TEMA 11

Cultivo de microorganismos
anaerobios
Tema 11. Cultivo de microorganismos anaerobios

1. Microorganismos anaerobios
1.1. Anaerobios estrictos y anaerobios aerotolerantes
1.2. Importancia de la microbiota anaerobia
1.3. Enfermedades producidas por microorganismos anaerobios
2. Tipos de muestras que pueden contener microorganismos anaerobios
2.1. Muestras no adecuadas para el cultivo de anaerobios
3. Recoleccin de muestras para recuperacin de anaerobios
3.1. Con aguja y jeringa
3.2. Con hisopo
4. Transporte de las muestras al laboratorio
5. Examen macroscpico y microscpico de las muestras
6. Pruebas previas al cultivo
7. Medios de cultivo para anaerobios
8. Incubacin de microorganismos anaerobios
8.1. Bolsas
8.2. Contenedores
8.3. Jarras
8.4. Estufas
1. Microorganismos anaerobios
1.1. Anaerobios estrictos y anaerobios aerotolerantes
Anaerobios: no utilizan oxgeno en su metabolismo (el aceptor final de electrones
es un compuesto diferente al oxgeno).

Estrictos (2): crecen en

atmsferas con una tensin
de oxgeno inferior al 0,5%.
Mueren en presencia de
cantidades mayores.

Aerotolerantes (5): pueden

sobrevivir en presencia de
oxgeno (hasta un 8%), pero
son incapaces de utilizarlo para su metabolismo.

La tolerancia viene determinada por la presencia de enzimas:

superoxido dismutasa (SOD), catalasa y peroxidasa que catalizan la
conversin de radicales superxido a perxido de hidrgeno, menos
txico, y a oxgeno molecular.
1.2. Importancia de la microbiota anaerobia

Piel: Clostridium, Propionibacterium, Peptostreptococcus.

Ojos: Propionibacterium, Clostridium.
Nasofaringe: Peptostreptococcus,Veillonella, Propionibacterium, Prevotella,
Clostridium, Actinomyces, Eubacterium, Bacteroides, Fusobacterium.
Boca (3-10:1).
Surcos gingivales (100-1.000:1).
Intestino delgado: Peptostreptococcus. Peptococcus, Lactobacillus (1:1).

Intestino grueso: Prevotella, Fusobacterium, Peptostreptococcus, Peptococcus,

Lactobacillus (100-1.000:1).

Uretra: Bacteroides, Peptostreptococcus, Peptococcus, Lactobacillus,

Clostridium, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella.
Vagina: Bacteroides, Propionibacterium, Peptostreptococcus, Peptococcus,
Lactobacillus, Clostridium, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella (5-10:1).
1.3. Enfermedades producidas por microorganismos anaerobios

Abcesos en cualquier rgano

Infeccin periodontal
Otitis media
Sinusitis
Endocarditis, bacteriemia y
septicemia
Empiema torcico
Apendicitis, peritonitis
Endometritis y salpingitis,
absceso ovrico
Osteomielitis
Artritis sptica
Ttanos, gangrena gaseosa
Mionecrosis clostrdica
2. Tipos de muestras que pueden contener microorganismos anaerobios

Orina
Puncin suprapbica
Heces
Sangre, LCR y otros lquidos
orgnicos
Tracto respiratorio inferior
Aspiracin traslarngea
Toracocentesis
Broncoscopia
Odo
Timpanocentesis
Cavidad oral y dientes
Aparato genital
Masculino
Femenino
Hisopado de endocrvix
Bartolinitis
Pus, exudados y quemaduras
Muestras de ciruga
2.1. Muestras no adecuadas para el cultivo de anaerobios

Orina de chorro medio

Esputo expectorado

Heces (slo para investigar Clostridium difficile),

ni hisopados rectales

Hisopado farngeo y nasofarngeo

Hisopado de encas

Hisopado vaginal

Superficie de lceras
3. Recoleccin de muestras para recuperacin de anaerobios
3.1. Con aguja y jeringa

Muestra de orina por

puncin suprapbica

Muestra de orina de catter

Sangre

LCR

Otros lquidos orgnicos

Abscesos, flemones, focos

piognicos
3.1. Con aguja y jeringa
3.2. Con hisopo

Hisopado de endocrvix

Hisopado de heridas, abscesos

4. Transporte de las muestras al laboratorio

Sistema Scott
de doble tubo
Sistema
Port-A-Cult
4. Transporte de las muestras al laboratorio

Sistema
Culturette

Sistema
Vacutainer
5. Examen macroscpico y microscpico de las muestras

Examen macroscpico

Olor ftido.
Aspecto purulento.
Tejido necrtico.
Presencia de gas.

Examen microscpico
Tincin de gram: muchas infecciones
anaerobias pueden ser polimicrobianas.
Tincin y observacin de esporas (puede indicar
Clostridium).
Observacin de ramificaciones en los extremos
de las clulas o filamentos (puede indicar
Actynomices).
Observacin clulas fusiformes (puede indicar
Fusobacterium).
6. Pruebas previas al cultivo

Cromatografa de gases
7. Medios de cultivo para anaerobios
Agar sangre para anaerobios con L-cistina, hemina y vitamina K
Medio no selectivo de uso general.

Agar chocolate
Utilizado principalmente para aislar
especies de Neisseria y Haemophilus; sin
embargo, se puede requerir tambin para
el aislamiento de anaerobios exigentes.

Agar alcohol fenil etlico con sangre

Aislamiento de anaerobios obligados Gram positivos.
7. Medios de cultivo para anaerobios

Agar Columbia con colistina y cido nalidxico (CNA)

Aislamiento de anaerobios obligados Gram
positivos.

Agar KVLB (kanamicina, vancomicina, sangre lacada)

Aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos
anaerobios

Caldo tioglicolato (enriquecido con L-cistina, hemina y

vitamina K)
Caldo de carne picada

Caldos de enriquecimiento que se pueden usar

como suplemento de medios slidos
particularmente si la muestra escasa (se
pueden aadir unas gotas de parafina lquida
para mantener mejor la atmsfera anaerobia).
Subcultivar en medio para anaerobios.
8. Incubacin de microorganismos anaerobios

Preincubacin de los medios en

anaerobiosis

8.1. Bolsas
8.2. Contenedores
8.3. Jarras
8.3. Jarras
8.4. Estufas