Anda di halaman 1dari 22

PROTAP PEMERIKSAAN KIMIA KLINIK

PEMERIKSAAN GLUKOSA

A. Tujuan : Untuk mengetahui kadar glukosa dalam darah


B. Metode : GOD-PAP
C. Prinsip : Glukosa diukur setelah oksidase enzimatik, adanya glukosidase hydrogen
di bawah katalisa peroksidase bereaksi dengan phenol dan 4- amino phenazone membentuk zat
warna merah violet, quinoneimine sebagai indicator.
D. Bahan : Serum
E. Alat : 1. Micropipet 10l & 1000l 4. Tabung reaksi
2. Blue tipe & yelow tip 5. Centrifuge
3. Beackerglass 6. Fotometer

F.Reagensia : 1. Reagen enzim (buffer pH 7,5)


2. Reagen satandar
G.Cara Kerja :
Sampel Standart Blanko
Sampel 10l
Standart 10l
Reagen 1000l 1000l 1000l
Masing masing tabung dihomogenkan, diinkubasi 10 menit
pada suhu 20 25 C atau 5 menit pada suhu 37 C
Diukur absorbance standar dan sampel terhadap blanko reagen
dalam 60menit

= 546 nm Standar = 200


Suhu = 25oC Program = c/st
H. Nilai Rujukan : a. Darah segar (puasa) 70 100 mg/dl
b. Serum & plasma (puasa) 75 115 mg/dl
PEMERIKSAAN CHOLESTEROL TOTAL
Pemeriksaan : Cholesterol Total
Tujuan : Untuk mengetahui kadar kolesterol seseorang
Metode : CHOD-PAP
Prinsip : Cholesterol diukurr setelah hidrolisa enzimatik dan oksidasi
indikator quinoneimine dibentuk dari hidrogen peroksidase dan 4-aminophenazone.
Absorben warna diukur dengan terbentuknya warna yang dibaca pada spektrofotometer
dalam phenol dan peroxidase
Bahan : Serum
Alat : Tabung reaksi
Beacker glass
Pipet automatic
Reagensia : Cholesterol liquicolor
Nilai Nomal : 200 mg/dl
Cara Kerja :
Skema pemipetan Blanko R/ Standart Test
Standart 10 l
Sampel 10 l
R/ Cholesterol 1000 l 1000 l 1000 l
- Dihomogenkan
- Diinkubasi selama 20 menit pada suhu 20 - 25 C
- Diukur absorbance sampel tehadap blanko reagen dalam waktu tidak lebih dari 60 menit
( = 546 nm, program = c/st, angka faktor = 200,0 mg/dl )
PEMERIKSAAN LDL

A. Tujuan : untuk pengukuran kuantitatif LDL-cholesterol (LDL)


B. Metode : Test warna-Enzymatik
C. Prinsip : Chylomicrons,VLDL dan HDL cholestrol dihilangkan secara khusus
melalui reaksi enzymatik.kemudian LDL cholesterol yang tertinggal diukur melalui reaksi
enzymatik khusus ,juga memakai surfactans spesific untuk LDL
D. Bahan : Serum
E. Alat : 1. Tabung 3. Mikropipet 5. Centrifuge
2. Beacker Glass 4. Yellow tip . blue tip 6.Photometer

F.Reagensia : 1. R1
2. R2
G.Cara Kerja :
Hangatkan reagen dan kufet sampai 37C.suhu harus dijaga konstan (0,5C) selama test.
Blankoreagen Calibrator/sampel
Air 10
Calibrator/Sampel 10
R1 750 750

R2 250 250

Campur dengan hati-hati,inkubasi pada suhu 37C dan baca absorbance AA calibrator dan
sampai terhadap blanko reagen (RB) setelah 5 menit.
F. Nilai Rujukan :

Laki - Laki Perempuan


Resiko menurun untuk < 50 mg/dl < 63 mg/dl
CHD
Resiko meningkat untuk > 172 mg/dl > 167 mg/dl
CHD
PEMERIKSAAN TRIGLISERIDA

A. Tujuan : Untuk mengetahui kadar trigliserida dalam sample


B. Metode : GOD-PAP
C. Prinsip : Trigliserida diukur setelah hidrolisa enzimatik dengan lipase
indicator quinonemine dibentuk dari hydrogen peroksida 4amino pryme chlorophenol
dibawah pengaruh katalisa peroksida
D. Bahan : Serum
E. Alat : 1. Tabung 4. Mikropipet
2. Beacker Glass 5. Yellow tip . blue tip
3. Fotometer 4010

F. Reagensia : 1. Reagen enzym


2. Reagen standart

G.Cara Kerja :
Blanko Standar Tes
Standar 10 ul
Sampel 10 ul
Rg Enzym 1000ul 1000 ul 1000 ul
Dicampur diinkubasi pada 20-25C selama 10 menit

= 546 nm Standar = 200


Suhu = 25oC Program = c/s
PEMERIKSAAN TOTAL PROTEIN
A. Pemeriksaan : Total Protein
B. Tujuan : Untuk mengetahui kadar protein dalam serum
C. Metode : Biuret
D. Prinsip : Ion tembaga bereaksi dengan protein dalam media alkali
membentuk kompleks ungu. Absorbans kompleks ini sebanding dengan konsentrasi
protein dalam serum.
E. Reagen : 4 x 100 ml atau 1000 ml reagen warna
Natrium hidroksida 200 mmol/l
Kalium natrium tartrat 32 mmol/l
Cuprum sulfat 18 mmol/l
Kalium iodide 30 mmol/l
F. Bahan : Serum, plasma heparin atau EDTA
G. Alat : Tabung reaksi , mikropipet 20 l , 1000 l, blue and yellow
tip,
beacker glass, fotometer
H. Cara kerja :
Filter : 546 nm
Program : C/F
Tebal kuvet : 1 cm
Temperature : 20-250 C
Pengukuran terhadap blanko reagen
Factor : 19,00

Sampel Blanko
Sampel 20 l
Blanko 1000 l 1000 l
Dicampur, diinkubasi 20 menit dengan suhu 20-
250C. diukur absorbans sampel terhadap blanko
reagen dalam waktu 30 menit.
I. Perhitungan :
C = 19 x A (g/dl) atau C = 190 x A (g/l)
J. Nilai normal dalam serum atau plasma :
Bayi : 4,6 7.0 g/dl atau 46 70 g/l
3 tahun s/d dewasa : 6,6 8,7 g/dl atau 66 77 g/l
PEMERIKSAAN ALBUMIN

A. Tujuan : Untuk mengetahui kadar albumin dalam serum penderita.

B. Metode : BCG (Bromcresol Green


C. Prinsip :Bromcresol Green dengan albumin dalam larutan buffer sitrat membentuk
kompleks warna.Absorbance dari kompleks warna ini proporsional dengan konsentrasi albumin
dalam sampel.
D. Reagen :Reagen warna dan Standart
E. Bahan :Serum atau plasma
F. Alat : Fotometer
Pipet Automatik 10 dan 1000
Beacker Glass
Tabung Reaksi
Blue dan Yellow tipe

G. Cara Kerja : Panjang gelombang 546nm Program c/st


Tebal Kuvet 1cm
Temperatur 20-25C
Pengukuran terhadap Blanko Reagen

Blanko Standart Test


Sampel - - 10
Standart - 10 -

Reagen Warna 1000 1000 1000


Campur,diinkubasi 5 menit,ukur absorbance standart dan sampel terhadap
blanko reagen dalam waktu 30 menit.

H. Nilai Rujukan :Dalam serum atau plasma 3,8-5,1 gr/dl atau 38-51 gr/l

Pemeriksaan UREUM

A.Tujuan : Untuk mengetahui kadar ureum dalam serum


B. Metode : Berthelet
p :Urea dihidrolisa dengan adanya air dan urease membentuk ammonia dan
carbon dioksida . pada metode modifikasi Bedrthelet ini,ion ammonia bereaksi dengan hypochlorit
dan sallycilate membentuk zat warna hijau, Peningkata Abs.Pada 578 nm proporsional dengan
konsentrai urea dalam sample.
D. Bahan : Serum,plasma (semua plasma kecuali ammoniumheparinat ),urine.
Encerkan urine 1 + 100 dengan aquadest.
Jangan gunakan serum lipemic.stabil 3 hari pada 4 C.
E. Alat :

l. Spektrofotometer
2. Tabung reaksi
3. Beacker glaas
4. Pipet automatic
5. Blue tip dan Yellow tip

F.Reagensia : 1. Reagen standart


2. Reagen R1A
3. Reagen R2

KOMPOSISI REAGEN
R1 R2 R3
1. 10505 100 ml 100 ml 1 ml
2. 10506 1000 ml - 10 ml
3. 10507 - 1000 ml -
3 ml std. urea 80 mg/dl ( 13,3 mmol/l)
STD
atau BUN 37,28 mg/dl (6,2 mmol/l)

PERSIAPAN REAGEN
R1A : Campuran reagen 3 dengan reagen 1 sbb :
Missal : 1 ml R3 + 100 ml R1 ( 1 = 100 bag. )
R2 dan STD siap pakai tanpa pengenceran.
G.Cara Kerja :
Panjang gelombang : Hg 578
Tebal kuvet : 1 cm
Temperatur : 20 250 C
Pengukuran terhadap blanko reagen

RB STD SPL
Sampel - - 10 ul
Standard - 10 -
Reagen RIA 1000 1000 1000 ul
Campur , inkubasi 5 mnt (20-25 C) atau 3 mnt ( 37 C )
Reagen R2 1000 1000 1000 ul
Campur, inkubasi 10 menit pada 20 - 25 C atau 5
menit pada 37 C. Ukur Abs. standard dA( STD ) dan
sampel dA ( SPL ) terhadap RB dalam waktu 60
menit
G. Nilai Rujikan : Serum : 10 50 mg/dl atau 1,7 8,3 mmol/l
Urine : 20 35 mg/24 jam atau 333 583 mmol/24
jam
PEMERIKSAAN ASAM URAT
A. Tujuan : Untuk mengetahui kadar asam urat dalam darah
B. Metode : Uricase PAP
C. Prinsip :
Kadar asam urat diukur melalui reaksi dengan uricase. H2O2bereaksi dibawah katalisa peroksidase
dengan 3,5-dichloro-2-hydroxybenzenesulfonic acid (DCHBS) dan 4-aminophenazone (PAP)
membentuk zat warna merah violet quinoneimine sebagai indicator
D. Reaksi :
Uricase
Asam Urat + O2 + 2 H2O allantoin + CO2 + H2O2
peroxidase
2 H2O + DCHBS + PAP N(4-antypiryl) 3-chloro-5-sulfonate- p-
benzoquinoneimine + HCl + 4 H2O
E. Bahan : Serum
F. Alat :
Pipet automatic 20 l , 1000 l
Blue tip
Yellow tip
Becker glass
Tabung venoject
G. Reagensia :
Reagen enzyme
Larutan standart asam urat 8 mg/dl
H. Cara Kerja :
Disiapkan alat dan bahan
Disiapkan 3 buah tabung venoject, beri tanda (B, St , T)
Masing masing tabung dipipet
Blanko Standart Test
Sampel - - 20 l
Lart. Standart - 20 l -
Rg. Enzym 1000 l 1000 l 1000 l
- Dihomogenkan
- Diinkubasi pada suhu 37C selama 5 menit atau 20-25C selama 10 menit
- Dibaca Absorbance standart dan sampel terhadap reagen blanko pada fotometer
Filter : 546 nm
Program : C/St
Standart : 8,00
- Dicatat dan dilaporkan hasilnya
I. Nilai Rujukan : Pria : 3,4 7 mg/dl atau 200 420 mol/liter
Wanita : 2,4 5,7 mg/dl atau 140 340 mol/liter

PEMERIKSAAN KREATININ ( Dengan Deprot)


A.Tujuan : Untuk mengetahui kadar kreatinin dalam serum
B. Metode : Jaffe (dengan deproteinase)
: Kreatinin dalam suasana alkali akan membentuk kompleks warna merah
sampai jingga dengan asam pikrat. Kompleks warna yang terbentuk
sebanding dengan kadar kreatinin dalam sampel.
D. Bahan : Serum
E. Alat : 1. Micropipet 500 4. Tabung reaksi
2. Blue tipe 5. Centrifuge
3. Beackerglass 6. Fotometer

F.Reagensia :1.TCA (Tri Chlor Acid) 1,2 N 20


2. Asam pikrat dan NaOH = sebagai reagen kerja 1:1
3. Standar 2

G.Cara Kerja :
Deproteinase
Blanko Standar Tes
Aquadest 0,5 ml
Standar 0,5 ml
Sampel 0,5 ml
Rg TCA 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml
Dicentrifuge dengan kecepatan 4000 rpm selama 10 menit
Diambil supernatannya

= 546 nm Standar = 200


Suhu = 25oC Program = c/st

Blanko Standar Tes


Aquadest 0,5 ml
standar 0,5 ml
Sampel 0,5 ml
Rg kerja 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

Diinkubasi pada suhu 25oC selama 20 menit . Dibaca pada


fotometer dengan 546 nm, program c/st , standar 200.

H. Nilai Rujikan : Laki-laki = 0,5-0,9 mg/dl


Perempuan = 0,6-1,1mg/dl
PEMERIKSAAN KREATININ (Tanpa Deprot)

A.Tujuan : Untuk mengetahui kadar kreatinin dalam serum


B. Metode : Jaffe (tanpa deproteinase)
: Kreatinin dengan asam pikrat membentuk kompleks warna orange
merah dalam larutan alkali. Absorbance warna kompleks ini sebanding
dengan konsentrasi kreatinin dalam sampel.
D. Bahan : Serum
E. Alat : 1. Micropipet 500 4. Tabung reaksi
2. Blue tipe 5. Centrifuge
3. Beackerglass 6. Fotomete
F.Reagensia :1.Asam pikrat
2. Natrium hidroksida
3. Standar 2 mg/dl
G.Cara Kerja :
= 492 nm Standar = 200
Suhu = 37oC Program = c/st
Dipipet ke dalam kuet semi micro macro
Sampel/standar 100l 200l
Reagen kerja 1000l 2000l
Dicampur dan jalankan stopwatch. Setelah 30 detik dibaca
pada
Fotometer

H. Nilai Rujikan : Serum : Laki-Laki :0,6-1,1 mg/dl


Perempuan :0,5-0,9 mg/dl
Urine : 1000-1500 mg/24 jam

PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECT DAN BILIRUBIN TOTAL


A. Tujuan : Untuk mengetahui kadar Bilirubin Direct (D) dan Bilirubin Total (T)
B. Metode : Jendrassik / Grof
C. Prinsip :
Bilirubin bereaksi dengan Diazotized Sulphanilic Acid (DSA) membentuk zat warna merah azo.
Absorbans zat warna ini pada 546 nm sebanding dengan konsentrasi bilirubin dalam sampel.
Glucuronides bilirubin yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA yang mana albumin
yang terkonjugasi dalam bilirubin indirect hanya akan bereaksi dengan DSA, dibantu adanya
accelerator (zat pemercepat).
Bilirubin total = bilirubin direct + bilirubin indirect.
D. Reaksi : Asam sulfanilic + natrium nitrit DSA
Bilirubin +DSA DIRECT azobilirubin
Bilirubin + accelerator TOTAL azobilirubin
E. Bahan : Serum atau plasma heparin.
Hindari hemolisis. Sampel harus terlindungi dari sinar.
Stabilitas : Bilirubin stabil selama 3 hari bila disimpan terlindung dari sinar pada 2-8C.
F. Reagen :
1. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Total (tutup putih)
Asam sulfanilic 14 mmol/l
Asam hydroclorit 250 mmol/l
Caffeine (accelerator) 200 mmol/l
Natrium benzoate 420 mmol/l
2. 1 x 9 ml reagen T-Nitrit (tutup putih)
untuk pengukuran Bilirubin Total
Natrium nitrit 14 mmol/l
3. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Direct (tutup merah)
Asam sulfanilic 14 mmol/l
Asam hydroclorit 250 mmol/l
4. 1 x 9 ml reagen D-Nitrit (tutup merah)
untuk pengukuran Bilirubin Direct
Natrium nitrit 0.9 mmol/l
G. Alat :
1. Micropipet
2. Tip biru dan tip kuning
3. Tabung reaksi
4. Fotometer
H. Cara Kerja :
a. Persiapan reagen dan stabilitas
1. Kedua reagen dan larutan nitrit siap pakai.
2. Stabil sampai tanggal kadaluarsa bila tidak dibuka dan disimpan pada 15-25C.
b. Pemeriksaan
Panjang gelombang : 546 nm
Celah optik : 1 cm
Suhu : 20-25C
Pengukuran : terhadap blanko sampel
c. Prosedur
1. Bilirubin Total
Pipet ke dalam cuvet Blanko sampel Sampel
Reagen, bilirubin total (1) 1000 l 1000 l
Reagen T-Nitrit - 40 l
Campur dengan baik, inkubasi selama 5 menit.
Sampel 100 l 100 l
Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit.
Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (A546)

2. Bilirubin Direct
Pipet ke dalam cuvet Blanko sampel Sampel
Reagen, bilirubin direct (3) 1000 l 1000 l
Reagen D-Nitrit - 40 l
Campur dengan baik, inkubasi selama 2 menit.
Sampel 100 l 100 l
Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit tepat.
Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (A546)

I. Interpretasi Hasil :
Linearitas : Pemeriksaan linear sampai 25 mg/dl. Untuk konsentrasi bilirubin melebihi 25 mg/dl,
encerkan sampel 1 + 4 dengan garam fisiologis (0.9%) dan ulangi pemeriksaan. Kalikan hasil
dengan 5.
J. Perhitungan :
Hitung konsentrasi bilirubin total dan direct dengan menggunakan faktor 13.0
Konsentrasi bilirubin (mg/dl) = A546 x 13.0
(mg/dl) x 17.1 = (mol/l)
K. Nilai Rujukan :
Bilirubin total mg/dl mol/l
Pada kelahiran, sampai 5 85.5
5 hari, sampai 12 205.0
1 bulan, sampai 1.5 25.6
Dewasa, sampai 1.1 18.8
Bilirubin direct
Dewasa, sampai 0.25 4.3
ALKALI PHOSPATASE

A. Pemeriksaan : Alkali Phosphatase


B. Tujuan : Untuk mengetahui kadar Alkali phosphat
C. Metode : Optimised Standard Methode sesuai dengan rekomendasi
DGKC.
D. Prinsip : p Nitrophenyl phosphate + H2O <===> phosphatase
+ p - nitrophenol
E. Reagen : 1. Reagen Buffer
2. Larutan Substrat
F. Bahan : Serum, plasma heparin atau EDTA
G. Alat : Tabung reaksi , mikropipet 20 l , 1000 l, blue and yellow tip,
beacker glass, fotometer
H. Cara kerja :
Filter : 405 nm
Program : K20
Tebal kuvet : 1 cm
Temperature : 20-250 C
Pengukuran terhadap udara
Faktor : 2757
Test
Reagen Kerja 1000 l
Sampel 20 l
Campur, ukur absorbans dan pada saat bersamaan jalankan I. Nilai normal dalam serum atau
stopwatch. Ulangi pengukuran setelah 1, 2 dan 3 menit. plasma :
Wanita : 64 306 U/L
Pria : 80 306 U/L

PEMERIKSAAN SGOT
1. Tujuan : Untuk mengetahui kadar SGOT di dalam darahseseorang
secara fotometris.
2. Metode Pemeriksaan : Modifikasi IFCC
3. Prinsip : NADH dioksidasi menjadi NAD+ menghasilkan penurunan absorben
pada 340nm yang secara langsung sebanding dengan aktivitas
GOT(Glutamin Okdaloasetat Transaminase)
4. Reaksi : L-Aspartat + 2-oxoglutarate
GOT Oxaloacetate + L-GlutamateOxaloacetate + NADH + H+
MDH L-Malate + NAD + H
5. Reagen :
a. Aquadest
b. Reagen 1
c. Reagen 2
7. Alat :
Tabung reaksi
Rak tabung reaksi
Mikropipet 100cc , 200cc , 1000cc
Fotometer
8. Prosedur :
a. Pembuatan Reagen Kerja
Reagen 1 = 800 u/L + Reagen 2 = 200 u/L . Perbandingan = 4 : 1
b. Prosedur Kerja
Sampel 100 u/L

Reagen Kerja 1000 u/L


c. Pengukuran
Program : Kinetik 2
Panjang Gelombang : 340nm
Suhu : 37C
Faktor : 1745
d. Homogenkan , baca absorbansi terhadap udara setelah 1 menit dan jalankan timer . Baca absorbansi
lagi setelah tepat 1, 2, dan 3 menit
e. Nilai Normal : Laki Laki = <37 u/L , Perempuan = < 31 u/L

PEMERIKSAAN SGPT
Tujuan
untuk mengetahui fungsi hati
Metode
IFCC (International Federation of Clinical Chemistry
Prinsip
metode kinetik untuk mengukur akivitas ALAT berdasarkan rekomendasi Expert Panel of the
IFCC(International Federation of Clinical Chemistry)
Reaksi
2-Oxoglutarate + L-alanine GPTL-glutamate + pyruvate
Pyruvate + NADH + H LDH L-lactate + NAD
Bahan
Serum,plasma Heparin atau EDTA.Hindari hemolisa!
Alat
Fotometer 4010
Pipet automatic 200ul,1000ul,100ul
Stopwatch
Cuvet

Cara kerja
Panjang gelombang : Hg 365nm,340nm,atau 334nm
Celah optic : 1cm
Suhu : 25-37C
Pengukuran : terhadap udara (penurunan absorbans)
Hangatkan reagen dan cuvet pada suhu yang dikehendaki.Suhu harus dijaga konstan( 0,5C)
selama pemeriksaan.

Prosedur 1 dengan start sampel


Pipet ke dalam 25C atau 30C 37C
cuvet
Sampel 200ul 100ul
Reagen kerja 1000ul 1000ul
Campur,baca absorbans setelah 1 menit dan jalankan
stopwatch.
Baca absorbans lagi tepat setelah 1,2 dan 3 menit
Prosedur 2 dengan start reagen
Pipet ke dalam 25C,30C 37C
cuvet
Sampel 200ul 100ul
Reagen 1 1000ul 1000ul
Campur,inkubasi selama 5 menit dan jalankan stopwatch
Reagen 2 250ul 250ul
Campur,baca absorbans setelah I menit dan jalankan
stopwatch.
Baca absorbans lagi tepat setelah 1,2,3 menit.

Perhitungan/Interpretasi hasil
Untuk perhitungan absorbans per menit dalam 0,06-0,08 (Hg 365nm) atau 0,12-0,16 (Hg
334,340nm) , prosedur 1+2 pengukuran hanya dari 2 menit pertama digunakan untuk (1 menit
inkubasi,2 menit pengukuran).Hitung aktivias GPT dalam sampel menggunakan factor berikut:
Prosedur 1 dengan start sampel
Hg 334nm Hg 340nm Hg 365nm
Ul (25C,30C) 971 952 1765
Ul (37C) 1780 1745 3235

Prosedur 2 dengan start reagen


Hg 334nm Hg 340nm Hg 365nm
Ul (25C,30C) 1173 1151 2132
Ul (37C) 2184 2143 3971

Nilai rujukan
Suhu 25C 30C 37C
Pria 22ul 30ul 42ul
Wanita 17ul 23ul 32ul