Artigo

SACARIFICAÇÃO DA BIOMASSA
LIGNOCELULÓSICA ATRAVÉS DE PRÉ-HIDRÓLISE
ÁCIDA SEGUIDA POR HIDRÓLISE ENZIMÁTICA:
UMA ESTRATÉGIA DE “DESCONSTRUÇÃO” DA
FIBRA VEGETAL
RESUMO
Larissa Canilha,
Adriane M. F. Milagres,
A presente revisão procura abordar, de forma objetiva, os principais aspectos en- Silvio S. Silva,
volvidos na sacarificação da biomassa lignocelulósica por meio de pré-hidrólise João B. Almeida e Silva,
Maria G. A. Felipe,
ácida da hemicelulose seguida por hidrólise enzimática da celulose. Esta estratégia George J. M. Rocha,
de “desconstrução” da fibra vegetal é amplamente reportada na literatura científica André Ferraz e
e apresenta potencial para aplicação em escala industrial na produção de diversos Walter Carvalho*
produtos a partir de materiais lenhosos como o bagaço de cana-de-açúcar. Universidade de São Paulo,
Escola de Engenharia de Lorena,
Palavras-chave: materiais lignocelulósicos, pré-tratamento com ácido diluído, hi- Departamento de Biotecnologia

drólise enzimática *Autor para correspondência:

Estrada Municipal do Campinho, s/n
SUMMARY Caixa Postal 116
CEP 12602-810. Lorena. SP
Fone: (12) 3159-5129
This review intends to address, in an objective way, the main aspects involved Fax: (12) 3153-3133
E-mail: carvalho@debiq.eel.usp.br
in the saccharification of the lignocellulosic biomass by acid pre-hydrolysis of the
hemicellulose followed by enzymatic hydrolysis of the cellulose. This strategy of
“deconstruction” of the plant fiber is widely reported in the literature and shows
potential for application in industrial scale in the production of several goods from
woody materials such as the sugarcane bagasse.

Keywords: lignocellulosic materials, pre-treatment with dilute acid, enzymatic

hydrolysis

INTRODUÇÃO

A autossuficiência energética é tida como pré-requi-
sito fundamental para a segurança de uma nação. Por
exemplo, a crise do petróleo deflagrada na década de
70 acarretou em prejuízos marcantes à economia glo-
bal devido à vaidade e onipotência dos dirigentes de
nações produtoras de petróleo localizadas no Orien-
te Médio. Desde então, diversas nações situadas em
todos os continentes do globo deram início a progra-
mas de pesquisa e desenvolvimento com o objetivo de
se tornarem autossuficientes em termos energéticos.
No Brasil, o Programa Nacional do Álcool (Proálcool),
instituído pelo Governo Federal em 1975, fomentou o
uso do etanol, produzido a partir do caldo da cana-de-
açúcar, como combustível veicular. O desenvolvimento
tecnológico gerado dentro deste programa alçou o país
a uma posição de destaque no cenário mundial.
Pode-se dizer que a queda do preço do petróleo na
década de 80 desestimulou fortemente o desenvolvi-
mento de processos industriais baseados na utilização
de matérias-primas renováveis para a produção de bens
de consumo. Assim, embora sejam notórios os avanços
conseguidos pelo Brasil na produção de etanol a partir
do caldo de cana-de-açúcar (etanol de primeira gera-
ção), pouco se investiu no desenvolvimento de tecnolo-

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gias para a produção de etanol também a partir do ba-
gaço de cana-de-açúcar (etanol de segunda geração).
Se as usinas sucroalcooleiras utilizassem não somente
o caldo, mas também o bagaço da cana como fonte
de carboidratos, seria possível aumentar significativa-
mente a produção de etanol sem aumentar a demanda
por uma maior área de plantio da cana. Neste cená-
rio, a queima da palha, atualmente deixada no campo,
poderia suprir, pelo menos em parte, as necessidades
energéticas das usinas de processamento.
Nos últimos anos, tem-se observado um aumento
gradual no preço do petróleo, determinado pela redu-
ção na oferta prevista para médio e longo prazo. Além
disso, o aquecimento global do planeta, determinado
pelo acúmulo de gases do efeito estufa na atmosfera,
é uma realidade que impulsiona o desenvolvimento de
processos industriais à base de matérias-primas reno-
váveis. Seguindo a tendência mundial, a indústria su-
croalcooleira brasileira tem manifestado interesse em
tecnologias sustentáveis que possam ser agregadas à
sua cadeia produtiva. Por exemplo, enquanto o caldo
da cana é utilizado para a produção de açúcar e etanol,
a cogeração já permite que a queima do bagaço seja
aproveitada também para a produção de “bio” eletri-
cidade. Esforços estão atualmente sendo direcionados
para incluir também a palha (deixada no campo) no ci-
clo de produção. Tal façanha permitirá que o bagaço
seja então utilizado para a produção de etanol (de se-
gunda geração) e de outros insumos renováveis através
de rotas baseadas na alcoolquímica e na sucroquímica.
Benefícios econômicos, sociais e ambientais são espe-
rados como consequência.
Um dos principais problemas que limitam o apro-
veitamento dos açúcares contidos no bagaço de cana
para a produção de etanol diz respeito aos elevados
custos envolvidos no condicionamento da matéria-pri-
ma. Os açúcares do bagaço, assim como aqueles de
qualquer outro material lignocelulósico, encontram-se
na forma de polímeros (celulose e hemicelulose) asso-
ciados entre si e recobertos por uma macromolécula
aromática complexa (lignina), formando a microfibrila
celulósica. Esta, por sua vez, constitui a parede celular
(fibra) vegetal, uma estrutura recalcitrante difícil de ser
desestruturada e convertida em monossacarídeos fer-
mentescíveis.
Na presente revisão, procuramos sumarizar alguns
dos principais aspectos envolvidos na sacarificação da
biomassa lignocelulósica através de pré-hidrólise ácida
seguida por hidrólise enzimática, uma das estratégias
que podem ser utilizadas para a “desconstrução” da
fibra vegetal.
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ESTRUTURA E COMPOSIÇÃO DA
BIOMASSA LIGNOCELULÓSICA
Os materiais lignocelulósicos representam a fração
mais expressiva da biomassa vegetal, a maior fonte de
compostos orgânicos da biosfera. São constituídos por
três frações principais que, juntas, perfazem mais de
90% da massa seca total. São elas: celulose, hemice-
lulose e lignina (1).
A celulose, constituinte mais abundante da parede
celular vegetal, é um homopolissacarídeo constituído
por unidades de D-glucose unidas entre si por ligações
glicosídicas β(1→4), apresentando um grau de polime-
rização de até 10.000. A estrutura linear, conferida pela
configuração das ligações glicosídicas, possibilita a for-
mação de ligações de hidrogênio intra e intermolecula-
res e acarreta na agregação das cadeias celulósicas em
“fibrilas elementares” com alto grau de cristalinidade.
Estes agregados conferem elevada resistência à ten-
são, tornam a celulose insolúvel em um grande número
de solventes e explicam, pelo menos em parte, a sua
resistência à degradação microbiana (2,3).
A hemicelulose é um heteropolissacarídeo comple-
xo composto por D-glucose, D-galactose, D-manose,
D-xilose, L-arabinose, ácido D-glucurônico e ácido
4-O-metil-glucurônico. É ramificada, apresenta um grau
de polimerização inferior a 200 e pode ser acetilada.
Nas madeiras de coníferas (softwoods), galactogluco-
mananas e arabinoglucuronoxilanas são os principais
constituintes hemicelulósicos. Por outro lado, 4-O-
metil-glucuronoxilanas e glucomananas são os princi-
pais polissacarídeos encontrados na hemicelulose das
madeiras de folhosas (hardwoods). As gramíneas, por
sua vez, apresentam as glucuronoarabinoxilanas como
principais constituintes hemicelulósicos (4-7).
A lignina é uma macromolécula complexa, formada
pela polimerização radicalar de unidades fenil-propano
(álcool p-cumarílico, álcool coniferílico e álcool sinapí-
lico). Constitui a fração não polissacarídica mais abun-
dante da lignocelulose. Envolve as microfibrilas celu-
lósicas, conferindo proteção à degradação química e/
ou biológica, e pode formar ligações covalentes com a
hemicelulose. Enquanto as paredes celulares de gramí-
neas apresentam os menores teores de lignina, aquelas
de madeiras de coníferas (softwoods) são as mais ricas
neste componente (5).
Do ponto de vista tecnológico, os açúcares conti-
dos nas frações celulósica (glucose) e hemicelulósica
(xilose, arabinose, glucose, manose e galactose) repre-
sentam os substratos que podem ser utilizados para
a produção de etanol por via fermentativa. Entretanto,
49
Artigo
conforme ilustrado na Figura 1, a íntima associação en-
tre as três frações principais (celulose, hemicelulose e
lignina) é tal que impõe dificuldades para a recuperação
dos açúcares constituintes na forma de monômeros
com elevado grau de pureza (8).
CONVERSÃO DA BIOMASSA LIGNOCELULÓSICA
EM AÇÚCARES FERMENTESCÍVEIS
Diversas estratégias para a conversão de materiais
lignocelulósicos em açúcares fermentescíveis têm sido
demonstradas em escala laboratorial e piloto. O con-
ceito geral envolve pré-tratar a matéria bruta para, en-
tão, submetê-la à hidrólise enzimática (9).
Embora o pré-tratamento possa ser conduzido por
princípios bastante variados, tem por finalidades alterar
ou remover a hemicelulose e/ou a lignina, aumentar a
área superficial e diminuir o grau de polimerização e a
cristalinidade da celulose, o que acarreta em aumento
na digestibilidade enzimática e, consequentemente, no
rendimento em açúcares fermentescíveis (10-12).
Para que a sacarificação enzimática da celulose seja
eficiente, é necessário que as enzimas consigam “chegar”
até ela. Entretanto, a parede da célula vegetal é imperme-
ável a grandes moléculas, incluindo proteínas como as ce-
lulases. Para superar esta barreira, reagentes que incluem
(mas não se restringem a) ácidos e bases devem ser utiliza-
Parede celular
Célula vegetal
Figura 1. Arquitetura da parede celular vegetal (Adaptado da referência 55)
50
dos para solubilizar a hemicelulose e/ou a lignina e, assim,
aumentar a porosidade da matriz (13,14). Pré-tratamentos
puramente físicos também podem ser utilizados para au-
mentar a reatividade do material pré-tratado frente às enzi-
mas hidrolíticas. Por exemplo, a redução da granulometria
do material de partida por moagem (cominuição), embo-
ra altamente desfavorável do ponto de vista de consumo
energético, aumenta a área superficial disponível e diminui
a cristalinidade da celulose, favorecendo a sacarificação
enzimática (15). Pré-tratamentos biológicos, com fungos e
bactérias que promovem a degradação seletiva da lignina
e/ou da hemicelulose, representam outra opção, entretan-
to as velocidades de biodegradação são lentas (16).
Pré-tratamentos que combinam princípios físicos e
químicos representam as melhores opções para fracio-
nar a biomassa lignocelulósica (17), sendo que o pré-
tratamento adequado deveria idealmente: 1) maximizar
a digestibilidade enzimática, 2) minimizar a perda de
açúcares, 3) otimizar a produção de subprodutos (ligni-
na, por exemplo), 4) não requerer a adição de reagentes
que venham a inibir as enzimas hidrolíticas e os micror-
ganismos fermentativos, 5) minimizar o uso de energia,
reagentes e equipamentos, e 6) permitir a transposição
para escala industrial (18).
Dentre os diferentes métodos de pré-tratamento, a
hidrólise dos açúcares presentes na fração hemiceluló-
sica de materiais lignocelulósicos com ácidos diluídos,
Microfibrila
Hemicelulose
Lignina
Fibrila elementar
Celulose
Glicose
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seguida ou não por descompressão súbita (explosão),
tem se mostrado bastante eficiente, sendo também rá-
pida e simples (17,19). Esta técnica apresenta vanta-
gens como minimização da formação de produtos de
degradação e aumento da susceptibilidade da celulo-
se à hidrólise enzimática subseqüente, desde que as
condições de hidrólise sejam otimizadas (20). Trata-se
de uma tecnologia amplamente reportada na literatura,
testada em escala piloto e com potencial de aplicação
em escala industrial (9).
Durante a hidrólise com ácidos diluídos, o material
lignocelulósico é misturado com um ácido (H2SO4, ti-
picamente) diluído em água - catalisador - e aquecido
por certo tempo. Grupos acetil ligados à hemicelulose
são clivados e também atuam como catalisadores da
hidrólise. Conforme ilustrado na Figura 2, grande parte
da hemicelulose é removida. Por outro lado, a remoção
da lignina ocorre de maneira bastante limitada. Embo-
ra haja fusão e despolimerização desta fração durante
o pré-tratamento, também há repolimerização e redis-
tribuição superficial intensas. Estas reações acarretam
em alterações radicais na estrutura da parede celular
vegetal, favorecendo a acessibilidade das enzimas para
a hidrólise subseqüente da celulose (21-25).
Três classes de enzimas constituem o complexo
celulolítico: 1) exo-1,4-β-D-glucanases (EC 3.2.1.91),
que hidrolisam a cadeia celulósica a partir de suas
extremidades liberando celobioses, 2) endo-1,4-β-D-
glucanases (EC 3.2.1.4), que hidrolisam a cadeia celu-
Lignina
Celulose
Pré-tratamento
Hemicelulose
Figura 2. Alterações estruturais na microfibrila celulósica determinadas pelo pré-tratamento com ácido diluído, seguidas pela hidrólise enzimática
da celulose (Adaptado da referência 55)
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44
lósica internamente de maneira aleatória, e 3) 1,4-β-D-
glucosidases (EC 3.2.1.21), que promovem a hidrólise
da celobiose em glucose e podem também clivar unida-
des glucosídicas a partir de celuoligossacarídeos. Co-
letivamente chamadas de celulases, atuam em sinergia
para hidrolisar a celulose criando sítios acessíveis umas
para as outras e aliviando problemas de inibição pelos
produtos (26,27).
Dependendo do tipo e das condições empregadas
durante o pré-tratamento, parte da hemicelulose pode
permanecer no material pré-tratado e prejudicar a hi-
drólise enzimática da celulose. Neste caso, a hidrólise
eficiente do material pré-tratado requer, em adição às
celulases, o emprego de hemicelulases (9).
O sistema hemicelulolítico requerido para a hidró-
lise da hemicelulose é mais complexo que o sistema
celulolítico, já que a hemicelulose apresenta natureza
heterogênea. Inclui, entre outras enzimas: 1) endo-1,4-
β-D-xilanases (EC 3.2.1.8), que hidrolisam ligações gli-
cosídicas internas aleatoriamente na cadeia de xilana,
2) 1,4-β-D-xilosidases (EC 3.2.1.37), que “atacam” xi-
looligossacarídeos a partir das pontas não redutoras
da cadeia de xilana liberando xilose, 3) endo-1,4-β-D-
mananases (EC 3.2.1.78), que clivam ligações internas
na cadeia de manana, 4) 1,4-β-D-manosidases (EC
3.2.1.25), que clivam manooligossacarídeos em mano-
se, e 5) enzimas que removem os grupos substituintes
laterais (ramificações), como α-D-galactosidases (EC
3.2.1.22), α-L-arabinofuranosidases (EC 3.2.1.55), α-D-
51
Artigo

glucuronidases (EC 3.2.1.139), acetil xilana esterases
(EC 3.1.1.72) e feruloil esterases (EC 3.1.1.73) (28,29).
A maior parte das enzimas envolvidas na hidrólise
de carboidratos são proteínas modulares, constituídas
por um módulo catalítico e por um módulo de ligação
a carboidratos (MLC). A função do MLC é promover o
contato íntimo entre o substrato e o módulo catalítico da
enzima, assegurando a orientação correta entre ambos
(30-32). Entretanto, quando o substrato é um material
lignificado, a lignina pode promover intensa adsorção
inespecífica das enzimas utilizadas para a hidrólise da
celulose e/ou da hemicelulose. A fração de celulases e
hemicelulases tornadas improdutivas devido a esta ad-
sorção pode chegar a 70% do total adicionado (33-34).
Isto inclusive impede a reciclagem das enzimas, uma
estratégia que tem um grande impacto na viabilidade
econômica do processo (35-38). Para superar esta li-
mitação, outras proteínas (albumina, por exemplo),
surfactantes não iônicos (Tween 20, por exemplo) ou
polímeros (polietilenoglicol, por exemplo) têm sido adi-
cionados à mistura reacional com a finalidade de mini-
mizar adsorções indesejáveis (39-41). Pré-tratamentos
direcionados à solubilização da lignina com reagentes
apropriados (NaOH, por exemplo) também têm sido
propostos. Além de minimizar a adsorção improdutiva
das enzimas, estes pré-tratamentos geralmente acarre-
tam em aumento na acessibilidade à celulose (42).
Do ponto de vista de utilização dos hidrolisados
enzimáticos como substratos em processos fermenta-
tivos, pode-se afirmar que o uso de hidrolisados com
elevadas concentrações de açúcares fermentescíveis
permite a obtenção de caldos fermentados com altas
concentrações de produto, o que reduz os custos de
separação e purificação. Entretanto, a condução da
hidrólise enzimática na presença de elevadas concen-
trações de substrato (celulose) apresenta duas grandes
limitações:
• Concentrações de glucose relativamente baixas
(1-14 mM) acarretam em inibição das β-glucosidases,
levando ao acúmulo de celobiose no meio reacional.
A celobiose, por sua vez, é um potente inibidor das
celobiohidrolases, resultando em limitações severas
na hidrólise da celulose (43-46). Para superar esta li-
mitação, a sacarificação enzimática (da celulose em
glucose) e a fermentação (da glucose em etanol) de-
vem ser processadas simultaneamente (SFS) de for-
ma a evitar o acúmulo de glucose no meio (47,48).
A utilização de concentrações de substrato (celulose)
superiores a 15 % acarreta em viscosidade excessiva, di-
ficultando a mistura (homogeneização) e aumentando o
consumo de energia (49,50). Para contornar este proble-
ma, a SFS deve ser operada em modo batelada alimenta-
da. Inicia-se a hidrólise com uma concentração de subs-
trato inferior a 10 % e, na medida em que há liquefação da

5 6

Lignina
Celulose

4 3 Hemicelulose

Celobiohidrolase

Endoglucanase
Celobiose 1

Celobiohidrolase
β-glicosidase
Glicose

Figura 3. Visão simplificada dos principais mecanismos que limitam a hidrólise enzimática da celulose: 1) Inibição da β-glicosidase e da
celobiohidrolase pelos produtos (glucose e celobiose, respectivamente); 2) Adsorção improdutiva da celobiohidrolase à celulose; 3) Obstrução
do acesso das celulases à celulose pela hemicelulose; 4) Obstrução do acesso das celulases à celulose pela lignina; 5) Adsorção inespecífica
das enzimas à lignina; 6) Perda da atividade enzimática (Adaptado da referência 9).

52 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

celulose e redução na viscosidade do meio, adiciona-se
mais substrato de forma gradativa (51,52).
A Figura 3 apresenta uma visão simplificada dos prin-
cipais mecanismos que limitam a hidrólise enzimática da
celulose. Conforme abordado nos parágrafos anteriores,
a compreensão destes mecanismos tem permitido o de-
senvolvimento progressivo de estratégias para superar
as limitações. Assim, embora a utilização de enzimas em
escala industrial ainda seja economicamente proibitiva, os
prognósticos apontam para um futuro promissor.
CONCLUSÃO
Sabe-se que a hidrólise total dos polissacarídeos
lignocelulósicos (hemicelulose + celulose) com ácidos
diluídos é problemática em termos de degradação de
açúcares. A hidrólise com ácidos concentrados, embo-
ra permita a obtenção de rendimentos de sacarificação
próximos ao teórico, implica em custos e riscos eleva-
dos (53). Neste contexto, a hidrólise enzimática pro-
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mete soluções para os problemas evidenciados pelas
rotas concorrentes, ou seja, faz uso de catalisadores
específicos e ambientalmente amigáveis que operam
sob condições amenas de pH, temperatura e pressão.
Entretanto, para que a sacarificação enzimática seja efi-
ciente, é preciso que as enzimas tenham amplo acesso
ao substrato. Em outras palavras, é necessário “abrir” a
estrutura da fibra vegetal de forma a permitir uma rápi-
da digestão da celulose na presença de baixas concen-
trações de enzimas que, idealmente, possam ser utili-
zadas repetidamente (54). Conforme apresentado nesta
revisão, a pré-hidrólise com ácidos diluídos é uma entre
as muitas opções de pré-tratamento disponíveis.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem o apoio financeiro recebido
da FAPESP, CNPq, CAPES e USP para o desenvolvi-
mento de projetos de pesquisa relacionados com a te-
mática da presente revisão.
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Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44
Artigo

AVALIAÇÃO DA METODOLOGIA 5220 D. Closed

Reflux, Colorimetric Method PARA
DETERMINAÇÃO DA DEMANDA QUÍMICA DE
OXIGÊNIO (DQO) EM EFLUENTE LÁCTEO
RESUMO
Rodrigo F. S. Salazar¹*,
André L. C. Peixoto²e
A demanda química de oxigênio (DQO) é amplamente utilizado como indicador e me- Hélcio J. Izário Filho³
dida da biodisponibilidade do carbono em águas. DQO é definida como a quantidade
¹Departamento de Química (DQ),
equivalente consumida na oxidação química da matéria orgânica por um forte agente Universidade Federal
oxidante. Recentes trabalhos sobre DQO relatam sobre interferências e sinergismos de São Carlos
que influenciam a resposta; porém pouco se discute sobre a validade, calibração e fai-
²Departamento de Engenharia
xas de linearidade dos métodos empregados. No presente trabalho fez-se a otimização Química, Escola Politécnica,
de metodologias espectrofotométricas para determinação de DQO, em duas diferentes Universidade de São Paulo
faixas de concentrações (200 e 2000 mg O2 L-1, respectivamente baixo e alto teor), por
Departamento de Engenharia
³

análises comparativas. Através de análises estatísticas obtiveram-se valores de repe- Química (DEQUI), Escola
tibilidade e reprodutibilidade de 3,75% e 9,01% e de 3,56% e 8,55%, para DQO com de Engenharia de Lorena /
Universidade de São Paulo
baixo e alto teores, respectivamente.
*Autor para correspondência
Palavras-chave: efluente lácteo, demanda química de oxigênio (DQO), teste-t pa- Rod. Washington Luís, Km 235
Caixa Postal 676
reado, Lei de Beer-Lambert, equivalência química CEP: 13565-905
São Carlos. SP
Fone: (16) 3351-8058
SUMMARY
E-mail: r.f.s.salazar@gmail.com

The chemical oxygen demand (COD) is widely used as a surrogated measure for carbon
bioavailability. COD is defined as the equivalent amount of oxygen consumed in the
chemical oxidation of organic materials by a strong oxidant. Recent researches on COD
related some interferences and synergisms influencing the response of COD, but few
things are discussed about the expiration, calibration and “work band” of the methods
applied. In this work, optimization of colorimeter methodologies for COD determination
in two work bands with the use of a comparative analysis was related. Through expe-
rimental and statistical analysis, a linear limit of the two work bands was obtained as
follows: from 0 to 200 mg L-1 and 200 – 2000 mg L-1 for COD “low level” and “high level”,
respectively. And the efficiency of these methods (statistical analysis of repeatability and
reproducibility) was reported as 3,75% and 9,01% for COD “high level”, and 3,56% and
8,55% for COD “low level”, accordingly.

Keywords: dairy effluent, chemical oxygen demand (COD), test-t paired, Beer-
Lambert’s Law, chemical equivalence

INTRODUÇÃO

A demanda química de oxigênio (DQO) é um parâme- triais. A DQO é definida como a quantidade equivalente
tro indispensável e exigido nos estudos de caracterização de O2 consumido na oxidação química da matéria orgâ-
físico-química de esgotos sanitários e de efluentes indus- nica por fortes oxidantes. Dentre os métodos otimizados

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 55

Artigo
e validados deve-se destacar os métodos titulométricos
e colorimétricos, bem como, metodologias mais recentes
baseadas em digestão por microondas e/ou por reagentes
que não gerem resíduos perigosos (1,2).
A DQO é muito útil quando utilizada juntamente com a
DBO para observar a biodegradabilidade de despejos (2).
Sabe-se que o poder de oxidação do dicromato de po-
tássio é maior do que a que resulta mediante a ação de
microrganismos, exceto, raríssimos casos, como hidro-
carbonetos aromáticos e piridina. Desta forma, os resulta-
dos da DQO de uma amostra são superiores aos de DBO.
Como na DBO mede-se apenas a fração biodegradável,
quanto mais este valor se aproximar da DQO, significa que
mais facilmente biodegradável será o efluente (2,3,4).
Atualmente, a maior parte dos estudos e pesquisas
referentes a DQO buscam determinar as interferências
e sinergismos causadas por compostos inorgânicos e
pela oxidação incompleta das matrizes orgânicas sobre
a resposta da DQO (2). Recentes estudos desenvolvi-
dos por Aquino et al. (2006) investigaram a influência
dos íons cloreto, amônio, ferro e sulfeto presente em
águas residuárias bem como resultados comparando
os métodos colorimétricos e titulométricos para a de-
terminação de DQO. Porém pouco se reporta sobre a
repetibilidade e reprodutibilidade dos métodos padrões
ou em desenvolvimento, que, conseqüentemente, pode
haver divergências quanto aos valores dos limites de
detecção para um mesmo procedimento, conforme en-
contrado em literaturas recentemente (1,2,4).
A quimiometria é a área especificamente destinada à
análise de dados químicos de natureza multivariada. É
possível, também, a identificação de problemas eventu-
ais com linha base ou interferentes nas amostras usadas
na calibração e nas novas amostras de previsão (5,6).
Frequentemente o analista químico deseja saber se
há diferenças entre resultados obtidos usando proce-
dimentos diferentes, ou avaliar a robustez de um mé-
todo frente a diferentes analistas. No teste t, em que a
comparação é feita para uma série de replicatas com
diferentes analistas e um único procedimento, é classi-
ficada como teste t pareado (7).
No presente trabalho, fez-se a avaliação da robus-
tez de metodologias espectrofotométricas para deter-
minação de DQO, para alto e baixo teores, em elfuente
lácteo, devido a sua matriz altamente complexa e in-
terferente. Posteriormente, utilizou-se a metodologia
para determinações de demanda química de oxigênio
em amostras reais de efluentes lácteos, com valores de
DQO já conhecidos e atestadas por laudos laboratoriais
obtidos de laticinista fornecedora do efluente em estu-
do, com objetivo de avaliar a eficiência da mesma.
56
PARTE EXPERIMENTAL
Neste procedimento a amostra é aquecida por duas
horas com um forte agente oxidante, dicromato de po-
tássio (K2Cr2O7), em frascos com rosca esmerilhada (16 X
100 mm) para DQO em sistema fechado. Compostos or-
gânicos oxidáveis reagem, reduzindo o íon dicromato para
íon crômico de cor verde. Quando o método espectrofo-
tométrico para DQO baixo teor é usado, a quantidade de
íon dicromato restante é determinada. Quando o método
espectrofotométrico para DQO alto teor é usado, a quan-
tidade de Cr3+ reduzido é determinada. O reagente para
DQO também contém prata (H2SO4 / Ag2SO4) e íons mer-
cúrio (Hg2+). Prata é um catalisador, pois facilita a completa
degradação dos compostos orgânicos, e mercúrio é usa-
do para controlar interferências de cloreto (2).
Coleta de amostra, preservação e estocagem
As amostras do efluente lácteo foram coletadas em
frascos de vidro de uma estação de tratamento lácteo, se-
diado em Guaratinguetá. Homogeneizaram-se as amos-
tras compostas, para assegurar a sua representatividade.
Preparo dos reagentes
H2SO4 / Ag2SO4: este reagente foi preparado com áci-
do sulfúrico concentrado (0,67% m/v). Portanto, para cada
litro de H2SO4 P.A. - Dinâmica (95 – 97% m/m) dissolvia-
se 6,7 g de Ag2SO4 (Vetec) em sistema ultrassônico. Após
preparo da solução, a mesma repousou por 24 horas para
garantir dissolução completa do sal e estocou-se em fras-
co âmbar.
Soluções de K2Cr2O7 0,1 e 1,0 eq L-1: primeiramente
secou-se o sal de K2Cr2O7 (Vetec) a 105ºC por 2 horas
e condicionou-o em dessecador. Com base na pureza
do sal como sendo (99,9% m/m), pesou-se 49,0790 g e
4,9079 g para o preparo das soluções de dicromato 1,0
eq L-1 e 0,1 eq L-1, respectivamente. Após dissolução com
água deionizada, transferiu-se quantitativamente para ba-
lões volumétricos de 1000,0 mL, e completou seu volume
com a mesma água.
Água deionizada: resistividade de 18,2 mΩ cm obtida
por um sistema Millipore, modelo Simplicity.
Para determinar a exatidão do método utilizou-se como
amostra padrão uma solução padrão de biftalato de potás-
sio (Vetec) com concentração de 850 mg L-1. Esta solução
deverá apresentar uma DQO de 1060 mg L-1.
A Tabela 1 representa o esquema de adição dos re-
agentes, quantidades e comprimentos de onda utiliza-
dos na determinação da DQO.
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44
Tabela 1. Relação de reagentes e condições operacionais para o Avaliação da metodologia 5220
preparo dos frascos para análise de DQO D. Closed Reflux, Colorimetric Method
DQO DQO
Reagentes (Alto teor) (Baixo teor) Para a elaboração da curva de calibração e valida-
HgSO4 40 mg 40 mg ção do método, primeiramente determinou-se as faixas
H2SO4 / Ag2SO4 2,5 mL 2,5 mL de concentração nas quais a Lei de Beer - Lambert se
H2O (deionizada) 0,3 mL 0,3 mL mantém linear. Deste modo, mediu-se a absorbância
K2Cr2O7 1,0 eq L- 0,5 mL -- de uma série de pontos com diferentes concentrações
de biftalato de potássio (KBH). Foram empregadas 17
K2Cr2O7 0,1 eq L -
-- 0,5 mL
concentrações para as DQO alto e baixo teor, conforme
Amostra 2,0 mL 2,0 mL
mostrado na Tabela 2.
Comprimento 640 nm 420 nm
de onda
Seleção dos comprimentos de onda
para as determinações de DQO

Alguns cuidados foram necessários para este pro-
cedimento:
1) a adição dos reagentes foi feita em ordem decres-
cente até a adição final da amostra do efluente;
2) homogeneizaram-se bem os tubos digestores an-
tes e durante a digestão;
3) quando necessário, manteve-se os tubos guarda-
dos em lugar adequados e protegidos de luz devido
à fotossensibilidade do dicromato de potássio.
Através do espectro de varredura da Figura 1, para
o íon Cr3+ (dicromato reduzido), foi possível selecionar
o comprimento de onda com melhor absorbância para
esta espécie de coloração verde.
Observa-se que o λ de 620 nm possui uma boa sen-
sibilidade (ξ = 27,8 L mol-1 cm-1), sendo este compri-
mento de onda selecionado para as medidas espectro-
fotométricas de DQO de alto teor.

Procedimento estatístico para a

análise dos resultados Tabela 2. Valores de DQO adotados em função da concentração de
biftalato, para estimar a faixa de linearidade das curvas de calibração

Para verificar a eficiência do método aplicou-se o tes- Concentração de KBH (mg Concentração de O2 a ser
L-1) contida nos frascos expressa (mg L-1)
te-t pareado. Esta análise permitiu verificar a repetibilidade
e reprodutibilidade do método, empregando-se diferentes DQO DQO DQO DQO
(Alto Teor) (Baixo Teor) (Alto Teor) (Baixo Teor)
analistas. Verificou se a ferramenta estatística adotada é
robusta à influência do ruído (variáveis aleatórias), e se ten- 0,0 0,0 0,0 0,0
de à normalidade (8). O desvio padrão adotado foi de 0,2 125,0 12,5 156,60 15,66
e a largura da especificação adotada foi de 0,5, ou seja, 250,0 25,0 313,10 31,31
com confiança de 95%. Os cálculos foram efetuados em 375,0 37,5 469,70 46,97
Planilha Excell (Pacote Office, 2003). 500,0 50,0 626,20 62,62
625,0 62,5 782,80 78,28
RESULTADOS E DISCUSSÃO
750,0 75,0 939,30 93,93

Os resultados sobre calibração e validação metodo- 875,0 87,5 1096,40 109,64

lógica, bem como, resultados de caracterização obti- 1000,0 100,0 1253,00 125,30
dos são apresentados nos subtópicos a seguir: 1125,0 112,5 1409,60 140,96
• Determinação dos comprimentos de onda mais sen- 1250,0 125,0 1566,10 156,61
síveis para as determinações de DQO; 1375,0 137,5 1722,60 172,26
• Determinação das faixas de linearidade das curvas 1500,0 150,0 1879,20 187,92
de calibração para DQO alto e baixo teores; 1625,0 162,5 2035,30 203,53
• Otimização e Validação das metodologias pelas fer-
1750,0 175,0 2182,40 218,24
ramentas estatísticas (ANOVA, teste-t pareado);
1875,0 187,5 2338,20 233,82
• Utilização do método para análise de amostra real
(efluente lácteo) 2000,0 200,0 2494,10 249,41

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 57

Artigo

Determinação das faixas de linearidade das

 &XUYDGR(VSHFWURIRWRPHWURGR&U curvas de calibração para DQO alto e baixo teor
$OWR7HRU
 Para a validação do método, cada curva de calibra-
ção de DQO (alto e baixo teores) foi preparada com 17
$EVRUEkQFLD


pontos, a partir de diluições da solução padrão de bif-
talato de potássio a 2000 mg L-1 e 850 mg L-1, respec-
tivamente. A Tabela 2 contém os valores empregados

para a elaboração das curvas analíticas.
Após a digestão e análise espectrofotométrica,

construíram-se os gráficos com as médias das replica-

tas dos valores de absorbância, cujos perfis são mos-
&RPSULPHQWRGHRQGDQP trados nas Figuras 3 e 4.
O comportamento descendente para DQO baixo teor
Figura 1. Espectro de absorção do íon Cr3+ empregando-se
biftalato de potássio (2000 mg L-1) como amostra
e ascendente para DQO alto teor eram previstos, pois
quando o método espectrofotométrico para DQO baixo
teor é usado, a quantidade de íon dicromato restante é
O mesmo procedimento foi realizado para plotar o
espectro de varredura do Cr6+ (DQO baixo teor). Através
do espectro de varredura da Figura 2, para o Cr6+ (íon 

dicromato), foi possível selecionar o comprimento de
onda com a melhor absorbância para esta espécie de 
coloração laranja.       
$EVRUEkQFLDV

Observa-se que o λ de 420 nm possui uma boa sen- 

sibilidade (ξ = 235,3 L mol-1 cm-1), sendo este compri-


mento de onda selecionado para as medidas espectro-
fotométricas de DQO de baixo teor. 
Comparando-se os valores obtidos dos espectros
de absorção com os valores de referência segundo o 

Standard Methods, que admite comprimentos de onda


otimizados de 640 nm para DQO de alto teor (determi-
&RQFHQWUDomRGHR[LJrQLRHVWLPDGDPJ/
nação de Cr3+ formado) e de 420 nm para DQO de bai-
xo teor (determinação do Cr+6 restante), os resultados Figura 3. Perfil entre os valores de DQO para baixo teor com
mostraram-se concordantes. a média das replicatas (n=4), para determinação da faixa de
linearidade

 &XUYDGR(VSHFWURIRWRPHWURGR&U 

%DL[R7HRU
 
$EVRUEkQFLDV

 
$EVRUEkQFLD

 







       

&RPSULPHQWRGHRQGDQP
&RQFHQWUDomRGHR[LJrQLRHVWLPDGDPJ/

Figura 2. Espectro de absorção do íon Cr6+ empregando-se Figura 4. Perfil entre os valores de DQO para alto teor com a média
biftalato de potássio (850 mg L-1) como amostra das replicatas (n=4), para determinação da faixa de linearidade

58 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

determinada. Neste caso, a quantidade do íon dicroma-
to restante é inversamente proporcional à concentra-
ção de biftalato de potássio, o que resulta numa curva
analítica com coeficiente angular negativo. Quando o
método espectrofotométrico para DQO alto teor é usa-
do, a quantidade de Cr3+ reduzido é determinada. Este
valor é diretamente proporcional, pois quanto maior a
quantidade de biftalato de potássio, maior é a oxidação
pelo dicromato de potássio, que, conseqüentemente,
ocorre a formação de íons Cr3+ (forma reduzida) que são
quantificados, resultando numa curva analítica de co-
eficiente angular positivo. Genericamente, o mecanis-
mo de oxidação da matéria orgânica pode ser descrito
conforme a semirreação da equação 1.
  (Figuras 5 e 6).
 $J  62 
62
+ 
Em que:
C: concentração de O2 (mg L-1);
m: massa de oxigênio obtida do cálculo de equiva-
lência química (g);
f: fator de conversão (neste caso é igual a 1000).
V: volume de amostra contida no frasco de DQO (L).
Deste modo, pode-se observar nas figuras
3 e 4 que nas regiões acima das concentrações má-
ximas de degradação equivalente ao dicromato, não
há mais linearidade com o conjunto de pontos res-
tantes, bem como, a não obediência a Lei de Beer-
Lambert. Calculando-se as curvas analíticas, obede-
cendo-se os limites superiores teóricos, tem-se as
equações lineares com as significativas correlações
  o  ž &  (1)
2 2



Fazendo-se o cálculo de equivalência química tem-  

se (Eq. 2 e 3):


QH

.  &U  2
QH 2
(2)

$EVRUEkQFLDV



§P·
 1 u9  ¨ ¸
©(¹ (3)
.  &U  2 
2 \ [
5 

Em que:
nex: número de equivalente (eq); 

N: normalidade das soluções de K2Cr2O7 utilizadas      
&RQFHQWUDomRGHR[LJrQLRHVWLPDGDPJ/
(eq L-1);
V: volume de K2Cr2O7 pipetado nos frascos (L); Figura 5. Curva analítica para alto teor de DQO,
E: equivalente grama (EO2 = 8) (eq-g); compreendido entre 0 a 2000 mg L-1 de O2

m: massa (g) de O2 consumida na oxidação (da onde

provém a palavra demanda).
 
A partir destas equações, calculou-se a massa de
O2 máxima, proporcional à degradação do dicromato 

presente no tubo, determinando-se os limites teóricos      

como sendo iguais a 0,004 g e 0,0004 g de O2, refe- 

$EVRUEkQFLDV

rentes as soluções de 1,0 eq L-1 e 0,1 eq L-1, respecti-


vamente. Com a equação 4, calcularam-se as concen- \ [

trações de O2 para ambos os valores dos padrões de


5  

dicromato de potássio, que equivalem ao limite teórico
de concentração na qual a lei de Beer-Lambert deve 

ser respeitada, sendo iguais a 200 mg L-1 e 2000 mg L-1,

respectivamente para baixo e alto teor de DQO. 
&RQFHQWUDomRGHR[LJrQLRHVWLPDGDPJ/
 P2 u I
(4)
&2 
Figura 6. Curva analítica para baixo teor de DQO,

9 compreendido entre 0 a 200 mg L-1 de O2

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 59

Artigo

Otimização e Validação das metodologias de Tabela 3. Análise de Variância dos resultados das curvas analíticas de
DQO alto teor
DQO alto e baixo teor – teste-t pareado
FV1 Gl2 SQ3 MQ4 F5 P6
Para validar os métodos de análise para DQO alto e Amostra 9 0,730812 0,081201 1786,716 0,000
baixo teores, fez-se um estudo estatístico empregan- Analista 1 2,25E-07 2,25E-07 0,004951 0,945
do-se análise de variância (ANOVA) e teste-t pareado. Interação 9 0,000409 4,54E-05 0,895953 0,546
Avaliou-se a robustez da metodologia de determinação Repet. 20 0,001015 5,07E-05    
de DQO com dois analistas e duas medidas por analis- Total 39 0,732235
ta para 10 valores de concentração pré-determinados, 1
fatores variáveis; graus de liberdade; 3soma dos quadrática; 4média
2

num total de 40 medidas. O desvio padrão do processo quadrática; 5Fator F; 6grau de confiança
foi de 0,2 e a largura da especificação adotada foi de
0,5 (o mesmo que 95% de confiança).

Validação da metodologia para Tabela 4. Resultados da Análise de Medição (teste-t pareado) dos
dados das curvas analíticas de DQO alto teor
DQO alto teor (200 a 2000 mg L-1)
  Var % Desvio
Aplicando-se a técnicas de análise de medição por RR total 0,000051 0,249389 0,007122
variável cruzada sobre os resultados das determina- Repetibilidade 0,000051 0,249389 0,007122
ções de DQO alto teor, obtém-se os resultados apre- Reprodutibilidade 0,000000 0,000000 0,000000
sentados nas tabelas 3 e 4. Operador 0,000000 0,000000 0,000000
A partir da análise de variância dos resultados ob- Interação 0,000000 0,000000 0,000000
tidos (Tabelas 3 e 4) pode-se observar que a maior Amostra 0,02029 99,750611 0,142439
variância foi em relação a amostra (padrões), prova-
Total 0,020340 100,00 0,142617
velmente devido as diversas etapas de preparação
intrínsecas ao procedimento experimental (± 99,75%),
provavelmente sendo às várias medidas com volumes
pequenos e diferentes o fator que veio a influenciar
Tabela 5. Análise de Variância dos resultados das curvas
mais sobre os resultados. Em contrapartida, observa- analíticas de DQO baixo teor
se a repetibilidade dos resultados, com um percentual
FV Gl SQ MQ F P
de aproximadamente 0,25%, mostrando significativa
precisão do método, pois este resultado diz respeito ao Amostra 9 0,458881 0,050987 958,37208 0,000
controle sob os erros sistemáticos e minimização sob Analista 1 0,000035 0,000035 0,65827 0,438
os erros aleatórios. Em função destas análises, obteve- Interação 9 0,000479 0,000053 0,94412 0,530
se um percentual de repetibilidade de 3,56% e repro- Repet. 10 0,000564 0,000056    
dutibilidade de 8,55% para esta metodologia, valores Total 29 0,459958
considerados satisfatórios analiticamente. 1
fatores variáveis; graus de liberdade; 3soma quadrática; 4média
2

quadrática; 5Fator F; 6grau de confiança.

Validação de metodologia para
DQO baixo teor (0 a 200 mg L-1)

Tabela 6. Resultados da Análise de Medição (teste-t pareado) dos

Aplicando-se as mesmas ferramentas estatísticas dados das curvas analíticas de DQO baixo teor
adotadas anteriormente para os resultados experimen-
tais de DQO baixo teor, obtêm-se os resultados das   Var % Desvio
Tabelas 5 e 6. RR total 0,000051 0,330805 0,007507
A partir da análise das informações contidas nas tabe- Repetibilidade 0,000051 0,330805 0,007507
las 5 e 6 pode-se observar um comportamento de vari- Reprodutibilidade 0,000000 0,000000 0,000000
ância similar aos obtidos à interpretação dos resultados Operador 0,000000 0,000000 0,000000
da metodologia para alto teor de DQO, onde a variância
Interação 0,000000 0,000000 0,000000
da metodologia foi principalmente à natureza da amostra/
Amostra 0,02029 99,669195 0,130299
padrão (variância de ± 99,67%), seguido da variância na
Total 0,020340 100,00 0,130515
repetibilidade dos resultados, com um percentual de apro-

60 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

ximadamente 0,33%. Também se observa que a variância
devido a fatores de interação e questões operacionais não
influenciaram sobre os resultados. Em função destas aná-
lises foi obtido um percentual de repetibilidade de 3,75% e
reprodutibilidade de 9,01% para esta metodologia, sendo
considerados satisfatórios analiticamente.
É importante ressaltar que o efluente empregado
para a este estudo apresentava elevados teores de óle-
os e graxas (em torno de 4000 mg L-1). Os teores de só-
lidos totais, bem como o teor de óleos e graxas podem
interferir em uma série de análise físico-químicos como
DBO, DQO, fósforo, nitrogênio orgânico e amoniacal
(9,10,11). Entretanto, a metodologia mostrou-se robus-
ta o suficiente para minimizar possíveis interferências
desta matriz láctea.
Determinação da DQO em
amostra real (efluente lácteo)
Ao analisar algumas amostras de efluente lácteo,
amostrado do decantador da estação de tratamento de
efluentes, obtiveram-se valores de DQO em torno de
7207,5 ± 603,5 mg L-1 (n = 6). Segundo laudos desta
mesma unidade, a demanda química de oxigênio do
efluente que sai da linha de produção e, então, sofre di-
luição antes de ser lançado no decantador possui uma
DQO compreendida entre 6000 a 8000 mg L-1 (no de-
cantador), por batelada produzida de leite pasteurizado
e/ou outros produtos lácteos.
CONCLUSÕES
O efluente lácteo apresenta matriz altamente interfe-
rente sobre o sinal de resposta da DQO, podendo acar-
retar em valores superestimados. Em função deste fato
torna-se necessário o emprego de ferramentas para a
análise e correta interpretação dos dados obtidos nes-
te. A partir das análises estatísticas baseadas em teste-t
pareado pode-se validar e otimizar a metodologia pro-
posta para determinação de DQO em efluente lácteo.
A partir dos mecanismos fundamentais de oxidação
de matéria orgânica nas condições adotadas e de cál-
culos de equivalência química pode-se verificar a rela-
ção e influência da concentração e volume utilizados da
solução de K2Cr2O7 e volume de amostra adotados sob
o limite superior no qual a curva de calibração tende a
ser linear conforme prediz a Lei de Beer.
Para as condições adotadas pode-se estabelecer
as faixas de detecção ideais para a determinação de
DQO(baixo teor) entre 0 – 200 mg L-1 de O2; e para DQO(alto
teor)
entre 200 – 2000 mg L-1 de O2. Quanto a utilização da
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44
metodologia para a determinação da DQO em efluente
lácteo verificou-se que a média encontra-se compre-
endida na faixa de valores no qual esta unidade fabril
costuma encontrar em suas análises.
AGRADECIMENTOS
Ao Eng. Antônio Rodriguez de Lima, responsável
pela estação de tratamento de efluentes da DANONE,
unidade Guaratinguetá, e ao Prof. Ms.C. Gerônimo V.
Tagliaferro, pelo fornecimento de amostras de efluente
lácteo da Yakult empregadas neste projeto. À Coorde-
nação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Supe-
rior (CAPES) pela concessão da bolsa de mestrado e
pelo apoio financeiro para a realização desta pesquisa.
R efer ê ncias
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comparativa. Em: VIII ENCONTRO LATINO AMERICANO DE
PÓS GRADUAÇÃO. 2008. Anais, São José dos Campos, SP,
2008 (CD-ROM)
61
Artigo

SISTEMA DE BAIXO CUSTO PARA A PRODUÇÃO

DE MICROESFERAS DE QUITOSANA

RESUMO
Alexandre G.S. Prado*,
Igor C. Pescara,
Foi desenvolvido um sistema de baixo custo para obter microesferas de quitosana. Rômulo D.A. Albuquerque,
As microesferas obtidas por este sistema apresentou altas m. A microesferas mor- Fernando N. Honorato e
Claudio Magalhães de Almeida¹
fologia homogênea com diâmetro médio de 183µm superfície total de quitosana foi
de 4,2 m2g-1, o que aumenta para 14,1 m2g-1 para microesferas de quitosana. QuiCSI Team, Instituto de
Química, Universidade de Brasília
Palavras-chave: quitosana, microesferas, sistema de baixo custo ¹Depto. de Biologia, UnUCET,
Universidade Estadual de Goiás
SUMMARY
*Autor para correspondência
Caixa Postal 4478
A low-cost system to obtain microspheres of chitosan was developed. The micros- CEP: 70904-970
Brasília. DF
pheres obtained by this system presented high homogeneous spheres morphology E-mail: agspradus@gmail.com
with medium diameter of 183µm. The surface area of chitosan was 4.2 m2g-1, which
increases to 14.1 m2g-1 for chitosan microspheres.

Keywords: chitosan, microspheres, low-cost system

INTRODUÇÃO

Em 1811, Henri Braconnot isolou uma substância
presente em fungos e logo percebeu que se tratava
de um material diferente daquele encontrado nas ma-
deiras (celulose). Em 1823, A. Odier observou que as
carapaças dos insetos continham uma substância inso-
lúvel, a qual acreditou ser a matéria-prima básica para
a formação do exoesqueleto de todos os insetos, e a
denominou “quitina”, que em grego significa cobertura,
túnica ou envelope. Porém, apenas em 1843, Anselme
Payen detectou a presença de nitrogênio na estrutura
da quitina (1,2).
A quitina é o segundo biopolímero mais abundante
na natureza, sendo sintetizada por um grande número
de organismos vivos, ficando atrás somente da celulo-
se. Este material ocorre naturalmente em formas crista-
linas e é o componente majoritário do exoesqueleto dos
artrópodes, presente também nas paredes celulares de
alguns vegetais. Para alguns seres vivos, a quitina é
sintetizada em locais onde é necessário algum reforço
estrutural (1,3).
Alguns derivados da quitina são obtidos por meio de
transformações simples, sendo a quitosana o derivado
mais estudado. Ela é o principal derivado da quitina, e
é obtida pelo processo de desacetilação do polímero
primário, via tratamento alcalino ou via hidrólise enzi-
mática. Em 1859, C. Rouget foi o primeiro cientista a
relatar sobre este polímero (1-2).
Diferentemente da quitina, a quitosana não é tão
abundante na natureza, sendo encontrada em alguns
microrganismos. Desta forma, a quitosana é obtida em
maior escala via desacetilação da quitina, ainda assim
sendo considerada um biopolímero natural (1,2).
Ao contrário da quitina, a quitosana é solúvel em
muitos ácidos orgânicos diluídos, mas também é in-
solúvel em solventes orgânicos e em soluções ácidas
com pH maiores que 6,5. A solubilização da quitosana
ocorre devido à protonação do grupo amina (1,4).
A matéria-prima mais barata para a produção da
quitina e quitosana tem sido os rejeitos de crustáce-
os, entre eles os caranguejos, camarões e lagosta (1,4).
Atualmente, o Brasil gera uma grande quantidade de
rejeitos de frutos do mar, o que potencializa o país a
se tornar um grande produtor de quitina e quitosana ao
reaproveitar este tipo de refugo. Algumas vantagens da
quitina e da quitosana é que são biopolímeros extraí-
dos de rejeitos industriais, possuem fontes renováveis,

62 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

não-tóxicos, são inertes no trato gastrointestinal dos
mamíferos, são facilmente biodegrados, disponíveis
em diversas formas (pó, grão, membrana, esponja, al-
godão, fibra, fios e géis) e apresentam sítios doadores
de elétrons (5).
Estas características possibilitam a aplicação da
quitosana em diversas áreas da ciência e tecnologia.
Ela é muito aplicada na adsorção de cotaminantes
inorgânicos e orgânicos, em sistemas de pré-concen-
tração, na liberação controlada de drogas, em catálise
heterogênea, no desenvolvimento de novos materiais,
cosméticos etc. (6,12).
A quitosana em sua forma pó ou de flocos tem sido
extensivamente utilizada em processos de adsorção
de contaminantes. Porém, estas formas apresentam
algumas desvantagens como a baixa área superficial
e a solubilidade em meio ácido, bem como o difi-
culdade de empacotamento em sistemas em fluxo.
Assim, o desenvolvimento de microesferas de qui-
tosana, bem como a sua reticulação, melhoram as
qualidades do material, como tem sido apresentado
na literatura (5,13).
Na literatura, existem diversos métodos de obten-
ção de microesferas tais como: atomização, emulsão e
inversão de fase (5,14-16). Porém, os custos para a ob-
tenção de microesferas ainda é alto. Assim, a proposta
Figura 1. Esquema do sistema de gotejamento
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44
deste trabalho é o desenvolvimento de um sistema sim-
ples e de baixo custo para a obtenção de microesferas
de quitosana.
PARTE EXPERIMENTAL
Reagentes e materiais
Quitosana (Polymar), ácido acético (Vetec), hidróxi-
do de sódio (Vetec) Glutaraldeído (Vetec), Caneta esfe-
rográfica (Bic), agulha hipodérmica 13x0,45 mm (Injex),
Compressor de ar 12 V (Carrefour), bomba submersa
de aquário (Boyu).
Confecção do sistema para
obtenção de microesferas
A preparação das microesferas de quitosana foi re-
alizada conforme adaptações do método proposto por
Rorrer e Hsien (17). O sistema de gotejamento utilizado
foi uma adaptação do sistema proposto por Dias e co-
laboradores (5).
O sistema de gotejamento (Figura 1) foi construído
utilizando-se partes de uma caneta esferográfica (tubo
externo, tubo da carga e tampa) e uma agulha de insu-
lina (0,45 mm Ø; 13 mm).
63
Artigo
Uma solução de quitosana 10% (m/v) foi preparada
em ácido acético 10% (v/v) e, com o auxílio de uma
bomba de aquário, foi gotejada a um fluxo de 0,5 mL
min-1 em uma solução coagulante de hidróxido de só-
dio 12% mantida sob leve agitação. Para a dispersão
da gota foi utilizado um fluxo de ar proveniente de um
compressor portátil de ar para pneus, como mostra a
Figura 2. Em seguida, as microesferas gelificadas foram
enxaguadas com água deionizada até pH 7,0.
Depois de neutralizadas, as micro-esferas gelifica-
das foram reticuladas em uma solução 25% de glutaral-
deído, sem agitação por 2h. Posteriormente, as micro-
esferas reticuladas foram filtradas e lavadas com água
deionizada em excesso, para retirar qualquer resíduo
de glutaraldeído não reagido. Ao término do enxágüe,
as microesferas foram imersas em acetona por 2h e de-
pois secas a temperatura ambiente (18,19).
Caracterização das microesferas
As imagens das microesferas foram obtidas de três for-
mas distintas: i) utilizando uma câmera fotográfica digital
Sony DSC H10, ii) em um microscópio ótico trinocular aco-
plado com câmera fotográfica Vision Plus L2000C, iii) e por
microscopia eletrônica de varredura em um microscópio
Zeiss EVO50, com as amostras recobertas com carbono
em um metalizador Bal-Tec SCD-050.
As áreas superficiais das amostras de quitosana
(quitosana em pó, microesfera de quitosana sem reti-
culação e microesfera de quitosana reticulada) foram
obtidas por meio da isoterma de adsorção de nitrogê-
nio usando a equação de BET em um analisador Quan-
tachrome Nova 2200.
b
c
Figura 2. Esquema do sistema de obtenção das microesferas contendo uma bomba de aquário (a), um compressor de ar (b), um sistema de
gotejamento (c) e a solução de coagulação (d)
64
RESULTADOS E DISCUSSÃO
A solução de quitosana apresentou uma alta visco-
sidade e coloração castanha escuro. Com um fluxo de
ar ideal de 5,0 mL min-1 passando pelo sistema de go-
tejamento construído, Figura 3 e 4, a solução de quito-
sana, ao chegar à ponta da agulha, formava gotas com
aproximadamente 1 mm de diâmetro.
Ao entrar em contato com a solução de hidróxido de
sódio, a gota de solução de quitosana é neutralizada e
em alguns segundos a quitosana assume um formato
esférico gelificado.
A Figura 5 mostra as imagens das microesferas re-
ticuladas, as imagens óticas e por varredura eletrônica
mostraram que a quitosana apresentou morfologia de
microesferas, as quais estavam muito homogêneas e
uniformes com diâmetro médio de 183 ± 27 µm, com-
provando o sucesso do sistema de baixo-custo para a
obtenção de microesferas de quitosana.
Para observar o efeito na área superficial do mate-
rial a partir da organização da quitosana em microes-
feras foram realizadas isotermas de adsorção-dessor-
ção de N2, Figura 6. Todos os materiais apresentaram
curvas típicas de materiais microporosos, pois se ob-
serva uma total ausência de histerese, comprovando
apenas a presença de poros com diâmetros inferiores
a 2 nm (20). A partir da aplicação da equação de BET
nos dados das isotermas foram obtidos os seguintes
resultados para área superficial: a quitosana em pó
apresentou uma área de 4,2 m2 g-1, as microesferas de
quitosana sem a reticulação apresentaram uma área
superficial de 14,1 m2 g-1, e as microesferas reticula-
das apresentaram uma área de 9.2 m2 g-1. O aumento
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44
 Figura 3. Imagem do sistema de obtenção das microesferas
contendo uma bomba de aquário, um compressor de ar, um sistema
de gotejamento e a solução de coagulação

 
   $     %  
Figura 4. Detalhamento dos materiais usados no sistema de
obtenção das microesferas, no qual a bomba de aquário ficou
imersa na solução de quitosana (a), e o sistema de gotejamento (b)

da área da quitosana para a microesferas deve-se ao

fato da reorganização da estrutura da quitosana em
esferas de diâmetros inferiores resultando no aumen-
to da área superficial. A reticulação das microesferas
causa uma diminuição da área devido à formação das
ligações cruzadas entre camadas, as quais bloqueiam
a passagem do gás, conseqüentemente, resultam em
uma diminuição da área superficial.
Atualmente, as microesferas têm sido obtidas por
atomização por spray-drying (14,15), os resultados ob-
tidos por essa técnica são muito bons. Porém, o custo
desse aparelho gira em torno de R$ 50 mil no merca-
Figura 5. Imagens das microesferas de quitosana reticuladas
do nacional. Alguns trabalhos propuseram o desenvol- obtidas por máquina fotográfica (a), microscópio ótico (b) e por
vimento de sistemas muito interessantes de menores microscopia eletrônica de varredura

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 65

Artigo
custos para a obtenção de microesferas de quitosana.
No trabalho de Luz e colaboradores (21) foi proposto
um sistema de atomização ultrassônica baseado em
vaporizador, um forno mufla circular, e uma bomba de
vácuo. O sistema mostrou-se de excelente qualidade.
No entanto, o custo de um forno mufla circular ainda é
alto para diversos grupos de pesquisa emergentes, o
que está em torno de R$ 15 mil. Outro sistema muito
interessante e de baixo custo foi proposto por Rorrer
e colaboradores (17) e adaptado por Nascimento e co-
laboradores (5). Este sistema produz as microesferas
pelo método de inversão de fase, o qual necessita de
uma bomba peristáltica e um compressor de ar, a so-
matória dos dois equipamentos custa em torno de R$
6 mil. O sistema proposto neste trabalho usa materiais
de baixíssimo custo, o que permite a obtenção das mi-
croesferas sem quaisquer problemas financeiros, pois
o sistema foi feito usando um compressor de ar de 12 V
para encher pneu de carro com o custo de R$ 36, uma
bomba de aquário de R$ 29, uma caneta de R$ 1, uma
agulha hipodermica de R$ 0,40. Além de apresentar um
custo muito baixo, o que permite a realização da ciência
em laboratórios menos abastados, os resultados foram
muito bons e condizentes com a literatura, visto que

as microesferas se apresentaram muito homogêneas
com um diâmetro médio de 183 µm. Também pode ser
observado que a organização da quitosana em micro-
esferas resultou em um aumento substancial na área
superficial das mesmas.
CONSIDERAÇÕES FINAIS
O sistema desenvolvido apresenta baixíssimo custo
(menos de R$ 100), o qual pode ser reproduzido em
qualquer laboratório de pesquisa. O sistema mostrou-
se eficiente para a obtenção de microesferas com diâ-
metro médio de 183 µm. A área superficial aumentou
substancialmente de 4,2 m2g-1 para 14,1 m2g-1 com a
organização da quitosana em microesferas. Este sis-
tema vem sendo empregado na rotina do grupo para
a obtenção de microesferas de quitosana para serem
aplicadas nas mais diversas linhas de pesquisa.
Agradecimentos
A FAPDF pelo apoio financeiro, ao CNPq pelas bol-
sas concedidas e ao Jonas Pertusatti pelas valiosas
discussões e pela revisão do manuscrito.
&
J 
 


9ROXPHDGVRUYLGRFP

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 $



     
3UHVVmR5HODWLYD33R
Figura 6. Isotermas de adsorção-dessorção de nitrogênio para as amostras: quitosana (A),
microesferas de quitosana reticulada (B) e microesferas de quitosana (C)

66 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

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spray dryer to produce spherical microparticles from polymeric
matrices. Quim. Nova, 30: 1744, 2007
67
Artigo

SÍNTESE DE BIODIESEL
EMPREGANDO ÓLEO DE ABACATE
RESUMO
Manoel Lima de Menezes*,
Luis Fernando da Silva Lopes e
O biodiesel substitui total ou parcialmente o óleo diesel de petróleo em motores ciclo- Juliano Passaretti Filho
diesel automotivos (de caminhões, tratores, camionetas, automóveis etc.) ou estacioná-
Departamento de Química,
rios (geradores de eletricidade, calor etc.). Pode ser usado puro ou misturado ao diesel Faculdade de Ciências,
em diversas proporções. A mistura de 2% de biodiesel ao diesel de petróleo é chamada Universidade Estadual Paulista –
de B2 e assim sucessivamente, até o biodiesel puro, denominado B100. UNESP

Biodiesel é um combustível biodegradável derivado de fontes renováveis, que pode ser *Autor para correspondência
obtido por diferentes processos tais como o craqueamento, a esterificação ou pela tran- Av. Luiz Edmundo Carrijo
sesterificação. Pode ser produzido a partir de gorduras animais ou de óleos vegetais, Coube, 14-01
CEP: 17033-360
existindo dezenas de espécies vegetais no Brasil que podem ser utilizadas, tais como Bauru. SP
mamona, dendê (palma), girassol, babaçu, amendoim, pinhão manso e soja, dentre ou- E-mail: menezes@fc.unesp.br
tras. Dentro deste contexto, o desenvolvimento deste projeto de pesquisa avaliou a
potencialidade de empregar o óleo extraído de polpa de abacate na síntese de biodie-
sel. De acordo com os resultados obtidos, todos os parâmetros determinados estão
em conformidade com a ANP-42. É importante ressaltar que o biodiesel obtido com o
óleo de abacate, apresentou características muito próximas ao biodiesel obtido com o
óleo de soja, destacando-se a viscosidade cinemática, resíduo de cinzas de carbono,
ponto de fluidez e congelamento. Os métodos analíticos avaliados para efetuar a carac-
terização do biodiesel de óleo de abacate apresentaram bons resultados, permitindo a
avaliação de conformidade com a norma ANP-42, do novo produto sintetizado.

Palavras-chave: biodiesel, abacate, óleo de abacate, caracterização

SUMMARY

Biodiesel substitutes total partially or the oil diesel of oil in cars engines cychlodiesel
(of trucks, tractors, light trucks, automobiles, etc) or stationary (generating of electricity,
heat, etc). It can used pure or be mixed to diesel in diverse ratios. The mixture of 2%
of the biodiesel to diesel of oil is called B2 and thus successively, until biodiesel pure,
called B100. Biodiesel is a biodegradável fuel derivative of sources renewed, that it can
be gotten by different processes such as the craking, the esterification or for the tran-
sesterification. It can be produced from animal fats or of vegetal oils, existing sets of ten
of vegetal species in Brazil that can be used, such as castor oil plant, palm, sunflower,
peanut, tame nut and soy, amongst others. Inside of this context, the development of
this project of research evaluated the potentiality to use the extracted pulp oil of avoca-
do in the synthesis of biodiesel. In accordance with the gotten results, all the definitive
parameters are in compliance with the ANP-42. It is important to stand out that biodiesel
gotten with the avocado oil, very presented characteristics next to biodiesel gotten with
the soy oil, being distinguished it viscosity kinematics, carbon leached ashes residue,
point of fluidity and freezing. The analytical methods evaluated to effect the characteri-
zation of biodiesel of avocado oil had presented good resulted, allowing the evaluation
of conformity with norm ANP-42, and the new synthesized product.

Keywords: biodiesel, avocado, oil of avocado, characterization

68 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

INTRODUÇÃO
O biodiesel substitui total ou parcialmente o óleo
diesel de petróleo em motores ciclodiesel automoti-
vos (de caminhões, tratores, camionetas, automóveis,
etc) ou estacionários (geradores de eletricidade, calor
etc.). Pode ser usado puro ou misturado ao diesel em
diversas proporções. A mistura de 2% de biodiesel ao
diesel de petróleo é chamada de B2 e assim suces-
sivamente, até o biodiesel puro, denominado B100.
Biodiesel é um combustível biodegradável derivado de
fontes renováveis, que pode ser obtido por diferentes
processos tais como o craqueamento, a esterificação
ou pela transesterificação. Pode ser produzido a partir
de gorduras animais ou de óleos vegetais, existindo
dezenas de espécies vegetais no Brasil que podem
ser utilizadas, tais como mamona, dendê (palma), gi-
rassol, babaçu, amendoim, pinhão manso e soja, den-
tre outras (1).
Neste contexto, o abacate apresenta-se como uma
oleaginosa promissora para a produção de biodiesel.
O abacateiro é cultivado em quase todos os Estados
do Brasil. Trata-se de uma planta frutífera das mais
produtivas por unidade de área cultivada (2). Um gran-
de número de variedades de abacate é encontrado
nas diversas regiões do território nacional, cujos frutos
apresentam composição química muito variável. Estu-
do anteriormente realizado com algumas variedades
cultivadas no Estado de São Paulo mostrou grande
variação quanto aos teores de lipídeos na polpa dos
frutos (5,3 a 31,1% m/m), (3). Frutos que apresentam
altos teores de lipídeos na polpa poderão constituir-
se em uma matéria-prima importante para obtenção
de óleo. Considerando-se a quantidade de óleo que
pode ser obtida por unidade de área cultivada, a qual,
de acordo com estudos comparativos realizados por
Canto e colaboradores com algodão, amendoim e
soja, é bem mais elevada do que de qualquer dessas
sementes oleaginosas cultivadas (4). Além do que, tra-
ta-se o abacateiro de uma planta perene, podendo ser
cultivada em áreas de topografia acidentada, e o óleo
de seus frutos apresenta interessantes características
químicas (2).
Enfim, dada à multiplicidade de matérias-primas
que hoje existe para a produção de biodiesel, é plausí-
vel dizer que somente através do conhecimento pleno
das propriedades se determinam os padrões de iden-
tidade do biodiesel no qual será possível estabelecer
parâmetros de controle. Desta forma será possível
garantir a qualidade do produto a ser incorporado na
matriz energética nacional.
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44
MATERIAIS E MÉTODOS
Reagentes
Os solventes hexano, heptano e o etanol anidro
(grau CLAE) foram adquiridos junto a Mallinchrodt
(Mallinchrodt Baker Inc., USA). Os ácidos acético,
clorídrico, sulfúrico, fosfórico, fosfato ácido de sódio
(p.a), solução de Wijs, iodeto de potássio foram ad-
quiridos junto a Merck (Merck-E, Merck RgaA, Ger-
many). Os padrões de estearato de etila,linoleato,
palmitato de etila e oleato de etila, monoleína, dio-
leína, trioleína, tricaprina, butanotriol e MSTFA (N-
methyl-N-trimethylsilyltrifluoroacetamide), foram
adquiridos junto a Sigma-Aldrich, (Sigma-Aldrich
Chemical Company, USA). O óleo de abacate em-
pregado para a obtenção do biodiesel foi extraído e
purificado previamente.
Síntese do biodiesel de óleo de abacate
A reação de transesterificação foi realizada de acor-
do com o protocolo de FERRARI (5). O biodiesel obti-
do foi caracterizado quanto aos aspectos químicos e
físicos. Os resultados obtidos foram apresentados na
Tabela 7.
Preparação das Soluções-Padrão de ésteres de
ácidos graxos
As soluções-padrão foram preparadas, dissolven-
do-se quantidade conhecidas de linoleato, palmitato e
oleato de etila, em heptano, obtendo as concentrações
de 0,25; 0,50 e 1,0 g L-1, respectivamente.
Preparação das Soluções-Padrão de glicerina,
butanotriol, mnoleína, dioleína, tricaprina e
trioleína
As soluções-padrão foram preparadas, dissol-
vendo-se quantidade conhecidas de glicerina, buta-
notriol, monoleína, dioleína, tricaprina e trioléina, em
piridina. Preparou-se 10,0 ml de uma solução con-
tendo as seguintes concentrações de: 2,04, 4,08,
8,16, 10,2 e 20,4 mg L-1 para glicerina, 5,0; 10,0;
20,0; 25,0 e 50,0 mg L-1 para monooleína, dioléina
e trioléina e, 18,5 mg.L-1 e 40,0 mg.L-1 para as so-
luções de padrões internos butanotriol e tricaprina,
respectivamente. É importante enfatizar que estas
determinações foram efetuadas de acordo com a
norma ASTM D 6584 (6).
69
Artigo

Preparação das Soluções-padrão estoque de Determinação da corrossividade ao cobre a 50ºC

etanol, metanol e isopropanol
As soluções-padrão foram preparadas, dissolvendo-se
quantidade conhecidas de etanol, metanol e isopropanol
em 10,0 mL de heptano, contendo as seguintes concen-
trações: 1,25; 2,5 e 5.0% (m/v) para o etanol e metanol res-
pectivamente. A concentração do isopropanol foi de 2,5
%(m/v). Este álcool foi empregado com padrão interno de
acordo com a norma da ANP 42, usando um sistema de
cromatografia gasosa equipado com headspace.
Preparação da derivatização
do biodiesel com MSTFA
Volumes de 10,0; 20,0; 40,0; 80,0 e 100 µL das solu-
ções-padrão foram transferidas para cinco vials com ca-
pacidade de 2,0 mL, 20,0 µL da solução de padrão interno
contendo o butanotriol e tricaprina, seguido pela adição de
100,0 µL de MSTFA. Estas misturas foram mantidas sob
agitação por 20 minutos, em temperatura ambiente. Após
este tempo os volumes foram completados para um mL
com heptano, seguido pela injeção 1,0 µL de cada solu-
ção-padrão no cromatográfo gasoso.
INSTRUMENTAÇÃO
Sistema de cromatografia gasosa
Este ensaio foi realizado em um equipamento de-
nominado de Copper Strip Corrosion Apparatus, reco-
mendado pela ABNT – NBR – 14359, adquirido junto a
Petrotest Instruments, GmbH & Co, Alemanha.
Determinação potenciométrica da acidez
Esta foi realizada em um sistema potenciométrico equi-
pado com um eletrodo de referência e um eletrodo de pra-
ta, cloreto de prata, adquirido junto a Methrohm AG (Swit-
zerland), de acordo com a norma ABNT – NBR – 14448.
Determinação do ponto de névoa e fluidez
Este ensaio foi realizado em um Mini Pour /Cloud
Point Tester, modelo MPC-102L, adquirido junto a Ta-
naka Scientific Limited, Japan. Esta determinação foi
realizada de acordo com a norma ANP – 42.
Determinação da viscosidade cinemática a 40ºC
Este ensaio foi realizado de acordo com a norma
ABNT-NBR-10441, com auxílio de um viscosímetro
digital, adquirido junto à Quimis Aparelhos Científicos
Ltda, São Paulo.

Para efetuar a determinação dos ésteres de ácidos

graxos, glicerina livre, monoleína, dioleína, trioleína e
etanol foi empregado um sistema de cromatografia ga- Tabela 1. Condições cromatográficas empregada para a separação
dos ésteres de ácidos graxos presentes no biodiesel de óleo abacate
sosa, equipado com headspace, autosample, detector
de ionização de chama, uma coluna Elite-Wax (30m x Parâmetros cromatográficos
0,25mm DI x 0,25μm), injetor split/splitless e headspa-
Equipamento CG - Clarus 600, Perkin Elmer
ce para a determinação de etanol. A determinação dos
ésteres graxos e os demais componentes foram efe- ZB-5HT (15m x 0,32mm x
Coluna capilar 0,25μm), com um guard column
tuados com injeção on-colunm-PSSO, em uma coluna de 5 m
cromatográfica Elite -5HT de 32 m (DI 0,32mm x 0,25µm
Gás de arraste Nitrogênio (2,0 mL min-1)
de filme), conectada a uma coluna de proteção de 5m
x 0,53mm DI. E seringa de injeção com capacidade de Modo de injeção On column-PSSO
5µL com agulha de 0,47mm DI. O sistema de cromato- Volume de injeção 1 µl
grafia gasosa modelo Clarus 600, foi adquirido junto a
Detecção Ionização de chama
PerkinElmer, (Waltham, MA, USA).
Temperatura detector 380ºC
Determinação do ponto de fulgor Temperatura injector
Programável de acordo com a
programação do forno.
Este ensaio foi realizado em um equipamento de 50ºC/1min, 15ºC/min a 180ºC,
programação do forno 7ºC/min a 230ºC. 30ºC/min a
determinação de Ponto de Fulgor recomendado pela
380ºC/4,20min
norma ABNT – NBR – 14598, adquirido junto a Quimis
Tempo final 26 min
Aparelhos Científicos Ltda, São Paulo.

70 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

Determinação do teor de resíduo de carbono
Este ensaio foi realizado em um “Micro Carbon Resi-
due Tester”, adquirido junto à Tanaka Scientific Limited,
Japan. Esta determinação foi realizada de acordo com
a norma ASTM B – 4530.
MÉTODOS
Determinação potenciométrica do índice acidez
Este ensaio foi realizado em conformidade com a
norma ANBT – NBR – 14448. O resultado obtido está
apresentado na Tabela 7, (7).
Determinação do índice de iodo (Método de Wijs)
Este ensaio foi realizado de acordo com a norma EN
14111. O resultado obtido está apresentado na Tabela 7, (7).
Determinação de cinzas sulfatadas
Este ensaio foi realizado de acordo com a norma da
ABNT NBR – 6294. O resultado obtido está apresenta-
do na Tabela 7.
Determinação da massa específica
A otimização cromatográfica empregada para efetu-
ar a determinação dos ésteres de ácidos graxos, pre-
sentes em óleo de abacate foi realizada de acordo com
as condições cromatográficas apresentadas na Tabe-
la 1, empregando à técnica de padrão externo. Após
a injeção de 1 µL das soluções-padrão de ésteres de
ácidos graxos, estes permitiram calcular as equações
de reta e os respectivos coeficientes angulares, como
poder observado na Tabela 6.
Condições cromatográficas para a determinação
dos teores de etanol e metanol presentes no
biodiesel de óleo abacate
A otimização cromatográfica empregada para efe-
tuar a quantificação de etanol presente no biodiesel foi
realizada de acordo com as condições cromatográficas
apresentadas na Tabela 2, empregando a técnica de
padrão externo com auxílio do headspace. Após a inje-
ção de 20 µL dos vapores das soluções-padrão de eta-
nol e metanol, estes permitiram calcular as equações
de reta e os respectivos coeficientes angulares, como
poder observado na Tabela 4.
Tabela 2. Condições cromatográficas empregadas para determinação
de etanol presentes no biodiesel de óleo abacate

Parâmetros cromatográficos
Este ensaio foi realizado empregando um densíme-
tro de vidro com auxílio de uma proveta de 100mL. O CG – Headspace - Clarus
Equipamento
600, Perkin Elmer
resultado obtido foi apresentado na Tabela 7.
Elite Wax (30mm x 0,25mm
Coluna capilar
x 0,25μm) polietileno glycol
Determinação de água e contaminação total
Gás de arraste Nitrogênio (1,0 mL min-1)

Este ensaio foi realizado de acordo com a norma Modo de injeção Split 1:20
ASTM D 6304, onde uma alíquota de 15mL da amostra Volume de injeção 1 μL
de biodiesel foi submetida a centrifugação a 4000 RPM
Detecção Ionização de chama
por 20 minutos. O resultado obtido está apresentado
na Tabela 7. Temperatura detector 300ºC
Temperatura injector 120ºC
Avaliação do Aspecto
Temperatura isotérmica 70ºC/3min

Uma amostra de biodiesel foi transferida para uma Programação de temperatura do Headspace
proveta de vidro e de 250 ml e está foi observada quan- Agulha 120ºC
to ao aspecto físico e quanto a presença ou não de ma- Temperatura de transferência 120ºC
terial particulado. O resultado obtido foi apresentado na
Temperatura do do forno 77ºC
Tabela 7.
Tempo de termostatização 20 min
Condições cromatográficas para determinação Pressurização 20 psi/2min
dos ésteres de ácidos graxos, presentes no
Volume de injeção 20µL
biodiesel de abacate

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 71

Artigo

Condições cromatográficas para a determinação Tabela 4. Curvas analíticas obtidas para a determinação de etanol e
metanol presentes na amostras de biodiesel
dos teores de glicerina livre, monoleína, dioleína
e trioleína presentes no biodiesel de abacate Componente Curva Analítica R2

A otimização cromatográfica empregada para a Etanol Y= 5033,865 + 2198713,30X 0,9945

quantificação dos componentes presentes no biodiesel
Metanol Y= 898993,907 + 1824681,4X 0,9897
de óleo de abacate foi realizada de acordo com as con-
dições cromatográficas apresentadas na Tabela 3, em-
pregando a técnica de padrão externo. Após a injeção Tabela 5. Equações das curvas analíticas obtidas para os
componentes determinados em amostras de biodiesel
de 1 µL das soluções-padrão de glicerina, monoleína,
dioleína e trioléína, estes permitiram calcular as equa- Componente Curva Analítica R2
ções de reta e os respectivos coeficientes angulares, Glicerina Y= 1715,50 + 19045,00X 0,9996
como poder observado na Tabela 5.
Monooleína Y= -6726,36 + 8596,89X 0,9992
Dioleína Y= -13037,77 + 6782,22X 0,9929
Tabela 3. Condições cromatográficas empregada para a determinação Trioleína -11719,76 + 3175,53X 0,9838
dos teores de monooleína, dioleína, trioléina e glicerina presentes no
biodiesel de óleo abacate

Parâmetros cromatográficos
Equipamento CG - Clarus 600, Perkin Elmer o aspecto do óleo de abacate fosse límpido, mas não
ZB-5HT (15m x 0,32mm x 0,25μm), foi possível observar mudanças na coloração no início
Coluna capilar
com guard column de 5m. e término da reação. O biodiesel obtido apresentou-se
Gás de arraste Nitrogênio (2,0 mL min-1) límpido e com uma coloração esverdeada, caracterís-
tica do óleo de abacate. De acordo com os resultados
Modo de injeção On column-PSSO
obtidos na determinação dos ésteres formados, pode-
Volume de injeção 1 μL se inferir que a reação ocorreu com um rendimento de
Detecção Ionização de chama 84%. Cabe ressaltar que a coloração observada não
Temperatura detector 380ºC
resultou em aumento nos teores de cinzas sulfatadas e/
ou teor de resíduo de carbono, como pode ser obser-
Programável de acordo com a
Temperatura injector
programação do forno
vado na Tabela 7.
50ºC/1min, 15ºC/min a 180ºC,
programação do forno 7ºC/min a 230ºC. 30ºC/min a Otimização cromatográfica para a determinação
380ºC/4,20min dos teores de etanol e metanol presentes no
Tempo final 26 min biodiesel de óleo de abacate

A quantificação do etanol presente no biodiesel foi

RESULTADOS E DISCUSSÃO
Obtenção do biodiesel a partir de óleo de abacate
De acordo com os relatos de alguns pesquisadores,
o tempo reacional para realizar a reação de transesterifi-
cação, empregando o óleo de soja é muito rápido. Pois,
a conversão de ésteres etílicos atinge o seu valor má-
ximo com apenas 10 minutos de reação, estabilizando-
se em um tempo entre 20 a 30 minutos. No caso da sín-
tese do biodiesel de soja, pode se observar a variação
de coloração quando inicia e quando termina a reação,
(5,8). Na reação de transesterificação, empregando o
óleo de abacate e álcool etílico anidro, fixou-se o tem-
po de 60 minutos e uma temperatura de 60ºC. Embora
efetuada empregando o auxílio do headspace, com
calibração externa. O emprego de 1,0 mL da amostra
simplificou a metodologia analítica, uma vez que não
observou-se efeito de matriz. A temperatura de 70ºC
e tempo de termostatização de 20 minutos foram sufi-
cientes para ocorrer os equilíbrios entre a fase gasosa e
a matriz de biodiesel. A Figura 1 apresenta a o croma-
tograma obtido após a injeção de 20 µL de vapores da
amostra de biodiesel.
Observando-se o coeficiente de correlação (r2 = 0,9945),
apresentado na Tabela 4, permite inferir que o método
apresentou uma excelente linearidade.
De acordo com a Figura 3, observou-se que as de-
terminações de etanol ou metanol foram efetuadas sem
interferentes.

72 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

 400

350

300

250

200

150

100

50

0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9
Tempo (min)

Figura 1. Cromatograma obtido após a injeção de 20 µL de vapores de uma amostra de biodiesel, para a determinação de álcool empregando o
headspace. Os picos 1, 2 e 3 são referentes ao metanol, isopropanol e etanol respectivamente

950
900
850
800
750

700
650

600
550
500 5
450
400
350
300 3
250
200
6 7 8
150
1 2
100

50 9
4
0

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Tempo (min)

Figura 2. Cromatograma obtido após a injeção de 1,0 µL de uma solução- padrão contendo os seguintes componentes de acordo com os picos
cromatográficos: 1- glicerina, 2-butanotriol (padrão interno), 3-palmitato de etila, 4-oleato de etila, 5-linoleato de etila, 6- monooleína, 7- tricaprina
(padrão interno), 8- dioleína e 9- trioleína

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 73

Artigo
Otimização cromatográfica para a determinação
dos teores de glicerina livre, monooleína, dioléina e
trioleína presentes no biodiesel de óleo de abacate
Estas determinações foram realizadas empregando a
técnica de injeção on column-PSSO, para garantir a deter-
minação de todos os componentes presentes na amostra.
Para empregar está técnica foi necessário diluir o biodiesel
em solvente, afim de não saturar a coluna. Este processo
permitiu a análise de todos os componentes de interesse,
uma vez que o solvente não coeluiu com o álcool e com a
glicerina (9). Nestas determinações, após a derivatização
com MSTFA, as soluções-padrão, bem como as amostras
foram diluídas com heptano. A injeção on column a frio
(60ºC), com a temperatura do injetor programável, permitiu
a eluição de todos os compostos, evitando que ocorresse
a decomposição de algum componente a ser determinado.
A eluição da glicerina e butanotriol (padrão interno),
ocorreram em 5,6 e 6,3 minutos, e os demais componentes
monooleína, dioléína e tricaprina e trioléina foram eluidos
em 17,7; 19,7; 21,08 e 24,01minutos, respectivamente. As
Figuras 2 e 3 apresentam os cromatogramas obtidos após
a injeção de 1,0 µL se solução-padrão seguido pela inje-
ção de 1,0 µL da amostra de biodiesel em estudo.
A Tabela 6 apresenta as equações de reta para a glice-
rina, monooleína, dioleína e trioléina, obtidas após a obten-
ção da curva analítica.
Tabela 6. Equações das curvas analíticas obtidas para os
componentes determinados em amostras de biodiesel
Componente Curva Analítica R2
Linoleato de etila Y= 8371,64 + 800087,09X 0,9972
Oleato de etila Y= 3630,88 + 451457,04X 0,9976
Palmitato de tila Y= 12442,03 + 880616,59X 0,9969
De acordo com as equações de retas obtidas e os
respectivos coeficientes de relação (r2), apresentados
na Tabela 5, permite inferir que o método cromatográ-
fico otimizado mostrou-se adequado para efetuar as
determinações destes componentes, de acordo com a
norma ABNT-NBR – 15341 e 15344.
Otimização cromatográfica para a determinação
dos ésteres de ácidos graxos presentes no
biodiesel de óleo de abacate
Considerando-se que em uma amostra de biodiesel,
eventualmente poderá haver a presença de ácidos gra-
74
xos, monoglicerídeos, diglicrídeos e triglicerídeos, estes
não são vaporizados na forma inatura, dentro da coluna
cromatográfica, por possuírem pontos de ebulição rela-
tivamente altos. Neste caso, a injeção de uma amostra
de biodiesel na coluna cromatográfica ZB –5HT, sem a
prévia derivatização com MSTFA, poderia ocorrer adsor-
ções irreversíveis na coluna cromatográfica, diminuindo
a sua eficiência de separação e conseqüentemente al-
terando os tempos de retenções dos componentes em
estudo. Objetivando evitar danos maiores à coluna cro-
matográfica, minimizar o consumo do reativo MSTFA e
empregar a mesma coluna cromatográfica empregada
para as determinações de monooleína, dioleína e triole-
ína, nas determinações dos ésteres de ácidos graxos,
fez-se necessário otimizar esta metodologia analítica. É
importante ressaltar que a coluna cromatográfica Elite
Wax é específica para as determinações de ésteres de
ácidos graxos. Neste caso, para empregar a coluna cro-
matográfica (ZB-5HT) nas determinações de ésteres de
ácidos graxos presentes no biodiesel, fez se necessário
preparar uma nova curva de calibração com concen-
trações de ésteres variando de 0,2 a 1,0 g.L-1 e, efetuar
a diluição 1/100, da amostra previamente derivatizada
com MSTFA. Este procedimento foi realizado para ga-
rantir que não haveria adsorções irreversíveis na referi-
da coluna cromatográfica de diferentes componentes
presentes na amostra. Estas determinações foram rea-
lizadas empregando as programações de temperaturas
e técnica de injeção como descritas na Tabela 1.
As Figuras 4 e 5 apresentam os cromatogramas
obtidos após a injeção de 1,0 µL da solução-padrão
dos ésteres de ácidos graxos (palmitato, linoleato e
oleato de etila), e após a injeção 1,0 µL da amostra
derivatizada com MSTA diluída 1/100. Como podem
ser observadas, as determinações foram efetuadas
sem a presença de interferentes e os picos obtidos
estão bem definidos. Pode-se observar também que
os resíduos de monooleína, dioleína e tricaprina fo-
ram eluidos da coluna cromatográfica. A trioleína não
foi detectada devida a diluição da amostra efetuada
previamente.
A Tabela 6 apresenta as equações das curvas
analíticas, obtidas para os ésteres de ácidos graxos
presentes no biodiesel de abacate. De acordo comas
equações das curvas analíticas e os respectivos co-
eficientes de correlação (r2), apresentados na Tabela
6, permite inferir que esta metodologia mostrou-se
adequada para efetuar as determinações quantitativas
dos ésteres de ácidos graxos presentes em amostras
de biodiesel de óleo de abacate, em conformidade
com a norma ANP 42.
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Tempo (min)

Figura 3. Cromatograma obtido após a injeção de 1,0 µL de uma amostra de biodiesel contendo os seguintes componentes de acordo com os
picos cromatográficos: 1- glicerina, 2-butanotriol (padrão interno), 3-palmitato de etila, 5-linoleato de etila, 6- monooleína, 7- tricaprina (padrão
interno), 8- dioleína e 9- trioleína. A Tabela 6 apresenta as equações de reta para a glicerina, monooleína, dioleína e trioléina, obtidas após a
obtenção da curva analítica

240

220

200

180

1
160
3
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120

100

80 2

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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25

Figura 4. Cromatograma obtido após a injeção de 1,0 µL de uma solução-padrão contendo os ésteres palmitato
de etila (1), oleato de etila (2) e limoleato de etila (3)

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 75

Artigo
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0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Figura 5. Cromatograma obtido após a injeção de 1,0 µL de amostra de biodiesel derivatizada com MSTFA, diluída 1/10. Os picos 1, 2, 3, 4 e 5
correspondem ao palmitato, linoleato de etila, monooléina tricaprina e dioleína, respectivamente
Especificação do biodiesel de óleo de abacate
As características de qualidade do biodiesel obti-
do foram apresentadas na Tabela 7, onde os parâme-
tros determinados foram comparados com a especi-
ficação da ANP-42/ Resolução nº 7 de 19/03/2008 e
o biodiesel obtido com óleo de soja (10).
O número de cetano representa uma propriedade
importante do diesel automotivo e seu aumento ge-
ralmente resulta em redução da emissão pela exaus-
tão, diminuindo o consumo de combustível e redu-
zindo o barulho do motor (9). Como as equações,
para predizerem o número de cetanos não se aplica
ao biodiesel, um parâmetro alternativo adotado para
o biodiesel é o índice de cetano, calculado a par-
tir da equação [IC=454,74 –1641,416D + 774,74D2
– 0,554B + 97,803 (logB)2], onde D é a densidade do
biodiesel e B a temperatura da destilação de 50%
do produto em ºC. Observa-se que o valor obtido
foi de 37 e, o índice de cetano pela ANP-42 sugere
apenas anotar. Considerando-se que este cálculo foi
efetuado levando-se em consideração os valores de
76
1
3
4 5
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
densidade e a temperatura máxima de destilação de
50% (v/v) do biodiesel, pode-se inferir que pode ter
ocorrido uma variação na medida desta temperatu-
ra, uma vez que o termômetro empregado não foi
aferido, bem como a pressão de da bomba de vácuo
empregada.
Quanto ao resíduo de carbono, que representa a
tendência de formar carvão na câmara de combus-
tão (11), pode se dizer que este é um parâmetro de
grande importância na análise de combustíveis, pois
há uma correlação entre o conteúdo de carbono do
combustível e a formação de depósitos no injetor
(12). Como pode se observar no biodiesel obtido a
partir de óleo de abacate, os valores são inferiores
aos valores recomendados pela ANP-42. É impor-
tante salientar que a presença de clorofila, caracte-
rística esverdeada do referido biodiesel, não propor-
cionou alterações neste parâmetro.
Os teores dos ésteres etílicos de ácidos graxos
do biodiesel produzido, apresentados na Tabela 7,
são maiores de 96,5% (m/m), como recomendado
pela norma ANP-42. As quantidades determinadas
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44
Tabela 7. Resultados obtidos nas determinações ensaiadas para o biodiesel de óleo abacate, comparados com resultados de biodiesel de óleo
soja e a Norma ANP-42/ Resolução:(Resolução nº 7 de 19/03/2008 – DOU – 20/03/2008)

Limite Biodiesel
Característica Unidade
ABNT/NBR Abacate Soja5,28
Aspecto - LII (1) Límpido Límpido
863,7
Massa específica a 20°C kg/m3 850 - 900 877

Viscosidade Cinemática a 40ºC km2/s 3,0 – 6,0 4,8 5,0

Teor de Água Max. (2) mg/kg 500 ND ----
Contaminação Total máx. mg/kg 24 ND ------
Ponto de Fulgor, mín. (3) ºC 100,0 179 170
Teor de éster, mín. % massa 96,5 99,3 97,5
Resíduo de Carbono (6) % massa 0,050 0,0014 0,14
Cinzas sulfatadas, Max. %massa 0,020 0,001 0,006
Enxofre total,Max. mg/kg 50 ----- 75,0
Sódio + Potássio, Max. mg/kg 5 ----- ---
Cálcio + Magnésio, Max. mg/kg 5 ----- ----
Fósforo, Max. mg/kg 10 ------ -----
Corrosividade ao cobre, 3h a 50ºC, Max. ----- 1 1 -------
Número de Cetano (7) ---- Anotar 38 57,8
Ponto de entupimento de filtro a frio, Max. ºC 19 (9) ----- ----
Ponto de névoa e fluides ºC Anotar 14 e -2,0 ----
Índice de acidez, Max. mg KOH/g 0,50 0,82 0,5
Glicerol livre, Max. %massa 0,02 0,005 0,0109
Glicerol total, Max. %massa 0,25 0,625 ---
Mono, Di, tricilglicerol (7) % massa Anotar 0,62 ---
Metanol ou Etanol, Max. %massa 0,20 0,0001
Índice de iodo (7) g/100g Anotar 99,63 104,4
Estabilidade à oxidação
H 6 --------
a 110ºC, min. (2)

dos ésteres no biodiesel de óleo de abacate somam
98% (m/m), sendo que 28% (m/m) referem-se ao
palmitato de etila, originado de ácidos graxos satu-
rados.
Claramente pode-se observar que os resultados
são muito semelhantes, comparando-se o biodiesel
obtido a partir de óleo de abacate e biodiesel sinte-
tizado a partir do óleo de soja. Pequenas diferenças
são encontradas, possivelmente devido à diferença
na composição de ácidos graxos existentes nas di-
ferentes espécies. No caso do óleo de abacate pre-
domina-se a presença de ácidos oléico e palmítico
e, no óleo de soja a ocorrência dos ácidos linoleíco e
palmítico são mais pronunciados. Os resultados de-
monstram que os produtos obtidos não diferem em
sua qualidade como poderia de se esperar, uma vez
que tratam se de óleos vegetais de espécies diferen-
tes de oleaginosas.
De acordo com os valores determinados de glicerina
livre, bem como os teores de ésteres e os demais parâ-

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 77

Artigo

metros apresentaram-se em conformidade com a ANP- CONCLUSÕES

42, porém o teor de glicerina total e a acidez, observou-
se valores acima do determinado pela ANP-42. Neste
caso o mais adequado será efetuar uma avaliação do
tempo para realizar a reação de transesterificação e
efetuar mais uma vez a lavagem do biodiesel de óleo
de abacate. De acordo com os resíduos de glicerina,
traços de álcool, bem como os demais parâmetros de-
terminados, cujos, valores estão em conformidade com
a ANP-42, pode-se inferir que as metodologias empre-
gadas, segundo o protocolo de FERRARI (5), são ade-
quadas para realizar a síntese deste produto.
Os teores de fósforo, enxofre, sódio e a estabili-
dade a oxidação a 110ºC, não foram avaliados, mas
os demais parâmetros avaliados estão em conformi-
dade com a norma da ANP-42. Assim, pode-se dizer
que a similaridade encontrada entre os parâmetros
obtidos no biodiesel de óleo de abacate, comparado
aos parâmetros do biodiesel de óleo de soja, conclui-
se que o biodiesel obtido a partir do óleo de abacate
é mais um produto que poderá somar as matrizes
energéticas nacional.
Considerando-se as reais necessidades nacio-
nais, na busca de novas fontes energéticas para a
produção de biocombustíveis renováveis e sustentá-
veis, o desenvolvimento deste projeto de pesquisa,
permitiu concluir que:
• O óleo de abacate apresentou como uma excelen-
te matéria-prima para a obtenção do biodiesel,
• As propriedades físico-químicas dos produtos
obtidos estão em conformidade com a ANP-42,
na maioria dos parâmetros determinados,
• O tratamento dos resíduos, tais como o caroço
de abacate, permitiu a obtenção de álcool etílico,
como uma segunda matéria-prima para a obten-
ção do biodiesel.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem a FAPESP pelo suporte fi-
nanceiro.

R e f er ê ncias

1. http://www.biodiesel.gov.br/, acessado em 10/11/2009.

2. TANGO, J.S.; TURATTI, J.M. Óleo de abacate. In: ABACATE – cultura, matéria-prima, processamento e aspectos econômicos. Campinas:
ITAL,. p. 156-192.,1992.

3. TANGO, J.S.; COSTA, S.I.; ANTUNES, A.J.; FIGUEIREDO, I.B. Composition du fruit et de l’huile de différentes variétés d’avocats cultivés
dans l’Etat de São Paulo, Fruits, Paris, v. 27, p. 143-146, 1972.

4. CANTO, W.L.; SANTOS, L.C.; TRAVAGLINI, M.M.E. Óleo de abacate: extração, usos e seus mercados atuais no Brasil e na Europa.
Estudos Econômicos. Campinas: ITAL, 1980. 144p. (Alimentos Processados, 11)

5. FERRARI, R.A; OLIVEIRA, S.V; SCABIO, A; Quim.Nova. 28(1), 19-23, 2005.

6. Agência Nacional do Petróleo, Gás Natural e Biocombustíveis, Resolução ANP- nº7, de 19/03/2008, DOU 20/03/2008, Consulta ao site:
www.petrobras.com.br, em 27/09/2008.

7. Standard test method for determination of free and total glycerin in B-100 biodiesel methyl esters by chromatography, ASTM – Designation: D
6584-00, Annual Book of ASTM Standards, 2005.

8. AOCS,1999,Brasil,2005,http://www.fcf.usp.br/Ensino/Graduacao/Disciplinas/Exclusivo/Inserir/Anexos/LinkAnexos/Aula%20Lipides%20
2007.pdf.

9. SERDARI, A; EURIPIDES, L; STOURNAS, S. Ind. Eng. Chem. Res. 38, 3543, 1999.

10. REZENDE, D.R; ALVES, M.I.R; FILHO, A.R.N. Biodiesel

11. DORADO, M.P; BALLESTEROS, E; ARNAL, J.M; GÓMEZ, J; JIMENEZ, F.J.L. Energy Fuels. 17, 1560, 2003.

12. FREEDMAN, B; PRYDE, E.H; MOUNTS, T.L. J. Am. Oil Chem. Soc. 61, 1638, 1984.

78 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

CONSUMO DE CORANTES ARTIFICIAIS
EM BALAS E CHICLETES POR CRIANÇAS
DE SEIS A NOVE ANOS
RESUMO
Ana Paula da Silva Oliveira,
Gabriela Ferreira Jacques,
Um questionário foi elaborado com o objetivo de identificar as balas e chicletes Vinicius Vaz Cabral Nery e
mais consumidos, suas respectivas marcas e os corantes nestes utilizados, Shirley Abrantes*

por crianças de 6 a 9 anos, no período de uma semana. Este questionário foi INCQS-FIOCRUZ
aplicado em escolas particulares, considerando a norma de amostragem por
atributos ISO 2859-1 (NBR 5426). Foi escolhido o bairro de Del Castilho no *Autora para correspondência:
Av. Brasil, 4.365
Município do Rio de Janeiro. Das 12 escolas foi feita a amostragem representa- CEP: 21045-900
tiva de três escolas, contabilizando 640 questionários distribuídos, deste total Rio de Janeiro. RJ
Shirley.abrantes@incqs.fiocruz.br
somente 51 foram respondidos corretamente. Considerando os dados obtidos,
os corantes: vermelho 40, azul brilhante, indigotina e amarelo crepúsculo são
os corantes mais presentes nas balas e chicletes e que 88% das crianças con-
somem mais de 35 balas por semana e 45% consomem aproximadamente 20
chicletes por semana.

Palavras-chave: corantes artificiais, crianças, inquérito

SUMARY

A questionnaire was developed to identify the most consumed candy and

chewing gum, their markings and colors used in, for children 6 to 9 years in
the period of one week. This questionnaire was applied to private schools, was
used the standard sampling by attributes ISO 2859-1 (NBR 5426). Del Castilho
neighborhood was chosen in Rio de Janeiro. A representative sample of three
schools was sampled from twelve schools, 640 questionnaires were distribu-
ted, a total of 51 were answered correctly. Considering the data obtained, the
colors: allura red A C, brilliant blue FCF, indigotine and sunset yellow are pre-
sent in most candies and chewing gum and that 88% of children consume more
than 35 candies per week and consume about 45% 20 gums per week.

Keywords: artificial coloring, children, investigation

INTRODUÇÃO

A cor é associada a muitos aspectos da vida e in-
fluencia bastante as decisões do dia-a-dia, incluindo
aquelas que envolvem os alimentos. A aparência e as
características sensoriais de um alimento na hora da
compra é o que determina se o consumidor irá ou não
levá-lo. Portanto se pode afirmar que a aceitabilidade
dos alimentos é diretamente afetada pela cor e por esse
motivo cresce cada vez mais a utilização de corantes
nos alimentos e bebidas, seja na forma natural ou ar-
tificial.
A prática de colorir alimentos vem dos povos anti-
gos. Egípcios retiravam da natureza substâncias, como
especiarias e condimentos, para essa finalidade (PRA-
DO, 2003).
Muitos alimentos industrializados originalmente
não apresentam cor, em outros casos, a coloração é

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 79

Artigo
alterada ou destruída durante o processamento e/ou
estocagem. Sem valor nutritivo, os corantes são uma
classe de aditivos, introduzidos nestes alimentos com
o intuito de conferir, intensificar, restaurar e/ou unifor-
mizar sua cor, tornando estes mais atrativos (FIOCRUZ,
2005). Aditivos são substâncias químicas adicionadas
aos alimentos para proporcionar determinadas carac-
terísticas aos mesmos. Dentre os aditivos permitidos e
utilizados nos alimentos os corantes oferecem um fator
determinante para induzir o consumidor a adquiri-los.
Os alimentos vistosos introduzem um conceito de que
alimentos coloridos, atraentes só podem ser deliciosos
(PRADO, 2007). Em geral, a importância da aparência
do produto para sua aceitabilidade é a maior justificati-
va para emprego de corantes. Entretanto, a única fun-
ção dos corantes alimentares é conferir cor ao alimento
não oferecendo nenhum valor nutritivo a este.
Apesar da ANVISA (Agência Nacional de Vigilância
Sanitária) permitir o uso dos corantes artificiais, estes
têm como matéria prima a anilina que possui um grande
potencial carcinogênico já estabelecido, portanto, faz-
se necessário o controle da utilização desses corantes
no alimento uma vez que a maioria dos alimentos colo-
ridos é destinada as crianças e não é raro o relato de re-
ações alérgicas sofridas por estas substâncias. Como
exemplo pode-se citar a tartrazina que causa alergia
a algumas crianças (CUNHA, 1998). De acordo com a
pesquisa feita pelo pesquisador Stevenson et al. (2007),
crianças hiperativas, submetidas à administração de
corantes artificiais durante cinco dias, mostraram pre-
juízo no desempenho em testes de aprendizados.
A manutenção da cor natural no alimento constitui-
se em um fator fundamental para o comércio do produ-
to, em face da primeira avaliação do consumidor. Antes
do paladar os alimentos coloridos seduzem as pessoas
pela visão (PRADO, 2007).
A aceitação do produto pelo consumidor é sem
sombra de dúvida o maior motivo que faz as indústrias
alimentícias a usarem corantes. Essa prática vem au-
mentando cada vez mais, para ocultar a falta de cor em
alimentos industrializados, e também para minimizar as
alterações ou destruição da coloração que pode ocor-
rer durante o processamento e/ou estocagem (ALVES,
2004). Porém o uso indevido desses corantes pode
mascarar ou disfarçar o consumo de alimentos mal pro-
cessados ou deteriorados (PRADO, 1998).
A preferência pelo uso de corantes artificiais é de-
finida pelas vantagens apresentadas em relação aos
naturais, pois estes são sensíveis a luz, ao calor, ao oxi-
gênio ou a ação das bactérias. Consequentemente não
são estáveis. Além disso, os sintéticos propiciam cores
80
intensas e muitas vezes são menos onerosos (UFRGS,
2004).
Muitos estudos vêm tentando demonstrar as razões
adversas que os corantes podem causar assim o mo-
nitoramento dos teores destes em alimentos tem con-
tinuamente contribuído para alertar o consumo cons-
ciente desses produtos (PRADO, 2003)
No Brasil, a regulamentação do uso de aditivos
para alimentos, inclusive corantes, é de competência
da ANVISA.
O decreto nº 50.040 de 24 de janeiro de 1961, do
Ministério da Saúde, foi a primeira norma técnica de
regulamentação do emprego de aditivos químicos em
alimentos. Esta determina quais os alimentos em que
podem ser empregados cada corante e seus limites
máximos permitidos. O artigo nono descreve que os
corantes tolerados para serem introduzidos na fabri-
cação de alimentos e bebidas são: corantes naturais,
caramelos e corantes artificiais (BRASIL, 2009 1º).
Na resolução nº 44/77 da CNNPA (Comissão Nacio-
nal de Normas e Padrões para Alimentos), do Ministério
da Saúde (BRASIL, 2009 2º), os corantes permitidos
para uso em alimentos e bebidas são classificados da
seguinte forma:
a) Corante Orgânico Natural – aquele obtido a partir de
vegetal, ou eventualmente, de animal, cujo princípio
corante tenha sido isolado com emprego de proces-
so tecnológico adequado.
b) Corante Orgânico Sintético – obtido por síntese or-
gânica mediante o emprego de processo tecnológi-
co adequado.
b.1) Corante artificial – é o corante orgânico sintético
não encontrado em produtos naturais.
b.2) Corante sintético idêntico ao natural – é o co-
rante orgânico sintético cuja estrutura química
é semelhante à do princípio ativo isolado
de corante orgânico natural.
c) Corante Inorgânico – aquele obtido a partir de subs-
tâncias minerais e submetido a processos de elabo-
ração e purificação adequados a seu emprego em
alimentos.
d) Caramelo – o corante natural obtido pelo aqueci-
mento de açúcares à temperatura superior ao ponto
de fusão.
e) Caramelo (processo amônia) - é o corante sintético
idêntico ao natural obtido pelo processo amônia,
desde que o teor de 4-metil, imidazol não exceda no
mesmo a 200 mg/kg (duzentos miligramas por quilo).
Atualmente, a legislação brasileira, permite apenas
o uso de onze corantes artificiais, sendo eles: amaranto,
amarelo crepúsculo, azorrubina, azul brilhante, azul pa-
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44
tente V, eritrozina, indigotina, ponceau 4R, verde rápido,
vermelho 40 e tartrazina. O uso permitido desses corantes
artificiais não anula a possibilidade de efeitos adversos à
saúde.
A resolução 387, de 05 de agosto de 1999, do Minis-
tério da Saúde, aprova o regulamento técnico que esta-
belece o uso de aditivos alimentares, descriminando suas
funções, a ingestão diária aceitável (IDA) e seus limites má-
ximos para a categoria de alimentos 5: balas, confeitos,
bombons, chocolates e similares (BRASIL, 2009 4ºa).
Na Tabela 1 estão descritos os nomes comerciais, os
códigos de identificação utilizados no Brasil, a cor referente
a cada corante, a ingestão diária aceitável segundo a FAO
(Food and Agriculture Organization) e a OMS (Organização
Mundial da Saúde) e os limites máximos permitidos para
balas, confeitos, bombons, chocolates e similares descrito
na resolução nº 387 do Ministério da Saúde.
Segundo a ANVISA é considerado corante toda a
substância que confere ou intensifica a cor dos alimentos
(BRASIL, 2009 1º). Os corantes artificiais são obtidos atra-
vés de síntese orgânica, estes não são encontrados em
produtos naturais (BRASIL, 2009 2º). Suas principais van-
tagens em relação aos corantes naturais são: estabilidade,
melhor poder fixação nos alimentos e menor custo, pelo
seu preço direto e também por necessitar de uma menor
dosagem devido a sua intensa cor (PRADO, 2003).
Segundo Carvalho (2005) os corantes artificiais podem
ser classificados nas seguintes categorias:
• Categoria A – uso permitido em alimentos.
• Categoria B – são corantes que dispõem de poucos
estudos para incluí-los na categoria A.
• Categoria CI – Dispõem de dados detalhados relativos
a ensaios em animais com relação à toxidade prolon-
gada.
• Categoria CII – Não existe dados relevantes sobre a to-
xidade prolongada
• Categoria CIII – não dispõem de dados que indiquem a
possibilidade de efeitos prejudiciais.
• Categoria D - não dispõem de dados sobre sua toxi-
dade.
• Categoria E – São prejudiciais e não devem ser usados
em alimento, como os corantes amarelo sólido, azul in-
dantreno, laranja GGN, vermelho sólido e escarlate GN
que tiveram seus usos banidos pela portaria nº 02 de
1987 do Ministério da Saúde.
Na Tabela 2 encontram-se descritos os nomes dos
corantes artificiais permitidos, sua origem, sua aplicação,
suas vantagens e desvantagens e seus possíveis efeitos
adversos em relação à saúde.
O objetivo deste trabalho é de avaliar o uso de coran-
tes artificiais em balas e chicletes mais consumidos por
escolares de seis a nove anos na região norte do municí-
pio do Rio de Janeiro e reunir informações a respeito dos
benefícios e malefícios do uso dos corantes artificiais em
relação à saúde.
MATERIAL E MÉTODOS
Material
Questionário desenvolvido pela equipe de pes-
quisa do setor de Migrantes Orgânicos do Instituto

Tabela 1. Nomes, cor, IDA e limites máximos dos corantes artificiais

IDA
Nome Código Cor Limite máximo mg/100g
(mg/kg de peso corpóreo)
Amaranto E123 Magenta 0,50 10,0
Amarelo Crepúsculo E110 Laranja 2,50 10,0
Azorrubina E122 Vermelho 4,00 5,00
Azul Brilhante E133 Azul turquesa 10,0 30,0
Azul patente V E131 Azul 15,0 30,0
Eritrosina E127 Pink 0,10 5,00
Indigotina E132 Azul royal 5,00 30,0
Ponceau 4R E124 Cereja 4,00 10,0
Verde Rápido E143 Verde mar 10,0 30,0
Vermelho 40 E129 Vermelho alaranjado 7,00 30,0
Tartrazina E102 Amarelo limão 7,50 30,0

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 81

Artigo

Nacional de Controle e Qualidade em Saúde (INCQS) Metodologia

da Fundação Oswaldo Cruz.
Balas de diferentes marcas (total de nove marcas)
nos sabores: morango, cereja, framboesa, menta,
tutti-frutti, maçã verde e melancia.
Chicletes de 8 (oito) diferentes marcas nos sabo-
res: morango, uva, framboesa, menta, tutti-frutti.
Pesquisa bibliográfica
O desenvolvimento do trabalho iniciou-se com a
leitura e fichamento de obras e textos referentes ao
assunto em questão. Essencialmente a primeira parte
da pesquisa, foi desenvolvida com a leitura crítica das

Tabela 2. Características dos corantes artificiais utilizados no Brasil.

Nome*1 Amaranto Amarelo Crepúsculo Azorrubina Azul Brilhante Azul patente V Eritrosina

Origem (Síntese) *2 Alcatrão Tinta do alcatrão — Tinta do alcatrão — Tinta do alcatrão

de carvão de carvão de carvão de carvão
Cereais, balas, Cereais, balas, Cereais, balas,
Aplicação*2 xaropes, laticínios, xaropes, laticínios e — laticínios, queijos e — Pós para gelatina,
geléias, sucos goma de mascar. gelatinas. refrescos e geléias.
em pó.

Vantagem*3 Boaestabilidade Boa estabilidade a Boa estabilidade — Boa estabilidade a —

a luz, calor e ácido. luz, calor e ácidos. a luz, calor e ácidos. luz, calor e ácidos

Descolore
em presença Descolore em
de agente redutor Descolore em Razoável presença de
como, ácido presença de agente É proibido estabilidade a luz, agente redutor Insolúvel em pH
Desvantagem*3 ascórbico. redutor como ácido nos EUA calor e ácidos e como ácido abaixo de 5
É proibido nos ascórbico. baixa estabilidade ascórbico.
EUA (dificulta a oxidativa. É proibido nos EUA
exportação de
produtos)

Estudos relatam Possível associação

a capacidade com tumores na
Efeitos Efeito carcinogênico Alergia, angiodema Seu metabolismo de causar Seu metabolismo tiróide, pela provável
Adversos*3 em estudo e problemas ainda esta sendo hiperatividade em ainda esta sendo liberação de iodo no
gástricos. estudado crianças, eczema e estudado organismo. Porém
asma. estes estudos não
foram concluídos.

Nome*1 Indigotina Ponceau 4R Verde Rápido Vermelho 40 Tartrazina

Origem (Síntese) *2 Tinta do alcatrão Tinta do alcatrão — Sintetizado quimicamente Tinta do alcatrão
de carvão de carvão de carvão

Aplicação*2 Goma de mascar, iogurte, Frutas em calda, xaropes

de bebidas, balas e —
Cereais, balas, xaropes,
laticínios, geléias, —
balas, sucos em pós. refrigerantes. sucos em pó.
Boa estabilidade a luz, calor
Vantagem*3 — Boa estabilidade a luz, — e ácidos. É o corante mais Boa estabilidade a luz,
calor e ácidos. estável para bebidas na calor e ácidos.
presença do ácido ascórbico

Baixa estabilidade a luz, Descolore parcialmente

calor e ácidos, baixa em presença de Descolore em presença
Desvantagem*3 estabilidade oxidativa e agente redutor como — — de agente redutor como
Descolore em presença ácido ascórbico. ácido ascórbico.
de agente redutor como È proibido no EUA e tem
ácido ascórbico. uso limitado na Inglaterra.

Estudos metabólicos
Poucos estudos Não há mostram que é pouco Alergia, asma e de 8 a
Efeitos Alergia e problemas relevantes sobre sua estudos absorvido pelo organismo. 20% das pessoas sensíveis
Adversos*3 respiratórios. toxidade significativos. Em relação a mutagenicidade a aspirina são também
não apresentou potencial sensíveis a tartrazina.
carcinogênico.

Dados segundo: *1 resolução nº. 44/77 da CNNPA / *2 UFRGS, 2004 / *3 PRADO, 2003.

82 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

obras, alem de coleta de dados fundamentais para o
trabalho.
As pesquisas bibliográficas foram feitas no perío-
do de fevereiro de 2008 a maio de 2009, através de
periódicos disponíveis no site “Portal Capes”, arti-
gos publicados no sitio “Science Direct”, na revista
eletrônica “Scielo” e também na literatura disponível
em biblioteca.
Elaboração e aplicação do questionário
Em junho de 2008 foi elaborado um questio-
nário com o objetivo de identificar as balas e chicletes
mais consumidos, suas respectivas marcas e os co-
rantes nestes utilizados. Este passou pela avaliação do
comitê de Ética da Fundação Oswaldo Cruz e foi apro-
vado em 23 de julho de 2008.
Antes da aplicação do questionário, as crian-
ças recebiam um termo de responsabilidade contendo
informações que esclareciam aos responsáveis o obje-
tivo e como seria feito a pesquisa e, também, um termo
de autorização que deveria ser assinado pelo respon-
sável legal da criança.
Este questionário foi aplicado em três diferen-
tes escolas particulares (Centro Educacional Oliveira
Rocha, Escola Alberto Monteiro de Carvalho, Instituto
Educacional Nova Vida) situadas na região de Del Cas-
500
Total Consumido
404
400 367
300
200
78
100
0 Azul
Cor
Figura 1. Consumo de balas e chicletes por crianças de seis a nove anos de idade na região de Del Castilho (RJ)
Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44
tilho. Para escolha das escolas, foi preciso comparecer
à região administrativa do bairro de Del Castilho e atra-
vés desta visita contabilizou-se o total de escolas situa-
das nessa região e assim, de acordo com a ISO 2859-1
(NBR 5426) determinou-se a amostragem. O número
estabelecido da amostragem foi de três escolas, já que
o total de escolas situadas nessa região eram 12.
O inquérito alimentar foi realizado no mês de no-
vembro de 2008, o público alvo foi crianças de seis a
nove anos de idade tanto do sexo masculino quanto do
feminino. O questionário foi aplicado nas crianças que
trouxeram devidamente preenchido o termo de com-
promisso, estas respondiam questões que relatavam o
consumo semanal de balas e chicletes e suas respecti-
vas cores e marca.
O total de crianças nas três escolas somava
640, porém as entrevistadas foram 51 devido à não au-
torização dos pais para as demais.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
A partir da análise dos questionários foi possí-
vel identificar a cor, a marca e os sabores de balas
e/ou chicletes mais consumidos. Em relação à cor
observou-se que as mais consumidas eram aqueles
que apresentavam a cor vermelha e rosa, como é
demonstrado na Figura1.
Vermelha
213
Rosa
202
Roxo
Verde
52
22 Laranja
Amarelo
83
Artigo

Sabendo-se quais marcas eram mais consumidas, tituto Adolfo Lutz, onde foram analisadas 58 amostras
foi possível analisar os rótulos destas balas e/ou chicle- de produtos importados, constituídas de 35 balas e 23
tes, identificando assim o perfil de corantes presentes chicletes, que tinham o corante vermelho 40, como o
na produção destes produtos. corante mais encontrado (MARSIGLIA et al, 1999).
Foram analisados os rótulos de nove diferentes mar-
cas de bala, nos sabores cereja, morango, framboesa,
menta, maça verde, melancia e tutti-frutti e oito diferen- Tabela 4. Informações contidas nos rótulos dos chicletes analisados
tes marcas de chicletes, nos sabores framboesa, uva, CHICLETES
morango, menta e tutti-frutti.
Ao analisar os rótulos das balas constatou-se que, Sabor Cor Coorantes Intorduzidos
predominantemente, as balas de coloração vermelha Menta Azul Azul Brilhante
apresentam em sua composição o corante vermelho Tutti-frutti Rosa Vermelho 40
40, as balas de coloração rosa e roxa também apresen-
tam o vermelho 40, porém associado, invariavelmente, Morango Vermelho Vermelho 40
a outros corantes, como o azul brilhante, a indigotina Vermelho 40
e amarelo crepúsculo. Outro dado observado foi que Uva Roxo Indigotina
somente uma marca apresentou em sua formulação Vermelho 40
corante natural conforme descrito na Tabela 3. Ordem Indigotina
Tutti-frutti Rosa
de Consumo Amarelo crepúsculo
Vermelho 40
Não definido Azul brilhante
Tabela 3. Informações contidas nos rótulos das balas analisadas no rótulo Roxo Tartrazina
Indigotina
BALAS
Vermelho 40
Não definido
Sabor Cor CoorantesIntorduzidos Amarelo crepúsculo
no rótulo Laranja Tartrazina
Morango Vermelha Vermelho 40
Vermelho 40
Framboesa Azul
Vermelho 40 Azul brilhante
Framboesa Rosa Azul brilhante
Vermelho 40
Cereja Rosa Indigotina
Considerando os dados obtidos, os corantes:
Ordem Menta Azul Azul brilhante vermelho 40, azul brilhante, indigotina e amarelo
de Consumo Tartrazina crepúsculo são os corantes mais presentes e tendo
Verde
Menta Azul brilhante em vista que 88% das crianças consomem mais de
Tutti-frutti Rosa Vermelho 40 35 balas por semana e 45% consomem aproxima-
Tutti-frutti Rosa Vermelho 40 damente 20 chicletes por semana, segundo informa-
ções contidas no questionário, que também informou
Indigotina
Maça verde Verde o teor dos mesmos, uma vez que há estudos que
Tartrazina
Melancia Verde Clorofila (natural) relacionam o alto consumo de corantes artificiais a
alergia (CUNHA, 1998), hiperatividade e déficit de
atenção (LANCET, 2007).

Nos rótulos dos chicletes, apresentados na Tabela CONCLUSÃO

4 verificam-se que das oito marcas analisadas, só uma
não apresenta o corante vermelho 40 em sua compo-
sição e nenhum apresenta corante natural. Além disso,
uma das marcas encontra-se fora dos padrões esta-
belecidos pelo Ministério da Saúde, que estabelece no
decreto nº. 50.040 de janeiro de 1961, o uso de no má-
ximo três corantes artificiais no mesmo alimento e este
contém em sua formulação quatro corantes artificiais.
Os resultados obtidos na análise dos rótulos são
compatíveis com os obtidos na pesquisa feita no Ins-
É relevante dizer que a maioria das crianças en-
trevistadas pode estar excedendo a ingestão diária
aceitável para os corantes vermelho 40, amarelo cre-
púsculo e indigotina, uma vez que a exposição não
é somente dada pelo consumo de balas e chicletes,
mas também pela totalidade do consumo de outros
alimentos e bebidas como constatam o estudo feito
no hospital Gafrée Guinle com 150 crianças (Schu-
mann et al., 2008).

84 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

 R e f er ê ncias

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Brasília, DF. Disponível em <http://www.anvisa.gov.br> Acesso em: 21 de abril. 2009, 10h30.
7. _________. Resolução nº 387, de 05 de agosto de 1999 4ºa. Diário Oficial [da] República Federativa do Brasil. Agência de Vigilância
Sanitária. Brasília, DF. Disponível em <http://www.anvisa.gov.br> Acesso em: 20 de abril. 2009, 08h40.
8. _________. Resolução 389, de 5 de agosto de 1999 4ºb. Diário Oficial [da] República Federativa do Brasil. Agência de Vigilância Sanitária.
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Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 85

Artigo

desenvolvimento de metodologias para

a quantificação de componentes em
cerveja através do sistema FT-NIR Antaris II
RESUMO
Kelly Mayumi Narimoto* e
Álvaro Modesto de Oliveira
O presente trabalho teve como objetivo avaliar o sistema FT-NIR no desenvolvi-
mento de metodologias para a quantificação de componentes em cerveja e de- Charis Technologies, Vinhedo (SP)
monstrar a viabilidade da técnica sobre outras técnicas convencionais. A coleta *Autor para correspondência:
espectral foi realizada por transflectância e levou em torno de 25 segundos por R. dos Cardeais, 78 - cjto. 06
amostra, não necessitando de qualquer tipo de preparo. Foram desenvolvidos mo- Jd. Itália
CEP: 13280-000
delos de calibração utilizando a regressão por mínimos quadrados parciais (Partial Vinhedo. SP
Least Square, PLS), sendo que cada componente utilizou diferentes regiões es- Fone: (19) 3836-3110
pectrais. As calibrações foram desenvolvidas para os componentes: álcool, extrato Fax: (19) 3836-3109
E-mail: aplic@charistech.com.br
original, extrato aparente e extrato real. No geral, foram obtidas calibrações de
alta qualidade com excelentes coeficientes de correlação e baixos erros de previ-
são, mostrando que a técnica é capaz de predizer com precisão componentes em
amostras desconhecidas, além da rapidez com que se obtém os resultados e sem
a necessidade de preparo das amostras.

Palavras-chave: FT-NIR, cerveja, transflectância, calibração multivariada, álcool,

extrato real, extrato aparente, extrato original

SUMMARY

This study objective to evaluate the FT-NIR system in the development of metho-
dologies for the quantification of components in beers and demonstrate the feasi-
bility of the technique over other conventional techniques. The spectral collection
was performed by spectral transflectance and took around 25 seconds per sam-
ple, not requiring any preparation. Calibration models were developed using partial
least squares regression (Partial Least Square, PLS), and each component used
differents spectral regions. The calibrations were developed for the components:
alcohol, original extract, apparent extract and real extract. In general, calibrations
were obtained for high quality with excellent correlation coefficients and low errors
of prediction, showing that the technique is able to predict with precision compo-
nents in unknown samples, and the speed with which results are obtained without
no samples preparation.

Keywords: FT-NIR, beer, transflectance, multivariate calibration, alcohol, real ex-

tract, apparent extract, original extract

INTRODUÇÃO

A cerveja é uma bebida produzida da fermentação Uma cerveja é qualquer variedade da bebida al-
de cereais, especialmente cevada maltada e, acredi- coólica produzida pela fermentação de cereais ou
tava-se que tenha sido uma das primeiras bebidas derivados de cereais ou de outras fontes vegetais.
alcoólicas a ser desenvolvidas pelo homem. Pequenas mudanças no processo de fabricação,

86 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

como diferentes tempos e temperaturas de cozimen- o que consume grande quantidade de tempo, exige
to, fermentação e maturação (1). esforços e é caro (4).
Devido aos ingredientes usados para fazer cerve- A técnica do infravermelho próximo (FT-NIR) vem
ja diferirem de acordo com a localização, as carac- sendo amplamente empregada em diversas áreas,
terísticas (tipo, sabor e cor) variam amplamente em devido às suas vantagens em relação a técnicas
relação ao tipo de cerveja. convencionais. A rapidez com que se obtém os re-
Uma cerveja pura espera-se que seja feita de sultados e a não necessidade de preparo da amos-
água, cevada maltada, lúpulo e levedura de cerveja tra, com a qual se reduz gastos com reagentes e,
a menos que claramente identificados de outra for- consequentemente, não gera resíduos, são as prin-
ma, como a cerveja de trigo. A adição de outros con- cipais provas de que análises por FT-NIR são supe-
dimentos ou outras fontes de açúcar também pode riores sobre outras técnicas. Somada à calibração
ocorrer, de acordo com o tipo, a tradição ou a pre- multivariada, a técnica de FT-NIR é capaz de prever
ferência local (2). A cevada é a matéria-prima princi- múltiplos resultados simultaneamente mantendo a
pal. O lúpulo é responsável pelo amargor e aroma da mesma precisão, eficiência e a confiabilidade das
cerveja, sendo parte essencial no impacto sensorial metodologias convencionais.
total do produto (1). A levedura é usada no processo O trabalho teve como objetivo o desenvolvimento
de fermentação, o qual metaboliza o açúcar extraído de metodologias analíticas designadas ao controle
dos cereais, produzindo muitos compostos, incluin-
do a água e o dióxido de carbono.
A água representa a maior parte da cerveja em
torno de 90% exercendo grande influência sobre
o tipo e a qualidade da mesma, influenciando, por
exemplo, o sabor. Ela deve ser potável, transpa-
rente, incolor, inodora, neutra, sem sabor e cumprir
as necessidades específicas para assegurar o bom
andamento do processo de produção da cerveja e
obtenção do produto acabado desejado (1). Muitos
estilos de cerveja são influenciados e determinados
pelas características da água da região.
A cerveja tende a ter entre 4% a 5% de álcool,
apesar de poder variar consideravelmente depen-
dendo do estilo e cerveja. De fato, há cerveja com
2% de álcool para mais de 20%. Figura 1. Sistema FT-NIR Antaris
Existem diferenças entre as cervejas que vão II MDS Thermo Scientific
desde a cor, passando pelo aroma, teor alcoólico e
sabor, até o clima certo para ser consumida (1).
Análises de cerveja representam um significante
desafio analítico em diversos aspectos. A cerveja é
uma amostra muito complexa contendo uma larga
escala de componentes incluindo vitaminas, amino-
ácidos, proteínas e ácidos amargos, todos transmi-
tindo propriedades organolépticas peculiares para a
bebida. A presença e qualidade de certos compos-
tos são monitorados para assegurar a consistência
do produto (3).
Para a análise da cerveja, convencionalmente é
requerido um equipamento para cada componente.
Por exemplo, para a análise do conteúdo de álcool é
usada a cromatografia, enquanto a gravidade espe-
cífica é medida por um hidrômetro. Normalmente, as
amostras necessitam ser preparadas para a análise, Figura 2. Coleta espectral por transflectância

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 87

Artigo

de qualidade da cerveja, utilizando FT-NIR e regres-
são por mínimos quadrados parciais (PLS).
PARTE EXPERIMENTAL
Os espectros FT-NIR foram coletados em 27 amos-
tras de cerveja, produzidos em concentrações cres-
centes para os diversos componentes. As análises
foram realizadas no sistema FT-NIR Antaris II MDS
Thermo Scientific (Figura 1), o qual acopla sistema
de fibra óptica e possibilita realizar análises no modo
transflectância (Figura 2), capaz de analisar múltiplos
componentes em uma simples leitura, podendo anali-
sar o material diretamente sem a necessidade de pre-
Tabela 1. Parâmetros utilizados na coleta de dados
Região espectral 10.000 to 4.000 cm-1
Resolução 8 cm-1
paro da amostra. O sistema Antaris analisa espectros
FT-NIR na região entre 12.000 e 4.000 cm-1. Os parâ-
metros da coleta de dados se encontram na Tabela
1. Os espectros foram coletados utilizando software
de análise RESULTTM. Um espectro representativo da
amostra de cerveja, acompanhado de sua primeira de-
rivada está apresentado na Figura 3.
As calibrações foram construídas para os com-
ponentes: álcool, extrato original, extrato aparente
e extrato real. Extrato Original é a quantidade de
extrato antes de iniciar o processo de fermentação
originado no começo do processo de cozimento. O
extrato real é medido pelo suave aquecimento da
amostra de cerveja para eliminar o álcool, adicionan-
do água destilada para retornar ao volume original,
e então obter a gravidade específica da amostra re-
constituída. Isto contrasta com o extrato aparente,
o qual é a gravidade específica da amostra sem a
primeira remoção do álcool.

Varreduras 32 RESULTADOS E DISCUSSÃO

Background Spectralon® reference
A capacidade universal da técnica FT-NIR é base-
ada na quimiometria, e isso permite estabelecer uma
correlação entre os espectros e as suas proprieda-
1.1
des físicas e químicas.
1.0 Para o controle de qualidade da cerveja foram de-
0.9
senvolvidas algumas metodologias para a determi-
0.8

0.7
nação quantitativa do teor de álcool, extrato original,
0.6 extrato aparente e extrato real (Figura 4).
0.5
Os quatro componentes analisados foram preditos
Abs

0.4

0.3
usando um simples espectro FT-NIR para cada amos-
0.2 tra. O tempo de coleta de dados para a previsão de
0.1 uma simples amostra foi em torno de 25 segundos.
0.0

-0.1
O desenvolvimento das calibrações foi realizado no
-0.2 software TQ AnalystTM para análises quantitativas. As
-0.3
10000 9000 8000 7000 6000 5000
quatro metodologias foram desenvolvidas utilizando
cm-1 modelo PLS.
0.005
0.004
0.003
0.002
0.001
0.000
-0.001
Tabela 2. Resumo dos parâmetros aplicados na construção das
-0.002 curvas analíticas
Abs

-0.003
-0.004
-0.005
Componentes Região espectral Tratamento espectral
-0.006
-0.007
-0.008 Álcool 5.500 – 4.000 cm-1 1º Derivada
-0.009
-0.010
-0.011 Extrato original 7.000 – 4.000 cm-1 -
10000 9000 8000 7000 6000 5000
cm-1
10.000 – 5.400 cm -1
Extrato aparente -
4.700 – 4.100 cm-1
Figura 3. Espectro representativo da amostra de cerveja padrão 10.000 – 5.400 cm-1
obtido por transflectância, e espectro da primeira derivada, Extrato real -
4.700 – 4.100 cm-1
respectivamente

88 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

 Tabela 3. Resultados das calibrações
4.7

14
Álcool Extrato original
Componentes Coef. Corr. RMSEC RMSEP RMSECV VL

Álcool 0,99886 0,0430 0,0247 0,383 7

Calculated

Calculated
Extrato
0,99215 0,328 0,351 0,659 6
original
Extrato
0,99950 0,0173 0,0206 0,0639 8
1.9

6
aparente
1.9 Actual 4.7 6 Actual 14
Extrato real 0,99959 0,0270 0,0247 0,0885 8
2.8

5.0

Extrato aparente Extrato real

Calculated

Calculated

rápida em relação às técnicas convencionais e possi-

bilitando leitura direta na amostra sem a necessidade
de qualquer tipo de preparo. A técnica é capaz de ana-
1.1

2.0

1.1 Actual 2.8 2 Actual
Figura 4. Calibrações utilizando modelo PLS para quantificação de
componentes em cerveja
Para a construção de cada metodologia foi sele-
cionada a melhor região espectral (Tabela 2). Para
todos os espectros foi necessário aplicar a corre-
ção do espalhamento do sinal multiplicativo (MSC)
e apenas para a calibração do álcool foi aplicada a
primeira derivada. Em todos os casos os espectros
foram centrados na média. Não foram detectadas
amostras anômalas em nenhum dos casos.
No conjunto de calibração foram obtidos excelentes
coeficientes de correlação e baixos erros, assim como
ausência de amostras anômalas no conjunto de amos-
tras utilizadas no desenvolvimento dos modelos.
Para avaliar o desempenho do modelo foram cal-
culados os erros quadrático médio de calibração
(RMSEC – Root Mean Squares Error of Calibration),
de previsão (RMSEP - Root Mean Squares Error of
Prediction) e de validação cruzada (RMSECV – Root
Mean Squares Error of Cross-Validation). Os núme-
ros de VL foram definidos através da validação cru-
zada empregando amostras do próprio conjunto de
calibração. Os resultados de RMSEC, RMSEP, RM-
SECV e VL estão listados na Tabela 3.
Os resultados mostrados na Tabela 3 indicam um
modelo quimiométrico robusto e capaz de predizer
com precisão amostras desconhecidas.
2.8 lisar múltiplos componentes simultaneamente levando
em torno de 25 segundos para cada análise.
Os quatro componentes analisados foram conte-
údo de álcool, extrato original, extrato aparente e ex-
trato real. As análises quantitativas foram realizadas
utilizando modelo PLS. Os resultados da calibração
apresentados a partir dos coeficientes de correlação
e baixos erros quadráticos médios indicam que o
modelo é apropriado e robusto.
De modo geral, foi possível observar que a técni-
ca FT-NIR apresentou um bom potencial para esta
aplicação, podendo fornecer rapidamente resulta-
dos confiáveis.
A implementação da técnica FT-NIR pode levar
ao um aumento na eficiência, melhoria de processo
e controle de qualidade nas cervejarias.
R e f er ê ncias
1. JORGE, E.P.M. Processamento de cerveja sem álcool. 2004.
73p. TCC - Universidade Católica de Goiás. Goiás, 2004.
2. MONTEIRO, A. Curso Operador Cervejeiro. Companhia
Brasileira de Bebidas. Goiânia. 2001. 155p.
3. SCIGELOVA, M.; KLAGKOV, K.; WOFFENDIN, G. Analysis of
Beer Using a High Speed U-HPLC Coupled to a Linear Ion
Trap Hybrid Mass Spectrometer. Application note: 30143.
Thermo Fisher Scientific, Hemel Hempstead, UK.

CONCLUSÃO 4. BUDINOVA, G.; DOMINAK, I.; STROTHER, T. FT-NIR Analysis

of Czech Republic Beer: A Qualitative and Quantitative
Approach. Application Note: 51702. Thermo Fisher Scientific,
Este trabalho mostrou a viabilidade e as vantagens Madison, WI, USA.
da técnica FT-NIR na análise de cerveja, sendo mais

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 89

Resumo de tese

ESTUDO ANALÍTICO E OLFATOMÉTRICO DE ÓLEO

DE ALGODÃO E OLEÍNA DE PALMA UTILIZADOS
EM FRITURA DE PRODUTOS CÁRNEOS
RESUMO
Cibele Cristina Osawa¹* e
Lireny Aparecida Guaraldo
Pretendeu-se através deste estudo levantar dados sobre frituras, em colaboração Gonçalves²
com agências fiscalizadoras das boas práticas de frituras. Estudou-se o grau de 1
Doutoranda em Tecnologia de
conhecimento de manipuladores de alimentos de 13 estabelecimentos comerciais Alimentos, bolsista do CNPq.
de Campinas/SP, quanto às boas práticas de frituras, e avaliou-se a qualidade Laboratório de Óleos e Gorduras,
Departamento de Tecnologia
do óleo usado, através de métodos analíticos. Simulou-se, em triplicata, a fritura de Alimentos, Faculdade de
descontínua de alimentos cárneos empanados em fritadeira com capacidade de Engenharia de Alimentos,
Universidade Estadual de
28 L, utilizando dois tipos de óleos vegetais isentos de gorduras trans e disponí- Campinas (UNICAMP).
veis comercialmente: óleo de algodão e oleína de palma. Adotou-se temperatura
²
Docente e orientadora da tese.
de 182ºC e fritura por 4,5 minutos. Por vez, fritaram-se 400-500 g de alimentos. Idem. Email: lireny@fea.unicamp.br
Ao longo do dia, realizaram-se três operações de fritura em horários estratégicos
*Autora para correspondência
e a fritadeira permaneceu ligada a 182ºC por 8h. Não houve reposição com óleo R. Bertr0and Russell, s/n,
fresco, nem filtragem do óleo. O tempo total de estudo variou de 6 a 17 dias de Cidade Universitária
“Zeferino Vaz”
fritura, sem a troca do óleo e o final dos experimentos foi definido pela avaliação
CEP: 13084-970
dos óleos usados com testes rápidos. Monitoraram-se os óleos de fritura através Campinas. SP
de análises físico-químicas: teor de ácidos graxos livres, compostos polares to- Fone/Fax: (19) 3289-1186
Email: cibele_osawa@yahoo.com.br
tais e compostos poliméricos, cor Lovibond, dienos conjugados, composição em
ácidos graxos, estabilidade oxidativa e testes rápidos para avaliação da qualidade
de óleo usado. Embora fossem adotadas as mesmas condições experimentais,
mesma fritadeira e mesmo tipo de alimento frito e tipo de óleo, constatou-se que
não há reprodutibilidade do processo de fritura. Os alimentos foram avaliados ana-
liticamente e verificou-se perda de umidade, incorporação de óleo nos alimentos,
pequenas alterações na composição em ácidos graxos e formação de quantidades
desprezíveis de trans, podendo ser rotulados como alimentos zero trans. Estudou-
se Testo 265, Viscofrit e Fri-check, testes rápidos de avaliação da qualidade do
meio de fritura, utilizando 59 amostras de óleo de fritura. Testo 265 e Viscofrit são
alternativas viáveis, se respeitadas suas limitações. Requerem-se estudos mais
aprofundados com o Fri-check. Realizou-se, ainda, análise sensorial olfatométrica,
na oleína de palma usada na fritura de frango empanado, com quatro julgadores
treinados, em quadruplicata, utilizando o método desenvolvido na Universidade
Estadual de Oregon (OSME). Os julgadores detectaram e descreveram odores de
135 compostos voláteis presentes no óleo usado de fritura. Trinta e um deles foram
identificados por cromatografia em fase gasosa com detector de massas. Dentre
eles, compostos não reportados anteriormente na literatura, demonstrando inedi-
tismo do trabalho.

Palavras-chave: fritura, fritura por imersão, óleo de fritura, oleína de palma, óleo
de algodão, testes rápidos, controle de qualidade, descarte, olfatometria, OSME,
análise sensorial.

90 Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro2010 • Nº44

summary

This study intended to raise data about frying to contribute with supervisor
agencies of good practices of frying. The level of knowledge of food mani-
pulators from 13 commercial establishments at Campinas city/SP was stu-
died, in relation to good practices of fryings, and the quality of used oils was
evaluated by analytical methods. It was simulated the discontinous frying of
meat products with flour coating with a fryer of 28 L-capacity in triplicate,
using two types of commercially available zero-trans oils: cottonseed and
palm olein oils. The temperature of 182ºC and frying during 4.5 minutes were
adopted. Each time, 400-500 g of food samples were fried. During the day, 3
frying operations were strategically performed and the fryer remained on at
182ºC for 8h. There was neither oil replacement, nor filtering. The total time
of study varied from 6 to 17 days of frying, without oil exchanging and the
end of the experiments was determined by the oil evaluation using fast tests.
The frying oils were monitored through physico-chemical analyses: free fatty
acids content, total polar compounds and polymeric compounds, Lovibond
color, conjugated dienes, composition of fatty acids, oxidative stability and
fast tests for evaluation of the quality of used oils. Although the same expe-
rimental conditions, the same fryer and the same types of fried food and oil
were adopted, it was observed that there was no reproductivity in the frying
process. The foods were analytically evaluated and loss of humidity, oil in-
corporation on foods, small changes in fatty acids composition and minimal
amounts of trans-fatty-acid formation were verified, which enables to label
them as zero trans food. Testo 265, Viscofrit and Fri-check, fast tests for eva-
luation of frying fat quality were studied, using 59 samples of frying oil. Testo
265 and Viscofrit are feasible alternatives, if their limitations are respected.
Further studies with Fri-check are required. It was still performed olfactome-
try sensory analysis in the palm olein used in frying chicken breast with flour
coating, through the Oregon State University method (OSME), with 4 trained
judges, in quadruplicate. Judges detected and described odors of 135 volatile
compounds present in the used frying oil. Thirty-one of them were identified
by gas-chromatography equipped with mass detector. Among them, it was
found compounds not previously reported in the literature.

Keywords: frying, deep fat frying, frying oil, palm olein oil, cottonseed oil, fast tests,
quality control, discharge, olfatometry, OSME, sensory analysis

AGRADECIMENTOS

Agradecemos aos seguintes colaboradores no do estudo de campo. Ao CNPq pela concessão do

estudo: Sr. Antonio Castellón (Viscofrit), Agropalma,
Braslo, Cargill, Central Analítica do IQ/Unicamp,
Frais Filtercorp, Laboratório Central Instrumental
do DEPAN, McDonald’s, Testo do Brasil e estabe-
lecimentos comerciais de Campinas participantes
auxílio-pesquisa em nível de doutorado (Processo:
140387/2005-6). À FAPESP pelo auxílio-pesquisa de
iniciação científica, concedida ao aluno de graduação
da FEA/Unicamp Fábio Mincaucaste Mendes, cola-
borador deste estudo (Processo: 2007/01364-5).

Revista Analytica • Dezembro 2009/Janeiro 2010 • Nº44 91