Universidad Autnoma de Quertaro

Facultad de Qumica

Laboratorio de Bacteriologa

Reporte 6. Infecciones del tracto urinario (Urocultivo)

Grecia Alejandra Ortiz Cano/ Arturo Torres Zamora/ Jos Manuel

Alvarez Baltazar.

Fecha de realizacin: 16/10/2017 Fecha de entrega: 23/10/2017

NDICE

l. RESUMEN.2

II. INTRODUCCIN 2

III. OBJETIVOS....3

IV. METODOLOGA.3

V. RESULTADOS Y DISCUSIN7

Vl. CONCLUSIN..13

Vll. BIBLIOGRAFA..13

1
 I. RESUMEN

En esta prctica se estudiaron las caractersticas microscpicas y macroscpicas de la

cepas aislada de una muestra de orina. Adems, el equipo de trabajo mediante la utilizacin
de una batera de pruebas bioqumicas consigui identificar exitosamente dicha cepa,
siendo sta Enterobacter aerogenes.

II. INTRODUCCIN

Las infecciones urinarias (ITU), se define como la persistencia y multiplicacin de

microorganismos en el tracto urinario con reaccin inflamatoria de los tejidos adyacentes.
Es uno de los procesos infecciosos ms frecuentes, es la segunda causa de infeccin,
despus de las respiratorias, tanto en la comunidad como en el hospital.
Segn su localizacin anatmica, se clasifican en:

Bajas, que incluyen: uretritis, cistitis y prostatitis.

Altas o pielonefritis, que incluyen: El absceso renal.

En la edad preescolar se observa ms frecuencia en las nias. En los adultos su incidencia

es muy baja en los hombres y ms alta en la mujer, sobre todo coincidiendo con la etapa de
vida sexual activa y durante el embarazo. A partir de los 50 a 60 aos de edad, la incidencia
aumenta en el hombre de forma progresiva en relacin a los problemas obstructivos
causados por la hipertrofia de la prstata. A los 65 a 70 aos de edad vuelve a aumentar en
las mujeres la frecuencia.

Las infecciones de vas urinarias se dividen en dos categoras: Complicadas y no

complicadas. La Infeccin del Tracto Urinario no complicada es ms frecuente en:

Mujeres jvenes,
No embarazadas,
Sin condiciones pre-disponentes,
Y sintomatologa de afectacin del Tracto Urinario Inferior (cistitis).

Bacteriuria asintomtica se define como un urocultivo positivo en ausencia de sntomas

urinarios, con o sin piuria asociada. La bacteriuria asintomtica es la infeccin urinaria ms
frecuente en la mujer embarazada, con prevalencia que oscila entre el 2 y el 11%, que a su
vez se asocia:

A un aumento de la incidencia de partos prematuros.

Y de recin nacidos de bajo peso. . U

Una infeccin urinaria se considera complicada cuando afecta:

Enfermos con anomalas anatmicas o funcionales.
Instrumentacin de las vas urinarias.
Portadores de sonda. |
Insuficiencia Renal Crnica (IRC).

2
 Diabetes o inmunodepresin.
Con microorganismos multirresistentes.

Ms del 95% de las ITU son monobacterianas. Escherichia coli es el agente causal ms
frecuente (80-90%), Proteus mirabilis y Kelbsiella pneumoniae, en menor frecuencia
Enterococcus y Staphylococcus saprophyticcus. En el caso de las infecciones
polibacterianas se observan en el 16%-25% de ITU complicadas, presentando mayores
resistencias a antibiticos.

Criterios para evaluar infecciones de vas urinarias

Bacteriuria significativa: Nmero mnimo de bacterias para considerar la existencia

de una infeccin.
La cifra de 100 000 UFC/ml (Criterios de Kass) ha dejado de ser un numero
definitorio de infeccin urinaria y en la actualidad se admite su existencia con
cantidades muy inferiores, dependiendo de:
Tipo de paciente
El mtodo de recoleccin de la orina
El examen microscpico y los sntomas clnicos.

Flora habitual de la uretra anterior:

Staphilococcus epidermidis
Staphilococcus aureus
Micrococcus sp.
Estreptococos y
Corynebacterium

III. OBJETIVOS

Conocer la importancia del urocultivo como estudio bacteriolgico de laboratorio

Conocer los microorganismos de la flora urogenital y diferenciarlos de las bacterias
uropatgenas.
Conocer los microorganismos patgenos que pueden estar asociados en infecciones
de vas urinarias.
Establecer las metodologas para realizar una toma de muestra de calidad.
Conocer los criterios bacteriolgicos en los que debe basarse el diagnstico de una
infeccin verdadera de las vas urinarias.

IV. METODOLOGA
A. Material.
1. Asas bacteriolgicas.
2. Asas bacteriolgicas rectas.
3. Portaobjetos.
4. Mechero.
5. Cajas petri.

3
 B. Reactivos.
1. Reactivo de oxidasa.
2. Equipo de tincin Gram.
3. Reactivo para prueba de catalasa.
4. Tubos de ensayo para pruebas de:
a) Citrato de Simmons.
b) MIO.
c) SIM.
d) Degradacin de nitratos.
e) TSI.
f) Urea.
g) OF.
h) Lisina.
5. Cajas petri con agar, dos de cada uno:
a) Mueller Hinton sangre 5%.
b) McConkey.
c) Mueller Hinton.
6. Discos de cepazolim.
7. Discos de ceftriaxona.
8. Discos de cefaroxine.
9. Discos de cefepime.
10. Discos de ciprofloxacina.
11. Discos de imipenem.
12. Discos de gentamicina.
13. Discos de Trimetoprim/sulfametoxazol.
14. Discos de amikacina.
15. Discos de amoxicilina con cido clavulnico.
16. Discos de ampicilina.
V. Procedimiento.
A. Toma de muestra.
1. Tomar la muestra con al menos 4 horas de ayuno.
2. Colectar la orina del chorro intermedio.
3. Almacenar hasta el cultivo.
B. Cajas con agar.
1. Por cada uno de los agares preparar dos cajas petri.
2. Sembrar cada muestra en los agares.
3. Incubar a 37C por 24 h.
4. Notar crecimiento, morfologa de colonias y cambios de coloracin.
C. Tincin de Gram.
1. Realizar el procedimiento estndar para tincin de Gram a todas las
cepas.
2. Observar al microscopio e identificar si la prueba resulta negativa o
positiva.
D. Catalasa.
1. Realizar el frotis de las dos cepas en un portaobjetos.
2. Agregar una gota de H2O2 a cada frotis.

4
 3. Notar si hay efervescencia o no.
E. Oxidasa.
1. Con aplicadores de madera tomar una colonia de cada cepa.
2. Colocar las muestras en una tira reactiva y notar si hay cambio de
coloracin o no.
F. SIM.
1. Tomar una colonia con un asa recta estril.
2. Sembrar por picadura hasta la seccin intermedia del medio.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Adicionar gotas del reactivo de indol.
6. Notar cambios en crecimiento, coloracin y motilidad de bacterias.
G. MIO.
1. Tomar una colonia con un asa recta estril.
2. Sembrar por picadura hasta la seccin intermedia del medio.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en crecimiento, coloracin y motilidad de bacterias.
H. Citrato de Simmons.
1. Tomar una colonia con un asa estril.
2. Sembrar por arrastre en la superficie del pico de flauta y por picadura
en la seccin inferior.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en crecimiento y coloracin.
I. OF.
1. Tomar una colonia con un asa recta estril.
2. Sembrar por picadura hasta la seccin intermedia del medio en dos
tubos.
3. Hacer lo mismo con otros dos tubos pero en este caso adicionar
aceite de beb en la superficie para generar un medio de
anaerobiosis.
4. Repetir para cada cepa.
5. Incubar a 37C por 24 h.
6. Notar cambios en crecimiento y coloracin.
J. TSI.
1. Tomar una colonia con un asa estril.
2. Sembrar por arrastre en la superficie del pico de flauta y por picadura
en la seccin inferior.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en crecimiento y coloracin.
K. Urea.
1. Tomar una colonia con un asa recta estril.
2. Sembrar por picadura hasta la seccin intermedia del medio.
3. Repetir para cada cepa.

5
 4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en coloracin y formacin de gas.
L. Degradacin de nitratos.
1. Los tubos no fueron proporcionados al equipo
M. Lisina.
1. Tomar una colonia con un asa estril.
2. Sembrar por arrastre en la superficie del pico de flauta y por picadura
en la seccin inferior.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en crecimiento y coloracin.
N. Prueba de resistencia.
1. Hacer sembrados de la cepa a identificar por estriado masivo en una
caja de agar Mueller Hinton.
2. Colocar los discos de antibiticos necesarios.
3. Incubar a 37C por 24 h.
4. Notar la formacin o no de halos de inhibicin.

6
 VI. RESULTADOS Y DISCUSIN

Al equipo de trabajo se le proporcion una muestra de orina del laboratorio de la docente

como control positivo**, mientras que el equipo se encarg de conseguir la muestra
problema (Fig. 1).
Nota**: Se le llama control positivo ya que se sabe que la muestra es rica en bacterias
debido a una infeccin del paciente, sin embargo se desconoce la bacteria especfica que
contiene.

Fig 1. Muestra problema proporcionada

por el equipo.

Ambas muestras se sembraron en agar Macconkey y en agar Sangre para la identificacin y

desarrollo de las bacterias. Se puede observar crecimiento de la muestra control en ambos
agares, sin embargo la muestra problema no presenta crecimiento en ningn agar.

Fig 2. Cepas aisladas de muestra Fig 3. Agar McConkey con muestra
positiva en agar McConkey. problema, no hay crecimiento.

El control positivo muestra una coloracin roscea en colonias del agar MacConkey, esto
seala que la bacteria es fermentadora de lactosa.

7

Fig 4. Cepas aisladas de muestra positiva Fig 5. Agar sangre con muestra
en agar sangre. problema. No hay crecimiento.

Se observa un gran crecimiento de colonia en agar sangre de la muestra control positiva.

Una vez registradas las caractersticas macroscpicas de la cepas se realiz una tincin
Gram. Result ser Gram negativa (-).

Fig 6. Tincin de cepa roscea aislada

en agar sangre

8
Se realizaron las pruebas estndar de oxidasa y catalasa para la cepa roscea aislada en
agar sangre.

Fig 7. Prueba de oxidasa positiva Fig 8. Prueba de catalasa positiva

Tabla 1. Pruebas bioqumicas para la cepa roscea aislada en agar sangre

Prueba bioquimica Cepa de urocultivo Foto
de la muestra
proporcionada al
equipo

Prueba positiva
Presencia de
crecimiento en los
alrededores,
demostrando la
MIO (movilidad) movilidad de
bacterias.
Hay turbidez.

9
 Prueba negativa
La prueba para esta
cepa result ser
negativa debido a
que la bacteria no
Urea posee ureasa, por lo
cual no puede
metabolizar la urea y
no hay un cambio de
color

Pico amarillo fondo

amarillo:
El microorganismo
fermenta glucosa,
lactosa y/o sacarosa

TSI

Prueba positiva
El color violeta es
producido por el vire
del prpura de
bromocresol debido a
la descarboxilacin
de la lisina, que
Lisina produce la amina
cadaverina, que
alcaliniza el medio.
Estos slo tiene lugar
en medio cido, por
lo que es necesario
que la glucosa sea
previamente
fermentada.

10
 Prueba positiva
Se present
movilidad, esto se
peude notar por el
acumulameniento de
microorganismos en
SIM la superficie del
medio, ya que las
bacterias buscan el
O2 de la atmsfera.

Prueba positiva:
Fermentadora. El
uso del hidrato de
carbono, ya sea por
fermentacin u
oxidacin, produce
OF (aerobiosis) acidez en el medio,
con el consecuente
viraje del color verde
al amarillo.

Prueba positiva:
Fermentadora. El
uso del hidrato de
carbono, ya sea por
fermentacin u
oxidacin, produce
OF (anaerobiosis) acidez en el medio,
con el consecuente
viraje del color verde
al amarillo.

El tubo para de
gradacin de nitratos
Nitratos nunca fue N/A
proporcionado al
equipo

11
Se realizaron las pruebas de sensibilidad de acuerdo al CLSI.

Fig 9. Pruebas de resistencia a antibiticos

Tabla 2. Resultados de la prueba de sensibilidad. Se midieron los halos de inhibicin y

compraron la bibliografa correspondiente.
Dimetro del halo
Dimetro del halo necesario para Resultado
Antibitico medido (mm) considerar
sensibilidad (mm)

Cepazolim 26 23 Sensible

Ceftriaxona 30 23 Sensible

Cefaroxine 23 18 Sensible

Cefepime 35 18 Sensible

Ciprofloxacina 35 31 Sensible

Imipinem 30 23 Sensible

Gentamicina 20 16 Sensible

SXT 26 15 Sensible

Amikacina 24 17 Sensible

Amoxicilina con - 18 Resistente

cido clavulnico

Ampicilina - 17 Resistente

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VII. CONCLUSIN

Se aprendi la tcnica de urocultivo y su importancia como estudio bacteriolgico de

laboratorio. Se identificaron las cepas obtenidas de la muestra de control positivo, debido a
las pruebas bioqumicas y caractersticas microscpicas y macroscpicas se identific a la
cepa como Enterobacter Aerogenes. Esta bacteria es sensible a diversos antibiticos tales
como Cepazolim, Ceftriaxona, Cefaroxine, Cefepime, Ciprofloxacina, Imipinem,
Gentamicina, SXT y Amikacina. La muestra problema no contena bacterias patgenas para
identificacin.

VIII. BIBLIOGRAFA
Patrick R. M. (2014). Microbiologa Medica 7. Edicin. Editorial Elsevier. 8.

Romero C. R. (2007) Microbiologa y parasitologa humana. 3a. Edicin. Editorial

Mdica Panamericana. 9.

Stephen J.C. (2005). Manual de pruebas de susceptibilidad .

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