Protocolo de Práctica de Laboratorio de Bioquímica

Universidad Nacional Abierta y a Distancia
Vicerrectora Acadmica y de Investigacin

Protocolo para el desarrollo del componente prctico
Laboratorio presencial de bioqumica
BIOQUMICA
Cdigo: 15103
Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD -

Escuela de Ciencias de la Salud (ECISA)
1 Contenido
2 INTRODUCCIN ........................................................................ 6
3 PRE INFORME DE LABORATORIO ................................................ 8
3.1 Portada ............................................................................... 8
3.2 El ndice General .................................................................. 8
3.3 Introduccin ........................................................................ 8
3.4 Revisin bibliogrfica ............................................................ 8
3.5 Materiales y Mtodos ............................................................ 9
3.6 Plan de Trabajo .................................................................... 9
3.7 Nomenclatura ...................................................................... 9
3.8 Referencias ......................................................................... 9
3.9 Anexo ................................................................................. 9
4 INFORME DE LABORATORIO ..................................................... 10
4.1 Portada ............................................................................. 10
4.2 Resumen ........................................................................... 10
4.3 El ndice General ................................................................ 10
4.4 Introduccin ...................................................................... 10
4.5 Revisin bibliogrfica .......................................................... 10
4.6 Materiales y Mtodos .......................................................... 11
4.7 Resultados ........................................................................ 11
4.8 Discusin .......................................................................... 11
4.9 Conclusiones...................................................................... 11
4.10 Recomendaciones ............................................................ 11
4.11 Revisin bibliogrfica ........................................................ 11
4.12 Referencias ..................................................................... 12
4.13 Anexo ............................................................................ 12
5 Practica 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO ................. 13
5.1 NORMAS PERSONALES ........................................................ 13
5.2 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS ... 14
5.3 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE INSTRUMENTACIN ......... 15
5.4 NORMAS DE EMERGENCIA ................................................... 15
5.5 MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS. ....................................... 15
6 Practica 2: PROPIEDADES BIOQUMICAS DE LOS AMINOCIDOS. . 17
6.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO .......................................... 21
6.2 REACCIN CON LA NINHIDRINA .......................................... 22
6.3 REACCIN DE BIURET ........................................................ 23
6.4 REACCION XANTOPROTEICA. ............................................... 24
6.5 REACCION DE MILLON ........................................................ 25
6.6 REACCION DE SAKAGUCHI .................................................. 26
6.7 PREGUNTAS: ..................................................................... 29
7 Practica 3. BIOQUMICAS DE LAS PROTENAS ............................ 31
7.1 PROCEDIMIENTO Y MATERIALES .......................................... 33
7.2 REACCIN DE BIURET ........................................................ 35
7.3 REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS ........................... 36
7.4 DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE PROTENAS:
MTODO DE BRADFORD. ............................................................ 37
7.5 PREGUNTAS: ..................................................................... 41
8 Prctica 4: IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS ...................... 42
8.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO. ......................................... 47
8.2 PRUEBA DE BENEDICT ........................................................ 47
8.3 REACCIN DE FEHLING ...................................................... 48
8.4 REACCIN DE MOLISCH ...................................................... 50
8.5 PRUEBA DE TOLLENS .......................................................... 51
8.6 REACCIN DE LUGOL (YODO) .............................................. 53
8.7 PREGUNTAS ...................................................................... 54
9 Practica 5. CARACTERSTICAS DE LOS CIDOS GRASOS ............. 56
9.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO. ......................................... 57
9.2 SOLUBILIDAD EN LPIDOS .................................................. 57
SAPONIFICACIN ................................................................... 58
9.3 REACCIN CON EL SUDN III .............................................. 59
9.4 PREGUNTAS: ..................................................................... 60
10 BIBLIOGRAFA ...................................................................... 62
Tablas
Tabla 1 Clasificacin de los aminocidos. ......................................... 17

Tabla 2 Aminocidos proteicos con nomenclatura clsica sistema de tres
letras y sistema de una sola letra, impuesto en gentica molecular. .... 18
Tabla 3 Pruebas bioqumicas para identificar aminocidos. ................. 19
Tabla 4 Materiales y reactivos. ....................................................... 21
Tabla 5 Procedimiento a realizar para la reaccin de ninhidrina. ......... 22
Tabla 6 Procedimiento a realizar para la reaccin de Reaccin de
Biuret. ........................................................................................ 23
Tabla 7 Procedimiento a realizar para la reaccin Xantoprotica. ........ 24
Tabla 8 Procedimiento a realizar para la reaccin de milln. ............... 25
Tabla 9 Procedimiento a realizar para la reaccin de Sakaguchi. ......... 26
Tabla 10 Resumen de las reacciones de aminocidos en las diferentes
tcnicas....................................................................................... 28
Tabla 11 Descripcin de reactivos y mtodos. .................................. 31
Tabla 12 Materiales y Materiales y reactivos..................................... 33
Tabla 13 Procedimiento a realizar para la reaccin de Biuret. ............. 35
Tabla 14 Reaccin De Aminocidos Azufrados, Grupos SH. ................ 36
Tabla 15 Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango desde
0 hasta. ...................................................................................... 39
Tabla 16 Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango desde
0 hasta ....................................................................................... 40
Tabla 17 Diferentes ensayos para reconocimiento en carbohidratos. ... 43
Tabla 18 Materiales y reactivos. ..................................................... 47
Tabla 19 Prueba de Benedict (detecta la presencia de azcares
reductores) .................................................................................. 48
Tabla 20 Reaccin de Fehling (detecta la presencia de azcares
reductores) .................................................................................. 49
Tabla 21 Reaccin de Molisch. ........................................................ 50
Tabla 22 Prueba De Tollens. ........................................................... 51
Tabla 23 Reaccin de almidones con lugol (yoduro potsico). ............. 53
Tabla 24 Clasificacin de lpidos. .................................................... 56
Tabla 25 Materiales y Materiales y reactivos..................................... 57
Tabla 26 Determinacin de solubilidad en lpidos. ............................. 58
Tabla 27 Ensayo de Saponificacin. ................................................ 58
Tabla 28 Tincin: Reaccin con el Sudn III. .................................... 60
Ilustraciones
Ilustracin 1 Clasificacin de carbohidratos. ..................................... 43
Ilustracin 2 Molcula de glucosa. .................................................. 47
2 INTRODUCCIN
La gua de prcticas de laboratorio introduce al estudiante en los

procedimientos experimentales ms ampliamente usados en bioqumica.
Incluye anlisis de macromolculas como carbohidratos, lpidos, protenas
y cidos nucleicos. El estudiante tambin se familiarizar de las
instalaciones y los equipos usados en las prcticas de bioqumica. Es de
gran importancia la lectura y compresin del documento con anterioridad
a la asistencia de las prcticas, adems del desarrollo de las consultas
que permitan entender cada procedimiento.
Los objetivos de las prcticas del curso de bioqumica son:
1. Que el estudiante sea capaz de comprender e integrar los conceptos

tericos con la actividad prctica incluyendo una adecuada manipulacin
de las tcnicas de laboratorio, desde la actividad procedimental hasta la
entrega de resultados o informe final.
2. Que el estudiante adquiera una preparacin en Bioqumica que le

permita comprender la transversalidad que tiene la actividad prctica,
tanto en otros cursos del programa de estudio como en las actividades
profesionales que l desempear, as mismo que le permitan desarrollar
una actitud de pensamiento crtico y de liderazgo en el trabajo que se de
en el grupo.
3. Que el estudiante realice las a actividades las practicas, teniendo en

cuenta las normas de seguridad y las indicaciones que del docente
responsable de la prctica considere.
4. Que el estudiante adquiera los elementos formativos que incluye:

lectura previa de esta gua, planeacin de la actividad, asistencia a las
prcticas, resolucin de problemas con la metodologa empleada,
interpretacin de resultados y presentacin de resultados en el informe
de laboratorio.
La bioqumica es una rama de la ciencia encargada de descifrar los
mecanismos esenciales de los seres vivos, con una fase terica y una fase
prctica, la primera se da a travs de los distintos referentes bibliogrficos
y el segundo se apoya en el desarrollo de la gua de prcticas de
laboratorio del curso de bioqumica.
El desarrollo del trabajo prctico se apoya en una serie de pasos que van
describiendo el progreso de una tcnica a travs de mediciones, clculos,
observaciones cualitativas y cuantitativas de los procedimientos
planteados en la gua. La prctica de laboratorio integra, en el estudiante
la habilidad de trabajar en el laboratorio, utilizando las tcnicas ms
habituales de un laboratorio bioqumico y aprendiendo a interpretar los
resultados experimentales.
3 PRE INFORME DE LABORATORIO
En la redaccin de los preinformes se deben conjugar los verbos en tiempo

presente atemporal y en tiempo futuro cuando se indiquen las acciones
que se van a realizar. Esta elaboracin es individual.
Ejemplo La centrifuga gira a 1600 revoluciones por minuto.
La estructura de los preinformes es la siguiente:
3.1 Portada
La pgina de acuerdo a lo establecido por las normas para trabajos
escritos, en el entorno de gestin encuentra un manual de normas APA.
La portada contiene el nombre la universidad, la escuela a que pertenece
el nombre de los integrantes del grupo con los datos necesarios para su
identificacin.
3.2 El ndice General
Presenta toda la informacin del contenido, incluyendo el ndice general,
el ndice de tablas, el ndice de figuras y el ndice de anexos
-ndice General
-ndice de Tablas
-ndice de Figuras
-ndice de Anexos
3.3 Introduccin
Describir las prcticas a desarrollar explicado las principales
caractersticas de las tcnicas, as como, descripcin de objetivos
generales y especficos que da lugar al trabajo experimental. Esta es una
seccin realizada, redactando las ideas de los autores o sea ustedes.
3.4 Revisin bibliogrfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temticas
propuestas por la gua del componente prctico. Se toman los principales
aspectos tericos de acuerdo a la metodologa que se platea para
desarrollar en la gua. Tenga presenta que hay que dar los crditos
respectivos a los autores consultados y las ideas resultantes son
redactadas por el estudiante.
3.5 Materiales y Mtodos
Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las
precauciones a tener, as como describir la informacin relvate que
permita el buen desarrollo de la prctica.
3.6 Plan de Trabajo
Primero que todo identifique quien es el docente encargado de la prctica,

describa los principales datos personales, as como la identificacin de la
fecha lugar de la prctica. Tenga presente las normas de bioseguridad y
como debe asistir al desarrollo del componente prctico (Uso de pantaln
jean, zapato cerrado, bata blanca, guantes etc.). Define aqu que
elementos debe tener en cuenta para el desarrollo de la prctica de
acuerdo a las indicaciones que haga el docente de la prctica y la
descripcin que se de en la gua.
3.7 Nomenclatura
La Nomenclatura deber ser presentada en tablas, que presenten
ordenadamente sustancias qumicas o unidades, identificadas con
smbolos, abreviaturas.
3.8 Referencias
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita
la remisin a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus caractersticas
editoriales. Por lo general y de acuerdo con la normas para trabajos
escritos, la informacin bsica a ofrecer es Autor(es). /Ao de
publicacin./Ttulo:/subttulo./Mencin del traductor y/o
editor./Edicin./Ciudad y/o pas de publicacin en caso necesario, /Casa
editora. /Pginas o volmenes. / (Mencin de serie)
Esta informacin se detalla el final del documento y su descripcin es de
acuerdo a las normas para trabajos escritos.
3.9 Anexo
En stos se deben colocar toda aquella informacin referente a fichas de
seguridad, reactivos, equipos y otra informacin que se considere
relvate.
4 INFORME DE LABORATORIO
En la redaccin de los informes se deben conjugar los verbos en tiempo
pasado. Esta actividad es grupal.
La estructura de los informes es la siguiente:
4.1 Portada
La pgina de acuerdo a lo establecido por las normas para trabajos
escritos, en el entorno de gestin se encuentra un manual de normas APA.
La portada contiene el nombre la universidad, la escuela a que pertenece
el nombre de los integrantes del grupo con los datos necesarios para su
identificacin
4.2 Resumen
Indicar una breve resea de lo hecho durante la prctica y los objetivos,
principales resultados y las conclusiones del trabajo realizado.
4.3 El ndice General
El contenido, incluyendo el ndice general, el ndice de tablas, el ndice de
figuras y el ndice de anexos
-ndice General
-ndice de Tablas
-ndice de Figuras
-ndice de Anexos
4.4 Introduccin
Describir las prcticas a desarrollar explicado las principales
caractersticas de las tcnicas, as como, descripcin de objetivos
generales y especficos que da lugar al trabajo experimental. Esta es una
seccin realizada, redactando las ideas de los autores o sea ustedes.
propuestas por la gua del componente prctico. Se toma los principales
aspectos tericos de acuerdo a la metodologa que de platea para
4.6 Materiales y Mtodos
Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las
precauciones a tener, as como describiendo la informacin relvate que
permita el buen desarrollo de la prctica.
4.7 Resultados
Presentar la informacin sobre el desarrollo de las prcticas de forma
estructurada, completa y ordenada de la actividad experimental.
Presentando grficos, tablas, clculos y dems notas que describa la
ejecucin de la prctica.
4.8 Discusin
La discusin contendr un anlisis crtico de los resultados obtenidos de
la actividad prctica y los conceptos tericos.
4.9 Conclusiones
Derivan de los resultados y la discusin del trabajo.
4.10 Recomendaciones
El trabajo realizado debera mostrar nuevos caminos para otras
experiencias de laboratorio similares. En esta seccin se enumerarn
claramente las actividades que podran realizarse para proyectar la
informacin obtenida en la investigacin.
escritos la informacin bsica a ofrecer es Autor(es)./Ao de
editor./Edicin./Ciudad y/o pas de publicacin en caso necesario,/Casa
editora. /Pginas o volmenes./ (Mencin de serie )
Esta informacin se detalla el final del documento.
propuestas por la gua del componente prctico. Se toman los principales
aspectos tericos de acuerdo a la metodologa que se platea para
4.12 Referencias
escritos la informacin bsica a ofrecer es Autor(es)./Ao de
editor./Edicin./Ciudad y/o pas de publicacin en caso necesario,/Casa
editora. /Pginas o volmenes./ (Mencin de serie )
Esta informacin se detalla el final del documento.
4.13 Anexo
En stos se deben colocar toda aquella informacin referente a fichas de
seguridad, reactiva y equipos esta otra informacin que se considere
relvate.
5 Practica 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO
Referente terico seguridad y normas de laboratorio

Se entiende la prctica de laboratorio, como la estrategia pedaggica que
facilita la consolidacin del aprendizaje y el desarrollo de competencias
disciplinares. La prctica de laboratorio puede desarrollarse en una sesin
o en varias sesiones de acuerdo a las indicaciones que se den en la
programacin de cada periodo acadmico.
En el laboratorio se realiza, para el caso del curso de bioqumica, prcticas

experimentales: en donde se aprenden a manipular equipos, reactivos
qumicos, conformndose pequeos grupos de trabajo para el desarrollo
de la actividad. Para llevar a cabo las prcticas de laboratorio se requiere
que el estudiante tenga un conocimiento terico bsico sobre el tema y
lea detenidamente la gua de laboratorio.
5.1 NORMAS PERSONALES
La vestimenta deber ser apropiada y cmoda, que facilite la movilidad

para la actividad que se desarrolla en los laboratorios. Debe cubrir reas
considerables de la piel con pantalones (jeans), blusas con mangas, la
bata y guantes.
Use calzado cerrado que cubra completamente el pie. El alumno debe

portar en todo momento Bata blanca de Laboratorio.
Nunca ingerir alimentos, beber o masticar chicle dentro del laboratorio,

igualmente evitar tocar partes del rostro y llevar las manos a la boca o
introducir lapiceros u otros en boca nariz y odos.
Asistir puntualmente en la fecha y hora programada, igualmente al entrar

a las instalaciones del laboratorio se recomienda que se haga cuando est
presente el docente encargado de la prctica, as como no ausentarse
antes de terminar la prctica.
El rea del laboratorio es exclusivamente para realizar el trabajo de la
prctica; cualquier tipo de accin social como cortejar, charlas ajenas a
la prctica e igual que las bromas pueden causar prdida de tiempo y
posibles incidentes de alta gravedad.
5.2 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS
Cuando se tiene que hacer una reaccin qumica se debe escoger el

recipiente adecuado a la cantidad que se va a usar. Los ensayos se hacen
en tubos de ensayo o en placas de gotas, nunca en vasos, matraces, etc.
No usar recipientes alimenticios para contener productos qumicos e
igualmente cualquier recipiente que se utilice para la recepcin productos
es necesario rotular, brindando la mayor informacin sobre la sustancia
contenida.
De los materiales de laboratorio No utilice vidrio agrietado, el material de
vidrio en mal estado aumenta el riesgo de accidente. No deben utilizarse
para pipetear jeringuillas provistas de aguja hipodrmica o aspirar con la
boca pipetas de vidrio. Compruebe la temperatura de los materiales antes
de cogerlos directamente con las manos.
Si cuenta con sistemas de extraccin y renovacin mecnica de aire

activados, mantngalos siempre en funcionamiento. Utilizar las campanas
extractoras siempre que sean posible.
Para detectar el olor de una sustancia, no se debe colocar la cara
directamente sobre el recipiente: utilizando la mano abierta como
pantalla, es posible hacer llega una pequea cantidad de vapor hasta la
nariz. Los frascos deben cerrarse inmediatamente despus de su uso.
Al momento de trabajar con cido, para diluirlos vierta el cido sobre el
agua, nunca al contrario.
No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos
utilizados. Nunca debe sacar sustancias qumicas del laboratorio sin
autorizacin.
5.3 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE INSTRUMENTACIN
Cuando se determinan masas de productos qumicos con balanza se

utilizar un recipiente adecuado.
Se debe mantener perfectamente limpio y seco el lugar dnde se
encuentre situado cualquier instrumento con contactos elctricos. Leer las
instrucciones de uso de los instrumentos.
Debe revisarse el material de vidrio para comprobar posibles fisuras,
especialmente antes de su uso a vaco o presin.
5.4 NORMAS DE EMERGENCIA
En caso de tener que evacuar el laboratorio, cerrar la llave del gas y salir
de forma ordenada siguiendo en todo momento las instrucciones que haya
impartido el Profesor. Localizar al iniciar la sesin de prcticas los
diferentes equipos de emergencia en el correspondiente laboratorio:
Duchas y lavaojos, Botiqun, Absorbente para derrames, Alarma de
emergencia, Salida de emergencia y Recipiente para el vidrio roto.
Al finalizar la prctica, limpia el rea de trabajo y entrega los materiales

utilizados limpios y en buenas condiciones. Por ltimo esperar las
indicaciones para retirarse de las instalaciones del laboratorio.
5.5 MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS.
Se har la discusin sobre las normas de seguridad antes descriptas y las

que encuentran en el Reglamentacin y Normas de Bioseguridad en los
Laboratorios de la
UNAD y Otras Disposiciones.
Identifique la sealizacin que encuentra en el laboratorio, fotografi o

dibuje los pictogramas y describa en el informe de laboratorio que
significan con que elementos de seguridad se cuenta. (Duchas, extintores,
cmaras extractoras, etc.)
Preguntas
a) Escriba el nombre del reactivo y la formula qumica de los
productos usados en la prctica.
Ejemplo, Nitrato de plata (AgNO3)
c) Escriba una propiedad fsica de la sustancia.
Ejemplo, Son cristales blancos Densidad: (20/4): 4,352
d) Mencione posibles riesgos que representa la sustancia para
la salud.
En contacto con la piel y ojos puede provocar irritacin y quemaduras.
Por ingestin puede causar irritaciones en las mucosas de la boca,
garganta, esfago y tracto intestinal.
e) Indique cual es el equipo o la vestimenta de
seguridad necesaria para manipular la sustancia.
Usar equipo respiratorio adecuado. Utilizar guantes y gafas
apropiadas. Utilizar ropa de trabajo adecuada (bata de laboratorio) y
lavarse las manos y la cara antes y al finalizar el trabajo.
f) Resuma la informacin obtenida en el rea de reactividad
del smbolo de diamante
En cuanto a la salud (rombo azul), el nmero 2 indica que es un reactivo
peligroso. En cuanto a inflamalidad (rombo rojo), el nmero 0 indica que
no es inflamable. En cuanto a la reactividad (rombo amarillo), el nmero
0 indica que es estable. En cuanto a algn riesgo especfico (rombo
blanco), no presenta alguno.
6 Practica 2: PROPIEDADES BIOQUMICAS DE LOS
AMINOCIDOS.
Referente terico de aminocidos
Los aminocidos se denominan as por tener un grupo amino (-NH2) y un

grupo carboxilo (-COOH).
Es posible agrupar los aminocidos en clases principales basadas en las
propiedades de sus grupos R, en especial de su polaridad, o tendencia a
interaccionar como el agua a pH biolgico (cerca del pH 7.0). La polaridad
de los grupos R vara enormemente desde totalmente apolar o hidrofbico
(insoluble en agua) hasta altamente polar o hidroflico (soluble en agua).
Tabla 1 Clasificacin de los aminocidos.
Grupos R Propiedades de los aminocidos
Apolares Los grupos R de esta clase de aminocidos son

alifticos apolares e hidrofbicos.
Las cadenas laterales de la alanina, valina, leucina
e isoleucina tienden a agruparse entre s en las
protenas, estabilizando las estructuras proteicas a
travs de interacciones hidrofbicas.
Otros aminocidos que conforman este grupo son:
glicina, metionina y prolina.
Aromticos Fenilalanina, Tirosina y Triptfano, con sus

cadenas laterales aromticas, son relativamente
apolares (hidrofbicos). Todos ellos pueden
participar de interacciones hidrofbicas.
Polares sin Los grupos R de estos aminocidos son ms solubles

carga en agua, que los aminocidos apolares, debido a que
contienen grupos funcionales que forman puentes de
hidrgeno con el agua.
Incluye este grupo la serina, treonina, cistena,
asparagina y glutamina.
Cargados Estos aminocidos pueden tener el grupo R cargado

positivamente (bsicos) o negativamente (cidos),
siendo ms hidroflicos que los dems aminocidos.
Los aminocidos en los que los grupos R tienen una

carga neta positiva significativa a pH 7.0 Lisina,
arginina e histidina
Con una carga neta negativa a pH 7.0 son:

aspartamo y el glutamato.
La cadena R es de estructura variable y es la responsable de las

caractersticas particulares de los AA y de su clasificacin, en funcin de
sta podemos agrupar a los 20 aminocidos, en diversas categoras as
mismo, la nomenclatura puede hacerse utilizando un cdigo de tres
letras o de una, tal como se observa en la siguiente tabla:
Tabla 2 Aminocidos proteicos con nomenclatura clsica sistema

de tres letras y sistema de una sola letra, impuesto en gentica
molecular.
Nomenclatur
a
Una Tres Nombre

Clasificacin
letra letras
A Ala Alanina
G Gly Glicina
I Ile Isoleucina Ae Apolares alifticos
L Leu Leucina Ae
V Val Valina
F Phe Fenilalanina Ae
Apolares aromticos
W Trp Triptfano Ae
C Cys Cisteina
Apolares con azufre
M Met Metionina Ae
N Asn Asparagina
Q Gln Glutamina Polares alifticos y

S Ser Serina sin carga
T Thr Treonina Ae
Y Tyr Tirosina Polar aromtico y sin

carga
R Arg Arginina
Polar con carga
H His Histidina Ae
positiva
K Lys Lisina
D Asp Ac. Asprtico o Aspartato Polar con carga

E Glu Ac. Glutamico o Glutamato negativa
P Pro Prolina Iminoacido
Ae = Aminocido esencial
Tomado de: Manual de Prcticas de Laboratorio de bioqumica,
Universidad Nacional Autnoma de Mxico
Tabla 3 Pruebas bioqumicas para identificar aminocidos.

Prueba bioqumica Descripcin de la reaccin qumica entre los
aminocidos y los reactivos.
El grupo alfa-amino de los aminocidos forma

Reaccin con la complejos coloreados con la ninhidrina: violeta
ninhidrina azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo
grupo amino es primario, amarillo para la
(Hidrato de
prolina e hidroxiprolina y caf para la
tricetohidrindeno)
asparagina que tiene un grupo amido en la
cadena lateral. Esta reaccin tambin identifica
los grupos alfa-amino libres presentes en
pptidos y protenas
El anillo fenlico tiene un comportamiento

caracterstico frente a las sales de Mercurio a
Reaccin de Milln pH cido, formando complejos color rojo ladrillo
con el anillo fenlico de la tirosina y las
protenas que la contienen.
Los anillos aromticos presentes en algunos

aminocidos reaccionan con cido ntrico
Reaccin concentrado formando nitroderivados de color
Xantoprotica amarillo o anaranjado por lo cual esta reaccin
permite reconocer la presencia de Tirosina,
Fenilalanina y Triptfano.
El grupo guanidinio presente en la cadena

lateral de la Arginina reacciona con soluciones
Reaccin de
de alfa naftol en presencia de Bromo en medio
Sakaguchi
alcalino formando complejos coloreados rosados
o rojos.
La presencia de anillos aromticos fenlicos o

nitrogenados en la cadena lateral de los
Aminocidos se puede identificar mediante la
reaccin con cido sulfanlico y nitrito de Sodio
Reaccin de Ehrlich
por formacin de sales de Diazonio fuertemente
coloreadas permitiendo as detectar la presencia
de Tirosina e Histidina libres o formando
pptidos y protenas.
El anillo indlico presente en la cadena lateral

de los alfa-aminocidos libres o haciendo parte
Reaccin de
de pptidos y protenas se puede reconocer
Adamkiewick o
mediante reaccin con el cido glioxlico a pH
Hopkins Cole
cido, puesto que forma complejos de
coloracin violeta o
Reaccin con Los Aminocidos azufrados como Metionina,

acetato de Plomo Cistena y Cistina se reconocen por la formacin
alcalino de precipitados de Sulfuro de Plomo de color
gris oscuro o negro que se forman cuando
reacciona con Acetato de Plomo en medio
alcalino.
6.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

Tabla 4 Materiales y reactivos.
Reactivos Materiales Cantidad
Reactivo ninhidrina Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15
NaOH Gradilla 2
Sulfato cprico Pinza para tubos 2

(CuSO)
cido Pipetas Pauster con bulbo 4

actico(CH3COOH)
Cloruro de sodio Beaker o vasos de precipitados de 5

(NaCl) 500 mL
albmina Estufa 1
cido ntrico Cmara de flujo laminas 1

(HNO3)
Hidrxido de sodio Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 4

(NaOH) 10 ml.
Acetato de Plomo Pera de goma para pipetas 4
Naftol
Hipoclorito de
sodio
Reactivo de
Hopkins- Cole
cido sulfrico
(H2SO)
Reactivo de Milln
Aminocidos:
Glicina, tirosina,
triptfano,
fenilalanina y
arginina
Fenol
Albumina de huevo
Procedimiento
6.2 REACCIN CON LA NINHIDRINA
El grupo alfa-amino de los aminocidos forma complejos coloreados con

la ninhidrina: violeta azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo
grupo amino es primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y caf
para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena lateral.
Esta reaccin tambin identifica los grupos alfa-amino libres presentes
en pptidos y protenas. Precauciones la ninhidrina es toxica.
Tabla 5 Procedimiento a realizar para la reaccin de ninhidrina.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo
con 1.5 mL Preparar los tubos de Agregar 2 ml de

1 ninhidrina
de Glicina1% ensayo. solucin de
ninhidrina
con 1.5 mL
(0.3%)
2 de ninhidrina
Agregue a cada tubo
Albmina1%
de ensayo 1.5mL de la
con 1.5 mL solucin
3 de Tirosina ninhidrina correspondiente.
1%

con 1.5 mL
4 de Glicina ninhidrina
1%
con 1.5 mL 2 ml de solucin 1.5 ml de
5 de Triptfano ninhidrina (0.3%) de ninhidrina a solucin
1% cada tubo. respectiva
+
Tubos de ensayo en un Bao de agua

bao de agua hirviente hirviente por 10
con 1.5 mL por unos 10 minutos. minutos.
6 de Leucina al ninhidrina
1%
Observar y tomar
apuntes de los
cambios.
6.3 REACCIN DE BIURET
Esta reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los

aminocidos ya que se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH
que se destruye al liberarse los aminocidos. El reactivo de Biuret lleva
sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se
une con los enlaces peptdicos formando un complejo de color violeta
(Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentracin de
protenas.
Tabla 6 Procedimiento a realizar para la reaccin de Reaccin de

Biuret.
NaOH 2,5N
con 5 ml de
solucin de + Preparar los tubos 1 ml de
1
Leucina al de ensayo.
sulfato NaOH 2,5N
1%
cprico
NaOH 2,5N +
con 1.5 mL
+ Agregue a cada 3 gotas de
2 de
tubo de ensayo solucin de
Albmina1% sulfato
agregue 1 ml de sulfato cprico al
cprico
1%
NaOH 2,5N de la
NaOH 2,5N
solucin
con 1.5 mL
+ correspondiente.
3 de Tirosina
1% sulfato
cprico
Agregue 3 gotas de
NaOH 2,5N solucin de sulfato
con 1.5 mL cprico al 1% a 5ml de solucin
+
4 de Glicina cada tubo de respectiva
1% sulfato ensayo.
cprico

Agite cada tubo de

NaOH 2,5N ensayo
con 1.5 mL
de +
5
Triptfano
sulfato Observar y tomar
1%
cprico apuntes de los
cambios.
6.4 REACCION XANTOPROTEICA.

Los anillos aromticos presentes en algunos aminocidos reaccionan con
cido ntrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o
anaranjado por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia de
Tirosina, Fenilalanina y Triptfano.
Tabla 7 Procedimiento a realizar para la reaccin Xantoprotica.

HNO3 Agregue, 0,5 ml

con 1.5 ml de HNO3
1 de solucin + Preparar los tubos de
de ensayo. +
NaOH
Triptfano
1%
Agregue, 0,5 ml de
HNO3 HNO3 concentrado en
con 1.5 mL cada tubo, en la
+
2 de campana de
Albmina1% NaOH extraccin.
1.5 ml de solucin
respectiva
HNO3 Retire los tubos del +
con 1.5 mL bao y djelos enfriar.
+ Bao de agua
3 de Metionina hirviente por 10
1% NaOH
minutos.
Agregue lentamente 1
ml de Amoniaco +
(NH4OH) concentrado
Agregue 1 ml de
en la campana de
HNO3 Amoniaco
extraccin o 1.5 mL.
con 1.5 mL (NH4OH) 1.5 mL
de NaOH al 40%,
de + de NaOH al 40%.
4
Fenilalanina NaOH
+
1%
Observar y tomar
observe el cambio
apuntes de los
de color
cambios.
6.5 REACCION DE MILLON
El anillo fenlico tiene un comportamiento caracterstico frente a las sales

de Mercurio a pH cido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo
fenlico de la tirosina y las protenas que la contienen.
Tabla 8 Procedimiento a realizar para la reaccin de milln.

Reactivo Agregue 15 gotas
con 1.5 ml de Milln del Reactivo de
Preparar los tubos de
de solucin Milln
1 + ensayo.
de Tirosina
+
1% sulfato
cprico
agregue 15 gotas del
Reactivo Reactivo de Milln a
de Milln cada tubo de ensayo
con 1.5 mL
2 de +
Albmina1%
sulfato Agregue 3 gotas de
cprico solucin de sulfato 1.5 ml de
cprico al 1% a cada solucin
Reactivo respectiva
tubo de ensayo.
de Milln
con 1.5 mL +

3 de Leucina +
1% Retire con cuidado los Bao de agua
sulfato hirviente por 10
tubos de ensayo del
cprico minutos
bao de Mara y
colquelos en la +
gradilla.
Dejar enfriar.

Observar y tomar
apuntes de los
cambios.
6.6 REACCION DE SAKAGUCHI
El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina

reacciona con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio
alcalino formando complejos coloreados rosados o rojos
Tabla 9 Procedimiento a realizar para la reaccin de Sakaguchi.
Hidrxido Enfre en bao de

1 con 5 mL de Sodio hielo por 10
de solucin (NaOH minutos.
de Arginina + Preparar los tubos de +
1% ensayo.
alfa-naftol 1 ml de
Hidrxido de
+
Sodio (NaOH) al
Enfre en bao de
hipoclorito 5%
hielo por 10 minutos.
de Sodio
+

Hidrxido
Dejar enfriar 10
de Sodio 1 ml de Hidrxido de
minutos.
(NaOH Sodio (NaOH) al 5%
a cada tubo de +
con 1.5 mL +
ensayo.
2 de 2 gotas de alfa-
alfa-naftol
Albmina1% naftol al 1%.
+
Dejar enfriar 10 +
hipoclorito minutos.
2 gotas de
de Sodio
hipoclorito de
Hidrxido Sodio al 10%.
Agregue con un
de Sodio
gotero, 2 gotas de
(NaOH
alfa-naftol al 1% a
con 1.5 mL + cada tubo de ensayo.
3 de protena
alfa-naftol
de trigo 1%.
+ Agregue 2 gotas de
hipoclorito de Sodio 5 ml de solucin
hipoclorito
al 10% a cada tubo. respectiva
de Sodio

Hidrxido
de Sodio Observar y tomar
(NaOH apuntes de los
cambios.
+
con 1.5 mL
4
de Leucina alfa-naftol
+
hipoclorito
de Sodio
Tabla 10 Resumen de las reacciones de aminocidos en las
diferentes tcnicas.
NINHIDRINA
(+) Violeta o
(-) incolora (+) Rojo o
amarillo
amarillo
No es claro
fuerte
protena ni protena,
Hidroxiprolin
aminocido polipptido o
a o prolina
aminocido
BIURET
(-) Azul o (+) Violeta

amarillo Protenas y
aminocidos polipptidos
XANTOPROTICA
COAGULACIN
(+) (-) No (+)

Amarillo, coagula Coagula
(-) Incoloro
naranja o Histonas, Albmina
Otros verde protaminas so
aminocido Tirosina, o globulinas
s fenilalanina polipptido
o triptfano s
ADAMKIEWICK o
HOPKINS COLE SULFATO DE
AMONIO
(+) Azul o (+) (-) No

(-) Incoloro
violeta Precipita
Triptfano Tirosina o Globulinas Precipita
Fenilalanina
Albmina
s
MILLN
(+) Rojo (-) Incoloro

Grupo SH Tirosina Fenilalanina
SAKAGUCH
I
(+) Negro o
(-) Incolora
gris
(+) Rojo
Otros
Cistena,
aminocido Arginina
cistina,
s
metionina
Tomada:
6.7 PREGUNTAS:
Escriba la reaccin para cada una de las pruebas realizadas.

Proponga de acuerdo a la pruebas una clasificacin de los aminocidos
utilizados y relacione la importancia de la aplicacin de algunas de estas
pruebas aplicadas a otras reas del conocimiento como: microbiologa,
qumica de alimentos entre otras.
Para el siguiente pentapptido, diga cuales pruebas y porque sern
positivas. (ALA-
VAL-GLY-GLU-LYS)
Defina los siguientes trminos: aminocidos, protenas, anlisis
cualitativo, cuantitativo.
7 Practica 3. BIOQUMICAS DE LAS PROTENAS
Referente terico de protenas y aminocidos.

Las protenas son uno de los principales componentes de todas nuestras
clulas. Los aminocidos (compuestos orgnicos) son los ladrillos de
construccin de la protenas. Los aminocidos se agrupan de acuerdo con
su comportamiento qumico. La sntesis de las protenas ocurre mediante
la unin entre s de las cadenas de aminocidos. Los distintos aminocidos
imparten diferentes comportamientos qumicos en la estructura de
las protenas. Debido a la presencia de diferentes aminocidos en las
uniones peptdicas las protenas reaccionan con una variedad de
compuestos formando productos coloreados.
Los aminocidos tiene tres tipos de reacciones qumicas importantes: (1)

reacciones debido a la presencia del grupo carboxilo (COO- ), (2)
reacciones debidas al grupo amino (NH), y (3) reacciones debido al grupo
R.
Las reacciones debidas al grupo carboxilo y al grupo amino son generales
y se dan para todos los aminocidos. Las reacciones del radical R son
reacciones especficas; por ejemplo, cistena da una reaccin para azufre,
triptfano da ciertas reacciones de color debido a que su molcula
contiene el grupo indol, tirosina da otras reacciones de color debido a su
grupo fenlico, etc.
Existen reacciones de coloracin que son especficas para aminocidos de

esas protenas y son importantes tanto para la deteccin como para el
dopaje de aminocidos y protenas. Existen tambin reacciones generales
porque sirven para caracterizar grupos comunes a todas las protenas
como grupos amino o uniones
Tabla 11 Descripcin de reactivos y mtodos.

Mtodo Descripcin Desventajas
Biuret Gornell AG, C. J. Bardawill, and El mtodo se usa para

M. M. DAVID. Determination of soluciones que tienen
serum proteins by means of the
biuret. reaction. J. BioZ. Chem. de 0.5 a 10 mg
177: 751-766, 1949 protena/ml.
Se basa en la reaccin de sales
de Cu+2 con molculas que
Es un mtodo poco
contienen ms de dos enlaces
sensible. Es til
peptdicos en un medio alcalino;
cuando se quiere
el cobre es reducido a Cu+
analizar grandes lotes
formando complejos color
de protena.
prpura que tienen un mximo de
absorcin a 540 nm.
Lowry Lowry, OH, NJ Rosbrough, AL

Farr, and RJ Randall. J. Biol.
Chem. 193: 265. 1951
Este es un mtodo
muy sensible, por lo
Resulta de la reaccin de Biuret que permite trabajar
sobre los enlaces peptdicos, con soluciones muy
adems de la reduccin del diluidas de protenas
reactivo de fosfomolibdato- (0.02 - 0.5 mg
fosfotungstato (Folin-Ciocalteu) protena/ ml)
por las protenas pretratadas con
cobre en medio alcalino, dando
una coloracin azul, determinado
a 650 nm.
El Cu+ y los grupos R de la

tirosina, triptofano y cistena
reaccionan con el reactivo de
Folin, produciendo un producto
inestable que es reducido a azul
de molibdeno/tungsteno.
Bradford Bradford, M. M. (1976) Anal. Muestra interferencias

Biochem. 72, 248 con detergentes
Basado en el Azul Brillante de

Coomasie G-250 cambia de rojo a
azul, al unirse a residuos
aromticos y arginina en las
protenas.
La reaccin entre el colorante y la
protena es muy rpida
(aproximadamente 2 min), y el
completo protena-colorante
permanece disperso en solucin
por un tiempo relativamente
largo.
Rango de deteccin: 0.5-10 mg
protena/ml.
7.1 PROCEDIMIENTO Y MATERIALES
Tabla 12 Materiales y Materiales y reactivos.

Reactivo ninhidrina Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15
NaOH Gradilla 2
Sulfato cprico Pinza para tubos 2

(CuSO)
cido Pipetas Pauster con bulbo 4

actico(CH3COOH)
Cloruro de sodio Beaker o vasos de precipitados de 5

(NaCl) 500 mL
albmina Estufa 1
cido ntrico (HNO3) Cmara de flujo laminas 1
Hidrxido de sodio Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 4

(NaOH) ml y 10 ml.
Acetato de Plomo Pera de goma para pipetas 4
Naftol Vidrios reloj grandes

Hipoclorito de sodio Probeta 100 ml
Reactivo de Hopkins- Baln aforado de 25 ml

Cole
cido sulfrico Agitador de vidrio

(H2SO)
Reactivo de Milln Balanza analtica
Aminocidos: Glicina, Espectrofotmetro

tirosina, triptfano,
fenilalanina y arginina
Fenol Micropipeta 10 L
Albumina de huevo Micropipeta 20- 200 L
Agua destilada Micropipeta 20- 200 L
cido fosfrico Micropipeta 200-1000 L

L
Etanol 1 caja con puntas de 200 L

(amarillas) para micropipeta
1 caja con puntas de 200 L

(amarillas) para micropipeta
1 caja con puntas de 1000 L

(azules) para micropipeta.
Agitador vrtex mltiple para

tubos
7.2 REACCIN DE BIURET
Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven

por tanto para su identificacin, destaca la reaccin del Biuret. Esta
reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos
ya que se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye
al liberarse los aminocidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre
(II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se une con los
enlaces peptdicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya
intensidad de color depende de la concentracin de protenas.
Tabla 13 Procedimiento a realizar para la reaccin de Biuret.

Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo
CuSO4 al Preparar los tubos de

con 3 mL de 1% ensayo.
4 a 5 gotas de
solucin de
1 + solucin de
Albmina de
CuSO4 al 1%
huevo 1% hidrxido Aadir de 4 a 5
sdico gotas de solucin de +
CuSO4al 1%
con 3 mL de CuSO4 al 2 ml hidrxido
solucin de 1% sdico
aminocidos
2 + Aadir 2 ml de
Tirosina,
solucin de hidrxido
Triptfano o hidrxido
sdico al 20%.
Fenilalanina. sdico

CuSO4 al
1% Agitar para que se
con 3 mL de mezcle.
3 +
Leche 1%

hidrxido
sdico
CuSO4 al Observar y tomar
1% apuntes de los
con 3 mL de con 3 mL de
cambios.
4 Aceite de + solucin
cocina respectiva
hidrxido
sdico +
CuSO4 al Agitar y observar

1% color violeta, azul
con 3 mL de o amarillo.
5 +
Glucosa
hidrxido
sdico
7.3 REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS
Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de

sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un
lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin
de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.
Tabla 14 Reaccin De Aminocidos Azufrados, Grupos SH.

Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo
hidrxido Preparar los tubos de 2 ml

sdico ensayo. hidrxido
con 3 mL de sdico
solucin de +
1 +
Albmina de acetato de Aadir 2 ml de solucin
huevo 1% plomo de hidrxido sdico al
20%.
hidrxido solucin de
con 3 mL de sdico acetato de
solucin de Aadir 10 gotas de
plomo al 5%
aminocidos + solucin de acetato de
2 plomo al 5% +
Tirosina, acetato de
Triptfano o plomo
Fenilalanina.
Calentar el tubo hasta
ebullicin.
hidrxido
sdico
con 3 mL de + Observar y tomar

3 apuntes de los cambios.
Leche 1% acetato de
plomo con 3 mL de
solucin
respectiva
hidrxido El precipitado de color +
sdico negruzco indica que se
ha formado sulfuro de Calentar el
con 3 mL de + tubo hasta
4 Aceite de Plomo, utilizndose el
acetato de ebullicin.
cocina azufre de los
plomo
aminocidos
hidrxido
sdico
con 3 mL de +
5
Glucosa acetato de
plomo
7.4 DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE PROTENAS: MTODO

DE BRADFORD.
Prctica sugerida de acuerdo a la disposicin de los recursos.

INTRODUCCION
Existen varios mtodos para determinar la concentracin de protenas de

una muestra, tales como la determinacin de la absorbancia a 280 nm, o
mediante la formacin de derivados coloreados de las protenas, base de
los mtodos de BIURET o de LOWRY. En estos casos se forma un complejo
coloreado de cobre con el enlace peptdico; en el mtodo de Lowry,
adems del complejo anterior tambin se forma un derivado de las
tirosinas que contribuye a la absorbancia total.
El mtodo de Bradford se basa en el empleo de emplea un colorante

hidrofbico cuyas disoluciones acuosas en presencia de cido fosfrico
tienen un color pardo y que, al encontrarse en el entorno hidrofbico del
interior de una protena, origina un color azul intenso que se puede medir
fcilmente. Este mtodo depende, pues de la interaccin relativamente
inespecfica entre un colorante hidrofbico y las protenas, por lo que es
relativamente sensible a la presencia de contaminantes tales como restos
de detergente y lquidos orgnicos como el metanol.
La determinacin de protenas por el mtodo de Bradford consiste en la

cuantificacin de la unin de un colorante, el Azul de Coomassie G-250,
a la protena, comparando esta unin con la de diferentes cantidades de
una protena estndar (Albmina de Suero Bovino (BSA)). La
cuantificacin se hace midiendo la absorbancia en un espectrofotmetro,
a 595 nm, y graficando la absorbancia vs la concentracin de protenas,
obteniendo una curva de calibracin de la protena estndar. Con esta
curva de calibracin, se puede interpolar la concentracin de protenas en
una muestra al medir su absorbancia a 595 nm.
1- Reactivo de Bradford
Azul de coomasie G-250 5 mg
Etanol 2.5 ml
cido fosfrico 5 ml
Agua Hasta 50 ml
Mezclar en el orden indicado, disolver con agitacin y a continuacin filtrar
2-Patrn de albmina. Disolver 10 mg de albmina bovina en 10 ml de

agua destilada, con lo que tenemos una disolucin madre con una
concentracin de 1 mg/ml.
1-Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango desde 0 hasta

60 g; de tal manera que el volumen final en cada tubo sea de 300 l.
Mezclar para ello el volumen adecuado de la disolucin madre de albmina

bovina de un 1 mg/ml y el correspondiente volumen necesario de agua,
de acuerdo con la siguiente tabla.
METODO
1-Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango desde 0 hasta

60 g; de tal manera que el volumen final en cada tubo sea de 300 l.
Mezclar para ello el volumen adecuado de la disolucin madre de albmina
bovina de un 1 mg/ml y el correspondiente volumen necesario de agua,
de acuerdo con la siguiente tabla.
Tabla 15 Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango

desde 0 hasta.
g (prot) 0 10 20 30 40 50 60
l (alb) 0 10 20 30 40 50 60
l 300 290 280 270 260 250 240

(agua)
l total 300 300 300 300 300 300 300
2-Preparacin de tres diluciones de la muestra problema:

Hacer una dilucin 1:20 de la leche comercial; a continuacin realizar
las diferentes diluciones de acuerdo con la siguiente tabla.
Tabla 16 Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango
desde 0 hasta
Leche diluida A B C
V. leche (l) 20 25 30
V. agua (l) 280 275 270
V. total 300 300 300
Finalmente aadir 3 ml del reactivo de Bradford a todos los tubos; tanto

a las diluciones que contienen la albmina como a las que contienen la
leche diluida. Agitar los tubos y a continuacin proceder a la lectura de la
absorbancia a 595 nm en el colorimetro.
RESULTADOS
1- Elaboracin de la recta patrn. Para ello representar en el papel

milimetrado adjunto la absorbancia de cada uno de los tubos que
contenan albmina bovina frente a la cantidad de protenas
correspondiente. Si se dispone de una calculadora con capacidad para
hacer rectas de regresin, compruebe el coeficiente de correlacin de la
recta obtenida. En cualquier caso determine la pendiente de la recta.
2- Para las tres diluciones del problema, interpolar la absorbancia

obtenidas sobre la recta representada para saber la cantidad de protenas
presentes en cada una de ellas. Alternativamente, haga el clculo
mediante la pendiente de la recta.
3- Teniendo en cuenta los volmenes de muestra usados en cada caso y

teniendo en cuenta la dilucin realizada, calclese la concentracin de
protenas en la muestra analizada. Dar el resultado en gramos de
protenapor 100 ml de leche.
7.5 PREGUNTAS:
Cules son los principales mtodos colorimtricos usados en la

determinacin de protenas?
Cul es la reaccin de un alfa-aminocido y ninhidrina?
Cul es la reaccin con el reactivo de Biuret?
Qu protenas dan positivas con la prueba de Hopkins-cole?
Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo? 2. Cul

de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalizacin? 3.
Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena?
4. Qu coloracin da la reaccin del Biuret? 5. Una protena coagulada
podra dar la reaccin del Biuret? 6. Si se realiza la reaccin del Biuret
sobre un aminocido como la Glicina es positiva o negativa? Por qu?
8 Prctica 4: IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS
Referente terico.
Los hidratos de carbono constituyen el grupo de biomolculas ms

abundante sobre la superficie terrestre, representando aproximadamente
el 75 % de la materia orgnica existente. En ocasiones, se denominan
tambin carbohidratos, azcares, sacridos o glcidos. Todos son
trminos que hacen referencia a su sabor dulce, o a que poseen la
composicin Cn (H2O)n. Estas molculas usualmente contienen carbono,
hidrgeno y oxgeno en una proporcin de 1:2:1. Los carbohidratos se
clasifican como monosacridos, disacridos o polisacridos, dependiendo
del tamao y la complejidad de la molcula. Los monosacridos se
componen de una sola molcula de azcar. Cuando dos monosacridos se
unen se produce un disacrido, y cuando dos o ms se unen se produce
un polisacrido.
En los animales los carbohidratos son esenciales desde el punto de vista

energtico, ya que muchos rganos y clulas del cuerpo humano, como
el cerebro y los glbulos rojos, obtienen su energa principalmente de la
glucosa. Pero sus funciones no se restringen a ser nicamente fuente de
energa, sino que tambin pueden desarrollar funciones estructurales, de
reconocimiento celular y adhesin. Estructuralmente, un hidrato de
carbono tpico es una cadena hidrocarbonada con varios grupos alcohol y
un carbono ms oxidado, en forma de grupo carbonilo. Este grupo oxidado
puede situarse en el extremo de la cadena (aldehdo), o adyacente, en
posicin 2 (cetonas)
Ilustracin 1 Clasificacin de carbohidratos.
Todos los monosacridos y los disacridos con enlace mono-carbonilo,

cuando se encuentran en solucin a pH alcalino, tienen la capacidad de
reducir otros compuestos. Esta capacidad reside en las caractersticas
del grupo carbonilo (C anomrico en formas cicladas) libre. Esta
propiedad, y por tanto, la presencia de un azcar reductor, se ponen de
manifiesto mediante las reacciones de:
Tabla 17 Diferentes ensayos para reconocimiento en

carbohidratos.
Ensayo Descripcin del ensayo
Molisch: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de

carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos se
hidrolizan con cido sulfrico concentrado hasta
monosacridos y se convierten en derivados del furfural o
5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con -naftol
formando un color prpura violeta.
Fehling -Fehling A: CuSO4 disuelto en H2O

-Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disueltos en agua
(Detecta la presencia de azcares reductores) Los

azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de
reducir el in Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo.
Para ello el grupo carbonilo del azcar se oxida a grupo
carboxilo. En medio fuertemente bsico, como es en este
caso el NaOH, el in Cu2+ formara Cu (OH)2 insoluble,
por eso se aade tartrato sdico potsico en el Fehling B
(el reactivo de Fehling consta de dos componentes:
Fehling A y Fehling B) que acta como estabilizador al
formar un complejo con el Cu2+.
NaOH +Calor
+R
CuSO2 Cu(OH)2 Cu2O (rojo

(azul) ladrillo)
Reaccin
Benedict (Detecta la presencia de azcares reductores) Se basa en

la reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil.
Aunque es similar a la reaccin de Fehling, el medio
bsico dbil y el estabilizante (citrato sdico) utilizados
hacen que este test sea ms sensible y estable.
-Sulfato cprico.
-Citrato de sodio.
-Carbonato anhidro de sodio
Barfoed cido actico

Acetato cprico
(Detecta la presencia de monosacridos) El reactivo de
Barfoed es dbilmente cido y es reducido solamente por
monosacridos, formndose como producto de reaccin
xido cuproso.
En medio cido, tan slo los monosacridos son capaces
de reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+ as producido reduce al
cido fosfomolbdico a un complejo de intenso color azul
oscuro.
Ioduro Los polisacridos sin ramificar forman complejos

caractersticos cuando reaccionan con yodo. Los
ramificados tambin lo hacen, pero los complejos
formados tienen menos intensidad de color.
Seliwanoff Este ensayo es especfico para cetosas y se basa en la

conversin de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su
posterior condensacin con resorcinol formando as
complejos coloreados.
Bial El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el
cual forma complejos de coloracin slo con las pentosas.
Lugol El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y
yoduro, permite reconocer polisacridos, particularmente
el almidn por la formacin de una coloracin azul violeta
intensa y el glicgeno y las dextrinas por formacin de
coloracin roja.
Rotacin ptica
Es una propiedad importante que permite identificar los carbohidratos, y

determinar el grado de pureza de los mismos, particularmente
monosacridos, ocasionada por la presencia de centros asimtricos o
quirales en la estructura molecular, los cuales desvan el plano de luz
polarizada. Esta propiedad no es exclusiva de los carbohidratos pues la
presentan todas aquellas sustancias denominadas ptimamente activas,
por tener en su estructura centros quirales.
Para la medicin de la rotacin ptica los factores importantes a tener en

cuenta son: La longitud de onda de luz polarizada, la cantidad de material
ptimamente activo, y la naturaleza del solvente cuando se usa. Los
cambios en la temperatura ocasionan solo pequeas variaciones en las
medidas de la rotacin.
Los datos de rotacin ptica se representan como |] = rotacin especfica

o | M] = Rotacin molecular, donde:
|| = /LC
: Rotacin observada en grados angulares
L: Longitud en decmetros del paso de luz polarizada a travs de la
muestra
C: Concentracin en gramos por mililitro.
M: Peso molecular
| M | = M x | |/100 cuando el plano de luz polarizada se desva en el

sentido de las manecillas del reloj se antepone un signo positivo al nmero
de grados que fue rotado el plano de luz.
El plano de luz polarizada hacia la derecha se llaman dextrgiros o dextro
rotatorios, y esa caracterstica se indica anteponiendo el signo (+) al
nombre del compuesto. Los compuestos que desvan el plano de luz
polarizada hacia la izquierda se llaman levgiros o levo rotatorios, y esa
caracterstica se indica anteponiendo el signo (-) al nombre del
compuesto.
O H O H Los prefijos D y L no tienen nada que ver

C C con el carcter dextro/levo rotatorio de la
H C OH HO C H molcula, sino que indican la posicin del
HO C H H C OH OH del penltimo carbono en la
H C OH HO C H representacin de Fischer. Para indicar su
H C OH HO C H poder rotatorio hay que utilizar los signos
CH2OH CH2OH (+) y (-). Da la casualidad de que el D-
D-glucose L-glucose gliceraldehdo es dextrgiro (D-(+)-
gliceraldehdo) y de que el L-gliceraldehdo
es levgiro (L-(-)-gliceraldehdo), pero pueden existir compuestos que
pertenecen a la serie D y que son levgiros, como la D-(-)-fructosa.
Ilustracin 2 Molcula de glucosa.
8.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO.
Tabla 18 Materiales y reactivos.

Reactivo de Benedict Tubos de ensayo (140 15

mm*14mm)
Reactivo Fehling A y Gradilla 2

reactivo Fehling B
Lugol Pinza para tubos 2
Glucosa Pipetas Pauster con bulbo 4
sacarosa Beaker o vasos de precipitados de 5

500 mL
almidn Estufa 1
Fructosa Cmara de flujo laminas 1
Reactivo Fehling A y B Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 4

ml y 10 ml.
-naftol Pera de goma para pipetas 4
Vidrios reloj grandes
Probeta 100 ml
Baln aforado de 25 ml
Agitador de vidrio
Balanza analtica
8.2 PRUEBA DE BENEDICT
Es similar a la reaccin de Fehling, el medio bsico dbil y el estabilizante

(citrato sdico) utilizados hacen que este test sea ms sensible y estable.
Tabla 19 Prueba de Benedict (detecta la presencia de azcares
reductores)
con 3 ml
de reactivo de
1 Preparar los tubos de Agregue a cada
Glucosa al Benedict
ensayo. tubo de ensayo
1%
2

con 3 mL
ml de reactivo de
de reactivo de Agregue a cada tubo
2 Benedict
sacarosa Benedict de ensayo 2
al 1% +
ml de reactivo de
con 3 mL Benedict. Bao de agua
de reactivo de hirviente por
3
almidn al Benedict
10 minutos.
1% Tubos de ensayo en
un bao de agua
con 3 mL
hirviente por unos 10
de jugo de reactivo de
4 minutos.
cebolla al Benedict
1%
con 3 mL Agite cada tubo de

de reactivo de ensayo
5
Fructosa Benedict
3 ml de solucin
al 1%
Observar y tomar respectiva
apuntes de los
con 3 mL reactivo de cambios. Positiva
6 aparece un
de agua Benedict
precipitado rojizo,
verde o amarillo.
8.3 REACCIN DE FEHLING
Los azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el in

Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del
azcar se oxida a grupo carboxilo.
Tabla 20 Reaccin de Fehling (detecta la presencia de azcares
reductores)
con 3 Reactivo
mL de Fehling A
1 Preparar los tubos Aadir reactivo
Glucosa Reactivo de ensayo. Fehling A y
al 1% Fehling B reactivo Fehling B

con 3 Ml Reactivo +
Aadir 1 ml del
de Fehling A
2 reactivo Fehling A y Bao de agua
sacarosa Reactivo 1 ml del hirviente por
al 1% Fehling B
10 minutos.
con 3 mL Reactivo
Tubos de ensayo en
de Fehling A
3 un bao de agua
almidn Reactivo hirviente por unos
al 1% Fehling B 10 minutos.
con 3 mL Reactivo
de jugo Fehling A Bao de agua
4 de
Reactivo hirviente por
cebolla al
1% Fehling B 10 minutos.
3 ml de solucin
con 3 mL Reactivo respectiva
de Fehling A
5 Observar y tomar
Fructosa Reactivo apuntes de los
al 1% Fehling B cambios.
con 3 mL Reactivo
de Fehling A
6
Lactosa Reactivo
al 1% Fehling B
Reactivo Fehling A: disolver 7 g CuSO4 5 H2O en 100 ml de agua
destilada.
Reactivo Fehling B: 35 g de tartrato de sodio y potasio + 12 g NaOH en
100 ml de agua destilada
8.4 REACCIN DE MOLISCH

La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por
la reaccin de Molisch, que a cierto punto es la reaccin universal para
cualquier carbohidrato. Se basa en la accin hidrolizante y deshidratante
del cido sulfrico sobre los hidratos de carbono. En dicha reaccin el
cido sulfrico cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos de la
muestra y la deshidratacin a furfural (en las pentosas) o
hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se condensan con
el alfa naftol del reactivo de Molisch (reaccin de Molisch) dando un
producto coloreado.
Tabla 21 Reaccin de Molisch.

reactivo de
con 3
Molisch
mLde de Preparar los tubos de reactivo de
1
Glucosa al + ensayo. Molisch
1%
H2SO4 +
reactivo de Agregue dos gotas de Incline el tubo y

con 3 mL
Molisch reactivo de Molisch deposite 1 mL de
de
2 H2SO4
Sacarosa al +
1%
H2SO4 Mezcle bien
No mezcle
con 3 mL reactivo de
de Molisch
3 Incline el tubo y
Galactosa
+ deposite 1 mL de
al 1%
H2SO4 concentrado
H2SO4 deslizndolo
lentamente por la
reactivo de
pared del tubo.
con 3 mL Molisch
4 de Ribosa
+
1%
No mezcle. Slo
H2SO4
coloque el tubo en
reactivo de posicin vertical y
con 3 mL Molisch observe la formacin 3 ml de solucin
5 de Fructosa del anillo rojo violeta respectiva
+
al 1% que aparece en la
+
H2SO4 zona de contacto de
los dos lquido coloque el tubo
reactivo de en posicin
con 3 mL Molisch vertical y
6 de maltosa observe la
+
al 1% formacin del
H2SO4 anillo rojo violeta
8.5 PRUEBA DE TOLLENS

En primer lugar, hemos de limpiar el tubo de ensayo donde se realizar
el experimento, hirviendo en ste NaOH al 10%. Entonces, se aaden 3
gotas de la muestra problema (o bien 50 mg de slido), y 2,5 ml de
reactivo de Tollens recin preparado. Agitar el tubo y dejarlo estar
durante 10 minutos. Si al cabo de ste tiempo no se observa reaccin, se
calienta el tubo en un bao de agua caliente.
Tabla 22 Prueba De Tollens.
con 3 mL NaOH al
de solucin 5%
1 Preparar los tubos de dos gotas de
Glucosa al
+ ensayo. solucin de
1%
AgNO3 al -naftol
5%
aadir 2 gotas de una +
NaOH al disolucin de
con 3 mL 1 mL de H2SO4
5%
de solucin NaOH al 5%
2 de +

Sacarosa al
AgNO3 al
1% ml de disolucin
5%
acuosa de AgNO3 al
NaOH al 5%
con 3 mL
5%
de solucin
3 de +
Agitar el tubo y
Galactosa al
AgNO3 al aadir
1% 3 ml de solucin
5%
gota a gota y con respectiva
NaOH al agitacin NH4OH 2N,
con 3 mL 5% hasta que se consiga
de solucin disolver el precipitado
4 +
de Lactosa de AgOH
1% AgNO3 al

5%
No mezcle. Slo
NaOH al
coloque el tubo en
con 3 mL 5%
posicin vertical y
de solucin
5 + observe la formacin
de Fructosa
del anillo rojo violeta
al 1% AgNO3 al que aparece en la
5%
zona de contacto de
NaOH al los dos lquido
con 3 mL 5%
de solucin
6 +
de maltosa
al 1% AgNO3 al
5%
8.6 REACCIN DE LUGOL (YODO)
La prueba de yodo se da como consecuencia de la formacin de cadenas
de poliyoduro a partir de la reaccin entre el almidn y el yodo presente
en el reactivo de lugol.
La amilosa y la amilopectina son componentes del almidn pero la amilosa

es de estructura lineal, con enlaces (1-4), que forma hlices en donde
se juntan las molculas de yodo formando un color azul oscuro; mientras
que la amilopectina es de estructura ramificada, con enlaces (1-4) (1-
6), que forma hlices mucho ms cortas y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse presentando un color intermedio entre anaranjado
o amarillo.
8.7 REACCIN DE LUGOL (YODO)

La prueba de yodo se da como consecuencia de la formacin de cadenas
de poliyoduro a partir de la reaccin entre el almidn y el yodo presente
en el reactivo de lugol.
La amilosa y la amilopectina son componentes del almidn pero la amilosa

es de estructura lineal, con enlaces (1-4), que forma hlices en donde
se juntan las molculas de yodo formando un color azul oscuro; mientras
que la amilopectina es de estructura ramificada, con enlaces (1-4) (1-
6), que forma hlices mucho ms cortas y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse presentando un color intermedio entre anaranjado
o amarillo.
Tabla 23 Reaccin de almidones con lugol (yoduro potsico).
con 3 ml de
solucin
1 lugol Preparar los Agregar 5 gotas
Glucosa al
tubos de de lugol
1%
ensayo.
con 3 mL de

solucin
2 lugol
sacarosa al Agregar 5 gotas
1% de lugol
3 con 3 mL de lugol
solucin
almidn al Observar y
1% tomar apuntes
de los cambios.
con 3 mL de
solucin jugo
4 lugol
de cebolla al
1%
con 3 mL de
solucin de 3 ml de solucin
5 lugol respectiva
almidn de
papa al 1%
con 3 mL de Observar y tomar

6 lugol apuntes de los
agua
cambios.
8.8 PREGUNTAS
Explique por qu el monosacrido gliceraldehido da negativa la prueba
Molish.
Cules son las aplicaciones prcticas de las pruebas estudiadas?
Defina los siguientes trminos: carbono anomrico, centro quiral,

levorrotatorio.
Dibuje los monosacridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa,

clasifquelos segn el nmero de tomos de carbono y la funcin principal
Efectu un enlace hemiacetlico y uno hemicetlico, escriba las

diferencias entre ambos enlaces.
Escriba las funciones: aldehdica, cetnica, alcohlica, cida, colquelas

en orden de reactividad y explique el porqu de ese orden.
Explique en qu consiste la hidrlisis cida de disacridos.
Defina los siguientes trminos: azcar reductor y azcar no reductor, cite

ejemplos.
Efectu un enlace glucosdico.

9 Practica 5. CARACTERSTICAS DE LOS CIDOS GRASOS
Los lpidos (del griego lypos, grasa) son biomolculas orgnicas formadas
bsicamente por
C, H y O, aunque este ltimo elemento se encuentra en proporciones
mucho ms bajas que los dos primeros. Adems, pueden contener P, N y
S. Constituyen un grupo de sustancias muy heterogneas con
caractersticas qumicas diversas, pero con algunas propiedades fsicas
comunes, que podran resumirse en estas dos:
_ Son mayoritariamente insolubles en agua.
_ Son solubles en disolventes orgnicos, tales como ter, cloroformo,
alcanos (ej: hexano), benceno, acetona y alcoholes.
De acuerdo a la estructura qumica los lpidos se clasifican en dos grupos,

de acuerdo al contenido en su composicin cidos grasos (Lpidos
saponificables) o no lo posean
(Lpidos insaponificables).
La saponificacin consiste en una hidrlisis alcalina de la preparacin

lipdica (con KOH o NaOH). Los lpidos derivados de cidos grasos (cidos
monocarboxlicos de cadena larga) dan lugar a sales alcalinas (jabones)
y alcohol, que son fcilmente extrables en medio acuoso.
Tabla 24 Clasificacin de lpidos.

Lpidos Simples Acilglicridos
saponificables
Cridos
Complejos Fosfolpidos
Glucolpidos
Lpidos Terpenos
insaponificables
Esteroides
Prostaglandinas
9.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO.

Tabla 25 Materiales y Materiales y reactivos.
Aceite de girasol Tubos de ensayo (140 15

mm*14mm)
Agua destilada Gradilla 2
Hexano Pinza para tubos 2
Acetato de etilo Pipetas Pauster con bulbo 4
Etanol Beaker o vasos de precipitados de 5

500 mL
NaOH Estufa 1
KOH Cmara de flujo laminas 1
Reactivo Sudn III Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 4

ml y 10 ml.
Pera de goma para pipetas 4
Vidrios reloj grandes
Probeta 100 ml
Baln aforado de 25 ml
Agitador de vidrio
Balanza analtica
9.2 SOLUBILIDAD EN LPIDOS

Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella
se dividen en pequesimas gotitas formando una emulsin de aspecto
lechoso, que es transitoria, puede seprese en reposo, por reagrupacin
de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sita
sobre la de agua. Por el contrario, las grasas con solubles en los
llamados disolventes orgnicos como el ter, benceno, xilol, cloroformo,
etc.
Tabla 26 Determinacin de solubilidad en lpidos.
con 3 ml 4 mL de Preparar los tubos 4 mL de hexano

1 de Aceite agua de ensayo.
vegetal destilada

con 3 ml
4 mL de 4 mL de hexano
2 de Aceite
hexano
vegetal
Agite los tubos.
3 ml de Aceite
vegetal
deje reposar unos
minutos +
Agite los tubos
Observar y tomar +
apuntes de los Dejar en reposo.
cambios.
+
Observar y tomar
apuntes de los
cambios.
SAPONIFICACIN
Muchos lpidos, como por ejemplo: los cidos grasos, reaccionan con
bases fuertes, NaOH o KOH, dando sales sdicas o potsicas que reciben
el nombre de jabones. Esta reaccin se denomina de saponificacin. Son
saponificables los cidos grasos o los lpidos que poseen cidos grasos
en su estructura.
Tabla 27 Ensayo de Saponificacin.

3 mL de 3 mL de Agregar manteca
1 aceite NaOH en un tubo de
Preparar los tubos de
vegetal ensayo.
(1 N) ensayo.

3 mL de Agregar 3 mL solucin
3 mL de
2 aceite de NaOH
KOH
vegetal
(1 N).

Agitar.
3 ml de la solucin

de NaOH (1 N).
Bao de agua hirviente
+
por
Bao de agua
10 minutos.
hirviente por

10 minutos.
Dejar enfriar.
Observar y tomar
apuntes de los
cambios.
Observar y tomar
apuntes de los cambios.
Si posible repetir el
mismo procedimiento
con KOH
9.3 REACCIN CON EL SUDN III

El Sudn III es un colorante que se utiliza para detectar especficamente
las grasas, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las
grasas. Al ser de color rojo, cuando se disuelve tie las grasas de color
rojo anaranjado.
Tabla 28 Tincin: Reaccin con el Sudn III.
con 3 3 ml de Aceite
ml de vegetal
1 Sudan III Preparar los tubos de
Aceite
ensayo.
vegetal

con 3
mL de Agregar 3mL de aceite
2 Tinta roja
Aceite vegetal.
vegetal

Agregar 8 gotas de
Sudan III 8 gotas de Sudan
III

Observar y tomar
Observar y tomar apuntes de los
apuntes de los cambios. cambios.
9.4 PREGUNTAS:
Qu son los jabones? Cmo se pueden obtener los jabones?

Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?
Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?
Indica lo que ocurre con las mezcla aceite sudan III y aceite-tinta y
explica a qu se debe la diferencia entre ambos resultados.
Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos minutos
de reposo? Y con la de los otros compuestos empleados? A qu se deben
las diferencias observadas entre ambas emulsiones?
Qu ocurre con la emulsin cuando se le aade detergente?
10 BIBLIOGRAFA
Bejarano, L. D. C., & de Qumica, P.GUA DE LABORATORIO DE

BIOQUMICA.
Gonzlez, M. P. (2003). Prcticas de laboratorio y de aula Narcea
Ediciones.
HERNNDEZ-BERMDEZ, C.GLORIA GUTIRREZ-VENEGAS.

Quiones, Z. (2004). Identificacin de carbohidratos y protenas .
Retrieved from http://lls.ulat.ac.pa/archivos/vrodrig_8-352-
694/Archivos_de_Cursos/Materia_-_EFI002-Biologia_I_Grupo_-
_1_Anio_-_2011-1/BQMA-SIB2.PDF
Rivera, E. I. V. (2005). Prcticas de bioqumica descriptiva USON.
TORRES, G. (2013). 6. DESCRIPCIN DE PRCTICAS PRCTICA no. 1:

METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS
Y PROTEINAS. UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA YA DISTANCIA.
Universidad de Bogot, & Jorge Tadeo Lozano. (2014). GUA no 9:

ENSAYOS PARA RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS. Retrieved from
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/
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Universidad de la frontera, Temuco Chile. (2014). Aminocidos.

Retrieved from http://cmcc.ufro.cl/wiki/doku.php?id=molecular:aas
https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-
i/carbohidratos/reaccion-de-benedict.
http://www.academia.edu/6410068/BIOQUIMICA_INF_4
Universidad Complutense de Madrid. (Marzo de 2007). UCM- Manual de
Gestin de Residuos Peligroso. Recuperado el 15 de Enero de 2012, de
http://www.ucm.es/info/ucmp/cont/descargas/documento28113.pdf
Lineamientos para el desecho de productos qumicos (s.f.). Disponible

17 de enero de 2013, en
http://xml.cie.unam.mx/xml/dir/seguridad/Lineamientos_para_el_Desec
hos.pdf
Stoscheck, C.M. (1990): Quantitation of protein. Methods in

Enzymology, 182: 50-69
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/practicasgenerales.htm
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINI
CA_10817.pdf
http://veterinaria.uaemex.mx/_docs/603_958_MP%20Bioqu%C3%ADmi
ca.pdf
4. Formato de Rubrica de evaluacin
Formato rbrica de evaluacin

Tipo de Actividad Actividad
X X
actividad: individual colaborativa
Momento de Intermedia,
Inicial X Final
la evaluacin unidad
Niveles de desempeo de la actividad
Aspectos
individual Puntaj
evaluado
Valoracin Valoracin e
s Valoracin alta
media baja
El estudiante viste
ropa adecuada y No viste
lleva el pelo adecuadamente
recogido. Cumple y no cumplen
Presentaci
estrictamente las con ninguna de
n en el
normas de las normas 25
laboratori
laboratorio. Bata bsicas de
o
blanca y zapatos laboratorio.
cerrados
(25) (0) (0)
El estudiante,
El estudiante
asiste
trae al
puntualmente,
laboratorio el
trae al laboratorio El Estudiante no
gua, ms no
el gua de la trae gua, ni
hace una
Preparaci prctica, los elementos
lectura
n previa clculos necesarios para
previa de la 25
de la necesarios ya la realizacin de
misma y le
prctica planteados y la la prctica de
faltan los
informacin laboratorio.
elementos
bsica necesaria y
exigidos para
los elementos que
la prctica.
docentes exigi.
(25) (12) (0)
No lleva el pre
Desarrolla de Desarrolla informe al
forma correcta parte del pre laboratorio o lo
Pre
todas las informe pero lleva pero no 20
informe
exigencias del pre alguna no es cumple con lo
informe correcta. solicitado en la
gua.
(20) (12) (0)
Niveles de desempeo de la actividad
Aspectos
colaborativa Puntaj
evaluado
Valoracin Valoracin e
s Valoracin alta
media baja
El grupo
realiza la
prctica,
presenta
dificultades
El equipo No
El grupo realiza la en la
Desempe realiza la
prctica sin realizacin
o del prctica. No
dificultades. de las
alumno en sabe aplicar los
Aplican los actividades.
base a conocimientos
conocimientos Desconoce
conocimie adquiridos.
adquiridos. parte de las 30
ntos Presenta
Presenta prcticas y
demostra dificultades en
seguridad en sus no presenta
dos la realizacin de
acciones. dificultades
los clculos.
en la
realizacin
de las
actividades y
los clculos.
(12 X
(30 X puntos) (0 X puntos)
puntos)
El Grupos
El equipo
entrega el informe
realiza la
de laboratorios
prctica
con :
con
- revisa
mucha
bibliografa
dificultad.
- realiza la El grupo
No sabe
portada, presenta un El grupo no
aplicar los
introduccin informa presenta
conocimie 25
desde donde parcial de la informe de
ntos
plantea los prctica de laboratorio.
adquiridos
objetivos, laboratorio.
. Presenta
muestra
dificultade
resultado,
s en la
concluye y
realizacin
reporta la
de los
bibliografa en
clculos.
normas APA.
- contesta
cuestionarios
- resolvi los
ejercicios
- entrega informe
a tiempo
- Aporta
informacin
adicional.
- Aporta
fotografas
- Elabora las
conclusiones con
dificultades y
propuestas de
mejora.
(15 puntos) (0 puntos)
(25 puntos)
Calificacin final 125

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Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Vicerrectora Acadmica y de Investigacin

Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD -

Tabla 1 Clasificacin de los aminocidos. ......................................... 17

La gua de prcticas de laboratorio introduce al estudiante en los

Los objetivos de las prcticas del curso de bioqumica son:

1. Que el estudiante sea capaz de comprender e integrar los conceptos

2. Que el estudiante adquiera una preparacin en Bioqumica que le

3. Que el estudiante realice las a actividades las practicas, teniendo en

4. Que el estudiante adquiera los elementos formativos que incluye:

En la redaccin de los preinformes se deben conjugar los verbos en tiempo

La estructura de los preinformes es la siguiente:

Primero que todo identifique quien es el docente encargado de la prctica,

Referente terico seguridad y normas de laboratorio

En el laboratorio se realiza, para el caso del curso de bioqumica, prcticas

5.1 NORMAS PERSONALES

La vestimenta deber ser apropiada y cmoda, que facilite la movilidad

Use calzado cerrado que cubra completamente el pie. El alumno debe

Nunca ingerir alimentos, beber o masticar chicle dentro del laboratorio,

Asistir puntualmente en la fecha y hora programada, igualmente al entrar

5.2 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS

Cuando se tiene que hacer una reaccin qumica se debe escoger el

Si cuenta con sistemas de extraccin y renovacin mecnica de aire

Cuando se determinan masas de productos qumicos con balanza se

5.4 NORMAS DE EMERGENCIA

Al finalizar la prctica, limpia el rea de trabajo y entrega los materiales

5.5 MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS.

Se har la discusin sobre las normas de seguridad antes descriptas y las

Identifique la sealizacin que encuentra en el laboratorio, fotografi o

Referente terico de aminocidos

Los aminocidos se denominan as por tener un grupo amino (-NH2) y un

Tabla 1 Clasificacin de los aminocidos.

Grupos R Propiedades de los aminocidos

Apolares Los grupos R de esta clase de aminocidos son

Aromticos Fenilalanina, Tirosina y Triptfano, con sus

Polares sin Los grupos R de estos aminocidos son ms solubles

Cargados Estos aminocidos pueden tener el grupo R cargado

Los aminocidos en los que los grupos R tienen una

Con una carga neta negativa a pH 7.0 son:

La cadena R es de estructura variable y es la responsable de las

Tabla 2 Aminocidos proteicos con nomenclatura clsica sistema

Una Tres Nombre

I Ile Isoleucina Ae Apolares alifticos

Q Gln Glutamina Polares alifticos y

Y Tyr Tirosina Polar aromtico y sin

D Asp Ac. Asprtico o Aspartato Polar con carga

P Pro Prolina Iminoacido

Tabla 3 Pruebas bioqumicas para identificar aminocidos.

El grupo alfa-amino de los aminocidos forma

El anillo fenlico tiene un comportamiento

Los anillos aromticos presentes en algunos

El grupo guanidinio presente en la cadena

La presencia de anillos aromticos fenlicos o

El anillo indlico presente en la cadena lateral

Reaccin con Los Aminocidos azufrados como Metionina,

6.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

Reactivo ninhidrina Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15

Sulfato cprico Pinza para tubos 2

cido Pipetas Pauster con bulbo 4

Cloruro de sodio Beaker o vasos de precipitados de 5

cido ntrico Cmara de flujo laminas 1

Hidrxido de sodio Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 4

Acetato de Plomo Pera de goma para pipetas 4

6.2 REACCIN CON LA NINHIDRINA