Perubahan Morfologi dan Anatomi Kalus Catharanthus roseus

dengan Perlakuan Triptofan

(The morphological and anatomical changes on tryptophan-treated callus of
Catharanthus roseus)
1)*
Dingse Pandiangan
1
) Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado
*
E-mail korespondensi: dingsepan@yahoo.com

Diterima 5 Februari 2012, diterima untuk dipublikasikan 20 Februari 2012

Abstrak
Penelitian tentang perubahan morfologi dan anatomi kalus Catharanthus roseus dengan
pemberian perlakuan triptofan telah dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk melengkapi
informasi tentang perubahan yang terjadi pada kalus khususnya struktur anatomi dan
morfologi sel kalus Catharanthus roseus setelah diberi perlakuan prekursor triptofan 175
mg/L. Pengamatan anatomi kalus dilakukan dengan metoda Parafin yang
didokumentasikan dengan mikroskop Nikon Halogen 100 W perbesaran 10X10 dan difoto
dengan camera Nikon DXM 1200F. Penampakan morfologi kalus didokumentasikan
dengan camera digital Cannon. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pertumbuhan kalus
yang diberi perlakuan triptofan lebih lambat pada awalnya, namun bertahan hidup sampai
40 hari kultur. Kalus tanpa triptofan cepat bertumbuh pada awalnya sampai hari ke 18
kultur, setelah itu tidak ada pertumbuhan lagi. Setelah kultur 40 hari kultur, kalus dengan
perlakuan triptofan tetap bertumbuh dengan baik sedangkan kontrol sudah rusak atau lisis.
Struktur sel kalus perlakuan triptofan setelah 28 kali subkultur menunjukkan adanya
penebalan dinding sel, sedangkan sel kalus kontrol mengalami lisis atau kerusakan sel.
Kata kunci: anatomi, Catharanthus roseus, kalus, morfologi, triptofan

Abstract
A research on the morphological and anatomical changes on tryptophan-treated
callus of Catharanthus roseus was conducted. This study aimed to complete the
information about the changes, particularly on anatomical and morphological structure of
Catharanthus roseus callus cells after treatment of 175 mg/L precursor tryptophan.
Anatomical observations was conducted using paraffin method, documented using a Nikon
microscope with a 10x10 magnification and the photograph was taken using the Nikon
DXM 100 W Halogen 1200F camera. The appearance of callus morphology was
documented by Cannon digital camera. The results showed that the growth of tryptophan-
treated callus was slower at the beginning, but it survived by 40-day culture. Non-
tryptophan callus grew rapidly by 18-day culture and did not grow later on. Tryptophan-
treated callus for 40 days grew well, whereas control callus was damaged or lysis. The
tryptophan-treated callus after 28 times subcultures showed cell wall thickening, whereas
the control callus cells are lysis or damaged.
Keywords: anatomy, callus, Catharanthus roseus, morphology, tryptophan

PENDAHULUAN sebagai tanaman hias dan obat.

Tapak dara (Catharanthus roseus Tanaman tapak dara ini berguna untuk
(L) G. Don) banyak dibudidayakan mengobati hipertensi, diabetes,
 46 JURNAL BIOSLOGOS, FEBRUARI 2012, VOL. 2 NOMOR 1
pendarahan akibat penurunan jumlah
trombosit, eptelioma korionik, leukemia
limfositik akut, leukemia, monositik akut,
limfosarkoma dan sarkoma sel retikulum.
Beberapa penelitian lain melaporkan
bahwa sekitar 130 macam alkaloid telah
diidentifikasi pada tanaman ini.
Diantaranya adalah alkaloid anti kanker
seperti vinblastin (VLB), vinkristin (VCR)
dan leurosin.
Kultur kalus maupun jaringan (in
vitro) tanaman ternyata dapat
memproduksi senyawa kimia berupa
alkaloid dan sejenisnya yang tergolong
metabolit sekunder (Vazquez-Flota et al.
1994, Kim et al. 1994). Beberapa
penelitian menyatakan bahwa alkaloid
tertentu dihasilkan lebih tinggi melalui
kultur jaringan (kalus) dari pada
kandungan tanaman induknya
(Pandiangan et al. 2006). Dengan
demikian sangat perlu menggunakan
kultur jaringan pada pengembangan
tapak dara ini untuk memproduksi suatu
senyawa alkaloid. Penemuan ini
menimbulkan harapan untuk menerapkan
cara yang sama dalam skala besar
terutama untuk memproduksi antara lain
alkaloid anti kanker yang selama ini
ditakuti.
Pandiangan et al. (2006) sudah
melaporkan bahwa pendekatan
penambahan prekursor sudah dilakukan.
Perlakuan triptofan pada kalus tapak dara
dapat meningkatkan kandungan
katarantin sampai 950,536g/g berat
kering (BK). Umumnya pada
pertumbuhan kalus rendah menghasilkan
kandungan katarantin yang lebih tinggi
daripada pertumbuhan yang tinggi. Dari
penelitian tersebut ditemukan
pertumbuhan optimum adalah pada
perlakuan 175 mg/L prekursor triptofan.
Moreno-Valenzuela (1998), juga
melaporkan bahwa pada sel yang
mengalami spesialisasi dan diferensiasi
menghasilkan metabolit sekunder yang
tinggi pada kultur in vivo. Sel yang
mengalami diferensiasi menunjukkan
pertumbuhan yang lebih lambat dari pada
yang undiferensiasi. Disamping itu, Girod
and Zryd (1991) melaporkan bahwa
morfologi sel pada kultur kalus bit merah
mempengaruhi akumulasi pigmen
betalain. Penambahan prekursor triptofan
dapat meningkatkan kandungan
katarantin (Pandiangan et al 2006)
mungkin juga dapat mengubah morfologi
dan anatomi kalus. Oleh karena itu
dilakukan penelitian ini untuk mengetahui
perubahan morfologi dan anatomi kalus
C. roseus yang diberi perlakuan triptofan.
METODE
Bahan dan Medium
Bahan penelitian yang digunakan
adalah daun dari tunas apikal C. roseus
yang tumbuhkan di Laboratorium. C.
roseus yang digunakan sebagai sumber
eksplan C. roseus berbunga putih.
Medium yang digunakan adalah medium
Murashige dan Skoog (MS), yang
dilengkapi dengan zat hara makro, mikro,
vitamin, zat pengatur tubuh, sukrosa dan
agar-agar. Medium disterilkan dengan
otoklaf 15 lb/inc2 dengan suhu 121oC
selama 15 menit.
Induksi Kalus
Induksi kalus mengikuti metoda
Pandiangan dan Nainggolan (2006).
Eksplan daun C. roseus disterilkan
terlebih dahulu sebelum dikulturkan pada
medium induksi kalus. Sterilisasi
dilakukan dengan alkohol 75% dan Na-
hipoklorit 2 % selama 15 menit yang
dilakukan 3 kali secara bertahap. Eksplan
yang sudah steril dikulturkan dalam
medium MS dengan kombinasi zat
pengatur tumbuh 2,4-D 2 mg/L dan
Kinetin 0,2 mg/L. . Subkultur dilakukan
setiap 3 minggu, selama 2 bulan untuk
memperbanyak kalus dan membuat kalus
kompak semakin meremah pada kultur
kalus yang berulang-ulang.
 Pandiangan, Perubahan morfologi dan . 47
Perlakuan Triptofan pada Kultur Kalus
Subkultur kalus pada media MS
dengan perlakuan triptofan 175 mg/L
dilakukan langsung pada saat subkultur
kedua. Setiap perlakuan dibuat 4
ulangan. Berat inokulum yang digunakan
dalam kultur dalam adalah 2 g kalus.
kalus ditimbang secara aseptik dalam
Laminar air flow ketika sedang subkultur.
Medium yang disiapkan sekitar 16 botol
kultur.
Pengamatan Morfologis dan Anatomi
Kalus
Penampakan secara morfologi
kalus diamati secara visual. Hasil
pengamatan didokumentasikan dengan
menggunakan kamera digital Cannon.
Pengamatan anatomi didokumentasikan
dengan menggunakan mikroskop Nikon
Halogen 100 W dengan perbesaran
10X10 yang difoto dengan camera digital
Nikon DXM 1200F. Anatomi kalus diamati
dengan metoda parafin.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan morfologi dan
pertumbuhan kalus secara visual
menunjukkan bahwa pertambahan besar
kalus kontrol cepat pada awalnya sampai
hari ke-18 (Gambar 1). Setelah itu
mengalami pencoklatan dan tidak ada
K
Gambar 1. Penampakan kalus Catharanthus roseus yang diberi perlakuan triptofann (T)
dan kontrol (K) yang diamati pada hari ke-18 setelah subkultur
pertambahan ukuran secara visual.
Namun pada perlakuan triptofan pada
awalnya (sampai hari 18) lambat
pertambahan ukuran kalus, tapi terus
bertahan dan sampai hari ke-28 dan
masih tumbuh baik seperti Gambar 2.
Bahkan kalus sampai pada hari ke-40
kultur juga menunjukkan penampakan
yang serupa dengan Gambar tersebut.
Oleh karena itu pada hari ke-40 setelah
kultur dalam perlakuan triptofan,
menghasilkan berat basah yang lebih
tinggi seperti pada Pandiangan dan
Nainggolan (2006).
Pada Gambar 1 terlihat bahwa
kalus kontrol (K) yang diamati pada hari
ke-18 setelah subkultur menunjukkan
pertumbuhan yang lebih cepat
dibandingkan dengan kalus perlakuan
pada triptofan. Tapi kemudian kalus
kontrol ini akan terlebih dahulu
mengalami fase penurunan atau penuaan
dibandingkan kalus perlakuan. Kalus
perlakuan dapat bertahan bahkan sampai
lebih dari 40 hari. Pada minggu ketiga
(hari ke 21) kalus kontrol mulai kelihatan
berwarna coklat (nekrotis) sepertinya sel-
selnya mengalami kerusakan. Namun
kalus T masih tetap berwarna putih
kekuningan atau nampak masih
bertumbuh baik sampai hari ke-28 kultur
(Gambar 2).
T
 48 JURNAL BIOSLOGOS, FEBRUARI 2012, VOL. 2 NOMOR 1

K
T

A B

Gambar 2. Penampakan kalus C. roseus setelah hari ke-28 disubkultur pada medium
perlakuan triptofan. K = kontrol, nampak warna kecoklatan. T = perlakuan
triptofan 200 mg/L dengan kalus berwarna putih kekuningan. A =
penampakan sayatan kalus K dengan sel lisis ( ). B = penampakan sayatan
kalus T dengan penebalan dinding sel ( )

Hasil analisis anatomi kalus tanpa
triptofan (kontrol = K) menunjukkan
bahwa sel nampak pecah atau lisis
(Gambar 2A). Kalus T atau perlakuan
triptofan menunjukkan bahwa sel-selnya
banyak yang mengalami penebalan. Sel
yang menebal tersebut merupakan
respon terhadap perlakuan triptofan.
Penampakan selnya mirip dengan sel
trakeid dan terlihat banyak jumlahnya
(Gambar 2B). Menurut Rompas (1998)
bahwa sel-sel penghasil metabolit
sekunder alkaloid pada C. roseus adalah
latisifer. Proses perkembangannya
menunjukkan sel-selnya memanjang dan
mengalami penebalan dinding yang
mempunyai sifat-sifat yang sama dengan
xilem (Darsini 2001). Sifat sel latisifer
yang sangat menonjol dalam hal ini
adalah adanya penebalan dinding selnya.
Oleh karena penebalan dinding sel juga
dapat menyebabkan pembelahan sel
berkurang. Disamping itu sel kalus yang
diberi perlakuan triptofan mengalami
penebalan dingding yang mengakibatkan
sel-sel tersebut tidak cepat lisis atau
kerusakan kalus. Medium yang lama
tentu sudah mengalami pengurangan
kandungan nutrisi dan perubahan
tekanan osmosis akibat pertumbuhan
kalus (Moreno-Valenzuela et al. 1999).
Oleh karena penebalan yang terjadi sel T
mempunyai pertahanan terhadap
perubahan tekanan osmosis dalam
 Pandiangan, Perubahan morfologi dan . 49
medium (Taiz and Zeiger 2002), sehingga
sel kalus bertahan lama dan bertumbuh
baik. Di samping itu triptofan yang
berlebih dalam media dapat dikonversi
oleh sel tumbuhan menjadi asam piruvat
dan asetil ko-A pada katabolisme sel
(Lehninger 1990), sehingga kekurangan
nutrisi dapat diatasi dan dapat
memperpanjang waktu kultur.
Pola pertumbuhan kalus (data pada
Pandiangan 2006) tersebut menunjukkan
bahwa 175 mg/L triptofan yang
ditambahkan ke dalam media
menghasilkan kalus dengan berat basah
tertinggi. Hal ini menunjukkan bahwa
perlakuan prekursor triptofan terhadap
pertumbuhan kalus mempunyai
konsentrasi yang optimum. Perlakuan
prekursor triptofan mempunyai
mekanisme penghambatan feedback
pada konsentrasi yang semakin tinggi
dari konsentrasi triptofan 200 mg/L (Taiz
and Zeiger 2002). Tetapi juga mempunyai
mekanisme induksi terhadap
pertumbuhan pada konsentrasi triptofan
100 sampai 200 mg/L.
Pengamatan secara kuantitatif lebih
menguatkan pengamatan kualitatif
sebelumnya pada penelitian sebelumnya.
Melanjutkan hasil sebelumnya bahwa
bahwa kalus kontrol lebih cepat
mengalami penuaan (senescens) dari
kalus perlakuan triptofan. Hal ini dapat
dibuktikan dari naiknya berat basah atau
pertumbuhan kalus setelah 40 hari kultur
pada perlakuan triptofan 175 mg/L. Di
samping itu nutrisi yang ditambahkan
melalui triptofan merupakan nutrisi
tambahan dan merupakan cadangan
nutrisi pada pertumbuhan kalus (Moreno-
Valenzuela et al. 1999). Faktor komposisi
media sangat mempengaruhi aktivitas
enzim yang mempengaruhi pertumbuhan
dan kandungan alkaloid (Merilon et al.
1986).
Zhao et al. (2001), melaporkan
dengan penambahan triptofan 300 mg/l
dan 500 mg/l pada kultur kalus kompak
dari C. roseus tidak menekan
pertumbuhan kalus atau pertumbuhannya
tetap normal sama dengan kontrol (tanpa
triptofan) meskipun kandungan
alkaloidnya meningkat. Ada perbedaan
antara hasil penelitian ini dengan Zhao et
al. (2001). Hasil penelitian ini
menunjukkan adanya pengaruh terhadap
pertumbuhan kalus. Zhao et al. (2001),
melaporkan bahwa kandungan katarantin
meningkat dengan penambahan triptofan
300 mg/l dan 500 mg/l pada kultur kalus
kompak dari C. roseus. Pengaruh
triptofan terhadap kultur itu bisa
meningkatkan atau menurunkan
kandungan alkaloid tergantung tipe kultur
dan spesies yang digunakan. Kalau pada
kalus meningkatkan tapi pada kultur lain
bisa saja menurunkan atau sebaliknya.
KESIMPULAN
Pertumbuhan kalus C. roseus yang diberi
perlakuan triptofan lebih lambat pada
awalnya, namun bertahan hidup sampai
40 hari kultur. Kalus tanpa triptofan cepat
bertumbuh pada awalnya sampai hari ke
18 kultur, setelah itu tidak ada
pertumbuhan lagi. Setelah kultur 40 hari
kultur, kalus dengan perlakuan triptofan
tetap bertumbuh dengan baik sedangkan
kontrol sudah rusak atau lisis. Struktur sel
kalus perlakuan triptofan setelah 28 kali
subkultur menunjukkan adanya
penebalan dinding sel, sedangkan sel
kalus kontrol mengalami lisis atau
kerusakan sel.
UCAPAN TERIMA KASIH
Diucapkan terima kasih kepada
pimpinan dan staf SITH ITB Bandung
yang memberikan kesempatan untuk
menggunakan alat mikroskop Nikon
Halogen 100 W dengan camera digital
Nikon DXM 1200F sehingga tulisan ini
dapat dipublikasikan. Demikian juga
dengan Dr. Rizkita Rahmi Esyanti
diucapkan terima kasih atas
kerjasamanya melalui penelitian Hibah
Pekerti.
 50 JURNAL BIOSLOGOS, FEBRUARI 2012, VOL. 2 NOMOR 1

DAFTAR PUSTAKA Catharanthus roseus hairy roots.

Plant Cell Reports 18: 99-104
Girod PA and Zryd JP (1991) Secondary Pandiangan D, Nainggolan N (2006)
metabolism in culture red beet Produksi alkaloid dari kalus tapak
(beta vulgaris L.) cells: dara. Jurnal Ilmiah Sains 6: 48-54
differentional regulation of Pandiangan D (2006) Respons
betaxanthin and betacyanin Pertumbuhan Kalus Catharanthus
biosynthesis. Plant Cell Tissue roseus yang diberi perlakuan
Organ Culture 25:1-12 triptofan. Jurnal Biotika 5:49-56
Kim SW, Jung KH, Kwak SS, and Liu JR Pandiangan D, Rompas D, Aritonang H,
(1994) Relationship between cell Esyanti RR, Marwani E ( 2006)
morphology and indole alkaloid Pengaruh triptofan terhadap
production in suspension cultures pertumbuhan dan kandungan
of Catharanthus roseus. Plant Cell katarantin pada kultur kalus C.
Report 14:23-26 roseus. Jurnal Matematika dan
Merillon JM, Doireau P, Guiilot A, Sains 11:111-118
Chonieux JC, and Rideau M Rompas DR (1998) Asal-usul,
(1986) Indole alkaloid perkembangan dan penyebaran
accumulation and tryptophan Latisifer pada tumbuhan tapak
decarboxylase activity in dara (Catharanthus roseus (L)
Catharanthus roseus cells G.Don). Tesis ITB Bandung
cultured in three different media. Taiz L and Zeiger E (2002) Plant
Plant Cell Reports 5:23-26 physiology, 3rd ed. Sinauer
Moreno-Valenzuela O, Coello-Coello J, Associates, pp 423-460
Loyola-Vargas VM and Vazquez- Vazquez-Flota F, Moreno-Valenjuela O,
Flota F (1999). Nutrient Miranda-Ham ML, Coello-Coello J,
consumption and alkaloid and Loyola-Vargas VM (1994)
accumulation in a hairy root line of Catharanthine and ajmalisine
Catharanthus roseus. synthesis in Catharanthus roseus
Biotechnology Letters 21: 1017 hairy root cultures. Plant Cell,
1021 Tissue and Organ Culture 38:
Darsini NN (2001) Perkembangan latisifer 273-279
pada kultur kalus Catharanthus Zhao J, Hu Q, Guo YQ, Zhu WH (2001)
roseus (L.) G. Don. Tesis ITB Effects of stress factors,
Bandung. bioregulators, and synthetic
Moreno-Valenzuela OA, Galaz-Avalos precursors on indole alkaloid
RM, Minero-Garcia Y, Loyola- production in compact callus
Vargas VM (1998) Effect of clusters cultures of Catharanthus
diffrentiation on the regulation of roseus. Appl Microbiol Biotechnol
indole alkaloid production in 55:693-698.