Anda di halaman 1dari 8

Deakin Online Research

Ini adalah versi yang dipublikasikan:

Wassermann, Gustavo Javier dan Afonso, Luis Orlando Bertolla 2002, Validasi teknik aceto-carmine untuk
mengevaluasi seks fenotipik di Nile tilapia (Oreochromis niloticus) goreng, Ciencia pedesaan, vol. 32, tidak ada. 1, pp.
133-139.

Tersedia dari Deakin Penelitian Online:

http://hdl.handle.net/10536/DRO/DU:30048530

Direproduksi dengan izin dari pemilik hak cipta.

Hak cipta : 2002, Centro


Ciencia Pedesaan, Santa Maria, V.32, n.1, p.133-139 2002 133
ISSN 0103-8478

VALIDASI DARI aceto-CARMINE TEKNIK UNTUK MENGEVALUASI


FENOTIPIK SEX DI IKAN NILA ( Oreochromis niloticus) MENGGORENG

VALIDAO DA Tecnica DO aceto-CARMIM PARA AVALIAR O SEXO DE ALEVINOS


DE nila nilotica ( Oreochromis niloticus).

Gustavo Javier Wassermann 1 Lus Orlando Bertolla Afonso 2

RINGKASAN espermatognias e espermatcitos, enquanto que sebagai fmeas foram facilmente


identificadas pela presenca de ovcitos ada Estdio perinucleolar. Sebuah tcnica
Dalam penelitian ini metode untuk mengevaluasi seks fenotipik provou ser eficiente no s para avaliar sebuah proporo dos sexos, mas tambm
di ikan nila disahkan. Sebuah teknik yang menggunakan aceto-carmine labu porque permite avaliao imediata melakukan sexo gonad e demanda menos tempo e
tunggangan untuk noda seluruh jaringan gonad untuk pemeriksaan mikroskopis trabalho.
(Metode 2- labu tunggangan) dibandingkan dengan teknik berdasarkan histologi
tradisional. Sekitar 2600 ikan nila goreng berat dan pengukuran, masing-masing, Palavras-chave: avaliao melakukan sexo, nila nilotica.
antara
0.25-2.50g dan 26-53mm, berusia 35 sampai 60 hari setelah menetas (DAH), yang
bergender menggunakan metodologi ini. in situ pemeriksaan mikroskopis pada gonad juga PENGANTAR
dilakukan. Sebuah sexing handal menggunakan labu gunung mungkin dengan ikan yang
beratnya lebih dari
0.500g, 45-47 DAH. Hasil dari pengamatan mikroskopis menggunakan noda The Nile tilapia ( Oreochromis niloticus)
aceto-carmine bertepatan 100% dengan pemeriksaan histologi. jaringan gonad laki-laki adalah salah satu spesies ikan paling berbudaya di seluruh dunia.
ditandai dengan adanya kista yang mengandung spermatogonium dan spermatosit, Alasan utama yang membuat spesies cocok untuk budidaya
sementara perempuan yang mudah diidentifikasi dengan adanya oosit pada tahap
adalah resistensi terhadap penyakit dan toleransi terhadap
perinucleolar. Teknik ini terbukti efisien tidak hanya dalam hal mengevaluasi proporsi
seks dalam ikan tetapi juga karena memungkinkan evaluasi segera seks gonad dan berbagai parameter lingkungan, selain daging putih tanpa duri
menuntut sedikit waktu dan tenaga kerja. internal. Di sisi lain, salah satu masalah utama dalam kultur ikan
nila adalah kematangan seksual dewasa sebelum waktunya, yang
dapat dicapai saat ikan berat 20- 30g (4-5 bulan setelah
Kata kunci: evaluasi seks, ikan nila.
menetas). reproduksi yang tidak terkendali biasanya
menyebabkan kolam ramai dan akibatnya mengurangi
RESUMO pertumbuhan (VARADARAJ & Pandian, 1987).

Neste estudo foi validado um Metodo para avaliar o


sexo fenotpico de alevinos de nila nilotica. Foi comparada uma tcnica que usa
aceto-carmim para corar o tecido gonad, o qual examinado em microscpio, com Ada beberapa cara mengendalikan reproduksi
histologia tradicional. Aproximadamente 2600 alevinos de nila nilotica com idade entre pada ikan (DONALDSON et al., 1996). Cara yang paling
35 e 60 dias apos sebuah ecloso (DAE), pesando e medindo, respectivamente, efektif dan luas menghindari reproduksi yang tidak diinginkan
di ikan nila adalah budaya semua laki-laki populasi, yang
0,250-2,50g dan foram 26-53mm
sexados usando este Metodo. Foi tambm realizado um exame macroscpico das
biasanya dicapai melalui pemberian hormon steroid alami
Gonadas in situ. Foi Possivel sexar com acerto, usando o Metodo de aceto-carmim, atau sintetis (androgen) dalam pakan (Pandian & SHEELA,
alevinos com peso atasan 1995). Efisiensi metode ini tergantung pada beberapa faktor
0.50g, 45-47 DAE. Os Resultados das observaes microscpicas usando o corante
(ukuran dan umur ikan, jumlah dan jenis hormon, periode
aceto-carmim coincidiram em 100% com o exame histolgico. O tecido gonad dos
machos foi
caracterizado pela presenca de cistos que continham

1 Engenheiro Agrnomo, Mestre.


2 Zootecnista, PhD., Departemen Ilmu Hewan, Sekolah Agronomi, Universitas Federal Rio Grande do Sul, Av. Bento Goncalves, 7712, Porto Alegre, RS, Brasil, 90.540-000.

E-mail: afonso@attcanada.ca. Penulis untuk korespondensi.


Recebido para publicao em 09.02.01. Aprovado em 30.05.01
134 Afonso et al.

administrasi, dll) (SHELTON et al., 1981), yang membuat dioleskan ke gonad. Prosedur ini mengeras jaringan gonad
sulit untuk menghasilkan 100% laki-laki memfasilitasi penghapusan. Setelah pemeriksaan makroskopik
populasi. Ketika maskulinisasi berhasil, proporsi laki-laki anterior dan posterior ligamen dipotong, dan kedua gonad yang
dapat bervariasi dari 90-100%. diangkat dengan menggunakan tang dan ditempatkan pada slide
Biasanya, tumbuh-out petani ikan membeli jenis kelamin kaca. Solusi aceto-carmine disiapkan sesuai dengan
terbalik Nil goreng nila, diduga semua laki-laki, ketika mereka berusia GUERRERO & SHELTON (1974). Awalnya, 0.5g indigo carmine
30-60 hari, dengan berat tidak lebih dari 2g. Namun, dalam banyak kasus ditambahkan ke 100m l asam asetat (45%) dan direbus selama 5
setelah reproduksi 4-5 bulan akan mulai dan ikan tidak akan tumbuh ke menit. Setelah pendinginan larutan disaring menggunakan kertas
ukuran pasar penuh. saring dan dipindahkan ke botol gelap. solusi aceto-carmine
ditambahkan dan jaringan ditutup dengan kaca penutup. Kedua
ikan nila yang dimorfik seksual, yang gonad kemudian diperiksa atas seluruh panjang mereka di
memungkinkan sexing melalui pemeriksaan papilla genital bawah mikroskop senyawa menggunakan perbesaran 100 x dan
bahkan ketika ikan kecil (AFONSO & LEBOUTE, 1993). 400 x (Metode 2).
Umumnya, efisiensi sex reversal
pengobatan dievaluasi melalui
analisis histologis jaringan gonad atau melalui metode Gonad dari 40 ikan diperiksa dengan menggunakan
aceto-carmine squash (GUERRERO & SHELTON, 1974), metode 1 dan 2, dengan berat antara 0,50 dan 1,50g, diserahkan
yang terakhir belum divalidasi untuk ikan nila. ke histologi. jaringan tetap dalam larutan Bouin selama 6 jam,
dehidrasi, tertanam dalam parafin, diwarnai dengan hematoksilin
Dalam penelitian ini protokol yang sama dengan yang dan eosin dan dipotong (5m) melintang.
GUERRERO & SHELTON (1974) disahkan, yang merupakan metode
sederhana, cepat dan efektif untuk sexing ikan nila goreng. Protokol ini
dapat berfungsi sebagai alat baik untuk mempercepat akses ke hasil HASIL
dalam studi maskulinisasi atau untuk digunakan oleh produsen ikan
untuk memeriksa persentase laki-laki ketika membeli goreng untuk Setelah jeroan telah dihapus dan gonad terkena adalah mungkin

kaus dalam tumbuh-out kolam. untuk membuat perbedaan makroskopik antara laki-laki dan perempuan gonad.
Gonad ikan seberat 0,25 untuk 0.45g bisa ditemukan, namun pemeriksaan
makroskopik mereka (Metode 1) sulit karena ukurannya yang kecil. penghapusan

METODE selanjutnya terhambat oleh kerapuhan jaringan, dan pengamatan mikroskopis


pada labu tunggangan juga sulit karena kurangnya diferensiasi sel. perbedaan

Nil telur ikan nila dikumpulkan dari perempuan handal antara jenis kelamin yang mungkin dengan ikan lebih berat dari 0.50g.

disimpan di Budidaya Laboratorium Federal University of Rio Morfologi eksternal dari gonad dan lokasi dan penyisipan mereka di dalam

Grande do Sul dan diinkubasi artifisial (AFONSO et al., 1993). rongga perut yang pengamatan berguna untuk menentukan jenis kelamin gonad

Setelah berenang, goreng dipindahkan ke beberapa 120 l plastik menggunakan Metode 1. gonad Pria yang tipis, tembus dan terletak bagian perut

tank dan dipelihara pada suhu air 27 1C. Sekitar 2600 goreng, ke kandung kemih berenang, memperluas caudally dari kepala ke papilla genital .

dari 20 sampai 60 hari setelah menetas yang bergender. berat Angka 1A dan jaringan testis 1C acara di bawah mikroskopis membedah pada

ikan dan panjang bervariasi sesuai dengan usia 0,25 untuk 2.0g perbesaran yang berbeda. Angka 1B dan 1D menunjukkan gonad yang sama

dan 26mm untuk 53mm, masing-masing, selama periode ini. setelah penambahan larutan Bouin ini. Ketika Bouin ini berinteraksi dengan
jaringan testis itu diberikan ketegasan dan integritas memfasilitasi identifikasi dan
penghapusan gonad. Tanpa penambahan sebelum gonad laki-laki Bouin ini

Itu in situ makroskopik (Metode 1) dan labu sangat sulit untuk menghapus karena kerapuhan mereka, dan kecenderungan

dipasang mikroskopis (Metode 2) untuk membentuk koil ketat sekali terpisah. Setelah mengeluarkan gonad dari

pengamatan dibandingkan dan Metode 2 divalidasi secara rongga perut dan menempatkan mereka pada slide kaca kami mengamati bahwa

histologis. Sebelum pengamatan, ikan dibunuh oleh sengatan testis mudah diserap solusi noda dan ketika kontak dengan itu digulung,

dingin (suhu air dari 0C), ditimbang, diukur, dan dibedah. meskipun pengobatan sebelum Bouin ini. Ketika Bouin ini berinteraksi dengan

Untuk pemeriksaan mikroskopis (Metode 1) ikan dipotong jaringan testis itu diberikan ketegasan dan integritas memfasilitasi identifikasi dan

bagian perut, menggunakan pisau bedah, dari papilla genital penghapusan gonad. Tanpa penambahan sebelum gonad laki-laki Bouin ini

ke dasar sirip dada. Sebuah jendela pada sisi samping dibuka sangat sulit untuk menghapus karena kerapuhan mereka, dan kecenderungan

dan jeroan telah dihapus, meninggalkan gonad, kandung untuk membentuk koil ketat sekali terpisah. Setelah mengeluarkan gonad dari

kemih berenang dan ginjal di tempat. Setelah sepasang gonad rongga perut dan menempatkan mereka pada slide kaca kami mengamati bahwa

diidentifikasi, pengamatan makroskopik berdasarkan testis mudah diserap solusi noda dan ketika kontak dengan itu digulung,

morfologi, lokasi, dan penyisipan jaringan gonad dibuat. meskipun pengobatan sebelum Bouin ini. Ketika Bouin ini berinteraksi dengan

Kemudian, beberapa tetes larutan Bouin ini adalah jaringan testis itu diberikan ketegasan dan integritas memfasilitasi identifikasi dan
penghapusan gonad. Tanpa penambahan sebelum gonad laki-laki Bouin ini
sangat sulit untuk menghapus karena kerapuhan mereka, dan kecenderungan untuk membentuk koil keta

Ciencia Pedesaan, v. 32, n. 1, 2002.


Validasi teknik aceto-carmine untuk mengevaluasi seks fenotipik di nila ( Oreochromis niloticus) menggoreng. 135

Gambar 1 - pemeriksaan makroskopik dari testis (A, B, C dan D) dan ovarium (E, F, G dan H) menggunakan perbesaran baik 6x (A, B, E dan
F) atau 15 x (C, D, G dan H), menambahkan (B, D, F dan H) atau tidak (A, C, E dan solusi G) Bouin ini. Te, testis; li, ligamen; Ov, ovarium.

Ciencia Pedesaan, v. 32, n. 1, 2002.


136 Afonso et al.

gonad perempuan tebal buram, memiliki bentuk Hasil pemeriksaan makroskopik (Metode 1) bertepatan 100%
bulat, dan juga terletak di sisi ventral dari kandung kemih dengan orang-orang dari sexing mikroskopis (Metode 2).
berenang. Namun, bagian anterior dari ovarium terletak lebih
caudally dari testis dan itu mungkin untuk mengidentifikasi Untuk memvalidasi Metode 2 untuk ikan nila kami
ligamen yang diadakan jaringan untuk dinding tubuh (Angka 1E, mengamati gonad ikan yang sama (40 total) di bawah Metode 2 dan
1F, 1G dan 1H). Jaringan ovarium menunjukkan kurang afinitas histologi tradisional. Angka 2A, 2C dan 2E menunjukkan gonad dari 3
untuk solusi noda dan kontras dengan jaringan testis tidak ikan bergender dengan Metode 2, sementara angka 2B, 2D dan 2F
menggulung ketika kontak dengan itu. Itu menunjukkan jaringan yang sama disampaikan kepada analisis
histologis.

Gambar 2 - Validasi teknik noda aceto-carmine untuk jaringan testis. A, C dan E: jaringan testis diwarnai dengan aceto-carmine. B, D
dan F: jaringan testis yang sama di bawah histologi (400 x). Cys, kista; Sc, spermatosit; Sp: spermatogonium.

Ciencia Pedesaan, v. 32, n. 1, 2002.


Validasi teknik aceto-carmine untuk mengevaluasi seks fenotipik di nila ( Oreochromis niloticus) menggoreng. 137

Di bawah Metode 2 jaringan gonad didefinisikan sebagai testis histologi: 3B, 3D dan 3F). oosit di itu
oleh kehadiran kista. Kadang-kadang hal itu mungkin untuk Tahap perinucleolar diamati. Namun nukleolus yang lebih
mengidentifikasi tahap perkembangan sel di dalam kista. jelas terlihat melalui histologi. Definisi seks gonad dari 40
Melalui histologi, adalah mungkin untuk menentukan tahap ikan diperiksa di bawah Metode 2 dikonfirmasi oleh
sel-sel pada testis, aalthough kista batas tidak bisa jelas pemeriksaan histologi.
menjadi. Di sisi lain, di ovarium adalah mungkin untuk
mengidentifikasi jenis yang sama struktur dengan dua teknik Ketika sexing ikan dengan metode labu digunakan
(Metode 2: Angka 3A, 3C dan 3E; kriteria berikut untuk menentukan laki-laki dan jaringan gonad
perempuan: keberadaan cyst-

Gambar 3 - Validasi teknik noda aceto-carmine untuk jaringan ovarium. A, C dan E: jaringan ovarium diwarnai dengan aceto-carmine. B, D dan
F: jaringan ovarium yang sama di bawah histologi (400 x). Dalam semua kasus adalah mungkin untuk mengidentifikasi oosit pada tahap perinucleolar. Panah In- dicate nukleolus.

Ciencia Pedesaan, v. 32, n. 1, 2002.


138 Afonso et al.

seperti struktur yang mengandung spermatogonium dan spermatosit oosit yang diamati pada tahap perinucleolar dalam ovarium (Gambar
dan penampilan oosit pada tahap perkembangan yang berbeda. Hal 4B). Sebuah perbesaran 200 x (Gambar 4C dan 4D) memungkinkan
ini dimungkinkan untuk membedakan dengan jelas testis (Gambar 4, definisi yang lebih baik dari apa yang terlihat pada 100 x. Pada
A, C dan E) dari indung telur (Gambar 4, B, D dan F). Pada perbesaran 400 x kista di dalam testis yang didefinisikan dengan baik
perbesaran 100 x (Gambar 4A) itu tidak mungkin untuk menentukan dan spermatogonium dan spermatosit jelas dapat diamati (Gambar 4E).
struktur sel testis, meskipun kista bisa dengan mudah dilihat. Di sisi Dalam ovarium pada 400 x itu semakin menegaskan pengamatan pada
lain, pada perbesaran ini waaaas 100 dan 200 x (Gambar 4F).

Gambar 4 - seks fenotipik Nil goreng ikan nila menggunakan teknik aceto-carmine. gonad jantan dan betina pada 100 x (A dan B), 200 x (C dan D)
dan 400 x (E dan F). Cys, kista; Oc, oosit.

Ciencia Pedesaan, v. 32, n. 1, 2002.


Validasi teknik aceto-carmine untuk mengevaluasi seks fenotipik di nila ( Oreochromis niloticus) menggoreng. 139

DISKUSI Rasio dalam studi kontrol seks atau oleh produsen untuk
memeriksa keberhasilan proses sex reversal.
Makroskopik Teknik (Metode 1) terbukti menjadi teknik
tambahan yang memadai untuk sexing ikan nila di atas 0.50g. UCAPAN TERIMA KASIH
Namun, tidak memungkinkan mendefinisikan perbedaan antara
jenis kelamin berdasarkan struktur selular, yang dapat Para penulis berterima kasih kepada staf Perikanan Budidaya Laboratorium

UFRGS, Dr MT Schifino-Wittmann, serta staf dari Pathos Laboratorium. Kami juga


menyebabkan beberapa salah tafsir ketika baru saja sexing
ingin mengucapkan terima kasih Dr Edward M. Donaldson dan Jack Smith untuk revisi
makroskopik digunakan.
ilmiah naskah ini. Penelitian ini didukung oleh FAPERGS hibah: 98 / 1555,7 dan
CNPq Research Award 520.066 / 98-7 untuk Luis Afonso.
Validasi teknik squash (Metode 2) melalui histologi
menunjukkan bahwa Nil goreng ikan nila di atas 0.50g bisa
efisien bergender dengan metode ini. Metode aceto-carmine REFERENSI
dikembangkan oleh GUERRERO & SHELTON (1974) untuk
AFONSO, LOB; LEBOUTE, EM Metodo para sexagem sebuah
sexing nila aurea ( Oreochromis aureus) dan bluegill ( Lepomis
visual yang de alevinos de nila nilotica ( Oreochromis niloticus).
macrochirus) telah digunakan tanpa sebelumnya Dalam: Encontro RIOGRANDENSE DE Tecnicos EM AQUICULTURA, 4, 1993,
Porto Alegre, RS, Brasil, Anais ...
pengesahan untuk sexing nila Porto Alegre \; UFRGS, 1993. p.100-103. AFONSO, LOB; GUDDE, DH;

(VARADARAJ, 1989 dan VARADARAJ & Pandian, 1991). Sebuah


LEBOUTE, EM Metodo
teknik yang dikembangkan untuk pewarnaan kromosom dalam labu para incubacao buatan de Ovos de nila nilotica ( Oreochromis niloticus). Revista

dari bahan tanaman juga telah digunakan untuk sexing ikan nila da Sociedade Brasileira de Zootecnia, Brasil, ayat 22, p.502-505, 1993.

(GALE et al., 1999). Kriteria yang digunakan dalam penelitian ini untuk AFONSO, LOB; WASSERMANN, GJ; Oliveira, RT Sex

menentukan gonad jantan dan betina yang lebih spesifik dari yang
pembalikan dalam ikan nila ( Oreochromis niloticus) menggunakan inhibitor
digunakan oleh GUERRERO & SHELTON (1974). Selanjutnya gonad
aromatase nonsteroid. Journal of Experimental Zoologi, New York, v.290,
bernoda yang bergender (Metode
p.177-181, 2001. DONALDSON, EM; Devlin, RH; PIFERRER, F. Hormon

2) di bawah mikroskop majemuk dengan menggunakan dan kontrol seks pada ikan dengan penekanan pada salmon. Asia Perikanan
perbesaran mulai dari 100 x 400 x. Karena kedua gonad Society, Manila, ayat 9, p.1-8, 1996. GALE, WL; FITZPATRICK, MS; LUCERO, M., et
telah dihapus utuh dari
al.
rongga perut, adalah mungkin untuk mengamati gonad Maskulinisasi ikan nila ( Oreochromis niloticus) dengan pencelupan dalam
longitudinal pada kedua jenis kelamin, dan jika penyelidikan androgen. Budidaya Perikanan, Amsterdam, v.178,
p.349-357 1999.
lebih lanjut diperlukan adalah mungkin untuk melanjutkan ke
analisis histologis. Teknik labu juga memungkinkan identifikasi GUERRERO, RD; SHELTON WL Sebuah aceto-carmine labu
individu interseks di Nile tilapia, terutama dengan kehadiran teknik untuk sexing ikan remaja. Progresif Fish- culturist, v.36, p.56, 1974.

oosit tersebar di antara jaringan testis (AFONSO


Pandian, TJ; SHEELA, SG hormonal induksi sex reversal
et al., 2001). Demikian pula, VARADARAJ (1989) interseks pada ikan. Budidaya Perikanan, Amsterdam, v.138, p.1-22, 1995. SHELTON,
diidentifikasi Mujair dengan menggunakan
WL; GUERRERO, DR; Faktor Macias, JL
teknik aceto-carmine squash (GUERRERO &
mempengaruhi androgen seks pembalikan dari nila aurea.
SHELTON, 1974). sexing handal, di mana morfologi Budidaya Perikanan, Amsterdam, ayat 25, p.59-65, 1981. VARADARAJ, K.
dan seluler
Feminisasi Mujair
perbedaan antara jenis kelamin, bisa dibuat mungkin dengan
oleh administrasi Dietilstilbestrol. Budidaya Perikanan,
ikan lebih berat dari 0.5g (di atas 32mm dan 45-47 DAH). Amsterdam, v.80, p.337-341, 1989.

VARADARAJ, K .; Pandian TJ maskulinisasi


Singkatnya, metode yang dijelaskan untuk sexing ikan
Mujair dengan pemberian 17 - metil 5-androsten-3 - diol melalui membesarkan
nila pewarnaan jaringan gonad dan memeriksanya mikroskopis
air. Ilmu saat ini,
terbukti efektif. Selain itu, metode ini memungkinkan untuk analisis Columbus, v.56, p.412-413.1987. VARADARAJ, K .; Pandian TJ Pengaruh
cepat proporsi seks dan juga menuntut materi kurang, tenaga kerja pelarut 17 - ethynyltestosterone dalam tiga pelarut yang berbeda pada sex
dan waktu dari prosedur histologis. Teknik ini dapat digunakan baik reversal dari Mozambik nila. Progresif Ikan-culturist, v.53,
sebagai alat untuk menentukan jenis kelamin
p.67-71, 1991.

Ciencia Pedesaan, v. 32, n. 1, 2002.