Prosedur kloning

Ligase
Fresh produc PCR 2 L
10x ligation buffer 1 L
PET Sumo Vector 2 L
T4 DNA ligase 1 L
Steril Water 1 L
+
Plasmid DNA 10 L

Inkubasi 15 oC, 4 jam/12 oC O/N, dibiarkan dalam suhu ruang selama 30 menit
NB: Taruh ligation pada suhu -20 oC sampai siap untuk transformasi

Transformasi
a. Ambil tabung tutup coklat (BL 21)
b. Add 5-10 ug plasmid DNA (mix dengan tip, tapi tidak boleh dipipetting)
c. Inkubasi selama 30 menit dalam es
d. Heat-shock cell 30 detik 42 oC (50 detik 42 oC)
e. Segera taruh tabng dalam es
f. Add 250 ul SOC medium
g. Tutup tabung dengan erat dan inkubasi 37 oC selama 1 jam dengan getar (200 rpm)
h. Tambahkan seluruh reaksi transformasi sampai 10 ml LB yang mengandung 50 ng/ml
kanamisin (dan 1% glukosa, jika diinginkan)
i. Inkubasi 37 oC, selama 24 jma.