6ta Practica Micro

CARRERA:
Ingeniera Qumica
5 Semestre grupo: I
MATERIA:
Microbiologa de Alimentos.
REPORTE DE LA PRCTICA
PRCTICA No: 6
NOMBRE DE LA PRCTICA:
Determinacin de Coliformes Totales en Alimentos mediante el Mtodo de Cuenta

en Placa.
INTEGRANTES DEL EQUIPO:
Ramos Hernndez Jonathan
Rodrguez Godnez Loren Karina
Torres Arrevillaga Martin Antonio
Torres Pivaral Eunice Yaritza
Velzquez Jimnez Miguel ngel
DOCENTE:
Gabriela Mayanin Mendoza Orozco
25/10/2017 01/11/2017
INSTITUTO TECNOLGICO DE TAPACHULA
LIBERTAD DE ESPRITU EN CIENCIA Y TECNOLOGA
INGENIERA QUMICA
Microbiologa de Alimentos I
ndice
Tema Pg.
1. Introduccin. .. 3
2. Objetivos.
2.1. Objetivo
.. 3
General.
2.2. Objetivos
.. 3
Especficos.
3. Resumen. .. 4
4. Fundamento de la
.. 5
Tcnica.
5. Material y mtodo. .. 7
6. Resultados. .. 10
7. Discusiones. .. 11
8. Conclusiones. .. 12
9. Sugerencias
.. 13
Didcticas
10. Referencia
. 22
Bibliogrfica.
2
INGENIERA QUMICA
1. INTRODUCCIN
El grupo de los microrganismos coliformes es el ms ampliamente utilizado en la

microbiologa d los alimentos como indicador de prcticas higinicas
inadecuadas. Su uso como indicador sanitario puede aplicarse para la deteccin
de prcticas sanitarias deficientes en el manejo y en la fabricacin de los
alimentos, la evaluacin de la calidad microbiolgica de un producto, aunque su
presencia no necesariamente implica un riesgo sanitario y evaluacin de la
eficiencia de prcticas sanitarias e higinicas del equipo y tambin para indicar
contaminacin postproceso trmico. Estos organismos se eliminan fcilmente por
tratamientos trmicos, por lo cual su presencia en alimentos sometidos al calor
sugiere una contaminacin posterior al tratamiento trmico o que este ha sido
deficiente.
Los coliformes totales pertenecen a la familia Enterobacteriaceae, incluye los

gneros Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Proteus y Klebsiella y se definen
como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios
facultativos. Fermentan la lactosa con formacin de cido y gas a 35-37C en 48
horas.
2. OBJETIVOS
2.1. Objetivo General
Analizar y valorar la importancia de los coliformes totales como

indicador sanitario en la deteccin de prcticas.
Interpretar su presencia segn la normatividad vigente y aplicando

adecuadamente el procedimiento de prueba para su identificacin y
cuantificacin.
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INGENIERA QUMICA
2.2. Objetivo Especifico
Comprender y realizar adecuadamente la determinacin de

coliformes totales en un alimento, en este caso el del jamn.
Mediante la cuenta en placas.
Interpretar los resultados obtenidos, de acuerdo con las normas

aplicadas.
3. RESUMEN
En la elaboracin de la prctica se pudo determinar que nuestra placa no

contena crecimiento de coliformes totales.
Uno de los pasos fundamentales es esterilizar materiales ya que es de

intima importancia para que el proceso de deteccin de microorganismos
sea excelente.
Primeramente se prepar una solucin diluyente de fosfatos que es la

solucin concentrada, despus se prepar el medio de cultivo de agar rojo
violeta y se calent durante 2min.
Una vez listo el material se empez a cuantificar la muestra con la bscula

pesando el jamn, una vez ya preparado la muestra se empez a etiquetar
de 1: 10 1: 100 1: 1000 1: 10000 1: 100000 las cajas Petri ,
luego la muestra una vez ya diluidas ,con forme el proceso cada paso se
sustrajo 1ml para cada caja Petri pero segn se iba diluyendo en cada
matraz Erlenmeyer de la forma que se etiqueto, luego se empieza a poner
en cada caja Petri el agar pero correctamente sin, ponerlo muy calinete ni
muy frio a la muestra.
Una vez que se prepar el cultivo con el primer agar, despus se prepara el
siguiente agar para la suiguite capa y aadirla a la cja petri correctamente
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INGENIERA QUMICA
para que no ocurra contaminacin, luego esperar a que solidifique el agar y

meterlo a la incubadora con una temperatura optima de 37C y esperar 48
horas para que se encuentre los coliformes o salga negativo.
4. FUNDAMENTO DE LA TECNICA
MICROORGANISMOS INDICADORES:
La calidad microbiolgica de los alimentos es fundamental porque influye en su

conservacin y vida de anaquel y, sobre todo, porque los microorganismos
presentes en ellos, pueden ser causantes de enfermedades transmitidas por
alimentos o ETAs (en ingls se denominan foodborne illness FBI). La
deteccin en el laboratorio de los microorganismos patgenos puede ser muy
complicada, muy lenta y/o muy costosa para determinaciones rutinarias. Adems,
es concluyente cuando se encuentra un microorganismo patgeno pero puede
haber casos en que no se detecte por razones circunstanciales como el clima o la
cantidad de individuos infectados que estn contaminando, a pesar de que el
manejo del alimento implique el riesgo de que el patgeno aparezca en cualquier
momento. En todo caso, la investigacin de microorganismos patgenos en
alimentos no facilita un enfoque preventivo. Por esas razones, las normas en
materia de alimentos, generalmente establecen la calidad microbiolgica en
trminos de microorganismos indicadores. stos son organismos (o grupos) que
advierten oportunamente de un manejo inadecuado o contaminacin que
incrementan el riesgo de presencia de microorganismos patgenos en alimentos.
Adems de que su deteccin en el laboratorio es ms sencilla, rpida y/o
econmica, los microorganismos indicadores permiten un enfoque de prevencin
de riesgos, puesto que advierten manejo inadecuado y/o contaminacin.
COLIFORMES TOTALES:
Son las Enterobacteriaceae lactosa-positivas y constituyen un grupo de bacterias

que se definen ms por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios
taxonmicos. Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su
capacidad para fermentar la lactosa con produccin de cido y gas, ms o menos
rpidamente, en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubacin
comprendida entre 30-37C.
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INGENIERA QUMICA
La demostracin y la cuenta de microorganismos coliformes, puede realizarse

mediante el empleo de medios de cultivos lquidos o slidos con caractersticas
selectivas o diferenciales. Para la cuenta en placa se usa el agar-lactosa-bilis-rojo
violeta.
Los coliformes resisten la presencia de bilis en el medio de cultivo; cuando se

desarrollan en ABRV, el cido producido por la fermentacin de la lactosa,
ocasiona el vire del indicador rojo neutro y la precipitacin de las sales biliares por
lo que las colonias son color rojo oscuro y generalmente estn rodeadas de un
halo de sales biliares precipitadas, de color rojo claro o rosa. La posibilidad de
contar las colonias
El uso de los coliformes como indicador sanitario puede aplicarse para:
La deteccin de prcticas sanitarias deficientes en el manejo y en la fabricacin

de los alimentos. La evaluacin de la calidad microbiolgica de un producto,
aunque su presencia no necesariamente implica un riesgo sanitario, cuando los
coliformes son de origen no-fecal.
Evaluacin de la eficiencia de prcticas sanitarias e higinicas en el equipo.
La calidad sanitaria del hielo y los distintos tipos de agua utilizados en las
diferentes reas del procesamiento de alimentos.
METODO DE CUENTA EN PLACA:
La tcnica se basa en contar las unidades formadoras de colonias o UFC

presentes en un gramo o mililitro de muestra. Se considera que cada colonia que
desarrolla en el medio de cultivo de eleccin despus de un cierto tiempo de
incubacin a la temperatura adecuada, proviene de un microorganismo o de un
agregado de ellos, de la muestra bajo estudio; ese microorganismo o
microorganismos son capaces de formar la colonia, es decir una UFC. Para que
las colonias puedan contarse de manera confiable, se hacen las diluciones
decimales necesarias de la muestra, antes de ponerla en el medio de cultivo; la
tcnica para realizar este procedimiento se describe en Preparacin y dilucin de
muestras de alimentos para su anlisis microbiolgico.
El medio de cultivo no debe fundirse ms de una vez, y debe mantenerse en bao

de agua regulado a 45 C, durante el tiempo suficiente para que alcance esta
temperatura, y hasta su utilizacin. El tiempo transcurrido desde el momento en
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INGENIERA QUMICA
que la muestra se incorpora al diluyente, hasta que finalmente se adiciona el

medio de cultivo a las cajas, no debe exceder de 20 minutos.
5. MATERIAL Y METODO
5 matraz Erlenmeyer Tela de adbesto
1 probeta de 100 ml Plumn
4 pipetas graduadas de 5 y 10 Papel macerado de aluminio

ml
Cerillos
5 cajas Petri de 90 mm de
dimetro Tijera
Mechero de bunsen Gasas
Espatula Cubre boca
Tripie
REACTIVOS
Fosfato de sodio monobsico
Solucin de hidrxido de sodio
MEDIOS DE CULTIVO
Agar bilis y agar rojo violeta
Disolver 1.7 g de fosfato de sodio monobsico en 25ml de agua destilada, y

ajustar el pH a 7.2 con solucin de Hidrxido de sodio 1.0 N. llevar a 50 ml con
agua. Esterilizar durante 15 minutos a 121 1.0C. Conservar en refrigeracin
Solucin de trabajo: Tomar 1.25 ml de la solucin concentrada y llevar a un litro

con agua, distribuir 90 ml de esta solucin en 4 matraces Erlenmeyer de 250 ml
esterilizar a 121 1.0C durante 15 minutos. Despus de la esterilizacin, el pH y
los volmenes finales de la solucin de trabajo debern ser iguales a los iniciales.
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INGENIERA QUMICA
En un matraz Erlenmeyer suspender la cantidad necesaria del medio deshidratado

en 100 ml de agua. Mezclar perfectamente y ajustar el pH a7.4 con cido
clorhdrico 0.1 N o con hidrxido de sodio 0.1 N a 25C, de forma que despus del
calentamiento se mantenga en este valor. Calentar con agitacin constante y
hervir durante 2 minutos. Enfriar inmediatamente el medio en un bao de agua
hasta que llegue a 45C. Evitar el sobrecalentamiento del medio. No esterilizar en
autoclave si su uso es inmediato, usar el medio dentro de las tres primeras horas
de su preparacin.
Preparacin de la dilucin primaria.
A partir de muestras liquidas:
a) Para muestras liquidas no viscosas (agua, leche, refrescos, etc) en las

cuales la distribucin de microorganismos es homognea o fcilmente
homogeneizable por medios mecnicos (agitacin, etc)
b) Para muestras congeladas de un alimento originalmente liquido o licuable,

fundir por completo en bao de agua de 40 a 45C un tiempo mximo de 15
minutos y homogeneizar agitando vigorosamente.
c) Para la parte liquida de una muestra heterognea la cual sea considerada

suficientemente representativa de la muestra total (por ejemplo la fase
acuosa de grasas animales y vegetales).
Agitar la muestra manualmente cn 5 movimientos de arriba abajo en un arco de 30
cm efectuados en un tiempo de 7 segundos. Tomar 10 ml de la muestra y diluir
con 90 ml del diluyente el cual debe encontrarse a una temperatura similar a sta,
evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente.
A partir de muestras solidas o semislidas.
Las muestras slidas y semislidas congeladas, deben descongelarse e

refrigeracin de 4 a 8C durante 18 horas y no ms de 24 horas antes de
proceder a su anlisis.
Pesar una cantidad de 10 g de la muestra para analizar en un recipiente o bolsa

plstica estriles de tamao adecuado. Adicionar un volumen de 90 ml del
diluyente llevado a una temperatura similar a la de la muestra. Operar la licuadora
o el homogeneizador peristltico de 1 a minutos hasta obtener una suspensin
completa y homognea. Aun en los equipos ms lentos, este tiempo no debe
exceder de 2.5 minutos. Permitir que las partculas grandes se sedimenten, y
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INGENIERA QUMICA
transferir la cantidad deseada tomando de las capas superiores de la suspensin.

Cuando la dilucin primaria es muy viscosa o pegajosa, adicionar ms diluyente, lo
cual debe tomarse en cuenta para las operaciones subsecuentes o expresin de
resultados.
Preparacin de las diluciones decimales adicionales. Utilizar pipetas diferentes

para cada dilucin.
Transferir 10 ml de la dilucin primaria (10-1), a un matraz Erlenmeyer

conteniendo 90 ml del diluyente estril, dilucin (10-2) a la temperatura apropiada,
evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente, mezclar cuidadosamente.
Realizar diluciones 10-3 y 10-4, transfiriendo 10 ml de la dilucin anterior a un

matraz Erlenmeyer con 90 ml de solucin diluyente estril.
Duracin del procedimiento.
En general, las diluciones de la muestra deben ser preparadas inmediatamente

antes del anlisis y estas deben ser usadas para inocular el medio, de cultivo
dentro de los 20 minutos posteriores a su preparacin.
Inoculacin e incubacin de la muestra.
Distribuir las cajas estriles en la mesa de trabajo de manera que la inoculacin, la

adicin de medio de cultivo y homogenizacin, se puedan realizar cmoda y
libremente. Marcar las cajas en sus tapas con los datos pertinentes a la dilucin
previamente a su inoculacin.
Utilizando pipetas graduadas diferentes para cada dilucin, agregar 1ml de la

muestra diluida en la caja Petri respectiva, agregar de 15 a 20 ml del medio
preparado (RVBA), mezclar las cajas mediante 6 movimientos en forma de ocho o
hasta lograr una completa incorporacin del inoculo en el medio; cuidar que el
medio no moje la cubierta de las cajas. Dejar solidificar.
Despus de que esta el medio completamente solidificado en la caja, verter

cantidades aproximadamente iguales del medio de cultivo a 451.0C en la
superficie del medio inoculado. Dejar que solidifique.
Incluir una caja con medio de cultivo y otra con 1 ml de solucin diluyente y medio
de cultivo como testigo de esterilidad.
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INGENIERA QUMICA
El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al

diluyente hasta que finalmente se adiciona el medio de cultivo a las cajas, no debe
exceder de 20 minutos.
Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35C, durante 24 2 horas.
Despus del periodo especificado para la incubacin, contar las colonias.
Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150 colonias. Las colonias tpicas
son de color rojo oscuro, generalmente se encuentran rodeadas de un halo de
precipitacin debido a las sales biliares, el cual es de color rojo claro o rosa, la
morfologa colonial es semejante a lentes biconvexos con un dimetro de 0.5 a .0
mm.
6. RESULTADOS
Se obtuvieron resultados buenos ya que no hubo crecimiento de coliformes totales

y por lo general fue que el jamn tuvo un buen proceso en su elaboracin, sin
embargo los resultados fueron negativos ya que no se desarrollaron coliformes
totales por ml de solucin.
Clculo de los valores de la placa

Colonias contadas UFC/g o ml
1: 10 1: 100 1: 1000 1: 10000 1: 100000

0 0 0 0 0 < 100c
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INGENIERA QUMICA
Estos resultados fueron apropiados porque se elabor con buenos pasos y a

pesar de todo se aprendi a analizar y a valorar la evaluacin de un producto
terminado y llevado a la venta, por ello es fundamental que se haga
adecuadamente las determinaciones de microorganismos de coliformes totales ya
que tambin este es un buen indicador para determinar escherichia, enterobacter,
citrobacter, proteus y klebsiella.
7. DISCUSIONES
Generalmente la microbiologa de alimentos es muy importante, por sus

aplicaciones alimenticias, cumpliendo funciones beneficiosas o perjudiciales en la
sociedad humana. Son necesarios para la elaboracin de pan, queso, cerveza,
antibiticos, vacunas, vitaminas, enzimas y otros productos importantes.
En la determinacin de coliformes totales a partir de la muestra del jamn no se

encontraron gneros escherichia, enterobacter, citrobacter, proteus y klebsiella de
las cuales son bacilos Gram negativos , son formadores de gas y fermentan la
lactosa , pero tambin son aerobios y anaerobios facultativos su crecimiento es de
una temperatura optima de 37C en un periodo de 48horas.
Los coliformes totales son muy importantes ya que en esta prctica nos aporta
mucho porque nos funcion como un indicador, sin embargo, son tiles para
aplicarse en deteccin de prcticas sanitarias deficientes en el manejo de
procesos de cualquier producto alimenticio, por ello tambin es importante
aplicarse a las normas alimenticias, es decir si el alimento esta en los lineamientos
adecuados para que salga a la venta este producto.
11
INGENIERA QUMICA
La determinacin de entorobacteriaceae es muy importante ya que una industria

necesita llevar las reglas adecuadas para que su producto este en los
lineamientos segn NOM-092-SSA1-1994, por eso es necesario que aprendamos
a determinar aplicando adecuadamente el procedimiento de identificacin y
cuantificacin de los microorganismos, sin embargo en nuestro muestreo nuestros
resultados fueron negativos porque no se encontraron colonias, a pesar de ello el
jamn Fud cumpli con los trminos segn las normas que rigen los alimentos.
8. CONCLUSIN
En la determinacin mediante el mtodo de en cuenta en placa nuestros

resultados dieron negativos prcticamente no fueron contaminados dado por ello
que aseguramos que las condiciones de trabajo en esta determinacin fueron
optimas en los resultados.
Tambin se demostr que en este mtodo de la determinacin de coliformes

totales de cuenta en placa que se contuvo los pasos necesarios o procedimientos
necesarios para el desarrollo de microorganismos evaluados gracias a los ptimos
resultados de estos diversos microorganismos.
Principalmente esta determinacin fue muy interesante ya que esta prctica fue
realmente importante para tratar el jamn que compramos, pero a pesar de ello
aprendimos , porque es muy importante saber determinar los diferentes
microorganismos que existen en un alimento , a pesar de eso es til para nuestra
formacin.
12
INGENIERA QUMICA
9. Sugerencias Didcticas
1.- Realice un diagrama de flujo de la metodologa de coliformes totales en
alimentos por el mtodo de la cuenta en placa.
Mtodo de la cuenta en placa en el jamn
Esterilizacin del material
Pesar los reactivos agar billis y rojo violeta para el cultivo, y fosfato
monobsico para elaborar la solucin diluyente.
Una vez prepara las soluciones para el cultivo

se ponen a hervir.
Esterilizacin de las soluciones de cultivo y la solucin de trabajo a 121+-1,

durante 15 minutos .
Pesar una cantidad de 10 g de muestra por analizar en un recipiente o bolsa plstica esteriles de
tamao adecuado. Adicionar un volumen de 90 ml del diluyente llevado a una temperatura similar a
la de la muestra.
Una vez sacado las soluciones de la autoclave, se deja enfriar hasta

45C
Utilizar pipetas diferentes para cada disolucin
Transferir 10 ml de la disolucin primaria (10-1), a un matraz Erlenmeyer conteniendo 90 ml del diluyente esteril,
dilucin (10-2) a la temperatura apropiada, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente, mezclar
cuidadosamente. Las diluciones de 10-3 y 10-4, transfiriendo 10 ml de la dilucin anterior a un matraz
Erlenmeyer con 90 ml de solucin diluyente esteril.
Se procede a meterlas en la incubadora, monitoreando cada 24 horas durante 2 das
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INGENIERA QUMICA
2. Mapa conceptual importancia de de coliformes totales en los alimentos
COLIFORMES TOTALES
Son bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no

esporulados
La principal bacteria de
este grupo es la
Por consiguiente, no son
Escherichia Escherichia coli cuya
tiles como ndice de
Klebsiella agentes patgenos fecales,
presencia en los alimentos
Enterobacter pero pueden utilizarse indica una posible
Citrobacter contaminacin fecal por lo
como indicador para
alimentos.. cual el consumidor en caso
de ingerir ese alimento
podra estar expuesto a
bacterias entricas
Los coliformes pueden proliferar en gran cantidad de

alimentos, en agua y productos lcteos. Pueden ser
fcilmente destruidos por el calor utilizado en las diversas
etapas de elaboracin). En productos lcteos y otros no
indica contaminacin fecal sino que refleja la higiene
general de la planta industrial.
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INGENIERA QUMICA
3. Investigar la normatividad vigente de coliformes totales en diferentes

alimentos y realice un cuadro comparativo
Alimentos Limites maximos permisibles

Helados y sorbestes <100 UFC/g o ml
Mezclas o bases para helados <50 UFC/g o ml
LECHE, FRMULA LCTEA, PRODUCTO <20 UFC/g o ml
LCTEO COMBINADO, PASTEURIZADOS.
LECHE, FRMULA LCTEA, PRODUCTO <10 UFC/g o ml
LCTEO COMBINADO; PASTEURIZADOS
O DESHIDRATADOS.
Mantequilla <10 UFC/g o ml
Cremas <10 UFC/g o ml
Leche condensada azucaradas <10 UFC/g o ml
Leche fermentada o acidificada <10 UFC/g o ml
Dulces a base de leche <10 UFC/g o ml
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INGENIERA QUMICA
4. mapa mental de microorganismos en otros aimentos
CLOSTRIDIUM
perfringens
TIPOS DE
MICROORGANISMOS EN
ALIMENTOS
COMPYLOBACTER
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INGENIERA QUMICA
5.- Medidas de seguridad obligatorias en el laboratorio de Microbiologa de

Alimentos
El objetivo de esta seccin es dar a conocer las reglas bsicas de higiene y

seguridad a seguir en un laboratorio de microbiologa.
El trabajo en un laboratorio de Microbiologa de Alimentos implica la exposicin a

microorganismos y algunos pueden ser potencialmente patgenos. La aplicacin
correcta de las reglas de seguridad e higiene determina la seguridad de las
personas que se encuentren en el laboratorio.
Las normas de seguridad y contencin microbiolgica describen los requisitos

indispensables para los laboratorios en donde se manipulan microorganismos.
La siguiente clasificacin de riesgos se basa en la patogenicidad del

microorganismo, el modo de transmisin y la gama de huspedes, la
disponibilidad de medidas preventivas y la disponibilidad del tratamiento eficaz.
Grupo de riesgo 1: Riesgos individuales y de bajo riesgo para la comunidad.

Microorganismos que son poco probable que causen dao a la poblacin humana,
vegetal o animal. Como ejemplo de microorganismos de este grupo se tienen:
Aerobacter, Alcaligenes, Erwinia, Klebsiella, Aspergillus, Botritys, Saccharomyces.
Grupo de riesgo 2: Riesgo individual moderado, riesgo comunitario limitado.

Microorganismos que son poco probable que sean un riesgo significativo para el
personal de laboratorio, la comunidad, la ganadera o el medio ambiente, las
exposiciones de laboratorio pueden causar la infeccin. El tratamiento es eficaz y
las medidas preventivas se encuentran disponibles. El riesgo de propagacin es
limitada. Dentro de este grupo se encuentran: Actinomyces bovis, Bacillus
anthracis, Bordetela, Clostridium perfinges, Legionella, Vibrio cholerae,
Blastomyces, Trichoderma.
17
INGENIERA QUMICA
Grupo de riesgo 3: Riesgo individual alto, riesgo a la comunidad moderado.

Microorganismos que provocan generalmente una enfermedad en humanos o
animales grave y puede representar un riesgo significativo para los trabajadores
de laboratorio.
Se podra presentar un nmero limitado de riesgo moderado si se propaga en la

comunidad o el medio ambiente, pero hay medidas de prevencin general o
tratamientos eficaces. Dentro de este grupo se considera a Brucella, Francisella,
Mycobacterium bovis, Pseudomonas mallei, Salmonella paratyphi A, Salmonella
typhi, Yersinia pestis, Coccidioides immitis, Epidermophyton, entre otros.
Grupo de riesgo 4: Alto riesgo individual y comunitario. Microorganismos que

normalmente producen enfermedad a humanos o animales y ponen en peligro la
vida, representa un riesgo significativo para los trabajadores de laboratorio y
puede ser fcilmente transmisible de un individuo a otro. El tratamiento eficaz y las
medidas preventivas no estn generalmente disponibles.
En este grupo generalmente se consideran los virus como Arenaviridae virus de

Lassa, Junn y Machupo, Sabia, Guanarito; Bunyaviridae gnero Nairovirus
Crimean-Congo hemorrhagic fever Filoviridae: virus de Marburg; virus de Ebola;
Flaviviridae: complejode la encefalitis Tick-borne; incluyendo encefalitis rusa, de
primavera - verano; virus del bosque de Kyasanur; virus de la fiebre hemorrgica
de Omsk; Herpesviridae; Alphaherpesvirinae; gnero Simplexvirus: Herpes B virus
(virus del mono) Poxviridae gnero Orthopoxvirinae Variola Monkeypox.
El conocimiento de las medidas de seguridad y precaucin son pre-requisitos

indispensables de trabajo en el laboratorio de microbiologa. Las medidas de
seguridad que a continuacin se describen coadyuvan a reducir los peligros
inherentes en el uso de material que, hasta cierto nivel, se puede considerar como
potencialmente peligroso. Se espera que todos los alumnos y profesores observen
18
INGENIERA QUMICA
las medidas de seguridad al estar trabajando en el Laboratorio de Microbiologa de

Alimentos.
Medidas de seguridad en el laboratorio de microbiologa de alimentos
Recomendaciones generales:
1. Es importantes que antes de la primera sesin prctica en laboratorio se

ubiquen las regaderas de seguridad, extinguidores, lavaojos, botiqun as como
familiarizarse con el uso adecuado de los mismos.
2. Se debe utilizar bata de algodn perfectamente abotonada y limpia. La bata

debe llegar a la rodilla, no se permitir el uso de filipinas debido a que stas no
ofrecen la proteccin requerida. Asimismo, se sugiere que la bata sea de color
blanco para facilitar la identificacin de posibles derrames.
3. Se recomienda el uso de calzado cerrado y suela antiderrapante. El uso de

sandalias con calcetines no es apropiado para trabajar en el laboratorio.
4. El uso de pantalones cortos o falda no est permitido dentro del laboratorio.
5. El cabello largo debe ser recogido en la parte de atrs de la cabeza para evitar
contacto con soluciones, mecheros o cultivos microbianos.
6. Comer, beber, fumar, aplicar cosmticos y la manipulacin de lentes de

contacto no est permitido dentro del laboratorio.
Papel, lpices, dedos y cualquier otro objeto deben mantenerse alejados de la

boca y ojos.
7. Est prohibido pipetear o tocar cualquier tipo de material con la boca. Se deben
utilizar bulbos de seguridad o pro-pipetas adecuadas al volumen de trabajo.
Cuando se utilicen pipetas automticas, asegurarse de desechar las puntas en los
contenedores apropiados dispuestos por la coordinacin de laboratorios.
19
INGENIERA QUMICA
8. Cualquier tipo de herida o abrasin debe ser cubierta para prevenir infecciones.
9. Se deben utilizar guantes durante la manipulacin de material txico o corrosivo

y se deben desechar adecuadamente antes de tocar materiales comunes como
tapones, tubos, manijas, etc.
10. Cuadernos, chamarras, suteres, bolsas, mochilas, etc. no deben ponerse

sobre la superficie de las mesas de trabajo. Utilizar los espacios designados para
ello.
11. Se deben utilizar los desinfectantes indicados por el profesor.
a) Es necesario lavarse las manos con jabn y utilizar gel sanitizante al inicio y al
final de la sesin de laboratorio; as como al terminar de manipular cualquier tipo
de cultivo o material que pueda estar contaminado.
b) La superficie de trabajo debe ser desinfectada (ej. fenol 5%; benzal 5%, cloro
5%) al inicio y al trmino de la sesin de trabajo, as como en caso de algn
derrame de material infeccioso.
12. Las asas de inoculacin utilizadas para transferir cultivos deben ser
esterilizadas por flameado al rojo vivo antes y despus de cada uso. Se debe
flamear el asa de manera vertical. Si el alambre se encuentra cubierto con material
viscoso, es necesario secar al lado de la flama antes de esterilizar para evitar la
formacin de aerosoles que puedan contaminar a quien este manipulando el
material y a los compaeros que se encuentren cerca. Los mecheros deben
permanecer apagados cuando no estn en uso.
13. Para evitar derrames o salpicaduras con cultivos, los tubos y matraces deben
mantenerse de manera vertical. Los tubos no deben ser tomados por las tapas y
no deben ser agitados violentamente. En caso de utilizar el vrtex, sostener el
tubo y la tapa simultneamente.
20
INGENIERA QUMICA
14. TODOS los accidentes como cortadas, quemadas, ruptura de material,

derrames, etc., deben ser reportados inmediatamente al profesor responsable a la
brevedad. En caso de derrames de cultivos bacterianos, se debe proceder como
sigue:
Informar al profesor responsable
Ponerse guantes de neopreno
Adicionar un volumen de cloro o de desinfectante de superficies, igual al del

derrame
Esperar 5 minutos para que las soluciones se mezclen
Limpiar el derrame con toallas absorbentes, procurando el mnimo contacto con

la solucin contaminada
Desechar el material dentro de una bolsa o contenedor esterilizable
Desechar los guantes y lavarse las manos con abundante agua y jabn y
posteriormente utilizar gel desinfectante
15. Todos los desechos slidos y lquidos contaminados como cajas de petri,
diluciones, caldos de cultivo y puntas de pipeta deben ser esterilizados en
autoclave antes de ser desechados en los contenedores dispuestos por la
coordinacin de laboratorios.
Es importante desechar el material biolgico siguiendo las indicaciones del

profesor para evitar que el personal que manipula los desechos se contamine.
16. En caso de que se rompa algn material de vidrio, notificar al profesor y

desechar en los contenedores adecuados para evitar la posibilidad de accidentes
por cortaduras o astillamientos.
17. Antes de salir del laboratorio, asegrate de los siguientes puntos:
21
INGENIERA QUMICA
Todos los cultivos y material contaminante fueron esterilizados en

autoclave y desechados apropiadamente?
Se removieron todas las etiquetas de los tubos y matraces utilizados?
Todo el material que qued en las estufas, refrigeradores y gavetas est

rotulado correctamente?
Se cerraron las llaves del gas y agua correctamente y se apag la luz?
Se limpi adecuadamente el microscopio (en caso de que se haya

utilizado) antes de ser entregado?
Se limpi y sec cualquier derrame de agua o manchas de la mesa de

trabajo, piso y tarjas?
Se desinfect la mesa y superficies de trabajo?
Te lavaste y desinfectaste las manos?
10. BIBLIOGRAFIA
Secretara de Salud. NOM-110-SSA1-1994. Bienes y Servicios. Preparacin y
Dilucin de Muestras de Alimentos para su Anlisis Microbiolgico. Norma Oficial
Mexicana. Mxico.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Tecnic-Basicas-Coliformes-en-
placa_6528.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Cuenta-en-
placa_6527.pdf
. http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-1.htmL
Secretara de Salud. NOM-092-SSA1-1994. Bienes y Servicios. Mtodo para la

cuenta de Bacterias Aerobias en Placa. Norma Oficial Mexicana. Mxico.
22

6ta Practica Micro

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CARRERA:

Determinacin de Coliformes Totales en Alimentos mediante el Mtodo de Cuenta

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

Ramos Hernndez Jonathan

Rodrguez Godnez Loren Karina

Torres Arrevillaga Martin Antonio

Torres Pivaral Eunice Yaritza

Velzquez Jimnez Miguel ngel

Gabriela Mayanin Mendoza Orozco

El grupo de los microrganismos coliformes es el ms ampliamente utilizado en la

Los coliformes totales pertenecen a la familia Enterobacteriaceae, incluye los

2.1. Objetivo General

Analizar y valorar la importancia de los coliformes totales como

Interpretar su presencia segn la normatividad vigente y aplicando

2.2. Objetivo Especifico

Comprender y realizar adecuadamente la determinacin de

Interpretar los resultados obtenidos, de acuerdo con las normas

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METODO DE CUENTA EN PLACA:

La tcnica se basa en contar las unidades formadoras de colonias o UFC

El medio de cultivo no debe fundirse ms de una vez, y debe mantenerse en bao

que la muestra se incorpora al diluyente, hasta que finalmente se adiciona el

1 probeta de 100 ml Plumn

4 pipetas graduadas de 5 y 10 Papel macerado de aluminio

Mechero de bunsen Gasas

Espatula Cubre boca

Fosfato de sodio monobsico

Solucin de hidrxido de sodio

Agar bilis y agar rojo violeta

Disolver 1.7 g de fosfato de sodio monobsico en 25ml de agua destilada, y

Solucin de trabajo: Tomar 1.25 ml de la solucin concentrada y llevar a un litro

En un matraz Erlenmeyer suspender la cantidad necesaria del medio deshidratado

Preparacin de la dilucin primaria.

A partir de muestras liquidas:

a) Para muestras liquidas no viscosas (agua, leche, refrescos, etc) en las

b) Para muestras congeladas de un alimento originalmente liquido o licuable,

c) Para la parte liquida de una muestra heterognea la cual sea considerada

A partir de muestras solidas o semislidas.

Las muestras slidas y semislidas congeladas, deben descongelarse e

Pesar una cantidad de 10 g de la muestra para analizar en un recipiente o bolsa

transferir la cantidad deseada tomando de las capas superiores de la suspensin.

Preparacin de las diluciones decimales adicionales. Utilizar pipetas diferentes

Transferir 10 ml de la dilucin primaria (10-1), a un matraz Erlenmeyer

Realizar diluciones 10-3 y 10-4, transfiriendo 10 ml de la dilucin anterior a un

Duracin del procedimiento.

En general, las diluciones de la muestra deben ser preparadas inmediatamente

Inoculacin e incubacin de la muestra.

Distribuir las cajas estriles en la mesa de trabajo de manera que la inoculacin, la

Utilizando pipetas graduadas diferentes para cada dilucin, agregar 1ml de la

Despus de que esta el medio completamente solidificado en la caja, verter

El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al

Invertir las placas y colocarlas en la incubadora a 35C, durante 24 2 horas.

Despus del periodo especificado para la incubacin, contar las colonias.