3.

1 ALAT DAN BAHAN

3.1.1 Alat
1. Labu Erlenmayer
2. Tabung reaksi
3. Rak tabung reaksi
4. Api bunsen/ spiritus
5. Pengaduk
6. Gelas Beaker
7. Pipet volume 10 ml
8. Kompor
9. Kapas
10. Aluminium foil
11. Alkohol

3.1.2 Bahan
1. Media sintetik dari MERCK yaitu Nutrien Agar (NA) 20 gr/l, Nutrien Broth
(NB) 8 g/l, Potato Dextrose Agar (PDA) 39 g/l
2. Daging segar tanpa lemak 200 g
3. Kentang 200 g
4. Tauge 100 g
5. Dextrose 15 g
6. Sukrosa 60 g
7. Pepton 5 g
8. NaCl 0,5 g

3.2. METODE KERJA

3.2.1 Pembuatan media sintetik:
1) Pembuatan Media Cair (Nutrien Broth) NB :
a) Menimbang berat media NB dengan menggunakan timbangan analitik.
Media NB yang yang diperlukan untuk 1 liter air adalah 8 gram,
sehingga untuk 100 ml air digunakan 0,8 gram media SDA.
b) Memasukkan media NB pada gelas beaker, kemudian ditambahkan 100
ml air.
c) Memanaskan bahan di atas kompor listrik sambil mengaduk sehingga
semua bahan terlarut sempurna.
d) Masukkan cairan tersebut kedalam tabung reaksi masing masing 6 ml
e) Menutup rapat tabung reaksi dengan menggunakan kapas, kemudian
melapisinya dengan aluminium foil.
f) Mensterilkan media dengan autoklaf pada tekanan 1 atm, temperature
121C selama 15 20 menit.

2) Pembuatan Media Padat (Nutrien Agar) NA:

a) Menimbang berat media NA dengan menggunakan timbangan analitik.
Media NA yang yang diperlukan untuk 1 liter air adalah 20 gram,
sehingga untuk 100 ml air digunakan 2,0 gram media NA.
b) Memasukkan media NA pada gelas beaker, kemudian ditambahkan 100
ml air.
c) Memanaskan bahan di atas kompor listrik sambil mengaduk sehingga
semua bahan terlarut sempurna.
d) Masukkan cairan tersebut kedalam tabung reaksi masing masing 6 ml
e) Menutup rapat tabung reaksi dengan menggunakan kapas, kemudian
melapisinya dengan aluminium foil.
f) Mensterilkan media dengan autoklaf pada tekanan 1 atm, temperature
121C selama 15 20 menit.

3) Pembuatan Media padat Potato Dextrose Agar (PDA):

a) Menimbang berat media PDA dengan menggunakan timbangan
analitik. Media PDA yang yang diperlukan untuk 1 liter air adalah 39
gram, sehingga untuk 100 ml air digunakan 3,9 gram media SDA.
 b) Memasukkan media PDA pada gelas beaker, kemudian ditambahkan
100 ml air.
c) Memanaskan bahan di atas kompor listrik sambil mengaduk sehingga
semua bahan terlarut sempurna.
d) Masukkan cairan tersebut kedalam tabung reaksi masing masing 6 ml
e) Menutup rapat tabung reaksi dengan menggunakan kapas, kemudian
melapisinya dengan aluminium foil.
f) Mensterilkan media dengan autoklaf pada tekanan 1 atm, temperature
121C selama 15 20 menit.

3.2.2 Media Non Sintetik

1. Media ekstrak daging segar
a) Daging segar 200 gram dipotong-potong dadu 1cm.
b) Masukkan kedalam 1.000ml aquades dalam panci.
c) Didihkan selama satu jam diatas kompor listrik.
d) Saring kedalam gelas Beker, tutup dengan aluminium foil
e) Biarkan satu malam dalam lemari es.
f) Pisahkan suspensi yang bening kedalam beker gelas, buang
endapannya.
g) Tambah aquades hingga volume akhir 1.000ml.
h) Tambahkan peptone 5 gram, NaCl 0,5 gram, dan agar 15 gram.
i) Panaskan diatas kompor listrik hingga semua bahan terlarut sempurna.
j) Masukkan cairan tersebut kedalam tabung reaksi masing masing 6 ml
k) Menutup rapat tabung reaksi dengan menggunakan kapas, kemudian
melapisinya dengan aluminium foil.
l) Mensterilkan media dengan autoklaf pada tekanan 1 atm, temperature
121C selama 15 20 menit.

2. Media kentang dextrose agar

a) Kupas kentang 200 gram dipotong-potong dadu 2 cm.
b) Masukkan kedalam 1.000 ml aquades dalam panci.
c) Didihkan selama 1 jam diatas kompor listrik.
d) Saring kedalam gelas Beker
 e) Pisahkan suspensi yang bening kedalam beker gelas, buang
endapannya.
f) Tambahkan aquades hingga volume akhir 1.000ml.
g) Tambahkan dextrose 15 gram, dan agar 15 gram.
m) Panaskan diatas kompor listrik hingga semua bahan terlarut sempurna.
n) Masukkan cairan tersebut kedalam tabung reaksi masing masing 6 ml
o) Menutup rapat tabung reaksi dengan menggunakan kapas, kemudian
melapisinya dengan aluminium foil.
p) Mensterilkan media dengan autoklaf pada tekanan 1 atm, temperature
121C selama 15 20 menit.

3. Media tauge agar

a) Didihkan 100 gram tauge dalam 1.000 ml aquades selama 1 jam diatas
kompor listrik.
b) Saring kedalam gelas Beker
c) Tambahkan 60 gram sukrosa dan agar 15 gram
d) Panaskan diatas kompor listrik hingga semua bahan terlarut sempurna.
e) Masukkan cairan tersebut kedalam tabung reaksi masing masing 6 ml
f) Menutup rapat tabung reaksi dengan menggunakan kapas, kemudian
melapisinya dengan aluminium foil.
g) Mensterilkan media dengan autoklaf pada tekanan 1 atm, temperature
121C selama 15 20 menit.