UNIVERSIDAD AUTNOMA DE QUERTARO

FACULTAD DE QUMICA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

Nombre de la prctica:
OBTENCIN Y PREPARACIN DE CULTIVOS Prctica Pginas Pginas de la
PUROS 4
Realiz:
Amaro Romero Leobardo
Rodrguez lvarez Alfonso
Revis: Autoriz:
Rodrguez Ontiveros Claudine
E.B.C. Norma E.B.C. Norma Pacheco
Geraldine
Pacheco Hernndez Hernndez
Valladolid Prez Melissa Paola
Vargas Uribe Rosa Mara

Fecha: 02/10/2017

Contenido Pgina

I. INTRODUCCIN 2

II. CONOCIMIENTOS PREVIOS 2

III. OBJETIVO 9

IV. METODOLOGA 10

V. RESULTADOS

VI. DISCUSIN

VII. CONCLUSINES

VIII. BIBLIOGRAFA

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INTRODUCCIN

La identificacin es un proceso por el cual debemos determinar a qu especie

pertenece una determinada cepa bacteriana, mediante la comparacin de una serie
de caractersticas que pueden ser puestas en evidencia en el laboratorio y que han
sido estudiadas para la gran mayora de las especies bacterianas. Cuanto ms
semejanza haya entre las caractersticas obtenidas en el laboratorio y las que
habitualmente presenta una determinada especie, mayor ser la probabilidad de
que esa cepa problema pertenezca a dicha especie. Las caractersticas utilizadas
en la identificacin de cada grupo de microorganismos dependen de las
posibilidades de cada laboratorio, fundamentalmente econmicas y de cualificacin
del personal. Tradicionalmente la identificacin de una cepa bacteriana comienza
con la visualizacin de un frotis de la colonia aislada al que se le ha realizado una
tincin de Gram: Bsicamente los cuatro grandes grupos que nos encontraremos
en este primer paso son los siguientes: Cocos Gram positivos, Cocos Gram
negativos, Bacilos Gram negativos y Bacilos Gram positivos. La identificacin puede
realizarse tambin sobre grupos de microorganismos con caractersticas especiales
que veremos especficamente cuando tratemos a dichos grupos, como son:
Micobacterias, Anaerobios, Rickettsias y Chlamydias, Micoplasmas, Espiroquetas,
Actinomices y Nocardias.

CONOCIMIENTOS PREVIOS

Una bacteria es un complejo ser vivo con un sistema de estructuras y molculas

intracelulares en parte similar al nuestro. La presencia de ciertos enzimas hace que
las bacterias puedan actuar sobre algunos substratos y transformarlos; la ausencia
de un enzima determinado impedir esa transformacin o al menos la retardar, si
el proceso puede desarrollarse siguiendo otra va.

Las pruebas ms utilizadas cuantitativamente son las pruebas bioqumicas que nos
permiten determinar caractersticas metablicas de los microorganismos objeto de
identificacin, aunque las reacciones de aglutinacin o precipitacin utilizadas son
ms rpidas y ms especficas. Estas podramos clasificarlas fundamentalmente en
aquellas que nos permiten la identificacin de Gram positivos y pruebas para
identificacin de Gram negativos.

Las pruebas de identificacin bioqumica pueden clasificarse en funcin de la parte

del metabolismo que est influyendo, y as tenemos:

Pruebas bioqumicas del metabolismo respiratorio

Catalasa
Citocromo-oxidasa

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Pruebas bioqumicas del mecanismo de produccin de energa

Oxidacin-Fermentacin
Reduccin de nitratos a nitritos
Rojo de metilo
Voges Proskauer
Pruebas bioqumicas del metabolismo hidrocarbonado
Fermentacin de hidratos de carbono
Utilizacin del citrato
Beta galactosidasa (ONPG)
Pruebas bioqumicas del metabolismo proteico:
Hidrlisis de la gelatina
Hidrlisis de la urea por ureasa
Produccin de indol
Produccin de cido sulfhdrico
Fenilalanina desaminasa (TDA)
Prueba de las decarboxilasas
LDC
ODC
ADH
Pruebas bioqumicas para la deteccin de exoenzimas:
Cogulasa
Fosfatasa
Desoxirribonucleasa
Descripcin de las pruebas bioqumicas ms comunes empleadas en la
identificacin de microorganismos.

1. Indol (Prueba SIM):

Es un producto de degradacin metabolica del aminocido triptfano. Las bacterias
que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con
produccin de indol, cido pirvico y amonaco. La produccin de indol es una
caracterstica importante para la identificacin de muchas especies de
microorganismos. La prueba de indol est basada en la formacin de un complejo
rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo del p-
dimetilaminobenzaldehdo. Este es el principio activo del reactivo de Kovacs. El
medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano. El desarrollo de un color rojo
intenso en la interfase del reactivo y el caldo, segundos despus de aadir el
reactivo indica la presencia de indol y un resultado de la prueba positiva. Un control
positivo es Escherichia coli y un control negativo Klebsiella pneumoniae.

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2. Rojo de Metilo - Voges-Proskauer (RM VP):

Una de las caractersticas taxonmicas que se utilizan para identificar los diferentes
gneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporcin de productos de
fermentacin que se originan por la fermentacin de la glucosa. Se conocen dos
tipos generales: la fermentacin cido-mixta y la fermentacin del 2,3 butanodiol.
En la fermentacin cido-mixta se forman fundamentalmente cido actico, lctico
y succnico, adems de etanol, H2 y CO2. En la va del butanodiol se forman
cantidades menores de cido (acetato y succinato) y los principales productos son
el butanodiol, etanol, H2 y CO2. El rojo de metilo es un indicador de pH con un
intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la
produccin de cidos por la va de fermentacin cido-mixta. El acetil-metil-carbinol
(o acetona) es un producto intermediario en la produccin de butanodiol. En medio
alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada a diacetilo. Este se revela
en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.
La prueba RM es positiva si se desarrolla un color rojo estable. Esto indica que la
produccin de cido es suficiente para producir el viraje del indicador y el
microorganismo ferment la glucosa por la va de cido mixta.
Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como
positivo. La prueba VP es positiva si se desarrolla un color rojo-fucsia luego de 15
minutos, que indica la presencia de diacetilo, producto de oxidacin de la acetona.
Una prueba RM control positiva es Escherichia coli y una RM negativa es
enterobacter aerogenea.

3. Citrato:
La utilizacin de citrato como nica fuente de carbono es una prueba til en la
identificacin de enterobacterias, esta se detecta en un medio de cultivo con citrato
como nica fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinizacin del medio.
Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al pH
7,6. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estra,
acompaado o no de un viraje del indicador al azul. Control positivo Klebsiella spp
y control negativo E. Coli.

4. Descarboxilacin de lisina y ornitina:

La descarboxilacin de aminocidos es llevada a cabo por descarboxilasas y se
forman aminas y CO2. Cada descarboxilasa es especfica para un aminocido y la
reaccin es completa e irreversible. Los aminocidos ensayados habitualmente
para la identificacin son lisina, ornitina y arginina. El caldo descarboxilasa de
Moeller es el medio base ms comnmente usado para la determinacin de las
descarboxilasas en enterobacterias. Se prepara un tubo con el medio conteniendo
el aminocido a ensayar y un tubo control con medio base sin aminocido. Se
cubren con una capa de aceite mineral (vaselina lquida) para hacer el medio

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anaerobio de manera que ocurra la fermentacin de la glucosa que contiene.

Durante las primeras etapas de la incubacin en ambos tubos se observar viraje
del indicador de pH del medio al cido, por la fermentacin de la glucosa. Luego, si
el aminocido es descarboxilado, se forman aminas que provocan un retorno al
color original del medio o un viraje al alcalino. El ensayo puede ser ledo si en el
tubo control se observa crecimiento y viraje del indicador al amarillo indicando que
se dio la fermentacin de la glucosa y un descenso de pH que permite la activacin
de las descarboxilasas. El retorno al color azul-violeta en el tubo que contiene el
aminocido indica una reaccin positiva debida a la liberacin de aminas por
descarboxilacin.
Descarboxilacin de lisina positiva: Enterobacter aerogenes
Descarboxilacin de lisina negativa: Enterobacter cloacae
Descarboxilacin de ornitina positiva: Serratia spp
Descarboxilacin de ornitina negativa: Klebsiella spp.

5. Fenilalanina desaminasa:
La fenilalanina es un aminocido que por desaminacin oxidativa forma un
cetocido, el cido fenilpiruvico. Solo los gneros Proteus y Providencia poseen la
fenilalanina desaminasa, lo que permite diferenciarlas del resto de las
Enterobacterias. La prueba de la fenilalanina se basa en la deteccin del cido
fenilpirvico luego del desarrollo del microorganismo en un medio que contiene
fenilalanina. Para eso se agrega cloruro frrico que forma un complejo de color
verde con el cido fenilpirvico. El medio de cultivo no puede contener extractos de
carne o peptonas por su contenido variable en fenilalanina. La aparicin inmediata
de un color verde intenso indica la presencia de cido fenilpirvico y una prueba
positiva. Un control positivo es Proteus y uno negativo: Escherichia Coli.

6. TSI (Triple Sugar Iron)

El agar triple azcar hierro es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar
la capacidad de produccin de cido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa
en un nico medio. Tambin permite la deteccin de la produccin de H2S. Es un
medio til para la identificacin de enterobacterias. El agar se prepara en forma de
pico de flauta. Esto determina que existan dos cmaras de reaccin dentro del
mismo tubo. La porcin inclinada (pico) expuesta en toda su superficie al oxgeno
es aerobia y la porcin inferior (fondo) est protegida del aire y es relativamente
anaerobia. Al crecer un microorganismo en el TSI, el pico tiende a virar al pH alcalino
(color rojo por el rojo fenol) por la produccin de aminas, debido a la utilizacin
aerobia de las peptonas. En el fondo del tubo -donde no hay oxgeno- la
degradacin de peptonas es menor y no se generan aminas, de manera que se
pueden detectar la produccin de pequeas cantidades de cido (color amarillo por
el rojo fenol). Si se inoculan microorganismos no fermentadores no se formarn
cidos, pero por la produccin de aminas en el pico, todo el medio quedar rojo. La

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glucosa en el TSI est en una proporcin 10 veces menor que la lactosa y la

sacarosa. Si el TSI es inoculado con una bacteria fermentadora de glucosa, pero no
de lactosa ni de sacarosa, la cantidad de cido producida por fermentacin ser
baja (porque la cantidad de glucosa inicial es baja). En las primeras horas (10 a 16
hrs) de incubacin se producir viraje del indicador al amarillo en todo el tubo (pico
y fondo), pero al continuar la incubacin, el pico del tubo retornar al rojo por la
produccin de aminas debida a la degradacin aerobia de las peptonas antes
descrita. Si el microorganismo fermenta la lactosa y/o la sacarosa, como las
concentraciones de estos azcares son 10 veces mayores a la glucosa, se producir
gran cantidad de cido (que no puede ser neutralizado por la produccin de aminas
en la superficie), por lo tanto, todo el tubo (pico y fondo) virar al color amarillo
(cido). La produccin de H2S a partir de tiosulfato se pone en evidencia por
precipitacin del sulfuro ferroso (negro). Como esta reaccin se da
preferencialmente en medio cido, un ennegrecimiento del fondo del tubo (que
puede cubrir todo el fondo del tubo y enmascarar el color amarillo) se lee como
fermentacin de algunos de los azcares del medio. Adems, tubo, por ruptura del
agar o desplazamiento del mismo hacia la superficie. Para el TSI siempre se informa
el resultado en el siguiente orden: pico, fondo, produccin de gas y H2S.
Pico alcalino/fondo alcalino (Alc/Alc/gas-/H2S-) No hay fermentacin de azcares.
Caracterstica de bacterias no fermentadoras como Ej. Pseudomonas sp
Pico alcalino/fondo cido (Alc/A/gas-/ H2S-) Glucosa fermentada, ni lactosa ni
sacarosa fermentadas. No hay produccin de gas ni de 2S. Ej. Shigella spp.
Pico alcalino/fondo cido (Alc/A/gas-/ H2S+) Glucosa fermentada, ni lactosa ni
sacarosa fermentadas. No hay produccin de gas, si de 2S. Ej. Salmmonella typhi.
Pico alcalino/fondo negro (Alc/A/gas+/H2S+) Glucosa fermentada, ni lactosa ni
sacarosa fermentadas, produccin de gas cido sulfhdrico. Ej. Salmonella spp. (la
mayora de las especies de Salmonella).
Pico cido/fondo cido (A/A) Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede
producirse H2S o no. E. Coli. A estos resultados se les agrega el resultado de la
produccion de gas.

7. LIA (Lysine iron agar)

Este ensayo permite diferenciar los microorganismos que producen
descarboxilacin o desaminacin de la lisina. Se puede detectar adems la
formacin de H2S. Es muy utilizado en las tcnicas de bsqueda de Salmonella,
principalmente para destacar otras bacterias que dan colonias de aspecto similar en
los medios diferenciales utilizados durante el aislamiento selectivo. Durante las
primeras etapas de la incubacin el fondo virar el indicador de pH del medio al
cido (amarillo) por la fermentacin de glucosa. Luego, si el aminocido es
descarboxilado se formarn aminas que provocan un retorno al color original del
medio o hacia un viraje al bsico (color violeta). En la desaminacin se produce un
cido carboxlico y NH3 y se visualiza en la superficie la aparicin de un color rojo
intenso. La produccin de H2S a partir de tiosulfato se visualiza por la precipitacin
de sulfuro ferroso de color negro.
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Interpretacin y controles
Pico alcalino/fondo alcalino/ H2S+ Descarboxilacion de lisina positiva. Ej: Samonella
choleraecuis
Pico rojo/fondo cido/H2S- Desaminacion de lisina positiva, descarboxilacin de
lisina negativa. Ej: Proteus mirabilis
Pico alcalino/fondo cido/H2S- descarboxilacin de lisina negativa. Ej: E.Coli
Pico alcalino/fondo cido/H2S+ descarboxilacin de lisina negativa, produccin de
H2S. Ej: Citrobacter freundii

8. Coagulasa
La coagulasa es una enzima proteica con actividad semejante a la protrombina,
capaz de transformar el fibringeno en fibrina, provocando la formacin de un
cogulo visible en un sistema analtico adecuado. En el laboratorio, la prueba utiliza
ms comnmente para diferenciar al Staphylococcus aureus (coagulasa positiva)
de otro Staphylococcus. La coagulasa se halla presente en dos formas, libre y
fija, cada una de las cuales posee diferentes propiedades que requieren el uso de
tcnicas de determinacin diferentes:
a) Coagulasa fija (prueba en portaobjetos): la coagulasa fija est unida a la pared
celular bacteriana. Los hilos de fibrina formados entre las clulas suspendidas en
plasma (que contiene fibringeno) provocan su aglutinacin, indicada por la
presencia de agregados visibles en el portaobjetos.
b) Coagulasa libre (prueba en tubo): la coagulasa libre es una enzima extracelular
que se halla presente en los filtrados de cultivos. Cuando una suspensin de
bacterias productoras de coagulasa se mezcla en partes iguales con plasma en un
tubo de ensayo, se forma un cogulo visible como consecuencia de la utilizacin de
los factores de coagulacin del plasma de manera similar a cuando se aade
trombina.
Prueba en portaobjetos: una reaccin positiva se detecta usualmente en 15 a 20
segundos por la aparicin de un precipitado granular. La prueba se considera
negativa si no se observa aglutinacin en 2 a 3 minutos. Esta prueba es solo
presuntiva y todos los cultivos que den resultados negativos o positivos tardos
deben verificarse mediante la prueba en tubos ya que algunas cepas de
Staphylococcus aureus no producen coagulasa fija.
Prueba en tubos:
1+: pequeos cogulos no organizados.
2+: pequeos cogulos organizados.
3+: gran cogulo organizado.
4+: todo el contenido aparece coagulado y se mantiene cuando se invierte el tubo.
Se consideran positivos los grados 3+ y 4+
Positivo: S. Aureus
Negativo: S. Epidermidis

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9. Ureasa
La urea es una diamida del cido carbnico que puede ser hidrolizada con liberacin
de amonaco y dixido de carbono. La ureasa es una enzima que poseen muchas
especies de microorganismos que pueden hidrolizar la urea en amoniaco, dixido
de carbono y agua. El amonaco reacciona en solucin para formar carbonato de
amonio, producindose alcalinizacin y aumento de pH del medio. Los organismos
que hidrolizan urea rpidamente pueden producir reacciones positivas en 1 a 3 hrs.
Las especies ms lentas pueden requerir 3 o ms das. Una coloracin rojiza indica
alcalinizacin e hidrlisis de urea. Los degradadores lentos producen coloracin
parcial (generalmente el pico), los rpidos producen coloracin en todo el tubo. Si
no hay hidrlisis el medio permanece con el color original (amarillo) y se observa
crecimiento.
Control positivo: Proteus sp
Control negativo: E. Coli

Las pruebas inmunolgicas utilizan las reacciones de aglutinacin para poner en

evidencia antgenos bacterianos. Las ms utilizadas son pruebas de aglutinacin
para deteccin de Staphylococcus aureus, Estreptococos beta hemolticos,
streptococcus pneumoniae, serotipos de salmonella, serotipos de E. Coli,
Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis. Por ltimo, las pruebas de
sensibilidad utilizan una caracterstica de los microorganismos frente a una
sustancia qumica o antimicrobiana que consiste en la sensibilidad o resistencia
constante frente a dicha sustancia, lo cual nos puede permitir confirmar o descartar
la presencia del microorganismo. Las pruebas de susceptibilidad ms utilizadas son:
- Sensibilidad a Novobiocina: Sensible cuando la inhibicin del desarrollo con un
dimetro mayor o igual a 16 mm.
-Sensibilidad a Optoquina: Suceptible si tiene una zona de inhibicin mayor a 14
mm alrededor del disco.
- Sensibilidad a Bacitracina (inhibe la sntesis de la pared bacteriana) o Metronidazol
y Sulfatiazol.

10. Prueba de Bilis esculina

Se base en la capacidad de ciertas bacterias (Streptococcus del grupo D) para

hidrolizar la esculina en presencia de 1-4% de sales biliares. Donde se realiza la
inoculacin del microorganismo en la superficie de un pico de flauta y
posteriormente se incuba. La beta glucosidasa escinde la esculina en glucosa y
esculetina. Esta ltima es soluble en el medio y forma un complejo de color negro
con Fe3+. La hidrolisis de esculina se observa como un oscurecimiento del medio
(color negro) en 24 hrs de incubacin.

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11. Prueba de cAMP

Los Streptococcus del grupo B secretar el factor cAMP que interacta con la B-
hemolisina secretada por una cepa B. hemoltica de S. aureus lo que causa un
acrecentamiento o sinergismo de la hemolisis. Lo cual se lleva acabo sembrando
una placa de agar sangre con estras de la cepa de S. aureus y perpendicularmente
a est sembrando la cepa del Streptococcus en estudio. El sinergismo se observa
como una rea de b-hemolisis en forma de punta de flecha en la zona de desarrollo
ms cercana a ambas estras.

12. Prueba de oxidacin fermentacin (O.F)

Determinan el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono o su

falta de utilizacin. Se usa el medio O.F de Hugh y Leifosn que contiene peptonas
e hidratos de carbono en una relacin 1:5. A ser menor la concentracin de
peptonas, hay menos produccin de productos de oxidacin a partir de los AA que
tienden a elevar el pH y pueden neutralizar los cidos dbiles producidos por los
microorganismos no fermentadores. Los microorganismos oxidativos, producen
acido solo en el tubo abierto, expuesto al O2 atmosfrico. Por lo que solamente el
tubo expuesto al aire cambia su color original a amarillo. Los microorganismo
fermentadores producen acido en los dos tubos y viran del verde al amarillo.

13. Catalasa

Detecta la presencia de la enzima catalasa, la cual puede ser observada por la

liberacin de burbujas rpida y sostenida por la produccin de oxigeno molecular
dando la prueba positiva.

OBJETIVO GENERAL

Lograr identificar el microorganismo presente en un cultivo puro, mediante la

realizacin de pruebas bioqumicas.

OBJETIVOS PARTICULARES

Realizar las siguientes pruebas bioqumicas: Indol, coagulasa, catalasa,

citocromo oxidasa, fermentacin de manitol, de lactosa, de glucosa,
desaminacin de lisina, de ornitina,de arginina reduccin de nitratos,
hemlisis, produccin de H2S, VogesProskauev, desarrollo de la presencia
de KCN, Rojo de metilo, Utilizacin de citrato, Hidrlisis de urea, de lecitina,
gelatinasa, descarboxilacin de: arginina, lisina, fenilalanina y utilizacin de
manitol, para la verificacin de la identidad de un cultivo del cual se sospecha
la presencia de Salmonella typhi y de otro del cual se dice contiene
Pseudomona aeruginosa..

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METODOLOGA

A) Identificacin de cocos

Se realiz la identificacin de un grupo microorganismos donde todos son cocos.

En donde tenamos S. Epidermidis, S. Aureus, S. Viridans, E. Feacalis, un
enterococcus y un - hemoltico ambos desconocidos. Como primera prueba de
identificacin se realizaron tinciones Gram para cada cepa.

Una vez sabiendo el tipo de Gram que posea cada cepa, se realizaron pruebas
diferenciales entre cepas.

La primera prueba que llevamos a cabo fue la prueba de sal y manitol, donde se
identifican los microorganismos fermentadores provocando un cambio de coloracin
del agar una vez inoculada la cepa por agotamiento de estra en dos lados de la
placa. Para esta prueba se utiliz S. Aureus y S. Epidermidis dejando incubar por
24 hrs en un ambiente anaerobio.

La prueba de hidrolisis de bilis esculina se realiz inoculando las cepas de

enterococcus y S. Viridans en el pico de flauta de los tubos dejando incubar por 24
hrs en un ambiente anaerobio. Otra prueba fue con caldo BHI para la inoculacin
utilizando las mismas cepas.

Para la prueba de coagulasa se realiz con S. Aureus y S. Epidermidis. Donde se

origina la formacin de un coagulo por la presencia de coagulasa que transforma
fibringeno en fibrina dejando incubar por 24 hrs en un ambiente anaerobio.

En la prueba de Novobiocina se realiz en una placa con agar Mueller Hinton, donde
se inocul S. Epidermidis y S. Aureus segn la tcnica de Kirby-Bauer utilizando
discos de Novobiocina dejando incubar por 24 hrs en un ambiente anaerobio. Para
la prueba de bacitracina, optoquina y dimetropil tambin se inocul en una placa
con agar Mueller Hinton sangre S. Viridans y un -hemoltico donde se colocaron
los discos de las pruebas correspondientes para cada cepa dejando incubar por 24
hrs en un ambiente anaerobio.

Una vez concluidas las pruebas se analizaron los resultados obtenidos para la
identificacin de los grupos a los que pertenece cada cepa estudiada.

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b) Pruebas bioqumicas

Para esta parte se estudi Klebsiella pneumoniae y una bacteria Proteus, a las
cuales se les realizaron como primera prueba una tincin de Gram. Posterior a ello,
se llevaron a cabo las pruebas bioqumicas de Oxidasa, Catalasa, LIA, TSI, OF,
MIO, urea, nitritos, citrato, Mc Conkey y SIM para cada cepa.

Para comenzar en la prueba de oxidasa se utiliz un palito de madera para colocar

la cepa en la tira para la prueba, por otro lado en la prueba de catalasa se utiliz
perxido de hidrogeno, en donde se indicaba la generacin de burbujas para cada
cepa. Para la inoculacin de ambas cepas para la prueba de LIA se sembraron las
cepas por puncin y estra en zigzag el pico de flauta de cada tubo correspondiente
a cada cepa. En el caso de la prueba TSI con ayuda de la asa en punta se sembr
por puncin y estra las cepas en el pico de flauta de cada tubo. Tanto para la prueba
de MIO se sembraron las cepas por puncin en ambos tubos. Para el caso de la
prueba de Urea y nitritos la siembra de ambas cepas se realiz por puncin en los
tubos correspondientes.

Para la prueba OF utilizaron 4 tubos donde dos de ellos se les adicionaron 10 gotas
de aceite mineral cada uno para una cepa diferente y los 2 tubos restantes se
sembraron las cepas por puncin y estramiento. En la prueba SIM se inocul las
cepas por puncin con asa de punta para cada tubo .Para la prueba de citrato, el
medio de cultivo es verde el cual esta fraccionado en pico de flauta, se realiz la
siembra por estras. Por ultimo para la prueba Mc Conkey, la siembra de ambas
cepas se realiz con estras por agotamiento en cada placa con agar.

En todas las pruebas realizadas se incubaron de 24- 75 hrs a una temperatura de

35 C, posterior a ello se analizaron las placas para determinar las caractersticas
de cada microorganismo estudiado.

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RESULTADOS Y DISCUSIN

a) Identificacin de cocos

Tinciones de Gram

MICROORGANISMO TIPO DE GRAM TINCIN GRAM

S. Epidermidis Positivo

S. Aureus Positivo

S. Viridans Positivo

E. Feacalis Positivo

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Imagen 1. Prueba de BHI (tubo izquierda con la Imagen 2. Prueba de Novobiocina (se realizaron
cepa de S. Viridans con una prueba negativa y a para S. Aureus y S. Epidermidis, donde ambos
la derecha tubo de prueba negativa de la cepa dieron prueba positiva por el halo de inhibicin
enterococcus). superior a 16 mm).

Imagen 3. Prueba de sal y manitol (se realiz

para S. Aureus y fue una prueba positiva). Imagen 4. Prueba de sal y manitol (se realiz
para S. Epidermidis y fue una prueba positiva).

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Imagen 5. Prueba de bilis escolina (se realiz

para S. Viridans el cual corresponde al tubo
izquierdo dando una prueba negativa y para el
tubo derecho corresponde al enterococcus donde
la prueba fue positiva).

CEPA CARACTERISTICAS GENERALES

S. Aureus -Presenta hemolisis

-Coagulasa positiva

-F. manitol

s. Epidermidis -Straphylococcus

-Coagulasa negativa

-F. manitol

S. Viridans - hemolitico

Enterococcus Bilis esculina positiva

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b) Pruebas bioqumicas

CONCLUSIN

BIBLIOGRAFA

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