FACULTAD DE QUMICA E INGENIERA QUMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS

BIOLGICAS
LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA

Practica N 6
CROMATOGRAFA DE PAPEL Y PLACA
INTEGRANTES:
- Ramos Flores, Elmer Jhoel 16100018
- Aroni Huamaccto, Yaquelin Pamela 16100001
- Merino Loayza, Aarom Sebastian 16100075
- Cuadra Carrasco, Jess 17100013
PROFESOR:
Mg. Bryan Huayhuas
HORARIO: Martes de 18 a 22 hrs.
FECHA DE ENTREGA: 24 de octubre del 2017
Lima Per
2017
RESUMEN
La presente experiencia se realiz con el fin de realizar las distintas pruebes de

cromatografa. Dichas pruebas se realizaron con pigmentos fotosintticos activos como

las clorofila de tipo a, b y c, acompaadas de carotenoides y xantofilas. Otros pigmentos

vegetales puestos a prueba fueron los flavonoides los cuales se ubican en los ptalos de

las flores y las tonalidades de estos varan segn el pH en que se encuentren.

Las pruebas cromatograficas realizadas fueron las de papel y placa. Ambas pruebas

guardan en si los mismos principios de poseer una fase esttica y una fase mvil. Para la

obtencin de resultados se realizaron 6 pruebas en la cromatografa de papel. Usando

reactivos alcohol/alcohol, benceno/benceno y benceno/alcohol. Tanto para hojas verdes

como para los ptalos. En cuanto la cromatografa de placa se utiliz almina y se

realizaron solo dos pruebas las cuales fueron con los reactivos que dieron mejores

resultados en la prueba anterior.

Finalmente los resultados obtenidos mostraron que segn el tipo de pigmento este

recorrer mayor o menor distancia siendo as que la clorofila de tipo a solo recorre una

distancia mnima mientras que los carotenos recorren una mayor distancia a los dems

pigmentos. En cuanto la cromatografa de pigmentos flavonoides estos recorrieron la

misma distancia en un tiempo menor.

INTRODUCCIN
La cromatografa es una de las muchas pruebas para el reconocimiento y anlisis de

pigmentos orgnicos e inorgnicos. Centrndonos en los pigmentos orgnicos, siendo el

caso de los pigmentos vegetales estos son de suma importancia ya que cumple.

Funciones fisiolgicas y anatmicas en la planta y en su medio. Mientras que en la

industria, el hombre aprovecho los distintos pigmentos orgnicos para la tincin de

prendas y para crear distintas pruebas de identificacin en cuanto la composicin de

estos gracias a pruebas cromatografcas siendo as el caso del reconocimiento de los

distintos tipos de clorofila los cuales varan dependiendo de a qu organismo

pertenezcan.

MARCO TERICO
CROMATOGRAFIA
Cromatografa plana: Es un tipo de cromatografa lquida en la que la fase

estacionaria est extendida sobre la superficie de un plano y la fase mvil fluye a travs

de ella. [] El flujo de la fase mvil se produce por capilaridad o por capilaridad y

gravedad.

Cromatografa en papel: En esta tcnica, la celulosa acta normalmente como

soporte de la fase estacionaria, que suele ser agua. No obstante tambin existen

papeles impregnados (con adsorbentes como gel de slice o almina, con silicona

para separaciones en fase invertida, con cambiadores inicos) o tratados

qumicamente que amplan la aplicabilidad de esta tcnica. (Valcrcel, 2003,

Pg. 390)

Cromatografa en capa fina: Consta de un sistema de dos fases, una slida

(fase estacionaria) que se aplica en forma de capa delgada, absorbente,

 usualmente de entre 0.1 a 0.25 mm con fines analticos y en los casos en los que

se desea aislar un compuesto el grosor puede variar entre 0.5 y 2mm. Esta capa

es fijada a una placa o lmina firme de vidrio, aluminio o plstico que acta

como soporte. A travs de la fase estacionaria transita un lquido o solvente

(fase mvil o eluente). De los tres materiales usados como soporte, el vidrio es

el ms popular, aunque el aluminio o plstico ofrecen la ventaja de ser flexibles

sin provocar la disrupcin de la fase estacionaria. En la figura se muestra un

montaje tpico de TLC.

Fig. Montaje tpico de cromatografa en capa fina. (Experimentos de qumica orgnica)

Cromatografa en columna: Consiste en hacer pasar mediante gravedad la fase lquida

sobre el slido soporte o activo retenido en una columna recta, generalmente de vidrio,

de dimensiones considerables y recogida del eluido en fracciones. (Valcrcel, 2003,

Pg. 437)

Cromatografa de lquidos

Cromatografa de gases

Cromatografa de fluidos supercrticos

DIFERENCIAS PRICIPALES ENTRE CROMATOGRAFA EN PLANA Y EN

COLUMNA

1) En cromatografa plana la separacin se realiza por distancias mientras que en la

columna se hace por tiempos (o volmenes).

2) En cromatografa plana, la velocidad de la fase mvil solo puede controlarse

indirectamente ya que est gobernada por fuerzas capilares. En cromatografa en

columna puede controlarse fcilmente dependiendo del gradiente de presin

mantenido a travs de la columna.

3) En cromatografa plana el tiempo que dura la separacin es el tiempo que

demora el disolvente en llegar a una cierta lnea determinada. En cromatografa

en columna cada soluto debe atravesar completamente la longitud de la columna,

por lo que el tiempo de separacin est determinado por el tiempo que demora el

soluto ms lento en atravesar la columna.

4) En cromatografa en columna la separacin de varias muestras debe realizarse en

forma secuencial, para cada muestra debe haber un proceso independiente de

introduccin en la columna. En cambio en cromatografa plana pueden realizarse

varias separaciones en simultneo, lo que constituye una ventaja en el ahorro de

tiempo frente a la cromatografa en columna. (Valcrcel, 2003, Pg. 391)

PARTE EXPERIMENTAL

MATERIALES

Mortero con piln

2 baguetas
2 escobillas
1 pisceta
2 vasos de precipitados de 150 mL y 250mL
 2 Pipetas de 2mL y 5mL
Placa Petri
Columna
Luna de reloj
Probeta de 25 mL
Esptula
Tijeras
Cinta adhesiva
Regla
Papel para cromatografa
Placa cromatografa

MUESTRAS
Flores color rojo intenso bien secas
Hojas de espinaca

REACTIVOS
cido clorhdrico al 1%
Metanol
cido actico
Benceno

PROCEDIMIENTO

A. PREPARACIN DE EXTRACTO DE HOJAS DE ESPINACA Y DE FLORES

Para la formacin extracto de hojas espinacas, era necesario que estn bien secas, se

tritur con ayuda el mortero hasta convertirla en polvo fino .despus se ech 5mL de

cido clorhdrico al 1% adicionalmente se introdujo alcohol, Se continu triturando

hasta que la muestra qued con bastante lquido sobrenadante dbilmente coloreado.

Una vez tenida la muestra completamente triturada, se filtr para el retirar las posibles

partculas suspendidas que pudiesen existir y se guard en un vaso de precipitado para

su posterior uso.
Para la segunda muestra de hojas de espinaca se realiz con los mismo pasos solo que

en este en vez de alcohol de adicion benceno, se continu triturando hasta que la

muestra quedo con bastante liquido sobrenadando y de apariencia verdosa muy oscura,

se pas a filtrar y se guard en un vaso de precipitado.

Para la obtencin de extracto de flores secas se sigui el mismo procedimiento inicial,

teniendo las flores rojas bien secas se pas a triturarlas con ayuda del mortero, se le

aadi alcohol y continu triturando hasta llegar a una mesclas con bastante contenido

lquido, posteriormente se filtr introducindola en una probeta con el fin de evitar

partculas slidas suspendidas.

B. CROMATOGRAFA DE PAPEL

Previamente ya teniendo lista muestras, se cort papel filtro lento para la cromatografa

de tamao adecuado para ser colocados en el vaso de precipitado sirviendo este como

cmara cromatografa. Se traz con un lpiz 1.5cm del borde inferior del papel y otra a

3cm del borde superior. Luego se marc 3 puntos donde se aplicaron la muestra.

Posteriormente se coloc como fase mvil benceno en el fondo del recipiente con la

ayuda de la pipeta siempre evitando mojar las paredes y se tap con una placa Petri.

Minutos despus se aplica la muestra de hojas de espinaca al papel utilizando el capilar

de tal forma que se produjese una mancha de 2 a 3 mm de dimetro, consecuentemente

se coloc el papel al nivel de la lnea inferior a la cmara lo ms rpido posible a fin de

evitar la prdida de saturacin de la fase mvil. Se dej correr el cromatograma hasta

que el solvente alcanz el borde superior. Por ltimo se retir al papel y se dej secar.

Este mismo procedimiento se realiz 2 veces ms utilizando en cada caso como fase

mvil adems de benceno, mescla de benceno - alcohol y alcohol.

Par la cromatografa de flores en papel realizaron los mismos paso previos utilizando

como fase mvil un mescla de alcohol benceno, alcohol y una mesclase de alcohol

ms agua y HCL al 1%.

C. CROMATOGRAFA EN CAPA FINA DE HOJAS DE ESPINACA

Se utiliz un cromatofolio de 5cm de largo por 2 cm de ancho, luego se traz una lnea

a 1 cm del borde inferior del cromatofolio y otra a una distancia de 5cm del borde

superior asimismo tuvimos que tener cuidado al marcar de manera leve la lnea con el

lpiz con el fin de que la capa adsorbente se interrumpa por esta accin y esta no

corriese por el cromatograma. Luego se marc 2 puntos donde se aplicaron la muestra

de hojas de espinaca. Despus se coloc el volumen de la fase mvil en este caso de

benceno en el fondo del recipiente con ayuda de la pipeta evitando mojar las paredes

inmediatamente se tap el recipiente.

Minutos despus se aplic la muestra de hojas de espinaca con un capilar delgado

sobre los puntos marcados cuya mancha era aproximadamente de 3mm dejndola secar.

Finalmente se introdujo la placa en la fase mvil teniendo en cuenta que la mancha no

deba sumergirse en el solvente inmediatamente se tap el frasco y se dej correr el

cromatograma hasta que el benceno alcanz el borde superior, se retir la placa y se

dejndola secar por unos minutos

RESULTADOS

EXTRACTO DE ESPINACA

Se realizaron dos extractos de espinaca en donde se utiliz en el primero alcohol y en el

segundo benceno. En el primer extracto se observ de color verde oscuro translucido,

mientras que el segundo extracto con benceno se observ de un color verde oscuro

intenso adems de un aspecto oleaginoso propio del benceno.

 CROMATOGRAFA DE EXTRACTO DE ESPINACA EN PAPEL

Benceno Benceno

Al darse el proceso de cromatografa se observ un desplazamiento notorio del soluto

en el papel filtro, observndose dos colores en el papel: verde y anaranjado que

corresponden a la clorofila y carotenoides respectivamente. Los solutos tomaron una

distancia considerable teniendo una buena distribucin en el papel filtro lento.

Benceno- Alcohol

Al inicio de la cromatografa se observ como el solvente ascenda de manera algo

rpida en comparacin al soluto por lo que el soluto no llego a separarse en sus

compuestos de manera adecuada, haciendo esto menos evidente los colores de estos en

la cromatografa.

Alcohol-Alcohol

Al darse el ascenso del solvente se observ que el soluto ascenda muy rpido asciendo

que los compuestos no tengan una separacin, por lo que se observ a los compuestos

muy juntos y en el frente del solvente haciendo difcil la identificacin de colores.

Benceno Mezcla entre agua, cido actico y HCl

Se observ que el solvente corri al mismo ritmo que el solvente haciendo que los

compuestos se separen, sin embargo no hubo una distancia adecuada entre los

compuestos, aunque se logr observar y idnticar los compuestos en un tono muy bajo

en comparacin con la cromatografa Benceno-Benceno y adems el papel filtro lento

absorbi mucho solvente en el proceso.

CROMATOGRAFA DE CAPA FINA DE EXTRACTO DE ESPINACA

Benceno-Benceno

Se observ al inicio una separacin correcta de compuestos pero mientras ascenda los

colores tomaron un tono ms claro llegando a observarse solo al inicio (clorofila)al final

del recorrido (carotenoides),mientras que el tono de la zona intermedia se cada vez ms

clara .

EXTRACTO DE FLORES ROJAS

Se realiz un solo extracto de flores rojas con alcohol en donde se observ de un color

rojo encendido un poco translucido.

CROMATOGRAFA DE FLORES EN PAPEL

Alcohol-Benceno

Se observ al solvente ascender con el soluto sin embargo el tono del soluto era muy

clara por lo que al trmino de la cromatografa no se lleg a idntica los compuesto

debido a la coloracin.

Alcohol-Alcohol

El ascenso del solvente fue muy rpido, sin embargo el soluto no ascendi quedndose

en la zona de origen y teniendo una forma ovalada de color rojo claro.

Alcohol-Mezcla entre agua, cido actico y HCl

Se observ que durante la cromatografa el solvente corri muy rpido haciendo que el

soluto ascienda y se acumule en el frente del solvente, por lo que no se observ una

correcta separacin de los compuestos y llego a visualizarse como una mancha de color

rojo claro en el papel filtro.

CLCULOS
CALCULO DEL
Frente de solvente
FACTOR DE

RETENCION

Frente de origen

()
=
()

Se tom las 6 cm 4,4 cm cromatografas en

donde se observaron la diferenciacin

2 cm
de solutos en el papel de filtro lento.

CROMATOGRAFIA DE EXTRACTO

DE ESPINACA EN PAPEL

BENCENO-BENCENO
 2 4,4
() = = 0,33 , () = = 0,73
6 6

BENCENO MEZCLA

4 cm 3 cm

1,5 cm

1,5 3
() = = 0,375 , () = = 0,75
4 4
DISCUSIN DE RESULTADOS

Para la preparacin de la muestra a cromatografa se observa que con alcohol y HCl no

se obtiene una buena cantidad de pigmentos, en cambio, s se obtiene con el benceno,

esto se debe al mejor arrastre que tiene el benceno (o sus derivados) sobre estos

pigmentos orgnicos.

Prueba adicional de ello se evidencia en que las cromatografas realizadas en las que la

fase mvil utilizada fue el benceno presentan mejor separacin que cuando variamos la

fase mvil a alcohol o agua.

Se observa en la estructura de uno de los pigmentos encontrados

(carotenos) que posee una larga cadena carbonada, lo que lo hace
ms afn a compuestos no polares.
As tambin las clorofilas A y B poseen una cadena larga de carbonos, que incrementa
su afinidad por compuestos como el benceno.

Caso contrario ocurre con las antocianinas, pigmento caracterstico de hojas rojas como

las utilizadas en la segunda parte de la prctica, ya que segn su estructura son solubles

en agua y alcoholes (Imagen inferior). Por ende en la preparacin de muestras utilizando

benceno y HCl no se obtuvieron buenos resultados.

Estructura de las antocianinas: Se puede observar los grupos hidroxilo como
sustituyentes que le dan mayor polaridad a la molcula.

CONCLUSIONES

A partir del procedimiento experimental y en base a nuestros resultados

obtenidos podemos concluir lo siguiente:

Es muy importante la cromatografa en papel ya que esta tcnica nos permite:

separar componentes de una mescla para as obtenerlos ms puros y que

puedan ser usados posteriormente por ejemplo en la etapa final de muchas

sntesis asimismo poder Medir la proporcin de los componentes de la mezcla

cuya finalidad sera analtica.

Para garantizar una buena cromatografa cuyos resultados sean los adecuados se

debe tener en cuenta que la fase mvil se desplaza no solo por capilaridad sino

tambin por evaporizacin del solvente y para ello el recipiente debe estar

saturado del vapor de la fase mvil previamente a la introduccin de papel luego

de cumplirse que:

La cromatografa debe realizarse en un recipiente cerrado (cmara).

La fase mvil se debe verter primero minutos antes del inicio de la

cromatografa hasta que los vapores de la misma saturen la recipiente cerrado

sino ocurriese una buena saturacin la evaporacin de la fase mvil seria

demasiado y habra un avance excesivo de la muestra.

El factor de retencin (Rf) durante la cromatografa de extracto de espinaca en

papel cuyo solvente fue el benceno nos arroj los valores mejores diferenciados

donde si pudimos ver la separacin de los componentes de la muestra cuyos

valores fueron: Rf de la clorofila de 0.33 y Rf de los carotenoides de 0.73

 estando en un intervalo aceptable teniendo en cuenta las condiciones y

variaciones que pueden surgir.

RECOMENDACIONES

Para tener una buena extraccin y tener una cromatografa en donde los compuestos se

puedan separan adecuadamente y se puedan identificar es recomendable realizar la

extraccin de espinaca con benceno y la de flores con alcohol ya que los compuestos de

ambas son solubles en tales, adems es importante tener un buen papel filtro lento.

Evitar realizar la cromatografa con papel filtro comn ya que este tienen demasiados

poros y al efectuar la cromatografa se producirn errores .Otro aspecto importante es

tener la cmara de cromatografa saturada con el vapor del solvente, ya que si no se

encuentra saturada el ascenso ser ms rpido con lo que se conllevara a errores en el

proceso .El tiempo en el cual se coloque el papel filtro lento dentro de la cmara tiene

que ser mnimo ,ya que se corre el riesgo de que si se tiene abierto la cmara mucho

tiempo esta deje de saturarse y al dar el proceso de cromatografa se produzca errores

.Al trabajar con el benceno procurar trabajar en la campaa y guantes para evitar daos

al operador .

BIBLIOGRAFA
Guarnizo F., Anderson. Martnez Y., Pedro. Experimentos de QUMICA

ORGNICA, Con enfoque en las ciencias de la vida. Armenia, Quindo,

Colombia. Ediciones Elizcom.

Valcarcel Cases, M. and Gomez Hens, A. (2003). Tcnicas analticas de

separacin. Barcelona: Reverte.