INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

Verificacin del funcionamiento de

un espectrofotmetro

Nombre: Gabriela Luna Prez

Grupo: 5QV2
Seccin: 1
Fecha de entrega: 20/Octubre /2017
Nombre de la Profesor: Vctor Manuel Macas Martnez
INTRODUCCIN
El espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve para medir, en
funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica
relativos a dos haces de radiaciones. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica
para la cuantificacin de sustancias y microorganismos. Hay varios tipos de
espectrofotmetros, puede ser de absorcin atmica o espectrofotmetro de masa. Este
instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica a travs de una
muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al
operador realizar dos funciones:
1. Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.
2. Indicar indirectamente qu cantidad de la sustancia que nos interesa est presente en la
muestra.
Componentes de un espectrofotmetro:
Cubetas de espectrofotometra. En un primer plano, dos de cuarzo aptas para el trabajo con
luz ultravioleta; en segundo plano, de plstico, para colorimetra (es decir, empleando luz
visible).
Fuente de luz: ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad,
direccionabilidad, distribucin de energa espectral continua y larga vida. Las fuentes
empleadas son: lmpara de wolframio (tambin llamado tungsteno), lmpara de arco de
xenn y lmpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atmicos.
Monocromador: asla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan
desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromtica.
Est constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersin.
El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el haz de luz
que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las
longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona
ese haz hacia la rendija de salida.
Compartimiento de Muestra: Es donde tiene lugar la interaccin, R.E.M con la materia (debe
producirse donde no haya absorcin ni dispersin de las longitudes de onda). Es importante
destacar, que durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su mxima
expresin, en base a sus leyes de absorcin, en lo que concierne al paso de la molcula de
fundamental-excitado.
Detector: es quien detecta una radiacin y a su vez lo deja en evidencia, para posterior
estudio. Hay de dos tipos:
a) los que responden a fotones
b) los que responden al calor
Registrador: Convierte el fenmeno fsico, en nmeros proporcionales al analito en cuestin.
RESULTADOS
A) EXACTITUD DE LA ESCALA DE LONGITUD DE ONDA
A.1) Mtodo del filtro de tierras raras (Didimio)

Longitud de onda (nm) %T

400 104.0
410 103.4
420 92.2
430 39.1
440 11.2
450 10.2
460 14.6
470 8.8
480 13.4
490 472 presenta pico
500 42.6
510 6.2
520 3.9 presenta valle
530 1.7
540 43.9
550 83.5 presenta pico
560 73.3
570 1.4
580 0.1
590 0.2
Tabla 1.- Elaboracin del espectro de transmisin del filtro de didimio.

500 472

400

300
%T

200

83.5
100
3.9
0
0 100 200 300 400 500 600 700
-100
Longitud de onda

Fig. 1 Espectro de transmisin del filtro de didimio

A.2) Mtodo de la solucin de estndar de . al 20%

Longitud de onda (nm) %T

380 0.4
390 0.2
400 0.2
410 0.3
420 2.3
430 12.1
440 33.0
450 48.0
460 57.4
470 68.7
480 79.5
490 91.4
500 90.8
510 90.05
520 87.3
530 86.7
540 83.5
550 80.7
560 75.3
570 67.7
580 57.8
590 45.9
Tabla 2.- Elaboracin del espectro de transmisin de la solucin de . al
20%

100
90
80
70
60
%T

50
40
30
20
10
0
0 100 200 300 400 500 600 700
Longitud de onda

Fig 2.- Espectro de transmisin de la solucin de . al 20%

Espectros de trasmisin estndar
 400 45
410 50 FILTRO DE DIDIMIO
420 55
430 50 70
440 46
450 47 60
460 46
50
470 44
480 49
40
490 57

%T
500 55 30
510 41
520 30 20
530 33
540 50 10
550 66
560 55
0
570 30 0 100 200 300 400 500 600 700
580 8 Longitud de onda
590 6

Fig.3 Espectro de transmisin de estndar del filtro de didimio

380 3
390 3
400 2 SULFATO DE NIQUEL 20%
410 4
100
420 8
430 18 90
440 31
80
450 44
460 55 70
470 65
60
480 76
%T

490 84 50
500 87
40
510 85
520 83 30
530 82
20
540 79
550 75 10
560 71
0
570 66
580 60
0 100 200 300 400 500 600 700
590 50 LONGITUD DE ONDA
600 43

Fig. 4 Espectro de transmisin estndar de la solucin de . al 20%

PROPORCIONALIDAD FOTOMTRICA

Longitud de onda (nm) Absorbancia %Trasmitancia

530 0.078 83.6
540 0.097 79.9
550 0.113 77.2
560 0.141 72.3
570 0.201 63.08
Tabla 3.-Proporcionalidad entre A y para el . al 20%

0.25

y = 0.0029x - 1.469
0.2 R = 0.9177
Absorbancia

0.15

0.1

0.05

0
525 530 535 540 545 550 555 560 565 570 575
Longitud de onda (nm)

Fig. 5 Proporcionalidad entre A y para el . al 20%

Unas de las ventajas de estos mtodos que se emplearon son:

Los resultados fueron muy rpidos os materiales como los filtros y el NiSO46H2O al 20%,
fueron fciles de emplear as como reutilizables, lo que hace los mtodos baratos. La tcnica
es muy simple y sencilla, no se necesita un manejo especial del espectrofotmetro.
. Las lecturas tomadas tienen estabilidad en la escala por lo que no
hay tanto error al tomar lecturas. .
Los espectros en ambos son muy similares a los del fabricante.
Las desventajas son:
El filtro de didimio aunque es reutilizable, es frgil y muy difcil de conseguir. . La
concentracin del NiSO46H2O al 20% se ve afectada con su uso ya que se va contaminando.
. Se debe tener mucho cuidado que el filtro no est rayado o las celdas con las que
se mide no estn maltratadas.

c) LUZ DISPERSA

la solucin de 4 . 62 al % T % de T de referencia
20%
400 0.2 2
450 48.0 44
500 90.8 87
Tabla 4.- Datos de la luz dispersa

D) ANCHO DE BANDA
Mxima transmitancia de la solucin fue 500 nm, en la solucin de 4 . 62 al 20%

Solucin de 4 . 62 al % de T % de T de referencia
20%
500nm 90.8 87
Tabla 5.- Datos del ancho de banda en un mximo de absorbancia

Concentracin de NiSO4* 6H2O A 400

Tubo (M) seria a serie b
a a
1 1 0 0 0
2 2 95 0.68 0.061
3 3 285 0.179 0.176
4 4 665 0.407 0.407
5 5 1045 0.604 0.624
6 6 1425 0.841 0.836
7 7 1520 0.891 0.895
8 8 1710 0.996 1.001
9 9 1805 1.044 1.054
10 10 1900 1.095 1.105
Tabla 6. Intervalo dinmico lineal de la concentracin

Discusin
La obtencin de resultados confiables empleando mtodos espectrofotomtricos, requiere en
primer lugar- verificar que el instrumento de medicin est funcionando correctamente para
poder realizar este tipo de comprobaciones ocupamos sustancias estndar.
El primero que se realiz ver la adecuada seleccin de la longitud de onda evita que se
produzcan desviaciones importantes en la exactitud fotomtrica. Para medir la exactitud de
la escala se recurri a un patrn, para este fin se emple filtros. En el primero se utiliz filtro
de didimio se obtuvieron las trasmitancias y se obtuvieron mayores a 100 en este caso se
tuvo que a 400 nm en % de T fue de 104 y de acuerdo al estndar se tiene que a 400 nm el
% de T DE 45 ms de la mitad de los 100 esta se define como como la fraccin de radiacin
incidente que consigue atravesar la muestra
En el caso del espectro de trasmisin de la solucin de 4 . 62 al 20% de acuerdo al
espectro estndar se obtuvo un comportamiento parecido donde el valor mximo de % T
90.8 fue a los 500 nm y en la estndar igualmente a 500 nm pero a un %T a 87.

En la proporcionalidad fotomtrica se ha definido como la relacin entre la intensidad de

radiacin registrada en el detector y la lectura; en general es deseable una relacin lineal
entre ambas magnitudes. Como se observa en la en la figura 5 se observa la proporcionalidad
entre la absorbancia y la longitud de onda que tiene un comportamiento lineal esto nos
permitir indicar una falla en la fuente de radiacin, el monocromador, el detector o bien, la
presencia de luz dispersa. Este estudio de la linealidad fotomtrica tambin permite
establecer el rango de absorbancias en el que el instrumento tiene respuestas proporcionales
a los cambios de concentracin. se obtuvo la ecuacin de la recta y = 0.0029x 1.469 donde
la pendiente se obtuvo de 0.0029
En la luz dispersa de define como aquella luz que llega hasta el detector, cuyas longitudes
de onda no se encuentran comprendidas en la banda de radiacin seleccionada por el
monocromador. Esta genera lecturas de trasmitancia, mayores a las esperadas y por lo
tanto, siempre causa desviaciones negativas a la ley de Beer si en presencia de estos filtros
si la cantidad de luz trasmitida en presencia de estos filtros se incrementa ms all del 1%
se considera presencia de luz dispersa.
En ancho de banda se define como la diferencia entre la longitud de onda mxima y mnima
de las longitudesde onda que salen del monocromador, que alcanza al menos el 50% de
transmitancia mxima de esta banda de radiacin y de acuerdo al aparato que se utiliza como
ejemplo el Baush & Lomb tiene un ancho de banda de 20 nm y el espectronic gnesis tiene
un ancho de banda de 8nm.

Conclusin
La verificacin de los espectrofotmetros es importante para poder obtener resultados
confiables y trabajar con calidad.
Bibliografa
http://www.calibracion.com.mx/calibracion/espectrofotometria/calibracion-espectrofotometro
[Consultado 18/10/2017]
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrometria_de_absorcion.pdf [Consultado
18/10/2017]
https://www.espectrometria.com/espectrometra_de_absorcin [Consultado 18/10/2017]