turgente
Medio Isotnico Medio Hipertnico Medio Hipotnico

Normal Plasmlisis/ Crenacin Plasmoptisis/ Hemlisis

Imagen tomada de http//:www.vi.cl
Clulas vegetales

Imagen tomada de http//:www.vi.cl

 36

LABORATORIO N 5

ACCION ENZIMTICA

INTRODUCCIN
Por regla general, todas las reacciones bioqumicas estn reguladas por
enzimas, que son catalizadores biolgicos. Un catalizador biolgico, es una
sustancia que acelera la reaccin qumica sin modificarse o consumirse,
haciendo que pueda actuar en muchas reacciones individuales. Sin embargo s
se puede ir deteriorando (entropa) y debe ser reemplazada eventualmente. Las
enzimas para participar en una reaccin no necesitan estar en grandes
cantidades.
Las enzimas (E) tienen uno o mas lugares denominados sitios activos, los
cuales se une al sustrato (S), o sea la sustancia sobre la que acta la enzima.
(Ver grficos en galera de imgenes). Cuando existe el acoplamiento de la
enzima ms el sustrato se forma el complejo enzima sustrato (ES) que es un
paso intermedio necesario para formar y romper enlaces. Como paso final se
dar producto (P) ms enzima (E). Este tipo de reaccin es generalmente
reversible y podemos expresarla de la siguiente manera:

E+S [ES] E+P

Ver grficos en galera de imgenes.

En la unin del sustrato al sitio activo de la enzima participan fuerzas qumicas

no covalentes (uniones inicas, puentes de hidrgeno, fuerzas de van der
waals), con un radio de accin muy limitado y es por esto que el complejo (ES)
se da slo si son complementarios.

Una caracterstica muy importante es que cada enzima es especfica para su

sustrato y factores tales como la temperatura y el PH pueden afectar su
actividad.
Aunque la gran mayora de las enzimas so protenas algunas contienen
elementos no proteicos (enzimas conjugados) llamados cofactores, que
pueden ser inorgnicos (metales) u orgnicos (coenzimas).

La presencia de enzimas permite a la clula utilizar eficientemente metabolitos

y sustancias comestibles. Al mismo tiempo, las enzimas pueden limitar las
capacidades de la clula, porque la clula puede llevar a cabo solamente
aquellas reacciones para las que tiene enzimas.

Algunos sistemas enzimticos son responsables directos del rompimiento de

molculas para producir energa y productos de desecho. A este tipo de
reacciones se llama exergnico, porque, a pesar de que la mayora de
reacciones involucradas requieren energa, al final se producen mayor cantidad
de energa de la que fue utilizada por el sistema. Ejemplo:
 37

Rompimiento:
Sistema enzimtico-aerobio
Monosacridos --------------------------------- > CO2 +H2O + energa
Respiracin

Por otro lado, otros sistemas enzimticos son responsables de procesos

biosintticos en la clula, en estos procesos usan energa. Estos son por entero
procesos endergnicos. Ejemplo:

Sntesis:
Sistema enzimtico- polimerasas
Monosacridos ---------------------------------------> polisacridos

Sin embargo de esto, es importante anotar que las enzimas no determinan que
sean reacciones exergnicas (termodinmicamentefavorables) o endergnicas
(termodinmicamente desfavorables).

5.1 OBJETIVOS.

Entender los principios bsicos de la actividad enzimtica.

Poner de manifiesto la presencia de enzimas en tejidos animales y
vegetales
Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de las enzimas.
Relacionar la accin enzimtica con el tiempo.

5.2 PRCTICAS

5.2.1 Ejercicio N 1 Actividad enzimtica y tiempo

Materiales
Papa
Tubos de ensayo
Solucin de catecol al 0.1% y/o 1%, preparadas poco minutos antes del
ejercicio.
Bao Mara.

La catecolasa (catecol oxidasa), enzima obtenida de la papa, es una enzima de

tipo oxidasa, cataliza la oxidacin del catecol. El catecol es incoloro en solucin,
mientras que el cido cis,cis mucnico es negro. Entre ms catecol convertido
a cido cis,cis mucnico, ms oscura se torna la solucin. Reacciones de este
tipo son las responsables de pigmentaciones negras en prcticamente todas las
formas de vida. Ver grficos en galera de imgenes.

Procedimiento A
a) Rotule 3 tubos de ensayo: 1a, 1b y 1c, ponga tambin sus iniciales.
b) Marque a 1cm y 2cms desde la base del tubo.
c) Llene cada tubo como sigue:
Tubo 1a: 1 cm de catecol oxidasa (catecolasa)
 38

1 cm de solucin de catecol al 1%
Tubo 1b: 1 cm de catecol oxidasa (catecolasa)
1 cm de agua destilada
Tubo 1c: 1 cm de agua destilada
1 cm de solucin de catecol al 1%
d) Mezcle el contenido de los tubos y anote el color de la solucin de cada
tubo en el tiempo 0 en la Tabla 5.2.1 B.
e) Coloque los tubos en Bao Mara a 38 C.
f) Examine el color de los tubos a los 5, 10 y 15 minutos. Antelo en la
Tabla 5.2.1 B.
A los 15 minutos, el catecol debe estar totalmente oxidado. Por lo tanto el
color del tubo 1a ser considerado como 5 para intensidad de color en
una escala de 0 a 5. Los tubos 1b y 1c, sern considerados 0.

TABLA 5.2.1 B
Tiempo Tubo 1 Tubo 1b Tubo 1c
0
5
10
15

5.2.2 Ejercicio N2 Efecto de la temperatura en la actividad

enzimtica.
Materiales:
Tubos de ensayo
Catecol al 1%
Gradillas
Hielo
Bao mara
Plancha trmica
Papa
Vaso de precipitados

Procedimiento A
a) Llene hasta la mitad un vaso de precipitacin de 400 ml con agua
corriente y pngalo a calentar hasta que hierva.
b) Llene otro vaso de precipitacin de 400 ml con 150 ml de agua corriente
y aada hielo.
c) Llene hasta la mitad un tercer vaso de precipitacin de 400 ml,
mantngalo a temperatura ambiente.
d) Caliente un bao mara a 38C.
e) Obtenga 4 tubos de ensayo y rotlelos 3a, 3b, 3c y 3d.
f) Marque a 1cm y 2 cms. desde la base.
g) Llene cada tubo hasta la marca de 1cm con catecol oxidasa.
h) Colquelos as:
o Tubo3a: en el vaso de precipitacin que contiene hielo.
 39

o Tubo3b: en el vaso de precipitacin que contiene agua a

temperatura ambiente.
o Tubo 3c: en bao Mara a 38C
o Tubo3d: en el vaso de precipitacin que tiene agua hirviendo.
o Mida las temperaturas y regstralas en la Tabla 5.2.2 B

i) Deje a los tubos 5 minutos en sus respectivas temperaturas.

Retire los tubos y aada catecol en cada tubo hasta la marca de dos
centmetros. Agtelos anote la hora, este es el tiempo 0. Registre la
intensidad de color en cada tubo en la Tabla 5.2.2B. Regrese
inmediatamente a los tubos a sus respectivas temperaturas.
j) Agite continuamente los tubos por 5 minutos. Registre la intensidad de
color a los 5, 10 y 15 minutos despus de aadir el catecol.

Tabla 5.2.2 B
Tiempo Tubo 3 Tubo 3b Tubo 3c Tubo 3d
(minutos) --------C ----------C 60C -----------C
0
5
10
15

5.2.3 Ejercicio N 3 Consecuencia de la actividad enzimtica

Materiales
Goteros o Pipetas Pasteur
Corazn de pollo
Hgado de pollo
Mortero
Perxido de Hidrgeno al 1%
cido sulfrico
Procedimiento A. Presencia de enzimas en rganos de animales.
Reconocimiento de catalasa.
La catalasa es una enzima (Ver grficos en galera de imgenes.) que se
encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales.
La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el perxido de
hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada) y la catalasa, lo descompone en agua y
oxgeno.
La reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la siguiente:

a) Colocar un pedazo pequeo de hgado de pollo en un mortero.

b) Macerar, estas son sus preparaciones de catalasa.
c) Proceder de igual manera con un pedazo de corazn de pollo.
 40

d) Marcar dos tubos de ensayo; uno con CH, de catalasa de hgado y el otro
CC, catalasa de corazn. Adems sealar los tubos hasta los 2cms desde
la base.
e) Colocar en cada tubo las preparaciones correspondientes.
f) Aadir, en cada tubo, 2.5 ml de perxido de hidrgeno al 1% (agua
oxigenada).
g) Dibuje los resultados observados.

5.3 ENLACES
http://www.ehu.es/biomoleculas/ENZ/ENZ.htm Armas qumicas: su
accin
http://www.ehu.es/zorrilla/juanma/ARMAS/Armamento.pdf tiene
Conceptos, clases, importancia metablica y ms sobre enzimas.
http://enzimasnelly.blogspot.com/ informacin de enzimas y tecnologa.

GALERIA DE IMGENES

Interaccin enzima sustrato

Imagen tomada de Comunidad de Madrid personales.ya.com/

Presencia de sitios activos en la clula.

Imagen tomada de www.proteus.1afm.com/biologia/Oligom66

 41

Reaccin del catecol y la catecol oxidasa

Imagen tomada de www.adinstruments.com/solutions/images

Acido cis, cis, mucnico es un metabolito del benceno

Imagen tomada de http://it.wikipedia.org/wiki/Acido_muconico

Estructura de la catalasa

Imagen tomada de http://enciclopedia.us.es/index.php/Catalasa

 42

LABORATORIO N 6

DIVISION CELULAR: MITOSIS

INTRODUCCIN

El proceso por el cual se originan nuevas clulas a partir de otras ya existentes

se llama divisin celular o reproduccin celular. Este es un proceso
necesario para: remplazar las clulas muertas, para colaborar con el
crecimiento del organismo del que forman parte y es la base para la
reproduccin de los organismos a travs de la formacin de gametos.
Cada clula en etapa de divisin se denomina clula madre, y sus
descendientes se llaman clulas hijas. Se les llama as porque la clula madre
transmite copias de su informacin gentica a sus clulas hijas, posteriormente
las clulas hijas se convertirn en clulas madres y volvern a pasar la
informacin gentica.

El crecimiento y divisin celular se llama CICLO CELULAR. Entonces el ciclo

celular esta formado de dos fases importantes: la fase M y la INTERFASE-

La fase M incluye: 1) mitosis o meiosis y 2) citocinesis que es la divisin del

citoplasma para dar clulas hijas. La clula en fase M pasa un corto tiempo de
todo el ciclo.(fig. 6.1)

Figura N. 6.1 Ciclo celular

INTERFASE: esta formado por tres estadios; G1, generalmente es una etapa
larga del ciclo celular (40% mas o menos) durante este momento, la clula
crece, su contenido de ADN es equivalente a 2n, las molculas y estructuras
citoplasmticas aumentan en nmero y hacia el final se aumenta la actividad de
 43

las enzimas que se requerirn para la fase siguiente y alcanza un punto R

(restriccin) que es el primer punto de control del ciclo celular, algunas clulas
dentro de este periodo antes del punto R entran en latencia temporal o
permanente llamado G0. En el estadio S o de sntesis se realiza la duplicacin
del ADN (4n) y de histonas, existe aqu un mecanismo de control para que
ocurra una sola vez esta sntesis.
Una vez que se complet el estadio S comienza la G2, y es donde evala si la
clula puede entrar en divisin y existe un aumento en la sntesis de protenas.
Se ensamblan las estructuras relacionadas con la mitosis y citocinesis. El fin de
G2 es marcado por el comienzo de la fase M. (ver figura 6.1)
Dijimos que en la fase M ocurre el proceso de mitosis o meiosis. En esta
prctica hablaremos de mitosis.

MITOSIS: es un proceso de divisin celular, que ocurre en todas las clulas

excepto las germinales y que da como resultado dos clulas hijas con el mismo
nmero de cromosomas de la clula madre. La mitosis generalmente se divide
en cinco etapas:
1. Profase: La cromatina se condensa para formar cromosomas. Los
cromosomas estn formados de dos cromtidas unidos por un
centrmero con cinetocoro. Empieza a organizarse el huso mittico. El
citoesqueleto, el nucleolo y la envoltura nuclear desaparecen.
2. Prometafase: Los microtbulos del huso mittico se fijan a l cinetocoro
de los cromosomas, los cromosomas se desplazan hacia el plano
ecuatorial del huso.
3. Metafase: los cromosomas se alinean en el plano ecuatorial de la clula.
4. Anafase: Separacin de las cromtidas hermanas y desde este momento
se les considera a cada una como un cromosoma independiente. Los
cromosomas se mueven hacia los polos opuestos del huso. Este perodo
termina cuando todos los cromosomas han llegado a los polos. La
citocinesis o divisin del citoplasma puede comenzar en este perodo.
5. Telofase: los cromosomas se agrupan en los polos apuestos del huso, se
ensambla la envoltura nuclear alrededor de los grupos de cromosomas,
los nucleolos se vuelven evidentes y desaparecen los microtbulos del
huso. Al final de esta fase terminara la citocinesis.
En las clulas animales la citocinesis comienza con un surco que la rodea en
la regin ecuatorial, se profundiza y termina por separar al citoplasma en dos
clulas hijas, cada una con ncleo completo.
En las clulas vegetales se forma una placa celular en el centro del citoplasma y
finalmente separa a la clula en dos partes iguales.
Ver imgenes de las etapas de mitosis en la galera de imgenes.

6.1 OBJETIVOS.
Analizar la importancia de la divisin celular en el crecimiento y la
reposicin de clulas en tejidos desgastados.
Realizar adecuadamente la tcnica de laboratorio en la preparacin de
placas de mitosis.
Observar microscpicamente las fases de la mitosis.
Identificar las fases de mitosis
 44

6.2 PRCTICAS
6.2.1 Ejercicio N 1. Mitosis en raz de cebolla
Materiales

Microscopios
Porta objetos
Cubre objetos
Bistur o cuchilla
Tijeras
Pinzas
Raz de cebolla
Solucin de carnoy
Acido clorhdrico al 10%
Acetocarmn
Esmalte
Procedimiento
a) Cinco o seis das antes de comenzar el experimento, escoja un bulbo de
cebolla fresca y elimine mediante un raspado con una cuchilla, las races
secas que se hallan en la base del bulbo. En un frasco boca ancha o un
vaso desechable coloque la cebolla como aparece en la figura No. 6.2.
Vierta agua en el frasco, hasta tocar la base de la cebolla. Mantenga la
base de la cebolla hmeda y cambie el agua diariamente.

Figura N 6.2 Cebolla en recipiente con agua.

Imagen tomada de www.unicartagena.edu.co

b) Cuando las races nuevas alcancen 3 cms. Aproximadamente de longitud,

extraiga la cebolla del recipiente y corte el ltimo centmetro de la punta.
c) Deposite estas races en la solucin fijadora Carnoy (3 metanol: 1 cido
actico) durante 20 minutos.
d) Traslade las races a un recipiente que contiene cido clorhdrico al 10%
durante 10 minutos. Este tiempo vara segn el tipo de clula.
e) Coloque las races en un recipiente con agua y lvela por cinco minutos.
 45

f) Traslade las races a un recipiente con acetocarmn. Este colorante las

debe cubrir totalmente durante 20 minutos.
g) Saque la raz del recipiente que contiene acetocarmn y pngala en un
porta objeto.
h) Corte nuevamente la raz, dejando el extremo inferior (pice) y deseche
el otro.
i) Coloque en ngulo recto el cubre objeto, bjelo lentamente hasta que se
pose en el preparado, y luego haga una leve presin con el dedo hasta
conseguir una extensin del preparado.
j) Selle los bordes del cubre objeto con esmalte y deje secar.
k) Observe con el objetivo de menor aumento para localizar las figuras
mitticas, y posteriormente con el objetivo de mayor aumento para
discriminar detalles. Guindose por las figuras de la galera de imgenes,
identifique las diferentes fases de la mitosis y dibjelas.

6.4 ENLACES
http://www.whfreeman.com/lodish/ Pgina del libro "Molecular cell
biology", con buenas imgenes, esquemas y videos.
http://www.biology.arizona.edu/default.html Curso de biologa
incluyendo biologa celular, bioqumica, desarrollo y otras reas afines.
http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/0070271348/student_view0/chapter27/elearning.html
Curso sobre Biologa con muy buenos documentales para visualizar con
Real Player.
GALERIA DE IMGENES
 46

Imagen tomada de www.life.illinois.edu.

 47

LABORATORIO N 7

DIVISION CELULAR: MEIOSIS

INTRODUCCIN

La meiosis es el proceso de divisin celular por el cual se obtienen clulas

haploides llamados gametos.
La meiosis comprende dos subdivisiones consecutivas; Meiosis I y Meiosis II
(ver figura n 7.1).
La Meiosis I separa cromosomas homlogos y esta formada de; Profase I,
Metafase I, Anafase I y Telofase I. La Profase I es la ms larga en la mayora
de las especies y consta de subfases: Leptoteno, Cigoteno, Paquiteno,
Diploteno y Diacinesis. En el transcurso de estas subfases ocurre sinapsis entre
los cromosomas homlogos. A los puntos de intercambio se lo conoce como
quiasmas y los cromosomas se hacen visibles en formas de ttradas.
Posteriormente hay el intercambio de material gentico. Adems en esta
primera fase desaparece la membrana nuclear, los nucleolos y se forma el huso
cromtico. En la Metafase I, los cromosomas homlogos duplicados se alinean
en el plano ecuatorial de la clula. En Anafase I, estos homlogos se separan y
se dirigen hacia los polos opuestos de la clula. En Telofase I, los cromosomas
se renen en los polos de la clula. Esta fase termina con la formacin de dos
clulas hijas por el proceso de citocinesis.

La Meiosis II, separa a las cromtidas hermanas y consta de Profase II,

Metafase II, Anafase II, Telofase II. En esta segunda divisin, las cromtidas
hermanas se separan por el centrmero y son llevadas a los polos celulares
generando as, dos clulas haploides procedentes de las dos clulas resultantes
de la Meiosis I. El resultado final es, en consecuencia, cuatro clulas haploides
con la mitad del contenido cromosmico.
En los animales los gametos son vulos y espermatozoides y se producen en los
ovarios y testculos respectivamente.
Ver imgenes de las etapas de meiosis en la galera de imgenes.

Figura N. 7.1 Esquema proceso meitico.

 48

7.1 OBJETIVOS.

Valorar la importancia de la meiosis en la formacin de gametos.

Entender los eventos importantes que ocurren en la meiosis.
Identificar mediante observacin microscpica las diferentes fases de la
meiosis.
Describir las diferencias entre los procesos mitticos y mitico.

7.2 PRCTICAS

7.2.2 Ejercicio N2. Demostracin de meiosis usando un modelo.

Los cromosomas contienen genes que son las unidades de la herencia. Los
pares homlogos contienen pares de genes que determinan las mismas
caractersticas y reciben el nombre de alelos. La localizacin fsica de un alelo
en un cromosoma se llama LOCUS (plural LOCI). Estos codifican para la misma
caracterstica pero no necesariamente para la misma condicin.

Materiales
Mullos de color rojo y blanco
Pedazos de sorbete
Piola
Plastilina o cinta adhesiva
Procedimiento
a) Arme 4 brazos, 2 de cada color, siguiendo el modelo de la figura
7.2.
b) Una por el sorbete las dos cadenas de un mismo color con un
trozo de plastilina o cinta adhesiva.
c) Las diferentes partes tienen las siguientes correspondencias:
1 mullo = 1 gen
Sorbete = centrmero
1 brazo = 1 cromtida
2 brazos unidos = Un cromosoma que se ha duplicado, formado
por dos cromtidas hermanas idnticas.
d) Con un marcador marque con letras dos loci, en cada cromtida
para indicar alelos que codifican una misma caracterstica.
Ejemplo: caractersticas color de la piel, A = pigmentacin normal,
a = Ausencia de color (albinismo). Caracterstica lbulos de las
orejas, F = Lbulos separados, f = lbulos unidos.
e) Usando sus cromosomas modelo, pngalos dentro de un crculo
de papel que simule el ncleo. Mire un grfico de meiosis y siga
los estadios que se describen a continuacin.
 49

Figura 7.2. Modelo de un par de cromosomas homlogos

7.3 ENLACES

http://www.whfreeman.com/lodish/ Pgina del libro "Molecular cell

biology", con buenas imgenes, esquemas y videos.
http://www.biology.arizona.edu/default.html Curso de biologa
incluyendo biologa celular, bioqumica, desarrollo y otras reas afines.
http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/0070271348/student_view0/chapter27/elearning.html
Curso sobre Biologa con muy buenos documentales para visualizar con
Real Player.
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GALERIA DE IMGENES

Meiosis : Profase I

Meiosis I
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Meiosis II

Imagen tomada de http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema12.pdf

Imgenes tomada de botit.botany.wisc.edu/.../Meiosis_1, Page rendered: Thursday, June 18,

2009, 15:51:18.
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Imgenes tomada de botit.botany.wisc.edu/.../Meiosis_1, Page rendered: Thursday,

June 18, 2009, 15:51:18.
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BIBLIOGRAFIA

La actualizacin de las pginas Web es funcin de sus representantes por lo

que no me responsabilizo de su actualizacin.

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: LABORATORIO DE BIOLOGABORA