A EMPRESA

Fundada em 2000, a BIO - Biotecnologia Animal surgiu com o avano observado nos
resultados das pesquisas em biotecnologia e com a sua aplicabilidade na medicina veterinria.
Idealizada por cinco mdicos veterinrios, especializados em Reproduo Animal e Biologia
Celular, a BIO - Biotecnologia Animal cresceu e se consolidou no mercado por acreditar no
perfeito equilbrio entre a otimizao da produo e a sade animal. A interao permanente
com o cliente e o comprometimento por melhores resultados a garantia do sucesso
empresarial e da solidificao do relacionamento entre a BIO e seus clientes.
A BIO - Biotecnologia Animal conta com um portflio de ferramentas biotecnolgicas
capaz de atender a diversos programas de melhoramento gentico animal e medicina animal,
como por exemplo, a Transferncia de Embries (TE), Fecundao in vitro (FIV),
Criopreservao de Embries, Andrologia, Anlise Reprodutiva Ultrasonogrfica e Terapia
Celular com clulas-tronco.
Em 2004, a BIO - Biotecnologia Animal iniciou o seu projeto para elaborao de um
modelo comercial consistente para a terapia celular, a partir do isolamento e cultivo in vitro de
clulas-tronco (stem cells), provenientes de tecido adiposo autlogo. Surgiu assim a BIO CELL. A
terapia celular tem por objetivo reparar tecidos lesionados, por meio da regenerao tecidual e
retomada das suas funes originais.
Em 2005, a BIO CELL iniciou as suas atividades comerciais em terapia celular visando
recuperao do aparelho locomotor de eqinos, os resultados obtidos foram surpreendentes.
Desde ento foram tratados mais de 400 cavalos.
Em 2009, a empresa iniciou a pesquisa para o tratamento de leses em pequenos
animais. Esta rea do conhecimento vem avanando rapidamente no cenrio mundial e o
nmero de patologias que podem ser tratadas com clulas-tronco cresce a cada dia.
Em junho de 2010, a BIO CELL iniciou, em parceria com o Parque Zoolgico de Braslia, o
projeto de isolamento, cultivo in vitro e criopreservao de clulas-tronco de animais silvestres.
Este projeto visa formao de um banco de germoplasma de espcies em perigo ou vias de
extino. At o presente momento, foram criopreservadas clulas-tronco de diferentes
espcies de animais silvestres, como por exemplo, Leo (Pahthera leo), Tigre (Panthera tigris),
Jaguatirica (Felis pardalis), Tamandu (Myrmecophaga tridactyla e Tamandua tetradactyla),
Lobo-Guar (Chrysocyon brachyurus), dentre outros.
Em 2011, a BIO CELL inaugurou a sua primeira franquia no exterior. O objetivo dessa
unidade, localizada prximo a Dallas (Texas, EUA), era proporcionar a terapia celular em
animais criados e mantidos nos Estados Unidos. Entretanto, nossa atuao no mercado
americano se ampliou e culminou com abertura de uma Joint Venture com a Minitube USA.
Essa nova empresa proporciona o desenvolvimento de mais tecnologia para aplicarmos em
nossos pacientes, alm da atuao no continente norte americano.
O ano de 2013 foi marcado por diversas conquistas visando a solidificao da marca como
sinnimo de qualidade. Estabelecemos parcerias em cidades como Braslia, So Paulo, Rio de
Janeiro, Belo Horizonte, Maring, Campo Grande, Campinas, Unai, Recife entre outras, as quais
descatacam-se por terem clnicas conhecidas pela capacidade de seu corpo tcnico e pela tica
no exercicio da profisso. Dessa forma podemos atender os animais de forma mais segura e
eficiente em vrios estados brasileiros.
 Atualmente, novos projetos esto sendo desenvolvidos pela BIO CELL e as novas
conquistas e possibilidades de utilizao das clulas-tronco sero sempre compartilhadas com
nossos parceiros.
Confiantes de que estamos no caminho certo, construimos esse manual tcnico com o
objetivo de proporcionar aos mdicos veterinrios credenciados um material de consulta sobre
clulas-tronco mesenquimais.
Ao final do credenciamento e da leitura desse manual o mdico veterinrio estar
capacitado a obter os melhores resultados da terapia celular com clulas-tronco BIO CELL.
Lembrando sempre que o bem estar animal a nossa prioridade!

VISO

Ser reconhecida como a empresa privada mais eficiente na rea de Biotecnologia Animal.

MISSO

Contribuir para a disseminao da biotecnologia relacionada s reas de diagnsitco

molecular, terapia celular e multiplicao animal. Desenvolver e aplicar solues visando o
respeito ao animal e melhores resultados para nossos clientes e pacientes.

VALORES

Formao tcnica como fator de competncia;

tica, Honestidade e Integridade;
Compromisso com a qualidade;
Valorizar e respeitar os clientes, parceiros e funcionrios;
Respeitar os animais;
Responsabilidade social e compromisso com o meio ambiente.
 CLULAS-TRONCO

As clulas-tronco esto presentes em indivduos em diferentes estgios de suas vidas,

desde a etapa embrionria at a idade adulta, preservando suas caractersticas funcionais e
moleculares. Estas clulas so multipotentes e podem se diferenciar em tendes, ligamentos,
ossos, cartilagem, clulas cardacas, nervos, msculos, vasos sanguneos, gordura e hepatcitos.
Os estudos com clulas-tronco mesenquimais comprovam a presena de clulas-tronco no
tecido adiposo (Zuk et al., 2002).

possvel isolar e cultivar clulas-tronco mesenquimais in vitro de diferentes tecidos em

diferentes estgios de desenvolvimento, com o mesmo nvel de indiferenciao celular. As
clulas-tronco so encontradas no embrioblasto (massa celular interna), cordo umbilical (RN),
medula ssea, tecido adiposo e polpa dentria (Strem BM et al, 2005;.. Zuk PA et al, 2002;
Oedayrajsingh M et al, 2007). As clulas- tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo tm
o potencial de se diferenciar em osso, msculo e cartilagem quando cultivadas em meio
apropriado de cultura de tecidos (Zuk et al 2002).

O QUE SO CLULAS-TRONCO MENSEQUIMAIS?

As clulas-tronco mesenquimais (CTMs) so clulas multipotentes presentes em vrios

tecidos. Essas clulas podem ser isoladas de diversos locais, embora as CTMs da medula ssea e
as CTMs de tecido adiposo representem o maior nmero de trabalhos publicados na rea de
terapia celular. As CTMs constituem uma fonte de tecidos originrios da mesoderme, portanto
possuem a capacidade de diferenciao direta para tecido sseo, tecido cartilaginoso e tecido
adiposo. Segue abaixo um esquema representando a capacidade de diferenciao das clulas-
tronco originrias do tecido adiposo e como ocorre o processo de diferenciao celular.
 Fonte: http://www.allthingsstemcell.com/2009/03/mesenchymal-stem-cells/

Fonte: http://www.discoverymedicine.com/Tracey-L-Bonfield/2010/04/15/adult-mesenchymal-
stem-cells-an-innovative-therapeutic-for-lung-diseases/
 POTENCIAL TERAPEUTICO DAS CLULAS-TRONCO

As clulas-tronco adultas existem para garantir a rpida substituio de clulas que

morrem naturalmente nos tecidos, e consequentemente proporcionar o equilbrio fisiolgico
do organismo. Cada clula do corpo tem um tempo de vida diferente variando de alguns dias a
muitos anos, dependendo da clula. Clulas do sangue circulante morrem com maior rapidez,
enquanto os neurnios vivem muitos anos. A morte celular permite que o tecido rejuvenesa e
fornece ao mesmo tempo um mecanismo para o tecido alterar lentamente suas propriedades
em funo da idade e/ou utilizao. Assim, as clulas-tronco so a fonte de reposio celular, e
tambm servem de clulas de reserva para danos ou comprometimento de tecidos adultos,
exigindo reparos mais extensos de regenerao ou de expanso. As clulas-tronco so,
portanto, muito diferentes das clulas embrionrias, cujo objetivo separar e formar
morfologias nicas e unidades funcionais que esto integradas em toda a fisiologia do
organismo. Sabe-se que clulas-tronco adultas no funcionam no microambiente embrionrio e
no respondem s molculas sinalizadoras embrionrias especficas (Arnold I. et al, 2006).

Clulas-tronco mesenquimais (CTMs) so conhecidas pela capacidade de diferenciao

em uma srie de fentipos diferentes ou, mais precisamente, de expressar marcadores para
uma variedade de fentipos celulares diferentes (Jiang et al., 2002). CTMs fazem mais do que
responder diferentes estmulos. Essas clulas sintetizam um amplo espectro de fatores de
crescimento e citocinas que tm efeitos sobre as clulas vizinhas (Arnold I. et al, 2006).

O uso da terapia celular com clulas-tronco tem vrios efeitos benficos. Estudos in vitro
e in vivo revelaram que as clulas-tronco reduzem a resposta inflamatria e promovem uma
rota alternativa anti-inflamatria. Diferentes estudos comprovam que as clulas-tronco
secretam citocinas, liberam fatores de crescimento, induzem a angiognese, promovem a
remodelao tecidual e inibem a apoptose. Clulas-tronco originrias de tecido adiposo
possuem uma grande plasticidade, e so capazes de se diferenciar em clulas adipognicas,
osteognicas, condrognicas, miognicas, cardiomiognicas, neurognicas, hepatognicas,
endoteliais, epiteliais e hematopoiticas. Esses dados confirmam os resultados de
experimentos in vivo e de estudos funcionais que demonstram a capacidade de regenerao
das clulas-tronco, reparar tecidos danificados por reposio ou diferenciao celular. Clulas-
tronco presentes no tecido adiposo auxiliam na angiognese e na neovascularizao atravs da
secreo de citocinas, tais como fator de crescimento heptico (HGF), fator de crescimento
vascular endotelial (VEGF), fator de crescimento placentrio (PGF), fator 2 de crescimento de
fibroblastos (FGF-2) e protenas angiognicas (Hattan et al, 2003;. Sanches-Ramos et al, 2000;
Woodbury eta al, 2000;. Jiang et al, 2002;. Yoo et al, 1998).

Para sintetizar, ao realizar o tratamento com clulas-tronco devemos observar:

Reduo da resposta inflamatria;

Secreo de citocinas e fatores de crescimento;
Induo da angiognese;
Remodelao tecidual;
 Inibio da apoptose (morte celular programada);
Reparao de tecidos danificados por reposio ou diferenciao celular.

O desenho esquemtico abaixo demonstra o mecanismo de ao das clulas-tronco

mesenquimais na inibio das respostas inflamatrias em um pulmo lesionado pela
Bleomicina. A Bleomicina ativa macrfagos pulmonares que passam a secretar TNF-a e IL-1.
Essas citocinas induzem a cascata inflamatria que leva ao recrutamento de outras clulas tais
como neutrfilos e linfcitos e induzem a apoptose das clulas alveolares. As clulas-tronco
mesenquimais secretam IL1RN e outros fatores antiinflamatrios que inibem a produo do
TNF-a e antagoniza a atividade da IL-1.

Fonte: Interleukin 1 receptor antagonist mediates the antiinflammatory and antifibrotic effect of mesenchymal stem cells during lung injury.
Ortiz et al. 10.1073/pnas.0704421104.
 A figura abaixo demonstra os efeitos endocrinos e parcrinos na administrao sistmica
das clulas-tronco:

1) Estmulo da angiognese. Liberao de fatores de crescimento: VEGF ( vascular endothelial growth factor), IGF-1 (insulin like growth factor
1), MCP1( monocyte chemoatractant protein 1), bFGF( basic fibroblast growth factor) e IL6( interleukin 6).
2) Diferenciao das Clulas-tronco. Stem cell factor (SCF), leukemiainhibitory factor (LIF), macrophage colonystimulating factor (MCSF),
stromal derived factor 1 (SDF1), angiopoietin1 e activin A.
3) Inibio da fibrose: hepatocyte growth factor (HGF), bFGF, adrenomedullin (ADM).
4) Inibio da apoptose: VEGF, HGF, IGF1, transforming growth factor (TGF)p, bFGF, granulocyte macrophage colonystimulating factor (GMCSF),
activin A e thrombospondin 1.
5) Supresso de clulas T e B: human leukocyte antigen G5 (HLAG5), HGF, inducible nitric oxide synthase (iNOS), indoleamine2, 3dioxygenase
(IDO), prostaglandin E2 (PGE2), bFGF and TGFp.
6) Induo da regulao de clulas T (Treg).
7) Inibia das clulas natural killer (NK) cells pela secreo de IDO, PGE2 e TGFp.
8) Inibio de maturao de clulas dendriticas (DC) pela secreo de PGE2.
Fonte: Carrin and Figueroa, Stem Cell Res Ther 2011 May 11;2(3):23.
 BENEFCIOS DA TERAPIA CELULAR FRENTE S TERAPIAS CONVENCIONAIS

Um dos benefcio da terapia celular com clulas-tronco est relacionado ao tem

reparao de tecidos danificados por reposio ou diferenciao celular, onde esperado a
regenerao tecidual. As clulas-tronco se diferenciam nas clulas do tecido lesionado.

Fonte: Molecular Aspects of Bone Remodeling.By Alma Y. Parra-Torres, Margarita Valds-Flores, Lorena Orozco and Rafael Velzquez-Cruz .DOI:
10.5772/54905

Fonte: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S095816691200033X
 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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Hattan N, Kawaguchi H, Ando K et al. Purified cardyomyocytes from bone marrow
mesenchymal stem cells produce stable intracardiac grafts in mice. Cardiovasc Res 2003
65:334-344.

Jiang Y, Jahagirdar B, Reinhard L et al. Pluripotency of mesenquymal stem cells derived from
adult marrow. Nature 2002, 418: 41-49.

Oedayrajsingh M, Breuls R, Schouten T, et al. Phenotypical and functional characterization of

freshly isolated adipose tissue-derived stem cells. Stem Cells Dev 2007; 16:91-104.
Sanches-Ramos J, Cardozo-Pelaez F, Hazzi C et al. Adult bon marrow stromal cells differentiate
into neural cells in vitro. 2000. Exp Neurol 164: 247-256.

Strem BM, Hicok KC, Zhu M, Wulur I, Alfonso Z, Schreiber RE, Fraser JK, Hedrick MH.
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Woodbury D, Schwarz E J, Prockop D J et al., Adult rat and human bone marrow stromal cells
differentiate into neurons 2000. J Neurosci Res 61: 364-370.
Yoo J, Barthel T, Nishimura K et al. The condrogenic potential of human bone-marrow-derived
mesenquymal progenitor cells 1998. J Bone Joint Surg 80: 1745-1757.

Zuk PA, Zhu M, Ashjian P, et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol
Biol Cell 2002; 13:4279-95 (Zuk et al., 2002).
 O PROCEDIMENTO BIO CELL

A extrao de clulas-tronco de tecido adiposo permite obter um grande nmero de

clulas multipotentes a partir de uma pequena quantidade de tecido (Nakagami et al., 2006). A
terapia celular desenvolvida pela BIO CELL usa um concentrado de clulas-tronco destinadas ao
tratamento de vrios tipos de leses e doenas que afetam eqinos, ces, gatos e diferentes
espcies silvestres.

O procedimento para a terapia celular tem passos importantes como a coleta de tecido
adiposo, o isolamento das clulas-tronco desse tecido, a identificao e diferenciao das
clulas-tronco e a aplicao no animal ou o congelamento destas clulas para futuros
procedimentos.

COMO FUNCIONA O PROCESSO?

1) O veterinrio identifica, a partir do exame clinico e resultados de exames complementares

tais como laboratoriais e de imagem, que a terapia com clulas-tronco ser capaz de
melhorar a qualidade de vida do animal.

2) Antes da coleta de tecido adiposo o veterinrio deve realizar a anlise clnica e hematolgica
(hemograma, uria, creatinina, ALT) do animal e preencher o Formulrio de Solicitao
Clulas-Tronco e a Autorizao para Coleta de Tecido Adiposo e Aplicao de Clulas-Tronco.

OBS: O Formulrio de Solicitao Clulas-Tronco deve ser enviado junto com o tecido
adiposo, bem como a Autorizao para Coleta de Tecido Adiposo e Aplicao de Clulas-
Tronco, devidamente assinado pelo proprietrio do Animal e pelo Mdico Veterinrio
responsvel.

3) Coleta de Tecido Adiposo:

a) O tecido adiposo subcutneo pode ser coletado a partir de qualquer rea sob a pele do
animal. A rea de escolha vai depender do tamanho, da raa e da condio corporal do animal
Para se escolher onde coletar o tecido adiposo deve-se levar em considerao a disponibilidade
de tecido adiposo na rea, o acesso mais fcil e o menor risco de complicaes ps-operatrias.
Na grande maioria das raas a base da cauda a opo mais indicada;

b) Aps a anestesia, o veterinrio faz uma inciso de aproximadamente 5 cm na pele do

animal e remove de 10 25 gramas de gordura. O tecido adiposo colocado de forma estril
no tubo denominado Lavagem 1 e uma lavagem realizada atravs de movimentao do
tubo por um perodo de 30 segundos. Aps a primeira lavagem tecido adiposo deve ser
transferido para o tubo Lavagem 2repetindo o procedimento de lavagem. Por ltimo, o
tecido adiposo deve ser transferido para o tubo denominado Transporte. O tubo deve ser
identificado com o nome do animal, lacrado com parafilme e armazenado em geladeira at que
esteja pronto para o envio do material.
Observaes:
- A coleta do tecido adiposo deve ser realizada sempre pela manh de segunda quinta.
- Antes de iniciar a coleta do tecido adiposo o veterinrio dever avisar a BIO CELL.
- Deve ser encaminhado , junto com o tecido adiposo, um tubo de sorologia contendo em torno
de 3 ml de sangue.

4) Procedimentos Laboratoriais:
No laboratrio as clulas-tronco sero isoladas e caracterizadas para assegurar a aplicao
de um concentrado de clulas-tronco, garantindo assim a mxima segurana no processo.
O tempo de cultivo das clulas-tronco depende, principalmente, da concentrao inicial de
clulas, da raa do animal e da idade.
As clulas permanecem em cultivo, em mdia, por um perodo de 10 dias antes de serem
enviadas para que o veterinrio realize a aplicao.
A BIO CELL sempre entrar em contato com o veterinrio para confirmar a data de aplicao
das clulas-tronco.

5) Aplicao das Clulas-Tronco:

A aplicao das clulas-tronco ocorre no local da leso, por via intravenosa ou por via
intramedular. A necessidade de se anestesiar o animal para a aplicao das clulas-tronco
depende basicamente do temperamento do animal e do local de aplicao.

Observaes:
- O veterinrio ir receber as clulas at no mximo 14:00hs do dia combinado entre o
veterinrio e o laboratrio.
- A aplicao deve ocorrer no mesmo dia do recebimento at no mximo s 19:00 horas.
- Aps o recebimento das clulas-tronco as mesmas no podem ser armazenadas em geladeira
e devem se manter em temperatura ambiente, dentro da caixa de isopor, at o momento da
aplicao.
Passo a Passo
Fluxo do Processo
 CUIDADOS NA COLETA DO TECIDO ADIPOSO E APLICAO DAS CLULAS-TRONCO

! O kit de coleta de tecido adiposo deve ser acondicionado em geladeira at o momento de

uso e aps a coleta do tecido adiposo;

! Na geladeira, o frasco deve ser acondicionado em um local limpo, e em sua embalagem

original;
! A coleta do tecido adiposo deve ser realizada de forma assptica;

! Todos os materiais utilizados tanto na coleta do tecido adiposo como na aplicao de

clulas-tronco devem estar estreis;

! Aps a aplicao de clulas-tronco o animal deve permanecer em repouso por pelo menos 3
dias;
! Durante a aplicao das clulas-tronco e aps 30 minutos do trmino da aplicao, o animal
deve ser monitorado por um mdico veterinrio. Reaes de hipersensibilidade podem
ocorrer e o mdico veterinrio deve estar preparado para combater os sintomas. Nessas
situaes os nicos medicamentos que devem ser evitados so os AIE (anti-inflamatrios
esteroidais);
! As aplicaes intravenosas devem ser administradas via soroterapia de forma lenta. O meio
contendo as clulas-tronco deve ser diluidos em uma bolsa de 100 ml. A temperatura do
soro deve estar adequada;

! As aplicaes realizadas no local da leso devem ser realizadas aps a tricotomia e assepsia
da regio.

CONTRAINDICAES GERAIS

Animais com neoplasias malignas no devem ser tratados;

Animais com infeco sistmica s devem receber a terapia celular aps o tratamento
da infeco;
A terapia com corticoides deve ser avaliada.

OBS: Para aplicaes intra-articulares a suspeno do corticoide intra-articular deve

ocorrer 30 dias antes da coleta do tecido adiposo.
 DOENAS TRATADAS COM A TERAPIA CELULAR BIO CELL

Osteoartrite
Leses Tendneas
Fraturas e Fissuras sseas
Aplasia de Medula
Cicatrizao de Feridas
Insuficincia Renal Crnica
Seqela de Cinomose

DOENAS QUE PODEM SER TRATADAS COM A TERAPIA CELULAR BIO CELL
(Fase de Pesquisa)

Ceratoconjuntivite Seca
lcera de crnea
Cardiomiopatia Dilatada
Leses Nervosas
 OSTEOARTRITES E OSTEOARTROSES

A osteoartrose (OA) a causa mais comum de dor crnica em ces, afetando mais de 20%
dos ces nos Estados Unidos (Hedhammar et al). caracterizada pela degenerao da
cartilagem articular, com perda da matriz, fibrilao e formao de fissuras, e pode resultar em
uma completa perda da superfcie da cartilagem articular (Mortellaro). Os condrcitos, clulas
presentes na cartilagem articular, mantm a sntese da matriz extracelular secretando
macromolculas tais como colgeno, glicosaminoglicanos e cido hialurnico, alm de modular
a renovao (ou regenerao) da matriz extracelular. Os condrcitos liberam os mediadores de
reparo celular (citocinas, radicais livres, proteases e prostaglandinas) e inibem as enzimas de
degradao (Mortellaro). Nas osteoartroses existe uma superproduo de mediadores
inflamatrios resultando em anabolismo, o que gera uma destruio da cartilagem articular
(Mortellaro).

A terapia celular com clulas-tronco funciona secretando citocinas e fatores de

crescimento (Caplan e Dennis), recrutando clulas endgenas no local lesionado e
promovendo, tambm, a diferenciao celular para clulas residentes sadias (Gimble et al). A
comunicao das clulas-tronco com outras clulas no local da leso, pode reduzir as reaes
imunolgicas e inibir a apoptose. Resultados de pesquisas recentes tambm indicam que as
clulas-tronco podem fornecer novas mitocndrias para as clulas danificadas resgatando
assim o metabolismo aerbico (Gimble et al; Spees et al).

AVALIAO DO CASO CLNICO

Alguns sintomas clnicos devem ser observados e anotados na ficha clnica do animal, tais
como: claudicao ao caminhar ou correr; dor na manipulao passiva da articulao;
movimentao limitada acompanhada de dor. Em alguns animais pode tambm ser observada
a reduo ou ausncia do interesse em caminhar ou correr.

Antes da indicao da terapia celular necessria classificao do nvel de degenerao

articular, que realizado atravs do histrico do animal, exame clnico e tcnicas de diagnstico
por imagem. A classificao em relao ao grau de degenerao articular varia de clnico para
clnico:

0 = Articulao normal;
1 = Evidencias radiogrficas de instabilidade, sem alterao degenerativa;
2 = Alterao degenerativa leve (ostefitos ocasionais);
3 = Alterao degenerativa mdia (presena de ostefitos e esclerose subcondral);
4 = Alterao degenerativa severa (presena de ostefitos, esclerose subcondral e
remodelao ssea).

Essa avaliao extremamente importante para um resultado eficiente. Em articulaes

que no possuem mais cartilagem o efeito das clulas-tronco ser apenas indireto pela sua
ao anti-inflamatria, entretanto o real efeito esperado que o da regenerao articular no
ir ocorrer.

Fonte: www .redevet.com.br

A complementao da terapia com os condroprotetores benfica uma vez que auxilia

na produo da matriz extracelular.

Fonte: www.redevet.com.br

INDICAES

Doenas degenerativas tais como displasia coxofemural; displasia do joelho, cotovelo e

ombro e osteoartroses.

Na ruptura do ligamento cruzado cranial a utilizao das clulas-tronco no substitui a

necessidade cirrgica, porm retarda ou evita o aparecimento de uma osteoartrose no joelho
operado. Nesses casos tambm indicado a aplicao das clulas-tronco no ligamento cruzado
contralateral cirurgia a fim de retardar a ruptura do mesmo.

CONTRAINDICAES

Doenas simultneas s osteoartroses, tais como infeces bacterianas ou virais;

Neoplasias malignas.

APLICAO DAS CLULAS-TRONCO

A aplicao das clulas-tronco deve ser realizada dentro da cavidade articular. Ao se

escolher o melhor local de acesso intra-articular deve-se levar em considerao a anatomia do
animal, evitando assim lesionar vasos de grande calibre e nervos.

Deve-se evitar a hiperextenso e hiperflexo da articulao durante a aplicao, visto que

tal procedimento pode ter como resultado um quadro clnico de dor. Se possvel, retirar uma
quantidade de liquido sinovial equivalente da que ser administrada de clulas-tronco.

Fonte: Acervo Pessoal

 TERAPIA PS-APLICAO DE CLULAS-TRONCO

O uso de analgsicos pode ser indicado nos primeiros trs dias ps aplicao das clulas-
tronco.

O uso de esteroides contra-indicado por 30 dias aps a terapia com clulas-tronco.

A fisioterapia benfica e auxilia na recuperao do animal.

Outras terapias devem ser avaliadas de forma a no impedir a multiplicao e

diferenciao das clulas-tronco no local da leso.

RESULTADOS ESPERADOS

Ces tratados com injeo intra-articular de clulas-tronco demonstraram diminuio

significativa da claudicao concomitante diminuio da dor, reduzindo de forma significativa
o desconforto destes pacientes e aumentando a capacidade funcional das articulaes
afetadas.

Guercio et al, 2012 realizaram um estudo em 4 ces machos adultos com osteoartrose
(OA) das articulaes mero-radiais. Esses ces no respondiam a terapia com anti-
inflamatrios e foram tratados com clulas-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo
(AD-MSC), via intra-articular, como uma alternativa teraputica para reduzir a degenerao das
superfcies articulares. Segundo os autores e, baseado em avaliao de veterinrios
especialistas, os animais apresentaram melhora significativa em seu sistema locomotor
comparado com animais tratados apenas com terapia medicamentosa. Essa pesquisa indica
que a terapia celular tem potencial clnico significativo no tratamento de claudicao associada
com osteoartrose (Toma et al., 2002; Sasaki et al., 2008), mas importante que o tratamento
se inicie antes dos danos se tornarem muito severos. Alguns estudos de acompanhamento
indicaram que a OA da articulao dos cotovelos melhora com o tempo, provavelmente devido
mobilizao de clulas-tronco pelo hospedeiro em resposta a inflamao e aos tecidos alvo
especficos (Karp e Leng Teo, 2009) que secretam citocinas e fatores de crescimento via
mecanismos ativos, o que pode estimular a recuperao atravs de uma ao parcrina (Caplan
e Dennis, 2006; Gimble et al., 2007; Ortiz et al., 2007).

Huurne et al, 2012 investigaram o efeito da administrao local de clulas-tronco na

articulao do joelho de ratos com OA induzida experimentalmente e com envolvimento
sinovial evidente. Os resultados mostraram que uma nica injeo dessas clulas na articulao
do joelho dos ratos, realizada sete dias aps a induo da OA, protegeu contra o espessamento
sinovial, evitou a formao de ostefito e a destruio da cartilagem.

Koh et al revisaram os registros de 18 pacientes humanos que foram submetidos a

cirurgias artroscpicas associada a terapia com clulas-tronco. Essas clulas foram adicionadas
plasma rico em plaquetas e injetadas nos joelhos dos participantes. Os autores
determinaram atravs dos achados clnicos e exames de ressonncia magntica que a injeo
intra-articular de clulas-tronco efetiva em reduzir a dor e melhorar a funo articular nos
pacientes com osteoartrose do joelho. Alm disso, os autores perceberam uma correlao
positiva entre o nmero de clulas injetadas e os resultados obtidos, e que os resultados
obtidos aps 2 anos foram melhores do que os em curto prazo. Esses autores concluram que a
terapia com clulas-tronco melhora a funo do joelho.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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 FRATURAS E FISSURAS

As clulas-tronco mesenquimais (CTMs) promovem a regenerao ssea. Experimentos

anteriores demonstraram que as CTMs podem ser utilizadas na reparao do tecido do osso
(Kadiyala, 1997). A osteognese a partir das CTMs ocorre por uma converso direta de clulas
mesenquimais em osteoblastos e no por uma seqncia endocondral (Nomura et al 2004).

Em aplicaes clnicas, tratamentos baseados em engenharia de tecidos e medicina

regenerativa de tecnologia possuem o benefcio sob o ponto de vista de reduzir dias de
hospitalizao e infeces alm de diminuir as reaes imunes (Kenji Ito et al 2005).

INDICAES

Fraturas sseas, fissuras sseas, cirurgia exigindo a remoo do tecido sseo, m

formao ssea.

CONTRAINDICAES

Neoplasia maligna e osteomielite.

APLICAO DAS CLULAS-TRONCO

A aplicao de clulas-tronco deve ser realizada no local da perda ssea. Dependendo da

extenso de perda de tecido sseo o emprego de matriz mineral pode ajudar.

Fonte: Acervo Pessoal

 TERAPIA APS A APLICAO DE CLULAS-TRONCO

O uso de esterides contra-indicado por 30 dias aps a terapia com clulas-tronco.

RESULTADOS ESPERADOS

Pacientes tratados com clulas-tronco demonstraram menor tempo de recuperao da

perda ssea. A formao ssea com clulas-tronco mesenquimais diminui o perodo de
cicatrizao ssea (Kenji Ito et al., 2005).

Kang et al, 2012 realizaram um estudo comparando o potencial osteognico de clulas-

tronco caninas derivadas de tecido adiposo, medula ssea, sangue de cordo umbilical e gelia
de Wharton. Os resultados mostraram que as clulas-tronco derivadas de tecido adiposo e
sangue do cordo umbilical tiveram maior potencial osteognico que as clulas de medula
ssea e de gelia de Wharton, embora as subculturas de todos os tipos de clulas-tronco
tenham formado matriz ssea suficiente sob condies de diferenciao osteognica in vitro.
Esse estudo comprovou que as celulas-tronco induziram considervel formao ssea in vivo.

Vrios autores citam os efeitos benficos das clulas-tronco mesenquimais na

osteognese. Em ces, essas clulas foram usadas com sucesso para a reparao de defeitos de
tamanho crtico em ossos longos (Bruder et al, Yuan et al). Bruder et al (1998) obtiveram bons
resultados com o implante de clulas-tronco mesenquimais derivadas de medula ssea
(BMSCs) autlogas juntamente com scaffolds porosos de cermica, que promoveram melhor
recuperao em defeito femural (de 21 mm) em ces, quando comparado com uso de scaffold
sozinho.

Yuan et al (2007) realizaram um experimento no qual criaram defeitos na mandbula de

16 ces e implantaram scaffolds de beta fosfato triclcio (-TCP) associado a clulas-tronco pr
induzidas, somente -TCP ou fragmentos mandibulares autlogos. O grupo que recebeu -TCP
associado s clulas-tronco apresentou pequenas formaes de calos em 4 semanas, uma
maior quantidade de formaes em 12 semanas e com 26 semanas aps a operao o volume e
radiopacidade do novo osso formado estava intensamente aumentado e j havia unio ssea.
Com 32 semanas o contorno sseo j se encontrava bem remodelado e a radiopacidade estava
prxima do lado contralateral, normal, da mandbula. O grupo que recebeu somente -TCP
no apresentou formao de calo sseo em 4 nem em 12 semanas. Com 26 semanas havia
radioluscncia ntida e formao mnima de calo sseo, com 32 semanas o grupo apresentou
radioluscncia quase completa. O grupo que recebeu o autotransplante (fragmentos de medula
ssea autlogos) mostrou formao de alguns calos em 4 semanas e com 12 semanas a
radiopacidade estava diminuda na poro mdia do implante. Este grupo mostrou uma unio
ssea quase completa em 26 semanas, com alguns fragmentos sseos isolados podendo ser
observados na poro mdia dos implantes. A densidade ssea aumentou continuamente, com
o osso neo-formado e os fragmentos de osso isolados coexistindo no implante at 32 semanas.
A unio radiogrfica do osso foi observada em todos os animais dos grupos autotransplante e
clulas-tronco associada com -TCP, mas no foi observada no grupo que recebeu somente o -
TCP.

Outros resultados promissores com uso de clulas-tronco em mandbula tambm foram

obtidos. Ito et al (2006) estudaram os efeitos de clulas-tronco associadas com PRP e cola de
fibrina prepararando 3 defeitos de cada lado da mandbula de 12 ces, os quais foram divididos
em 4 grupos, sendo eles: somente cola fibrina, cola de fibrina associada a clulas-tronco, cola
de fibrina associada a clulas-tronco e plasma rico em plaquetas (PRP) e um grupo controle.
Com 4 e 8 semanas os autores perceberam uma diferena significativa entre o grupo que
recebeu clulas-tronco, PRP e cola de fibrina comparado com os demais. Este grupo induziu
regenerao ssea suficiente e a rosca do implante, inserida nos defeitos sseos no era mais
visvel. Alm disso, os achados histolgicos mostraram que este grupo teve tima induo
formao de osso nos estgios primrios, comparado com os outros grupos. Sendo assim, estes
resultados indicam que houve regenerao ssea suficiente causada pelas clulas-tronco
associadas a PRP e cola de fibrina. Zheng et al (2009) mostraram reparo de defeitos
mandibulares crticos com uso de clulas-tronco autlogas derivadas de dentes decduos de
porcos miniatura.

Jin et al (2012) obtiveram bons resultados com uso de clulas-tronco mesenquimais em

casos de osteonecrose da cabea do fmur em ces. Os autores investigaram os efeitos das
clulas no reparo vascular e perfuso arterial e na angiognese desses ces. Aps quatro
semanas da induo cirrgica da necrose e posterior tratamento o grupo controle no mostrou
nenhuma melhora significativa no grau de claudicao enquanto os animais do grupo que
recebeu as clulas-tronco demonstraram melhora ao andar e pular. Aps oito semanas o grupo
contole mostrou melhora ao andar, mas a cabea do fmur desses animais apresentava-se
plana e em forma de cogumelo, enquanto o grupo que recebeu as clulas-tronco apresentava-
se sem claudicao, com visvel melhora na atividade e a cabea do fmur quase normal. Os
autores chegaram concluso de que h um bom efeito teraputico das clulas-tronco no
reparo vascular e angiognese na osteonecrose da cabea do fmur.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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 LESES TENDNEAS

Tendes ligam os msculos aos ossos e so geralmente requisitados para agir, permitindo
que as foras geradas pela musculatura ajam sobre o esqueleto, modulando assim o
movimento. A leso nos tendes a doena mais freqentemente tratada com clulas-tronco.
Em contraste com os tendes posicionais, como os tendes das mos, todos os tendes dos ps
tambm funcionam como molas, absorvendo e liberando a energia elstica durante as
diferentes fases da passada. Com um tendo projetado para operar prximo do seu limite
funcional, juntamente com a aquisio gradual de danos cumulativos, caractersticas
degenerativas em cavalos adultos submetidos a exerccios de alta intensidade, no
surpreendente que esses tendes de suporte de peso geralmente falhem (Richardson et al.
2007).

Os tendes cicatrizam naturalmente, mas o tecido da cicatriz formada neste reparo

funcionalmente deficiente em comparao com o tendo normal. Isto tem consequncias
importantes para o animal em termos de desempenho e um risco substancial da ocorrncia de
uma nova leso (Dowling et al., 2000).

Aps a leso do tendo no existe um problema em relao infiltrao celular. Essas

clulas envolvidas na sntese de tecido novo tem origem na diferenciao de clulas
precursoras locais. O local exato das clulas precursoras no tendo no conhecido, mas elas
so mais propensas a residir no tecido endotelial entre os fascculos de colgeno e adjacentes
vascularizao (Meirelles et al., 2006). Isso pode explicar por que este componente do processo
de reparao limitada e, portanto, por que o reparo natural no eficiente. (Richardson et al.,
2007).

A implantao de clulas-tronco mesenquimais em uma variedade de tecidos

esquelticos danificados tem sido realizada visando promover a cicatrizao. Um estudo
utilizando clulas-tronco derivadas de tecido adiposo em um modelo de leso no tendo de
cavalos indicou benefcios em termos de organizao do tecido (Dahlgren et al., 2006).

INDICAES

Leso de tendes e ligamentos. No caso de ruptura a correo cirrgica , em pequenos

animais, necessria.

CONTRAINDICAES

A experincia clnica tem demonstrado que o implante de clulas-tronco autlogas no

resulta em qualquer efeito deletrio tanto em relao ao processo de implantao quanto ao
da formao de diferentes tecidos dentro de local de implantao (Richardson et al., 2007).
 APLICAO DAS CLULAS-TRONCO

A aplicao de clulas-tronco deve ser realizada preferencialmente com o auxlio da ultra-

sonografia para identificar o local exato da leso.O meio contendo as clulas-tronco deve
preencher todo o local da leso.

O momento ideal para implantar as clulas-tronco , aps a fase inflamatria inicial, mas
antes da formao de tecido fibroso. A presena de tecido fibrosado dentro do tendo torna
mais difcil a implantao das clulas-tronco, reduzindo os benefcios da terapia. (Dahlgren et
al., 2006). A aplicao intra ou peri-lesional.

TERAPIA APS APLICAO DE CLULAS-TRONCO

O uso de esterides contra-indicado por 30 dias aps a terapia com clulas-tronco.

A fisioterapia muito importante para ajudar na recuperao do animal.

RESULTADOS ESPERADOS

A recuperao total do animal esperada com reestabelecimento normal das funes

desempenhadas pelo tendo lesionado.

Torricelli et al (2011) realizaram um estudo com a finalidade de avaliar o potencial da

administrao de uma combinao de PRP autlogo e clulas-tronco a fresco isoladas de
medula ssea em 13 cavalos de competio afetados por leses de esforo
musculoesquelticas (desmopatia do ligamento suspensrio e tendinopatia do flexor
superficial), . Os resultados mostraram uma melhora evidente no grau de claudicao de todos
os cavalos, com ausncia total de sintomas aps 12 meses. Onze dos 13 animais estavam aptos
a retornarem a competies aps o tratamento. Os autores tambm observaram que o
resultado final no foi influenciado pela condio basal, demonstrando assim que at mesmo as
leses mais comprometedoras podem se beneficiar deste tratamento.

Watts et al (2011) protagonizaram um estudo com injeo de clulas-tronco embrionrias

no tendo de 8 cavalos. Embora os autores no tenham encontrado diferenas no colgeno,
DNA ou proteoglicano total entre os grupos, o grupo tratado mostrou melhora significativa na
arquitetura do tecido, tamanho do tendo, tamanho da leso do tendo e no padro linear do
tendo. Hankemeier et al (2007) demonstraram um efeito das clulas-tronco na densidade das
fibras colgenas.

Outros resultados demonstram os efeitos regenerativos das clulas-tronco na cura do

tendo. Nourissat et al (2010) repararam o tendo de Aquilles de ratos nos quais o local de
insero deste tendo ao osso (ntese) havia sido destrudo. Quarenta e cinco dias aps a
injeo de condrcitos, clulas-tronco mesenquimais ou, no grupo controle, nenhuma injeo,
os animais que receberam clulas-tronco ou condrcitos apresentaram melhora significativa
comparado com os animais controle. Nesses animais uma nova ntese foi produzida e,
somente no grupo que recebeu clulas-tronco, ela se apresentava organizada de forma similar
ntese do tecido normal.

Segundo reviso de Ahmad et al (2012) demonstrado que o uso das clulas-tronco em

tendo pode aumentar a densidade da fibra colgena, melhorar a arquitetura do tecido e
restaurar a interface quase normal do osso com o tendo. Alm disso, segundo os autores, as
clulas-tronco mostram-se capazes de aumentar a presena de fibrocartilagem no local da
leso. Isso tem mostrado estar associado com o aumento da fora biomecnica. H evidncias
mostrando que as clulas-tronco tem efeitos positivos na cura do tendo. Isso ocorre devido
ao fato dessas clulas terem potencial regenerativo, produzindo tecido similar ao do estado
anterior leso.

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 APLASIA/HIPOPLASIA DE MEDULA

A aplasia medular uma doena congnita (ocorre devido a um fator gentico), ou

adquirida (causada pela utilizao de certos medicamentos ou doenas
infecciosas/parasitrias), caracterizada pela deficincia medular, ou seja, disfuno da medula
ssea, sendo tal doena separada em dois nveis, a moderada e a grave. O diagnstico da
aplasia hipoplasia medular feito atravs do hemograma e do mielograma. A medula ssea
responsvel pela produo dos componentes sanguneos (hemcias, plaquetas, leuccitos). Os
principais sintomas dessa doena so: anemia, devido ao baixo nmero de hemcias; infeces
contnuas, devido ao baixo nmero de leuccitos; e sangramento de mucosas, devido ao baixo
nmero de plaquetas. Um dos tratamentos mais eficazes contra a aplasia/hipoplasia medular
o transplante de medula ssea (JANSEN, et al.,1989). Atualmente a terapia com clulas-tronco
vem sendo utilizado com grande eficincia.

INDICAES

A aplicao de clulas-tronco em casos de aplasia/hipoplasia de medula indicada

apenas aps se conhecer a causa da patologia. A terapia celular dverer ser utilizada
preferencialmente para os casos de aplasia/hipoplasia medular adquirida. Para os casos de
doenas autoimunes o resultado reservado, devendo ser considerado o estagio da doena.

CONTRAINDICAES

A administrao de clulas-tronco no poder ocorrer antes do tratamento da causa da

aplasia de medula.

APLICAO DAS CLULAS-TRONCO

A aplicao de clulas-tronco em casos de aplasia/hipoplasia de medula deve ser

realizada intramedular. A experincia prtica do veterinrio que vai definir em qual osso ser
realizada a administrao, preferencialmente utiliza-se o mero ou o fmur.

A terapia inclui trs aplicaes com intervalo de 30 dias entre cada aplicao.

TERAPIA APS APLICAO DE CLULAS-TRONCO

O uso de esterides deve ser evitado por 30 dias aps a terapia com clulas-tronco.
Entretanto, muitos animais necessitam da continuidade do tratamento com corticoides. Nesses
casos essa condio deve ser infrmada BIO CELL.
 RESULTADOS ESPERADOS

A recuperao do animal esperada com o reestabelecimento dos valores de srie

branca e vermelha dentro da normalidade. A maioria dos animais voltam a apresentar um
hemograma normal aps a terceira aplicao e a melhora clnica evidente. Entretanto, o
resultado depende da resposta individual de cada animal, do estagio da doena no inicio do
tratamento e da certeza da eliminao da cauda da aplasia/hipoplasia medular.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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 INSUFICINCIA RENAL

A doena renal definida como a ocorrncia de leses morfolgicas renais de qualquer

extenso ou severidade ou qualquer anormalidade bioqumica relacionada funo renal
(GREGORY, 2003), ou seja, indica a existncia de leso renal sem qualificar a causa, a gravidade,
a distribuio ou estgio da funo renal (NELSON; COUTO, 2001).

A insuficincia renal comea quando a reserva funcional perdida. uma condio de

decrscimo da funo renal; refere-se a um nvel de funo do rgo e no a doena como
entidade especfica (NELSON; COUTO, 2001). A insuficincia renal est presente quando h
sinais clnicos ou alteraes laboratoriais causados pela reduo da funo renal, o que s
ocorre aps uma perda considervel dos nfrons (GREGORY, 2003) - aproximadamente 75%
dos nfrons de ambos os rins (NELSON; COUTO, 2001).

A insuficincia renal pode ser classificada como aguda (IRA) e crnica (IRC) (NELSON;
COUTO, 2001). A IRA resulta de uma reduo sbita na funo renal e geralmente causada
por uma agresso txica ou isqumica que pode ser reversvel. A IRC ocorre em um perodo de
semanas, meses ou anos (NELSON; COUTO, 2001).

Segundo Togel e Westenfelder (2012), a reparao tecidual no rim na fase de

recuperao feita por clulas-tronco circulantes (MSC), clulas-tronco hematopoiticas e
clulas precursoras endoteliais. No est claro para os autores a participao significativa das
clulas-tronco encontradas no parnquima renal na reparao do rim lesionado. Todas estas
fontes celulares participam coletivamente da reparao do parnquima renal. Dependo da
extenso da leso, estas fontes celulares so incapazes de reparar o tecido lesionado. Desta
forma, a terapia celular torna-se uma interessante ferramenta teraputica. Como a fonte
fisiolgica de clulas-tronco no exclusivamente o parnquima renal, a aplicao sistmica
torna-se uma via de administrao possvel.

Togel et al. (2007) descreveu que as clulas-tronco podem contribuir em todas as fase do
desenvolvimento da insuficincia renal. As aes difusas e inespecficas sobre o parnquima
renal como um agente com aes parcrina e endcrinas, epiteliognico, vasognico, bem
como, anti-inflamatrio torna a terapia celular com uso de clulas-tronco um candidato para a
renoproteo.

As clulas-tronco mesenquimais geralmente no se diferenciam nas clulas alvo renais,

no se implantam no rim lesionado, no se aderem nas clulas alvo e no exibem diapedese.
No entanto, as aes autcrinas e endcrinas das clulas-tronco contribuem significativamente
para a retomada da funo renal. Dentre estas se destacam:

Produo de fatores de crescimento e bioativos: VEGF, HGF, IGF-1, adrenomedulina, e

outros anti-apoptticos, mitognicos e vasoprotetores e angiognicos;
 As clulas-tronco mesenquimais, quando ativadas por interleucina, interferon e TNF
alteram a produo de citocinas e aumentam a produo de molculas de adeso e de
fatores solveis que contribuem para a ao anti-inflamatria e imuno-moduladora;
Inibem a funo Clulas-B de defesa;
Estimula a regulao de clulas T, contribuindo para o reparo do tecido renal.

Quimby et al. (2011) avaliou o efeito da aplicao de clulas-tronco mesenquimais no

parnquima renal com insuficincia crnica em gatos. Apesar de ser um trabalho piloto, feito
com apenas 6 animais, alguns pontos observados so interessantes:

A via de aplicao local vivel. No entanto, a aplicao no parnquima renal requer o

aumento do nmero de sedaes, o que leva a um quadro de estresse ainda maior para
o animal.
Como a ao das clulas-tronco mesenquimais para o tratamento de leso renal tem
uma relao maior como agente endcrino e parcrino, modulando a resposta de
defesa local e as aes epiteliognicas, angiognicas, a aplicao local no se torna a via
de administrao eletiva.

INDICAES

Como visto anteriormente, o principal efeito da terapia celular na Doena Renal Crnica
a renoproteo, ou seja, quanto maior a preservao do parnquima renal no momento
da aplicao, melhores sero os resultados. As clulas-tronco no so capazes de formar
novos nfrons, por isso a sua ao est diretamente ligada quantidade de nfrons
existente, proporcionando a preservao destes e conseqentemente a melhora da
qualidade de vida dos pacientes. Animais classificados em IRIS 1 e 2 so aqueles que
apresentam melhores resultados.

A triagem de um paciente renal para receber as clulas-tronco o aspecto mais

relevante em relao ao tratamento.
No Hemograma avalia-se: Anemia, Leucocitose, Protena palsmtica;
Os nveis sricos de Uria e Creatinina srica so importantes para a avaliao do
estagio da DRC (IRIS);
A relao Protena/Creatinina urinria importante para se avaliar a proteinria;
Na urinlise avalia-se: Densidade urinria, Sedimento ativo/inativo, presena de
Bactria;
No Ultra-som avalia-se a integridade do parnquima renal, relao cortico-medular,
presena de cistos, hidronefrose, obstrues, grau de fibrose...

Os animais devem estar estveis clinicamente para receberem a terapia clulas. As

clulas-tronco no so capazes de reverter o quadro clinico de animais com prognostico
desfavorvel.
 CONTRAINDICAES

No devem ser tratados:

Animais com neoplasias malignas;
Animais com obstrues no sistema geniturinrio;
Animais com qualquer tipo de infeco, inclusive cistite.

Animais com cistos renais devem ser avaliados com cautela.

APLICAO

A aplicao das clulas ser por via intravenosa, utilizando uma bolsa/frasco de 100 ml de
soro fisiolgico como veculo.

O contedo da seringa de transporte dever ser transferido para a bolsa de soro

fisiolgico no momento da aplicao, utilizando a prpria agulha de insulina.

A velocidade de gotejamento ser a mesma utilizada para hidratao de um animal.

Se houver impossibilidade clnica de perfundir os 100 ml, reduza o volume o mnimo possvel
(60ml; 30ml, por exemplo), mantendo o tempo de aplicao de aproximadamente 30 minutos.

Sero realizadas 3 aplicaes, com intervalos de 30 dias entre cada aplicao. Aps 21
dias da aplicao os exames hemograma, uria , creatinina e relao protena/creatinina
urinria.

TERAPIA APS APLICAO DE CLULAS-TRONCO

A terapia de suporte do animal com Doena Renal Crnica deve ser mantida mesmo
aps a aplicao de clulas-tronco. Inclusive em relao dieta.

O mdico veterinrio deve ficar atento aos retornos do animal para o acompanhamento
dos exames e controle da progresso da doena.

RESULTADOS ESPERADOS

Chen et al. (2011) demonstrou a eficincia do tratamento celular sistmico com uso de
clulas-tronco mesenquimais oriundas de tecido adiposo sobre a leso renal aguda decorrente
de reperfuso sangunea. As clulas-tronco preservaram a integridade da arquitetura do
parnquima renal e reduziu a deteriorizao da funo renal, atravs dos seus efeitos anti-
inflamatrios e anti-oxidativos, alm de contribuir positivamente sobre a angiognese local.
 Zhuo et al. (2013) concluiu que a terapia celular reduz os efeitos decorrentes da
insuficincia renal, como o baixo fluxo sanguneo e o estresse oxidativo, atravs da proteo do
epitlio tubular e aumento na proliferao das clulas do parnquima renal sobrevivente.
Tanto a via de acesso, seja venosa, seja arterial, como a dose, de 1 a 5 x 106 clulas/kg de peso
vivo, apresentaram o mesmo nvel de eficincia para o tratamento celular.

Fonte: Chen et al. 2011

Os principais resultados observados so melhora clinica do animal, com aumento de

apetite e ganho de peso. Alguns animais apresentam diminuio da proteinria e reduo das
taxas sricas de uria e creatinina. Entretanto o principal ganho est na estabilizao do
processo de degenerao renal, melhorando assim a qualidade de vida dos pacientes.

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 CARDIOMIOPATIA DILATADA

A Cardiomiopatia Dilatada uma sndrome cardaca caracterizada pela dilatao das

cmaras cardacas associado com a falncia da funo sistlica e diastlica.
Segundo Ou et al. (2010), a CMD inicia desde uma dilatao assintomtica do ventrculo
esquerdo at uma evidente falncia cardaca congestiva. A etiologia da CMD est relacionada
s infeces virais, anomalias genticas e aes auto-imune.

Nagaya et al. (2005) desenvolveram modelos de ratos com CMD, aplicando 5x106 clulas
diretamente em 10 pontos do miocrdio. Aps a terapia celular, os autores observaram as
seguintes alteraes da condio cardaca:

Induo da angiognese e miognese;

Diferenciao celular das clulas-tronco transplantadas em cardiomicitos, clulas
endoteliais e fibras musculares estriadas;
Detectada a presena de clulas-tronco transplantadas no miocrdio 4 semanas aps a
aplicao;
Secreo de VEGF, HGF e IGF;
Aumento da funo cardaca;
Inibio da remodelagem do ventrculo esquerdo;
Aumento da densidade capilar;
Diminuio do volume da frao de colgeno no miocrdio;
Diminuio da presso endodiastlica do ventrculo esquerdo;
Diminuio da apoptose;
Diminuio da reao inflamatria e da resposta oxidativa;
Aumento da funo do ventrculo esquerdo;
Aumento da microvascularidade coronria.

Psaltis et al. (2008) descreveu que os objetivos especficos da terapia celular para
tratamento de doeas cardacas esto intrinsicamente relacionados ao entendimento do
processo da doena, como a isquemia no miocrdio, disfuno cardaca ou a combinao das
duas. Por exemplo, na presena da isquemia no miocrdio a terapia celular ser efetiva se as
seguintes possibilidades forem verdadeiras: a) ser fonte renovvel de clulas que iro proliferar
e diferenciar-se funcionalmente em cardiomicitos e b) contribuir para o desenvolvimento de
uma rede de vasos que alimentaro os novos cardiomicitos e a regio do miocrdio lesionado.
Segundo os autores, a dificuldade de reteno das clulas implantadas no stio de leso
cardaca, bem como a sobrevivncia das clulas na regio do miocrdio que apresenta isquemia
ou extenso processo inflamatrio, pode limitar a ao das clulas-tronco na transdiferenciao
e subseqente reparao, por si, do stio de leso. As aes parcrinas das clulas-tronco, como
por exemplo, a induo a neovascularizao e aumento na eficincia da contratilidade da fibra
muscular cardaca, podem ser os principais efeitos benficos observados na terapia celular.
Outros efeitos das aes parcrinas so relevantes para a terapia celular no corao, como as
indues migrao das clulas-tronco progenitoras cardacas ao stio de leso, bem como
ativar a sua proliferao e diferenciao. A remodelagem do ambiente extracelular relevante
para a retomada da funo cardaca pela digesto dos pontos de fibrose e rearranjo da
composio da matriz extracelular.

Na mesma linha, Gnecchi et al. (2012) prope que existem trs aes no mecanismo de
ao das clulas-tronco na reparao do tecido cardaco:

Regenerao e diferenciao das clulas-tronco em Cardiomicitos;

Vasculognese;
Aes parcrinas.

Hatzistergos et al. (2010) descrevem em sunos a ao das clulas-tronco mesenquimais

sobre as clulas-tronco cardacas, estimulando o seu crescimento e a sua diferenciao em
cardiomicitos. Neste trabalho os autores relatam que a diferenciao celular ocorre de forma
aguda, aps a aplicao, alm de estimular a rotatividade dos cardiomicitos em duas
diferentes vias: ativando as clulas-tronco cardacas (c-kit) e aumentando a velocidade do ciclo
celular dos cardiomicitos presentes.
 Na medicina veterinria, a cardiomiopatia dilatada (CMD) uma das principais doenas
cardacas que acometem os ces, sendo esta considerada uma doena primria de etiologia
desconhecida, sendo relacionadas a infeces virais, exposies a agentes qumicos que
causem o enfraquecimento da musculatura cardaca. A CMD caracterizada pelo difuso dano
cardaco, com perda de tecido funcional (fibra cardaca) e substituio deste por tecido fibroso
(fibroblasto).

Chen et al. (2010) induziu a CMD em coelhos com uso do quimioterpico doxorubicin, que
provoca, como efeito colateral, a diminuio da fosforilao oxidativa mitocondrial em fibras
cardacas, aumento da produo de superxidos reativos a ferro e, subsequente, perda da
funo miofibrilas e vacuolizao do citoplasma do cardiomicito. Estes eventos em cascata
mimetizam o incio da formao da CMD, sendo considerada a plataforma ideal para o estudo
de novas terapias para CMD, como por exemplo, a terapia celular com clulas-tronco. O fato de
possuir a circulao coronria ntegra torna a CMD uma doena potencialmente mais aplicvel
terapia celular do que o miocrdio infartado, pois ambiente mais favorvel para a fixao e a
diferenciao das clulas-tronco. Nesta mesma publicao, os autores trataram os coelhos
CMD induzidos aplicando clulas-tronco mesenquimais diretamente na parede anterior do
ventrculo esquerdo (concentrao celular de 1 x 106cels/ml). Quatro semanas aps o
tratamento, j foram observadas as junes (aderentes) funcionais clulas-clula, o que leva a
crer o incio da participao das clulas implantadas na funo contrtil do miocrdio. Assim, os
autores relataram a sobrevivncia das clulas-tronco implantadas no miocrdio, adquirindo
caractersticas de cardiomicitos, com concomitante aumento das funes sistlicas
ventriculares. Assim, a terapia celular com uso de clulas-tronco mesenquimais aumenta a
funo cardaca de corao com cardiomiopatia dilatada.

Kaparthi et al. (2008) descreveu o tratamento intra-coronrio de clulas-tronco para o

tratamento de cardiomiopatia dilatada severa em humanos. Neste trabalho, os autores
definiram como critrios de incluso, os pacientes com CMD com: angina de esforo; disfuno
sistlica do ventrculo esquerdo severa (EF<30%); doena coronariana sem CABG ou
PTCA+Stenting; Segmentos hipocinticos; acinticos ou discinticos. J como critrios de
excluso, os autores definiram pacientes com: condio clnica severa/mrbida; disfuno
sistlica do ventrculo esquerdo severa (EF>30%); derrame com significativa sequela; HIV;
pacientes com expectativa de vida curta para cncer ou doena terminais; desordens mentais;
edema pulmonar. As clulas-tronco foram ressuspensas em 45 ml de salina, sendo essas
aplicadas (de 13-170 x 106 clulas-tronco mesenquimais) vagarosamente (15 minutos) dentro
da artria coronria. Aps o tratamento, as condies clnicas dos pacientes evoluram de
classe III para classe I, a funo cardaca dos paciente melhoraram consideravelmente, tendo a
funo do ventrculo esquerdo aumentado.

Zeinaloo et al. (2011) relatou o sucesso na terapia celular com uso de clulas-tronco
mesenquimais de uma criana de 6 anos com corao CMD sem etiologia conhecida e sem
respostas aos tratamentos medicamentosos convencionais. Neste relato, os mdicos fizeram a
aplicao intra-coronariana de 27x106 clulas-tronco mesenquimais (4.8x106 clulas-tronco
mesenquimais/ml). As condies clnicas do paciente melhoraram gradualmente aps o
procedimento, passando de grau IV para II; dispneia noturna paroximal desapareceu;
aumentou o apetite; voltou a andar e a subir lances de escada. No ano anterior aplicao, o
paciente permaneceu hospitalizado por 129 dias (25 em UTI). J no ano seguinte, o paciente
permaneceu apenas 25 dias internado (9 UTI). Os exames de ecocardiograma demonstraram
melhoria na funo do ventrculo esquerdo e a da funo cardaca em geral.

Chin et al. (2011) comparou a viabilidade e segurana da aplicao direta de clulas-

tronco mesenquimais no miocrdio (0.5 1 x106 MSC/kg paciente) e a infuso intracoronria(2
3 x106 MSC/kg paciente) deste mesmo tipo celular em pacientes (humanos) com severa
cardiomiopatia dilatada crnica. As clulas-tronco provenientes da medula ssea foram
cultivadas para expanso e criopreseravadas. Para a aplicao, as clulas-tronco foram
descongeladas e lavadas para a remoo do crioprotetor. Ambas as vias de aplicao so
viveis e apresentam o mesmo nvel de segurana em humanos. Os resultados demonstraram
resoluo de pontos de fibrose no miocrdio, aumento da espessura do miocrdio e melhora
na funo cardaca (ventrculo esquerdo).

Em uma extensa reviso bibliogrfica Teng et al. (2012) descreve que a infuso
intracoronria a principal via de administrao de clulas-tronco em humanos, dado a
necessidade de acessar a artria coronria em quadros de infarto. Outras vias de
aplicao/infuso so relatadas: sub-epicardial; trans-endocardial; intra-arterial e intra-venosa.
A via intra-venosa apresenta-se como a de maior facilidade de acesso e administrao. No
entanto, o possvel aprisionamento das clulas-tronco no pulmo faz com que esta seja a via
menos eletiva nos tratamentos de leses cardacas, visto que assim ser repercutido para o
indivduo apenas o extenso efeito anti-inflamatrio pulmonar, o que insuficiente para a
reparao do tecido cardaco. A reparao do tecido lesionado necessita do contato clula-
tronco cardiomicito.

Assim, dado a complexidade do acesso ao corao na rotina da clnica veterinria no

Brasil, novas vias de acesso, bem como, o protocolo teraputico devem ser definidos para o
tratamento da cardiomiopatia dilatada em ces.
 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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Hatzistergos, K.E. et al. Bone marrow mesenchymal stem cells stimulate cardiac stem cell
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Zeinaloo, A.A. et al. Intracoronary administration of autologous mesenchymal stem cells in a
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 CERATOCONJUNTIVITE SECA

A ceratoconjuntivite seca uma sndrome causada pela diminuio da produo lacrimal

e aumento da evaporao da lgrima. A CCS considerada a freqente causa de ulcerao e
infeco de crnea por alterar a composio do filme lacrimal normal e conseqente irritao e
leso da superfcie ocular.

O filme lacrimal a interface entre o ambiente externo e a superfcie ocular, cuja funo
formar uma superfcie refratria sobre a crnea e lubrificar a plpebra, alm de manter um
ambiente extracelular (pH, teor de O2, CO2, nutrientes, concentrao de fatores de
crescimento) favorvel para as clulas epiteliais da crnea e da conjuntiva. O filme lacrimal tem
uma estrutura complexa, sendo produzido em diferentes locais. composto por trs camadas:
a) interna, camada mucosa que recobre a crnea e a conjuntiva; b) intermediria, poro
aquosa, que contm protenas hidrossolveis; c) externa, poro lipdica. Cada camada do filme
lacrimal produzida por diferentes clulas excrinas. A camada mucosa secretada por clulas
encontradas na crnea e conjuntiva. J a camada intermediria secretada pela glndula
lacrimal principal e acessria. A camada lipdica produzida pelas clulas glandulares
meibomianas incorporadas na plpebra. (Zoukhri, 2010).

A glndula lacrimal caracterizada por ter uma estrutura tbulo-acinar, contendo cinos,
ductos, nervos, clulas mioepiteliais e clulas conjuntivas. Os cinos secretam eletrlitos, gua
e protenas, para formar o fluido primrio. Ao passar pelos ductos, o fluido primrio sofre
alteraes em sua composio. As clulas mioepiteliais so providas de actina, semelhante s
encontradas na musculatura lisa, assumindo o papel contrtil que facilita a expulso da lgrima.
A produo inadequada ou insuficiente da camada aquosa do filme lacrimal leva a
ceratoconjuntivite seca. (Zoukhri,2010).

Segundo Chen (2007), durante a evoluo da ceratoconjuntivite seca so observadas o

aumento da osmolaridade do filme lacrimal e a reduo da concentrao de importantes
fatores epiteliognicos secretados pela glndula lacrimal, como por exemplo o EGF.
Alteraes da populao celular so tambm observadas durante o desenrolar da CCS, com
anormal proliferao e diferenciao do epitlio da superfcie ocular, diminuio da densidade
de clulas caliciformes da conjuntiva, o que leva a concluir que a osmolaridade lacrimal
inversamente proporcional a concentrao das clulas caliciformes no epitlio da conjuntiva.
Essas mudanas diminuem a ao de proteo exercida pela crnea ntegra. Uma das principais
funes do epitlio conjuntival a produo de mucina, que lubrifica e protege a superfcie
ocular.

Allan et al. (2011) reportou que outros fatores que exacerbam a resposta do sistema
imune, podem de forma secundria alterar a funo da glndula lacrimal podem acometer a
glndula lacrimal, por levar a uma produo inadequada da frao de gua na lgrima. Doenas
como a Sndrome de Sjogren, Sarcoidose, Artrite Reumatide, doenas autoimunes, ou mesmo
o transplante de medula ssea, so algumas causa para o aparecimento da ceratoconjuntivite
seca. Estes eventos so marcados pela infiltrao de clulas de defesa no parnquima da
glndula lacrimal, diminuio da populao de clulas secretoras (clulas acinares) e aumento
da produo de citocinasproinflamatrias. As citocinas inibem a liberao de
neurotransmissores, o que levam a um insuficiente secreo da glndula lacrimal.

Os eventos inflamatrios incitam o desenvolvimento de apoptose e autofagia das clulas

acinares. Estes processos, por sua vez, eliciam o mecanismo de reparao tecidual, atravs da
estimulao da proliferao de clulas-tronco/progenitoras localizadas na regio perifrica aos
ductos. Durante o processo inflamatrio, h a infiltrao de clulas de defesa que, na glndula
lacrimal, se estabelecem na regio perifrica aos ductos. Este posicionamento das clulas de
defesa, durante o ataque do sistema imune pode diminuir o contingente de clulas-
tronco/progenitoras ali residentes, levando a um comprometimento do mecanismo de auto-
reparo da glndula lacrimal. Assim o desafio para a reparao da glndula lacrimal consite em
controlar a extenso da inflamao e da resposta imune, alm, claro, de estimular a
multiplicao da populao de clulas acinares. (Zoukhri, 2010).

Chen et al. (2007) demonstrou em ratos com CCS induzida que durante a fase aguda da
doena existe uma alterao da populao de clulas caliciforme localizadas na conjuntiva. A
diminuio no nmero das clulas caliciforme pode ocorrer visto que o aumento da apoptose
na fase aguda ocorre principalmente na regio de maior densidade das clulas caliciformes.
Aliado a este evento, foi observado que o nvel de proliferao de clulas epiteliais da
conjuntiva foi maior do que a diferenciao das clulas progenitoras peri-tubulares em clulas
caliciformes.
 Em humanos, Xu et al. 2012, demonstrou a eficincia no tratamento de pacientes
portadores autoimune Sndrome de Sjogren que, dentre os sinais clnicos, est a CCS. O
tratamento, clulas-tronco mesenquimais foram infundidas por via endovenosa, a uma
concentrao celular de 1x106cls/kg peso vivo, sem pr-medicao. Os resultados
demonstram uma atividade imunoreguladora das clulas-tronco, inibindo a produoe funo
de clulas T, o que as conferem um eficaz tratamento para paciente com Sndrome de Sjogren.

Wood et al. 2012, postulou que as aes imunomoduladoras das clulas-tronco

mesenquimais, inibindo a proliferao de clulas-T, alterando a funo de clulas-B e fazendo
down-regulation de MHC-II, tornam estas clulas potenciais agentes para o tratamento de
doenas autoimune, incluindo ceratoconjuntivite seca e a artrite reumatoide. Neste trabalho,
os autores analisaram a distribuio e o posicionamento das clulas-tronco marcadas aps
aplicaes locais. Guiados por ultra-som, os autores aplicaram2 x 106 MSC-Ad/0,2ml-PBS na
regio perilacrimal e na regio da terceira plpebra, em ces, semanalmente, durante 6
semanas. Os animais tambm receberam 5 x 106 MSC-Ad/0,5ml-PBS na articulao do
calcneo, 3 sesses, a cada 15 dias. Na ltima semana de aplicao, os animais receberam 66 x
106 MSC-Ad/3ml-PBS na articulao do calcneo. Os resultados demonstraram a permanncia
das clulas nos stios de aplicaes locais. As clulas-tronco marcadas aplicadas na regio
perilacrimal permaneceram no stio de aplicao por at 3 semanas, sendo que o pico de
intensidade observado na 1 e 2 semana e diminuio do sinal na 3 semana. Os ces que
receberam aplicao de clulas-tronco na articulao do calcneo tiveram, alm da
permanncia na prpria articulao (sinais foram observados por duas semanas e com pico de
fluorescncia uma semana aps a aplicao), migrao significativa de clulas-tronco para o
timo e para o trato gastrointestinal (estmago, duodeno, jejuno e clon). Outros tecidos
analisados, inclusive o pulmo, no apresentaram registro das clulas-tronco marcadas. A
presena de clulas-tronco marcadas no timo coerente com a observao das aes que as
clulas-tronco exercem sobre o sistema imune, atuando sobre as as clulas de defesa, Cls-T
(down-regulation, diminundo a sua produo) e Cls-B (modulando a sua ao).

Marfe et al. (2012) relatou o uso de clulas-tronco autlogas para o tratamento de

lceras na crnea e descolamento de retina em equinos. Os casos de lcera na crnea de
equinos so potencialmente ameaadores ao globo ocular, podendo levar a perda da viso pela
cicatriz na crnea ou pela perda do olho, em casos de endoftalmites, glaucomas e atrofia
ocular. A terapia celular foi feita pelo gotejamento (colrio com clulas-tronco) local, aplicao
local na regio subconjuntival, na artria oftlmica e infuso intra-venosa (no especificado). Os
autores no especificaram a concentrao de clulas-tronco por aplicao. Como cada animal
apresentou uma causa diferente para as leses da crnea e extenses de leses distintas, os
autores individualizaram o protocolo teraputico. Todos os animais foram tratados
previamente com terapia convencional, sem sucesso na retomada da funo ocular. Aps a
terapia celular, todos os animais apresentaram regresso nas suas ulceraes e retorno da
acuidade visual.

METODOLOGIA

Anamnese:
Obter informaes relevantes a respeito da etiologia clnica. Registrar o peso do animal.

Dados patologia clnica e diagnstico por imagem:

Todos os dados de patologia clnica (sangue) que informe a condio do sistema
imunolgico devero ser feitas em D0 (dia da aplicao), D15, D30 e D60, a saber:
Hemograma Completo

Coleta de Sangue:
Ser coletado de 5 a 10 ml de sangue do animal no momento da coleta do tecido adiposo.
O sangue coletado dever ser mantido refrigerado e enviado para o laboratrio junto com o
tecido coletado.
 Ao chegar ao laboratrio, no fluxo laminar, transfira o sangue para um tubo de 15ml e
centrifugue por 5 min a uma velocidade de 280G. Remova o soro, transferindo-o para um
criotubo estril. Congele-o.

Tecido Adiposo:
Todos os procedimentos descritos nos POPs Lab. Clula-Tronco devero ser aplicado
neste trabalho.

O nmero de garrafas de cultivo celular criadas est relacionado quantidade de clulas

necessrias para a terapia celular.

Sero realizadas 2 sesses de aplicaes, com intervalos de 21 dias entre cada aplicao.
Em cada sesso sero aplicadas:

Via endovenosa: 2 x 106 clulas/ Kg animal;

Regio Perilacrimal: 1 x 106 clulas/ olho;
Regio Conjuntival: 1 x 106 clulas/ olho;
3a Plpebra: 0,5 x 106 clulas/ olho.

Transporte de Clulas:
Ser utilizado o meio de Transporte que reduz a agregao celular, acrescido de soro
autlogo (5%). Abaixo seguem as recomendaes do envio de clulas para cada via de
aplicao:

Via Endovenosa: As clulas totais sero ressuspensas em 10ml do meio de transporte e

enviadas em uma seringa de 10ml ou 20ml, tendo uma agulha de insulina acoplada a
ela;
Aplicaes locais: 2,5 x 106 clulas sero ressuspensas em 0,5ml de meio de transporte:
o Regio Perilacrimal: 1 seringa com 0,2ml de meio de transporte e clulas;
o Regio Conjuntival: 1 seringa com 0,2ml de meio de transporte e clulas;
o 3a Plpebra: 1 seringa com 0,1ml de meio de transporte e clulas.

Aplicaes:
Via Endovenosa: A aplicao das clulas por esta via utilizar uma bolsa/frasco de 100
ml de soro fisiolgico como veculo.O contedo da seringa de transporte dever ser
transferido para a bolsa de soro fisiolgico no momento da aplicao, utilizando a
prpria agulha de insulina. A velocidade de gotejamento ser a mesma utilizada para
hidratao de um animal. Se houver impossibilidade clnica de perfundir os 100ml,
reduza o volume o mnimo possvel (60ml; 30ml, por exemplo);
Aplicaes locais: devero ser feitas diretamente:
o Regio Perilacrimal: 2 stios de aplicao
o Regio Conjuntival: 2 stios aplicao
o 3a plpebra: 1 stio de aplicao
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