UNIVERSIDAD

NACIONAL AUTNOMA DE
MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

ZARAGOZA

Laboratorio de Inmunologa Clnica

Prctica No. 4. Complemento

EQUIPO: 4
CONTENIDO VALOR VALOR
OBTENIDO
INTEGRANTES: CARTULA

Del Angel Monroy Sergio INTRODUCCIN 1 PUNTO

Jose Bautista Elizabeth

OBJETIVO Y 1 PUNTO
Jimenez Villanueva Erick Ivan DIAGRAMA DEL
Lassus Santana Ximena Italia MTODO

Ruiz Santana Montserrat

RESULTADOS 2 PUNTOS

ANLISIS DE 3 PUNTOS
RESULTADOS
GRUPO: 1802 CONCLUSIONES 2 PUNTOS

REFERENCIAS 1 PUNTO

TOTAL 10 PUNTOS
Introduccin:
El sistema del complemento no es una simple protena sino un sistema funcional de
protenas plasmticas y una pequea proporcin de protenas de membrana que
interaccionan unas con otras de una forma regulada y participan en muchas de las
funciones efectoras de la inmunidad humoral y de la inflamacin. El hgado es el
principal productor de factores del complemento, continan los macrfagos activados, el
tejido epitelial intestinal y el genitourinario
La activacin del complemento se lleva a cabo por tres vas diferentes: va clsica que es
dependiente de la formacin del complejo Ag-Ab, alterna y de las lectinas, stas dos
ltimas pueden activarse sin la necesidad de formar el complejo Ag-Ab. Tanto las va
clsica como la alterna conducen a la activacin de C5 convertasa y resultan en la
produccin de C5b que es esencial para la activacin de la va de ataque a la membrana.
La va de la lectina es muy similar a la va clsica, llegando en un punto de la cascada de
activacin a la formacin de un complejo con actividad convertasa similar a uno de la va
clsica, que posteriormente ser dirigido a la formacin del complejo de ataque a la
membrana, comn a las tres vas, est formada por el C5b, C6, C7, C8 y C9. Este complejo
se coloca a travs de la membrana de fosfolpidos formando un canal
transmembranario, que permite la entrada de iones y pequeas molculas, con lo
que la clula no puede mantener la estabilidad osmtica y es lisada debido a un flujo
hacia el interior de agua y a una prdida de electrolitos.
Las funciones biolgicas del complemento son de dos tipos:
1. Lisis celular mediada por el complejo de ataque a la membrana (MAC).
2. Acciones de los fragmentos proteolticos generados durante la activacin
a. Respuesta inflamatoria.
b. Opsonizacin de antgenos.
c. Neutralizacin de virus.
d. Solubilizacin de inmunocomplejos.
El propsito del sistema de complemento a travs de sus tres vas es la
destruccin de microorganismos, neutralizacin de ciertos virus y promover la
respuesta inflamatoria, que facilite el acceso de clulas del sistema inmune al sitio de la
infeccin
Mtodo sistema del complemento o CH50%.
Al mezclar suero fresco con una suspensin de eritrocitos "sensibilizados" (recubiertos)
con anticuerpos, el C' se activar por la va clsica y causar hemlisis. La hemoglobina
liberada es un indicador cuantitativo del grado de lisis de los eritrocitos. Si se grafica la
cantidad de suero agregado al sistema indicador, contra el porcentaje de hemlisis
resultante, se obtiene una curva sigmoidea. Este tipo de curvas poseen su mejor exactitud
 en la regin central, es decir, alrededor del 50% de hemlisis. De tal modo que se
determina cul es el volumen de suero que lisa el 50% de los eritrocitos, lo que se define
arbitrariamente como una unidad hemoltica 50%.
Objetivo y diagrama del mtodo:
Determinar la actividad ltica del complemento en unidades 50% hemolticas.

Lavar los GRC por Introduzca una gradilla en

centrifugacin a 2000 Deposite en bao de
bao de hielo y coloque 12
rpm. por 5 minutos, con hielo.
tubos, 4 para cada dilucin
solucin de TBS ms 2 tubos (testigo
negativo y testigo positivo).

Prepare las siguientes diluciones del

suero problema:
A. 0.4 mL de suero + 9.6 mL de TBS
Ajuste la suspensin de dilucin 1:25 Mezcle perfectamente e
GRC al 2% en TBS. B. 5 mL de la dilucin 1:25 + 5 mL de incube en bao Mara 30
TBS dilucin 1:50 minutos a 37 C,
C. 5 mL de la dilucin 1:50 + 5 mL de agitando
TBS dilucin 1:100 frecuentemente.

Transcurrido el tiempo de
.Coloque en un tubo de incubacin, retire los tubos
Incube 30 minutos a 37
13 x 100 mm, 0.6 mL de del bao y adicione 1 mL de
C en un bao
la suspensin de GRC al TBS fro para detener la
metablico, con
2%, adicione 3.4 mL de reaccin, excepto al tubo
agitacin frecuente. La
agua destilada testigo que se le adiciona
suspensin queda al 1%. 2.8 mL de agua destilada.

Leer la densidad ptica en Centrifugue los tubos a 2000

un espectro a 550 nm, Adicione un volumen de rpm. 5 min. y decante el
usando como blanco agua hemolisina titulada a 2U sobrenadante sobre un tubo
destilada. Ajuste la 50% hemoltica con un limpio y lea la densidad ptica a
densidad ptica a 0.5 con la volumen igual de la 550 nm usando como blanco el
ecuacin. D.O.1 x V1= D.O.2 tubo negativo y como 100% de
suspensin de GRC lisis a la lectura del testigo
x V2.
positivo.

Resultados:
En la siguiente tabla (Tabla 1) se muestran los resultados por equipo en la dilucin 1:50 con su
respectiva grfica y tabla de resultados
 TABLA 1. Unidades hemolticas obtenidas por equipo con su respectiva grfica.

Equipo Tabla (mL de suero vs % de hemolisis) Grfica

1 60
% y = 72.206x - 18.479
mL suero 50
hemolisis R = 0.9758

% deHemlisis
1 55.5 40

0.7 31.11 30
0.5 13.33 20
0.3 6.66 10
0.94 50
0
UH 47 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
r2 0.9758 mL de suero

2* SIN RESULTADOS SIN RESULTADOS

3
Suero % de
(mL) Hemolisis
1 65.8537
0.7 29.2683
0.5 9.7561
0.3 2.4390
0.88 50
UH 44
r2 0.9579
4 70

60 y = 76.992x - 20.742
mL suero % R = 0.9052
hemolisis 50

% Hemolisis
1 61.9 40
0.7 26.19 30
0.5 11.9
20
0.3 9.52
10
0.92 50
UH 46 0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
r2 0.9052
mL Suero

5**
mL de %
suero Hemlisis
1 53.658536
6
0.7 12.195122
0.5 2.4390243
9
0.3 2.4390243
9
1.058 50
UH 52.92
r2 0.831
6***

Suero (mL) % Hemolisis

1 46.67
0.7 20
0.5 13.33
0.3 11.1
1.156 50
UH 28.9
r2 0.876

7 80
mL de Hemolisis y = 99.317x - 26.116
70 R = 0.9889
suero (%)
1 74.54 60
0.7 43.18
50
0.5 19.31
0.3 6.8 40
0.76 50 30
UH 38
20
r2 0.9889
10

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
8

mL de %
suero hemolisis
1 64.1
0.7 28.2
0.5 8.97
0.3 2.56
0.89 50
UH 44.5
r2 0.9535

9 90
%
mL suero 80
hemolisis
70
1 75

% de hemlisis
60
0.7 54.55 50
0.5 40.91 40
0.3 11.36 30
20
0.6769 50
10
UH 33.84
0
r2 0.9579 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
mL de suero
10

suero Hemoli
sis (%)
1 70.45
0.7 36.36
0.5 13.63
0.3 4.5
0.8182 50
UH 40.9
r2 0.9746

*El equipo 2, no tuvo resultados puesto que los tubos con los que se trabaj, eran translucidos y no hubo lectura en el espectrofotmetro

** El equipo 5, su grfica presenta un CH50 extrapolado. El valor obtenido en mililitros de suero para el 50%, es mayor que el tubo con 1 mL de estndar. Esto ocurri
debido a una curva con un comportamiento no lineal y se encuentra denotado por el valor de coefieciente de correlacin que fue de 0.831

***El equipo 6, present la grfica construida a partir de la dilucin 1:25, dado que la curva 1:50 no alcanz a registrar los valores que se acercaran al 50%. Adems, la
curva 1:25 tambin se extrapol debido a que el valor ms alto registrado por el espectrofotmetro fue de 46.67%
 Anlisis de resultados:
Una unidad hemoltica 50 es el volumen de suero necesario para lisar el 50% de los
eritrocitos presentes. Este valor fue obtenido a partir de la construccin de curvas
estndar, en las cuales se esperaba que una muestra problema lisara una cantidad
especfica de eritrocitos de carnero. Los resultados registrados en la Tabla 1, son los
valores obtenidos de unidades hemolticas en el grupo completo por equipos, en donde se
observa bastante variacin en cada uno.
Las razones por las cuales los resultados son variados e incluso algunas determinaciones,
estadsticamente no son significativas, ya que los coeficientes de correlacin son muy
bajos, esto quiere decir que los datos obtenidos estn muy dispersos lo que ocasiona que
la curva construida no posea la linealidad esperada. Desde este punto de vista, el valor
interpolado para cada curva de todos los equipos, posee un error intrnseco que tiene
mucho que ver con la dispersin de los datos por lo que el resultado final nos arroja posee
errores de trabajo.
El material utilizado en el laboratorio para estas determinaciones requieren de una avidez
por parte del analista y ms si se requieren volmenes exactos al momento del pipeteo, ya
que los volmenes agregados de suero, hemolisina y las propias diluciones, no fueron
realizadas correctamente adems de que no se llev a cabo con material volumtrico,
esto es con el fin de reducir ms el error.
Otro factor importante es el propio suero utilizado por equipos, ya que como se ha
aprendido, la activacin de las vas del complemento est relacionada con el propio
individuo dependiendo de protenas como C3, C6, C9, etc. stas protenas y su sntesis van
a depender del estado fisiolgico del organismo e incluso patologas que este pueda
presentar pueden afectar su sntesis y por ende su activacin. No es igual para todas las
personas y esa es otra razn de la disparidad de los resultados. Se logr obtener las
unidades hemolticas 50 por equipo dando en algunos casos un coeficiente de correlacin
alto en los datos individuales, es decir por grfica, pero al juntar cada una de las grficas
para obtener un resultado en conjunto este no es claro por la dispersin de los mismos.

Conclusin.
Se cumpli el objetivo de la prctica al determinarse la actividad ltica del
complemento a partir de la unidad hemoltica 50 por medio de la construccin de una
curva estndar.
 Bibliografa

1. Goldsby R. Kindt T. Osborne B. Kuby J. Inmunologia, 5a ed. McGraw Hill. Mxico;

2006.
2. Regueiro J. Lopez C. Gonzlez S. Martinez E. Inmunologa. Biologa y patologa del
sistema inmunitario. 4 ed. Panamericana. Espaa; 2010.
3. Murphy K, Travers P, Walport M. Introduccin a la inmunobiologa y a la inmunidad
innata. En:Inmunobiologa de Janeway. Sptima edicin. Mxico: Mc Graw Hill; 2008.
1-81.Sistema del complemento. (2007). En B. A. Richard A, Inmunologa de Kuby (Sexta
ed., pg. 169). Ciudad de Mxico: MC Graw Hill.
4. Kindt J, Goldsby R, Osborne B. Sistema del complemento. En: Inmunologa de Kuby.
Sexta edicin. Mxico: Mc Graw Hill; 2007. 168-185.