CENTRO DE INVESTIGACIN EN QUMICA APLICADA

MAESTRA EN TECNOLOGA DE POLMEROS

Caracterizacin de polmeros
Dr. Eduardo Ramrez Vargas

Actividades:
GPC

Alumnos:
Jssica Mariana Jernimo Nava
Nelson Alberto Jimnez Reyes

Saltillo, Coahuila, a 6 de noviembre de 2017

 MODELO REOLGICO SISKO

La cromatografa por permeacin de gel (GPC) es una tcnica analtica que separa
macromolculas disueltas por tamao con base en su elucin desde columnas
llenas de un gel poroso. Los compuestos a separar son arrastrados por la fase mvil
y se analizan por medio de un detector, s la fase mvil es un gas da lugar a
cromatografa de gases y si es lquida de lquidos. Un tipo de cromatografa liquida
es la de exclusin de tamaos o tambin denominada cromatografa de
permeacin en gel en la cual la fase estacionaria es slida. Esta tcnica lleva a
cabo la separacin de molculas en funcin de tamao, y con esto obtener la
distribucin de pesos moleculares. Esta tcnica data de la preparacin de
microesferas de geles de compuestos orgnicos y biolgicos solubles en agua, los
cuales se aplicaron a la separacin de polmeros disueltos en disolventes orgnicos
utilizando un relleno de poliestireno. En consecuencia, a esto, la tcnica se
denomin GPC.

Caractersticas principales de la tcnica de GPC

Fase estacionaria es inerte, por lo que la columna no se desactiva.

La muestra no interacciona qumicamente con la fase estacionaria, ni con la
fase mvil.
Los solutos son generalmente sustancias de peso molecular elevado
(mayores de 2000). Dependiendo de su medida y estructura, stos se
retienen o se eluyen a travs de la columna.

Ilustracin 1.-Esquema de un equipo GPC (Fuente: Raimond Seymour y

Charles E. Carraher Jr.)
 MODELO REOLGICO SISKO

El relleno que la columna contiene se comporta como un filtro en donde existen tres
tipos de molculas:
Molculas permeables: son aquellas de menor tamao que al atravesar el poro
quedan retenidas.
Molculas fraccionables: son de un tamao intermedio que entran de manera
parcial en el relleno poroso.
Molculas excluidas: aquellas de tamao superior al poro que no entran y pasan
rpidamente por la columna.
Para seleccionar las fases se deben tener en cuenta una serie de parmetros estos
son mostrados en el siguiente diagrama:

FASES

Mvil Estacionaria

Clasificacin de materiales para

Requerimientos para eleccin de fase estacionaria:
Requerimientos para eleccin de la fase la fase:
mvil: *Segun su constitucin
*Uniformidad en la qumica (inorgnicos u
*Solubilidad de la muestra en el solvente. granulometra de las esferas. orgnicos).
*Muestra y fase mvil de viscosidad similar, *Uniformidad en tamao de *Flexibilidad de su estructura
de lo contrario se puede crear distorsin en poros. (hinchables o rgidos).
los picos cromatogrficos y cambios anmalos
en los tiempos de retencin. *Estabilidad qumica en cuanto *Microestructura (aerosoles,
al pH, y estabilidad trmica. xerosoles o mixtos)
*El aumento de la temperatura favorece la
resolucin de la muestra, ya que la difusin se *Mxima inercia frente a los *Origen (natural, sintticos o
produce con mayor facilidad. compuestos a separar. combinados).
*Los valores bajos de fuerza inica *Preparacin sencilla, y alta
favorecen las interacciones inicas soluto-fase resistencia mecnica a las altas
estacionaria, mientras los valores altos presiones.
favorecen las interacciones hidrofbicas.
*El pH influye en la ionizacin de los solutos
y grupos activos de la fase estacionaria.
*Al aumentar el flujo del eluyente se
produce una disminucin de la eficacia de la
columna.
 MODELO REOLGICO SISKO

El gel (fase estacionaria) que va en las columnas deber ser una sustancia
qumicamente inerte, mecnicamente estable, con un tamao de partcula uniforme
y con estructura de poros perfectamente reproducible. Posiblemente, los dos tipos
de materiales ms utilizados sean los geles de dextranos con enlaces cruzados y
los de poli-acrilamida. El gel de dextrano es insoluble en agua, pero hidroflico,
debido a los grupos OH residuales, lo cual hace que al ponerlo en solucin es
acuosas el gel se hinche, reteniendo entre 1 y 20 mL de agua por gramo de resina
seca. En disolventes no polares nicamente tiene lugar un ligero hinchamiento, por
lo que estas sustancias se utilizan casi exclusivamente en medio acuoso. Los geles
de poliacrilamida se comportan de forma similar a los geles de dextrano, si bien son
menos resistentes a los lcalis y los grupos amida pueden hidrolizarse a cidos
carboxlicos cuando se ponen en contacto con disolventes de pH extremos. Los
materiales descritos no son los nicos que se utilizan en cromatografa de exclusin
molecular. Los hay de naturaleza inorgnica, como el gel de slice y el vidrio poroso
y otros de naturaleza orgnica como los co-polmeros de estirenodivinilbenceno.
Estos polmeros (sin los grupos sulfnicos) se hinchan en disolventes como el
tolueno o el cloruro de metileno, y forman fases tiles para la cromatografa de
macromolculas que son solubles en disolventes orgnicos.

Columnas
Las columnas son parte importante de esta

tcnica por esta razn se deben cumplir ciertas

condiciones para evitar resultados errneos,

como los que se muestran en la Ilustracin 3.

Ilustracin 2.-Esquema de
una columna de borosilicato
de GPC.
 MODELO REOLGICO SISKO

Pueden ser vidrio borosilicato o de material plstico transparente. No se

utilizan columnas metlicas para evitar fenmenos de catlisis, que pueden
provocar degradaciones del gel o de la muestra.
Las columnas deben ser fciles de limpiar e instalar y deben tener un
dimetro de partcula uniforme.
No tienen que disponer de volmenes muertos que puedan producir
fenmenos de disolucin o de difusin de la muestra (se recomienda que el
volumen muerto que supere el 0.1% del volumen del gel.
La placa porosa que soporta la fase estacionaria tiene que ser de material
plstico (tefln o nylon).
Las dimensiones de la columna tienen que estar bien definidas para
conseguir una buena selectividad,
resolucin y eficiencia. La relacin
longitud/dimetro es funcin del tipo
de muestra: una columna corta y con
volumen pequeo puede dar lugar a
separaciones incompletas, mientras
que una columna larga y con un
volumen grande provoca diluciones
innecesarias.
A mayor grado de compactacin,
mayor ser el volumen que ocupan
las partculas de la fase estacionaria y, Ilustracin 3.-Problemas asociados a las
columnas.
por tanto, menor el volumen muerto.

Detectores

Un detector para cromatografa es un dispositivo que permite medir, a la salida de

la columna, una propiedad fsica el eluyente, que deber depender de la
composicin de este. La deteccin se realiza, habitualmente en continuo, aunque
 MODELO REOLGICO SISKO

es posible la utilizacin de colectores de fracciones para la identificacin y

cuantificacin de pequeas fracciones del eluyente.

Caractersticas:

Adecuada sensibilidad.
Estabilidad y Reproducibilidad
Respuesta lineal en un rango amplio.
Tiempo de respuesta corto.
Fiabilidad y manejo sencillo.
Respuesta semejante para todos los solutos e idealmente selectiva, no
destructivo.

Se puede hacer una divisin de los detectores en dos grandes grupos: los que
aportan informacin estructural sobre sustancias eluidas (aquellos que permiten la
obtencin de espectros de las sustancias que salen de la columna) y aquellos que
no aportan informacin estructural.

Los principales detectores usados para GPC son los que no aportan informacin
estructural entre ellos estn:

Detector de ndice de refraccin

Detector de UV y/o luz visible.
Detector de fluorescencia.
Detector de conductividad elctrica.
Detector electroqumico.
Detector de viscosidad

Se utiliza tradicionalmente el detector de ndice de refraccin, ya que la mayor parte

de polmeros presentan variacin de este paramento en funcin de su peso
molecular. Tambin es factible utilizar el detector espectrofotomtrico de longitud de
onda variable, principalmente en la zona de 200 nm.

El detector de ndice de refraccin es, posiblemente, el que ms se aproxima al

detector universal ideal, ya que, en principio, el ndice de refraccin (IR) de la fase
 MODELO REOLGICO SISKO

mvil deber modificarse por la presencia de cualquier soluto que tenga un ndice
de refraccin diferente de ella. Por ello, la comparacin del IR de la fase mvil pura
con el de los efluentes que salen de la columna cromatogrfica, indicar la presencia
de cualquier soluto eluido. El principal inconveniente de este tipo de detectores es
que son muy sensibles a los cambios de temperatura, la cual debe ser controlada
con fluctuaciones de 0.0001 C. Por otra parte, no resultan adecuados para
trabajar con la modalidad de elucin por gradiente.

Equipos
El sistema de elucin ms asequible inicialmente empleado fue la elucin por
gravedad. Actualmente se utilizan equipos de GPC dotados de bombas de alta
presin para hacer pasar el eluyente (y la muestra) a travs de la columna. En los
cromatogramas de exclusin, las molculas de tamaos ms grandes dan lugar a
los picos iniciales y los ms pequeos se eluyen al final. Existe una gran diversidad
de quipos de diversas marcas, con diversas funciones, detectores, etc.; Aqu se
muestran solo algunos de estos equipos.

Equipo para GPC/SEC Semi-micro EcoSEC para anlisis de polmeros de alta

eficacia.

El sistema GPC/SEC es un instrumento de

GPC completo desarrollado especficamente
para el anlisis rpido de polmeros cuenta con:
un sistema compacto de CPC/SEC de bajo
volumen muerto, tecnologa de ndice de
Ilustracin 4.- GPC/SEC Semi- Refraccin de doble flujo, tiempos de anlisis
micro EcoSEC para anlisis de
polmeros de alta eficacia.
recortados hasta la mitad que dobla la
productividad. Adems, reduce el coste de
disolvente y de residuos hasta un 80%. Cuenta con los siguientes detectores: ndice
de Refraccin, Detector de UV-Vis, Viscosmetro diferencial y Light Scattering.
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Equipo para GPC/SEC Semi-Micro ECOSEC HT.

EcoSEC HT EcoSEC HT es un sistema GPC de alta temperatura, que prioriza la

utilidad prctica como la estabilidad, alta
sensibilidad, la rapidez de la puesta en marcha,
etc. Adems, tiene en cuenta la seguridad y el
respeto al medio ambiente. Este equipo es
adecuado para el anlisis por GPC de polmeros
que se disuelven solamente en disolventes
orgnicos a alta temperatura. Permite trabajar Ilustracin 5.- GPC/SEC Semi-
Micro ECOSEC HT.
hasta 220C.

Sistema de anlisis GPC/SEC Agilent 1260 Infinity.

La particularidad de este sistema de suministro de

disolvente isocrtico permite una velocidad de flujo
estable y constante, la cual es de vital importancia para
mantener el alto nivel de resolucin de la columna
GPC/SEC. Y gracias a su alto nivel de precisin y
excelente estabilidad de temperatura, puede estar
seguro de que las determinaciones del peso molecular
cuentan con la precisin y exactitud ms elevadas.

Ilustracin 6.-Sistema de
anlisis GPC/SEC Agilent 1260
Infinity.
 MODELO REOLGICO SISKO

Sistema de GPC/SEC integrado Agilent PL-GPC 50.

Es un instrumento independiente que contiene todos los

componentes necesarios para analizar una amplia variedad
de polmeros. Con la bomba, la vlvula de inyeccin, el
horno de la columna y el desgasificador opcional, as como
con cualquier combinacin de detectores de ndice de
refraccin, dispersin de luz y viscosidad, el sistema PL-
GPC 50 es idneo para iniciarse en la GPC o para contar
con la comodidad de una solucin nica.
Ilustracin 7.- GPC/SEC
integrado Agilent PL-GPC
50.

Aplicaciones
La aplicacin ms simple de la GPC es la separacin de dos grupos de
sustancias con pesos moleculares muy diferentes, es posible separar oligmeros,
monmeros y aditivos de una disolucin polimrica compleja si las diferencias de
peso molecular entre los componentes son significativas. Es posible le eliminacin
de especies de bajo peso molecular de disoluciones que contengan molculas
grandes, mediante el paso a travs de una columna de filtracin en gel. La tcnica,
conocida como desalinizacin, es til, por ejemplo, para la separacin de
hemoglobina y cloruro sdico. Asimismo, es posible el fraccionamiento de mezclas
ms o menos complejas de diferentes materiales, como pptidos, cidos nucleicos,
enzimas, polisacridos, etc. Por otra parte, la tcnica puede usarse con fines
analticos o a escala preparativa.
 MODELO REOLGICO SISKO

Disolventes especficos para polmeros

Tabla 1.- Disolventes utilizados para diversos polmeros.

 MODELO REOLGICO SISKO

El tamao de las molculas est relacionado con su peso molecular, por lo que el
tiempo de elucin (o el volumen de elucin) de un determinado pico proporciona
una idea aproximada de su peso molecular. La cuantificacin se realiza a partir de
curvas de calibrado. Mediante mezclas de patrones de pesos moleculares
conocidos, se evalan los pesos moleculares que corresponden a cada tiempo (o
volumen) de retencin. Para ello, se representa el tiempo (o volumen) de retencin
en funcin del logaritmo de los pesos moleculares correspondientes como se
muestra en la ilustracin 8.

El primer pico que sale de la columna

corresponde al componente de la muestra
cuyas molculas no encajan en ninguno de
los poros por ser demasiado grandes
(exclusin total), mientras que el ultimo pico
corresponde a la molcula ms pequea
que penetra en todos los poros disponibles
del gel (permeacin total). Entre estos dos
casos extremos, se sita la gama de
molculas intermedias.
Ilustracin 8.-Curvas de calibrado
de un sistema GPC.

Se construye una curva de calibracin en escala semilogartmica usando patrones

previamente caracterizados y se obtiene la siguiente expresin:

Ecuacin 1.- Determinacin de peso molecular.

En esta ecuacin M es el peso molecular, V es el volumen de elucin y A0, A1,...

son constantes. Para obtener el peso molecular exacto, debe trazarse una curva de
calibracin para cada polmero, disolvente, eluyente y configuracin de columna.
 MODELO REOLGICO SISKO

La cromatografa GPC es una tcnica sumamente factible para conocer la

distribucin de pesos moleculares de los polmeros, este mtodo te permite calcular
la polidispersidad las muestras estudiadas y su peso molecular relativo en nmero
(MN)y en peso (MW).
 MODELO REOLGICO SISKO

Bibliografa

M.C. Gutirrez-BouznI, A. B. (2009). La cromatografa de exclusin:

anlisis de la distribucin de pesos moleculares en siliconas por gpc.

1. Gutirrez, M.C.; Lpez-Mesas, M.; Lacorte, M.T., Cegarra, J. Infrared

Analysis of the Amino Group Content in Function
Aminopolydimethylsiloxanes. Fibers and Polymers, 2009, 10 (4), 437-441.

https://www.malvern.com/es/products/technology/gel-permeation-
chromatography