Anda di halaman 1dari 9

Mekanisme Fisiologis Pertumbuhan Giberelin yang diinduksi

Seperti yang kita ketahui, efek yang menaikkan pertumbuhan giberelin jelas terlihat pada
tumbuhan kerdil dan tumbuhan roset. Ketika tumbuhan kerdil diberikan giberelin, tumbuhan
kerdil menyerupai varietas tertinggi dari spesies yang sama (lihat gambar 20.1). contoh
perlakuan lain dari giberelin meliputi pemanjangan hipokotil dan internode.

Contoh pemanjangan internode yang sangat mencolok ditemukan pada beras yang berada di
dalam air (Oryza sativa). Secara umum, tanaman padi disesuaikan dengan kondisi
penggenangan parsial. Untuk memungkinkan dedaunan pada bagian atas tanaman bertahan di
atas air, ruas-ruasnya memanjang saat permukaan air naik. beras yang berada di dalam air
memiliki potensi terbesar untuk perpanjangan ruas jalan yang cepat. Dalam kondisi lapangan,
tingkat pertumbuhan hingga 25 cm per hari telah diukur.

Sinyal pertama merupakan tekanan parsial O2 yang berkurang akibat penggenangan, yang
menginduksi biosintesis etilen (lihat Bab 22). Etilen yang terjebak dalam jaringan yang
terendam, pada gilirannya, mengurangi tingkat asam absisat (lihat Bab 23), yang bertindak
sebagai antagonis dari zat pembawa gibberellin. Hasil akhirnya, jaringan menjadi lebih
responsif terhadap gibberellin endogen (Kende et al 1998). Karena inhibitor biosintesis
gibberellin menghambat efek stimulasi dari perendaman dan etilen pada pertumbuhan, serta
gibberellin eksogen dapat merangsang pertumbuhan tanpa adanya perendaman, giberelin
merupakan hormon yang secara langsung bertanggung jawab terhadap stimulasi
pertumbuhan.

Pertumbuhan yang dirangsang oleh asam giberelin pada beras yang direndam dapat dipelajari
dalam sistem batang yang dipotong (Gambar 20.23). Penambahan giberellin menyebabkan
peningkatan laju pertumbuhan yang ditandai setelah periode lag (masa istirahat) sekitar 40
menit. Pemanjangan sel memberikan sekitar 90% kenaikan panjang batang selama 2 jam
pertama perlakuan giberelin.
Gambar 20.23. Pencatatan yang berlanjut
terhadap pertumbuhan rongga atas beras yang
direndam dalam ada atau tidak adanya GA
eksogen. Kontrol internode memanjang pada
tingkat konstan setelah pemecahan pertumbuhan
awal selama 2 jam pertama setelah penampang
dipotong. Penambahan GA setelah 3 jam
Pertumbuhan

menyebabkan kenaikan yang tajam pada tingkat


pertumbuhan setelah periode lag 40 menit (di
bawah kurva). Perbedaan tingkat pertumbuhan
awal kedua perlakuan tidak signifikan di sini,
namun mencerminkan sedikit variasi pada bahan
percobaan. Bagian inset menunjukkan bagian
ruas batang padi yang digunakan dalam
percobaan. Meristem interkalar tepat di atas
nodus merespon GA. (Setelah Sauter dan Kende
1992.)
Waktu (jam) setelah ruas dalam dipotong dari tanaman
Period lag = masa istirahat
Intercalary meristem = meristem interkalar
GA3 added to internode section = GA3 ditambahkan pada ruas penampang.
Control internode section (no GA3 added) = penampang ruas kontrol (tidak ada GA3
ditambahkan)

Giberelin merangsang Pemanjangan Sel dan Pembelahan Sel

Efek dari gibberellins yang diberikan pada tanaman kerdil yang utuh sangat dramatis
sehingga terlihat menjadi tugas sederhana untuk menentukan bagaimana tindakan tersebut.
Sayangnya, hal ini tidak terjadi karena, seperti yang telah kita lihat dengan auksin, begitu
banyak tentang pertumbuhan sel tumbuhan yang tidak dipahami. Namun, kita tahu beberapa
karakteristik pemanjangan batang akibat giberelin

Giberelin meningkatkan pemanjangan sel dan pembelahan sel, yang dibuktikan dengan
bertambahnya panjang sel dan jumlah sel sebagai respons terhadap pemberian giberelin.
Misalnya, rongga kacang polong memiliki sel lebih banyak daripada kacang polong kerdil,
dan selnya lebih panjang. Pembelahan secara mitosis meningkat di daerah subkutan meristem
tanaman roset sepanjang hari setelah pemberian giberelin (Gambar 20.24). Stimulasi radikal
pemanjangan ruas dalam beras yang direndam sebagian disebabkan oleh peningkatan
aktivitas pembelahan sel dalam meristem interkalar. Selain itu, hanya sel-sel dari meristem
interkalar yang pembagiannya ditingkatkan dengan gibberellin yang menunjukkan
rangsangan pembentukan sel giberelin.
Pemanjangan sel yang disebabkan giberelin didahului dengan pembelahan sel yang
diakibatkan oleh giberelin, kita memulai diskusi kita dengan peran giberelin dalam mengatur
pemanjangan sel.

Gambar mitosis per 64 m


Masing-masing tidak mewakili
pembelahan mitosis

Waktu (jam) mengikuti


Distribusi pembelahan sel mengikuti Penggunaan Giberelin perlakuan Giberelin

Gambar 20.24 Penggunaan Gibberellin pada tanaman roset yang menginduksi pemanjangan
ruas induk dengan meningkatkan pembelahan sel. (A) Bagian longitudinal melalui sumbu
Samolus parviflorus (brookweed) menunjukkan adanya peningkatan sel.

Giberelin Meningkatkan Ekstensibilitas Dinding Sel tanpa Asidifikasi (Pengasaman)

Seperti yang telah dibahas pada Bab 15, tingkat pemanjangan dapat dipengaruhi oleh
perluasan dinding sel dan laju pengambilan air secara osmotik. Giberelin tidak berpengaruh
pada parameter osmotik namun secara konsisten yang telah diamati menyebabkan
peningkatan perpanjangan mekanisme dinding sel dan relaksasi stres dari dinding sel yang
hidup. Analisis genotif kacang polong yang berbeda dalam kandungan giberelin atau
sensitivitas menunjukkan bahwa giberelin menurunkan gaya minimum yang akan
menyebabkan perluasan dinding (ambang batas hasil panen) (Behringer et al 1990). Dengan
demikian, baik giberelin dan auxin tampaknya mengerahkan efeknya dengan memodifikasi
sifat dinding sel.

Pada kasus auksin, pelonggaran dinding sel tampaknya dimediasi sebagian oleh pengasaman
dinding sel (lihat Bab 19). Namun, tampaknya bukan mekanisme tindakan gibberellin.
Bagaimanapun juga, ada peningkatan stimulan proton yang didorong oleh giberelin. Di sisi
lain, giberelin tidak pernah ada dalam jaringan tanpa kelengkapan auksin, dan efek dari
giberelin pada pertumbuhan dapat bergantung pada pengasaman dinding yang diinduksikan
oleh auksin.

Waktu lag yang khas sebelum pertumbuhan yang di stimulasi gibberellin dimulai lebih lama
daripada untuk auksin; Seperti yang telah dicatat, dalam beras yang direndam adalah sekitar
40 menit (lihat Gambar 20.23), dan dalam kacang polong 2 sampai 3 jam (Yang et al 1996).
Waktu lag yang lebih lama ini mengarah pada mekanisme yang menaikkan pertumbuhan
yang berbeda dari auksin. Konsisten dengan adanya mekanisme pelonggaran dinding
samping giberelin yang berbeda, respons pertumbuhan terhadap giberen dan auksin yang
diaplikasikan bersifat aditif.
Berbagai saran telah dibuat mengenai mekanisme pemanjangan batang yang distimulasi oleh
giberelin, dan semuanya memiliki beberapa dukungan eksperimental, namun belum ada yang
memberikan jawaban yang jelas. Sebagai contoh, terdapat bukti bahwa enzim xyloglucan
endotransglycosylase (XET) terlibat dalam perluasan dinding yang dinaikkan oleh
gibberellin. Fungsi XET untuk memudahkan penetrasi expansin ke dinding sel. (Perlu diingat
bahwa expansin merupakan protein dinding sel yang menyebabkan dinding sel longgar dalam
kondisi asam dengan melemahkan ikatan hidrogen dengan polisakarida dinding [lihat Bab
15].) Baik ekspansin dan XET diperlukan untuk pemanjangan sel yang dirangsang oleh
giberelin (lihat Topik Web 20.3).

Giberelin Mengatur Transkripsi Sel Siklus Kinase dalam Meristem Interkalar

Seperti yang dicatat sebelumnya, tingkat pertumbuhan internoda beras yang direndam secara
dramatis meningkat sebagai respons terhadap perendaman, dan sebagian dari respons ini
disebabkan oleh peningkatan pembelahan sel dalam meristem interkalar. Untuk mempelajari
efek giberelin pada siklus sel, peneliti mengisolasi nukleus dari meristem interkalar dan
menghitung jumlah DNA per inti (Gambar 20.25) (Sauter dan Kende 1992).
Persentase inti nukleus pada Fase S dan G2

Persentase inti nukleus pada Fase G1

Perlakuan Giberelin (Jam)

Gmabar 20.25 Perubahan dalam status siklus sel pada nukleus dari meristem interkalar
interversum pada beras dalam air yang diperlakukan dengan GA 3. Perhatikan bahwa skala
inti G berada di sisi kanan grafik. (Setelah Sauter dan Kende 1992.)

Pada tanaman yang diinduksi dengan perendaman, giberelin mengaktifkan siklus pembelahan
sel pertama pada transisi dari fase G ke S, yang menyebabkan peningkatan aktivitas mitosis.
Untuk melakukan ini, giberelin menginduksi ekspresi gen untuk beberapa protein kinase yang
bergantung pada kinase (CDKs), yang terlibat dalam pengaturan siklus sel (lihat Bab 1).
Transkripsi gen ini terlebih dahulu yang mengatur transisi dari fase G1 ke S, diikuti oleh yang
pengaturan transisi dari fase G2 ke M yang diinduksi dalam meristem interkalar oleh
giberelin. Hasilnya adalah peningkatan yang disebabkan oleh giberelin dalam perkembangan
dari G1 ke fase S melalui mitosis dan pembelahan sel (lihat Topik 20.4) (Fabian et al., 2000).

Respon Gibberellin Mutan Memiliki Kecacatan dalam Transduksi Sinyal

Gen mutan tunggal yang terganggu dalam responnya terhadap giberelin menyediakan bahan
yang berharga untuk mengidentifikasi gen yang menyandikan reseptor giberelin atau
komponen jalur transduksi sinyal. Dalam penyaringan untuk mutan tersebut, tiga kelas utama
mutasi yang mempengaruhi tinggi tanaman telah dipilih:

1. Giberelin- kekerdilan yang tidak sensitif


2. Mutan yang kekurangan Giberelin di mana kekurangan zat besi telah diatasi dengan
mutasi "penekan" kedua, sehingga tanaman terlihat lebih mendekati normal.
3. Mutan dengan respon giberelin konstitutif (mutan "kecil")

Ketiga jenis mutan hasil respon giberelin dihasilkan pada spesies Arabidopsis, namun mutasi
yang setara juga ditemukan pada beberapa spesies lainnya; Sebenarnya, beberapa telah
digunakan dalam pertanian selama bertahun-tahun.

Tiga jenis penyaringan mutan terkadang mengidentifikasi gen yang mengkodekan komponen
transduksi sinyal yang sama, walaupun fenotip yang dipilih sama sekali berbeda. Hal ini
dimungkinkan karena mutasi pada berbagai lokasi pada protein yang sama dapat
menghasilkan fenotip yang berbeda, tergantung pada apakah mutasi berada dalam domain
peraturan atau dalam suatu aktivitas, atau domain fungsional. Beberapa contoh dari berbagai
fenotip yang dapat dihasilkan dari perubahan pada lokasi yang berbeda pada protein yang
sama dijelaskan pada bagian berikut.

Domain Fungsional (Penekanan)

Komponen utama transduksi sinyal giberelin yang telah diidentifikasi sejauh ini adalah
represor pensinyalan giberelin; Artinya, pensinyalan Giberelin menekannya sebagai
pertumbuhan yang disebabkan oleh gibberellin dan membuat tanaman kerdil. Protein represor
dinegasikan atau dimatikan oleh giberelin sehingga pertumbuhan tipe utamanya yaitu, tinggi -
diperbolehkan untuk dilanjutkan. Hilangnya fungsi akibat mutasi pada domain fungsional
dari hasil regulator negatif seperti mutan yang muncul seolah-olah telah diobati dengan
giberelin; Artinya, memiliki fenotip tinggi. Dengan demikian mutasi yang kehilangan
fungsinya dari regulator negatif seperti negatif ganda dalam tata bahasa Inggris: Ini
diterjemahkan menjadi positif. Karena efek mutasi ini bersifat pleiotropik, mereka juga
mempengaruhi proses perkembangan selain pemanjangan batang - langkah-langkah dalam
jalur yang terlibat dalam respon pertumbuhan umum nya terjadi pada semua respons
giberelin.

Domain Regulasi. Jika mutasi pada gen untuk regulator negatif yang sama menyebabkan
perubahan pada domain peraturan (yaitu, bagian protein yang menerima sinyal dari reseptor
giberelin yang menunjukkan adanya giberelin), protein tidak dapat menerima sinyal, dan
mempertahankan aktivitas pertumbuhannya yang menekan. Fenotipe mutan seperti itu adalah
sejenis tanaman kerdil yang tidak sensitif terhadap giberelin. Dengan demikian, mutasi yang
berbeda pada gen yang sama dapat memberi fenotip berlawanan (tinggi banding kerdil),
tergantung pada apakah mutasi berada di domain represi atau domain peraturan.

Mutasi domain peraturan yang memberikan hilangnya sensitivitas giberelin menghasilkan


sintesis bentuk represif aktif dari represor daripada yang tidak dapat dimatikan oleh giberelin.
Semakin banyak jenis represor mutan yang ada di dalam sel, semakin kerdil tanaman itu.
Oleh karena itu, mutasi domain peraturan semacam itu semi dominan.

Sebaliknya, mutasi dalam domain represi tidak aktif regulator negatif (yaitu, mereka
bertindak sebagai alel "Knock Out") sehingga tidak lagi menekan pertumbuhan; mutasi
semacam itu resesif karena dalam setengah molekul heterozigot masih akan mampu menekan
pertumbuhan tanpa adanya giberelin. Semua regulator negatif harus tidak berfungsi agar
tanaman tumbuh tinggi tanpa giberelin.

Dengan latar belakang ini, sekarang kita meneliti contoh mutasi spesifik pada gen yang
mengkodekan protein dalam jalur transduksi sinyal giberelin.

Penyaringan Genetik yang Berbeda Telah Diidentifikasi Represor Terkait GAI dan
RGA. Beberapa mutan kerdil giberelin yang insensitif telah diisolasi dari berbagai spesies.
Yang pertama diisolasi pada Arabidopsis adalah mutan gai-1 (Gambar 20.26) (Sun 2000).
Mutan gai-1 menyerupai mutan yang kekurangan hormon giberelin, kecuali mutan tersbeut
tidak merespon giberelin eksogen.

Gambar 20.26 Efek pengobatan giberelin dan mutasi pada tiga gen yang berbeda (gai, ga1,
dan rga) pada fenotipe Arabidopsis.
Mutan lain diperoleh dengan melakukan skrining untuk mutasi kedua pada mutan
Arabidopsis yang kurang aktif dalam pengembalian, atau mengembalikan sebagian,
pertumbuhan tipe liar. Mutan defisiensi gibberellin asli adalah ga1-3, dan mutasi kedua yang
secara parsial "menyelamatkan" fenotipe (yaitu, pertumbuhan normal yang normal) disebut
rga (untuk represor ga1-3) 4. Mutasi rga adalah mutasi resesif yang apabila terdapat dalam
double duplikat, memberi tanaman ketinggian menengah (lihat Gambar 20.26).

Meskipun fenotipe kontras dari mutan,gen GAI dan RGA tipe liar ternyata terkait erat,
dengan identitas urutan (82%) yang sangat tinggi. Mutasi gai-1 bersifat semidominan, seperti
halnya mutasi kerdil yang mirip insufisiensi gibberellin pada spesies lain.

Analisis genetika menunjukkan bahwa protein GAI dan RGA biasanya berperan sebagai
represor respons Giberelin. Giberelin bertindak secara tidak langsung melalui perantara
sinyal yang tak dikenal, yang diperkirakan terikat pada domain peraturan protein GAI dan
RGA (Gambar 20.27). Represor tidak lagi mampu menghambat pertumbuhan, dan tanaman
yang dihasilkan tinggi.

GA signaling intermediate = Sinyal intermedia Giberelin


Repression domain = domain represi
Regulatory domain = domain pengatur
Active form = bentuk aktif
Inactive form = bentuk tidak aktif
Degradation = degradasi

Gambar 20.27 Dua domain fungsional utama GAI dan RGA: domain pengaturan dan domain
represi. Domain represi aktif tanpa adanya giberelin. Perantara sinyal yang diinduksi
giberelin berikatan dengan domain pengaturan, menargetkannya untuk penghancuran.
Perhatikan bahwa protein membentuk homodimers

Alasan bahwa gai-1 adalah tanaman kerdil, sementara rga tinggi, adalah mutasi berada di
berbagai bagian protein. Sedangkan mutasi gai-1 (yang meniadakan kepekaan repressor
terhadap giberelin) berada dalam domain peraturan, mutasi rga (yang mencegah tindakan
represor dalam menghalangi pertumbuhan) terletak pada domain penindakan, seperti yang
diilustrasikan pada Gambar 20.28.

Gambar 20.28 Mutasi yang berbeda pada represor GAI dan RGA dapat memiliki efek yang
berbeda terhadap pertumbuhan

Gen mutan gai-1 telah ditunjukkan dalam mengkodekan protein mutan dengan penghapusan
17 asam amino, yang sesuai dengan domain peraturan represor (Dill et al., 2001). Mutasi
asimilar pada domain reseptor gen RGA juga menghasilkan giberelin kerdil yang insensitive,
yang menunjukkan bahwa kedua protein terkait memiliki fungsi tumpang tindih. Karena
penghapusan mutan gai-1 ini, tindakan represor tidak dapat diatasi dengan oleh giberelin, dan
pertumbuhan terhambat secara konstitutif.

Gibberelin Penyebab Degradasi Penanda Transkripsi RGA. Gen GAI dan RGA tipe
Arabidopsis adalah anggota keluarga gen besar yang mengkodekan represor transkripsi yang
memiliki daerah yang sangat dilestarikan dengan sinyal lokalisasi nukleus. Untuk
menunjukkan sifat lokalisasi dan represor nukleus produk RGA, promotor RGA digabungkan
ke gen untuk protein floeresens hijau yang produknya dapat divisualisasikan di bawah
mikroskop. Warna hijau bisa terlihat di inti sel.

Ketika tanaman diberi gibberellin, tidak ada warna hijau, menunjukkan bahwa protein RGA
tidak terdapat setelah perlakuan giberelin. Namun, ketika kadar giberelin diturunkan dengan
pengobatan inhibitor biosintesis giberelin paclobutrazol, inti sel memperoleh fluoresensi hijau
yang sangat intens, menunjukkan kehadiran dan lokalisasi protein RGA hanya bila giberelin
tidak ada atau rendah (Gambar 20.29) Silverstone dkk., 2001).
Gambar 20.29 Protein RGA ditemukan di inti sel, konsisten dengan identitasnya sebagai
faktor transkripsi, dan tingkatnya dipengaruhi oleh tingkat GA. (A) Sel tumbuhan
ditransformasikan dengan gen untuk RGA yang menyatu dengan gen untuk protein fluoresen
hijau (GFP), yang memungkinkan deteksi RGA di nukleus oleh mikroskop fluoresens. (B)
Efek GA pada RGA. Suatu perlakuan sebelum 2 jam dengan giberelin menyebabkan
hilangnya RGA dari sel (atas). Bila biosintesis giberelin dihambat dengan adanya
paclobutrazol, kandungan RGA di nukleus meningkat (bawah). (Dari Silverstone et al 2001.)

Baik GAI dan RGA juga memiliki daerah yang dilindungi pada ujung amino protein yang
disebut DELLA, setelah kode huruf untuk asam amino dalam urutan itu. Daerah ini terlibat
dalam respon giberelin karena merupakan lokasi mutasi pada gai-1 yang membuatnya tidak
responsif terhadap giberelin. Ternyata protein RGA disintesis sepanjang waktu; Dengan
adanya giberelin, protein ini ditargetkan untuk penghancuran, dan daerah DELLA diperlukan
untuk merespon ini (Dill et al., 2001).