KAJIAN SENYAWA BIOAKTIF EKSTRAK BULU BABI

(Diadema setosum) SEBAGAI ANTI BAKTERI TERHADAP

BAKTERI Escherichia coli DAN Bacillus cereus

PROPOSAL SKRIPSI

Oleh :
Rr. ELING KEYKO YURIKA
26030113130056

FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN

UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2016
 DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ...................................................................................... i

DAFTAR ISI ................................................................................................... ii

DAFTAR TABEL .......................................................................................... iv

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... v

BAB I. PENDAHULUAN .............................................................................. 1

1.1. Latar Belakang.......................................................................... 1
1.2. Perumusan dan Pendekatan Masalah........................................ 2
1.2.1. Perumusan Masalah ........................................................ 2
1.2.2. Pendekatan Masalah ...................................................... 3
1.3. Tujuan dan Manfaat Penelitian ................................................. 5
1.3.1. Tujuan Penelitian ............................................................ 5
1.3.2. Manfaat Penelitian .......................................................... 5
1.4. Waktu dan Tempat Penelitian .................................................. 5

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ................................................................... 7

2.1. Bulu Babi .................................................................................. 7
2.2. Diadema setosum...................................................................... 8
2.2.1. Gonad ............................................................................. 8
2.2.2. Duri ................................................................................. 10
2.2.3. Cangkang ........................................................................ 10
2.3. Skrining Fitokimia .................................................................... 11
2.4. Senyawa Bioaktif...................................................................... 11
2.4.1. Falvonoid ........................................................................ 12
2.4.2. Fenol-Hidrokuinon ......................................................... 12
2.4.3. Steroid............................................................................. 13
2.4.4. Triterpenoid .................................................................... 14
2.4.5. Saponin ........................................................................... 14
2.5. Esktraksi ................................................................................... 15
2.5.1. Ekstraksi dengan Menggunakan Pelarut ........................ 15
2.5.2. Destiasi Uap.................................................................... 16
2.6. Pelarut ....................................................................................... 17
2.6.1. Etil Asetat ....................................................................... 18
2.7. Anti Bakteri .............................................................................. 18
2.6.1. Escherichia coli .............................................................. 19
2.6.2. Bacillus cereus................................................................ 20

BAB III. MATERI DAN METODE ............................................................. 21

3.1. Hipotesis ........................................................................................ 21
3.2. Materi Penelitian ........................................................................... 22
3.2.1. Bahan ................................................................................... 22

ii
 3.2.2. Alat ...................................................................................... 23
3.3. Metode Penelitian .......................................................................... 24
3.3.1. Penelitian Pendahuluan ....................................................... 25
3.3.1.1. Persiapan Sampel .................................................. 25
3.3.1.2. Skrining Fitokimia Kuantitatif .............................. 25
3.3.1.3. Ekstraksi Diadema setosum .................................. 26
3.3.2. Penelitian Utama................................................................. 27
3.3.2.1. Uji Aktivitas Anti Bakteri ..................................... 27
3.4. Parameter Pengujian ..................................................................... 29
3.4.1. Uji Kontrol Negatif ............................................................. 29
3.5. Rancangan Percobaan ................................................................... 29
3.6. Analisis Data................................................................................. 30

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 31

iii
 DAFTAR TABEL

Halaman

1. Komposisi gonad D. setosum .................................................................. 9

2. Bahan yang digunakan pada Proses Ekstraksi D. setosum ..................... 22

3. Bahan yang digunakan pada Pengujian Fitokimia Kuantitatif Ekstrak D.

setosum .................................................................................................... 22

4. Bahan yang digunakan pada Pengujian Aktivitas Anti Bakteri Ekstrak D.

setosum .................................................................................................... 23

5. Alat yang digunakan pada Proses Ekstraksi D. setosum ......................... 23

6. Alat yang digunakan pada Pengujian Fitokimia Kuantitatif Ekstrak D.

setosum .................................................................................................... 24

7. Alat yang digunakan pada Pengujian Aktivitas Anti Bakteri Ekstrak D.

setosum .................................................................................................... 24

iv
 DAFTAR GAMBAR

Halaman

1. Skema Penelitian ..................................................................................... 6

2. Anatomi Bulu Babi ................................................................................. 7

v
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Bulu babi (sea urchin) merupakan avertebrata yang tergolong dalam kelas

Echinoidea. Bulu babi merupakan indikator kualitas perairan. Jumlah bulu babi di

perairan Indonesia juga cukup melimpah. Bulu babi biasanya banyak ditemukan di

daerah lamun dan kekarangan.

Di Indonesia, potensi bulu babi belum optimal dikembangkan. Angka

statistik menunjukkan kuantitas ekspor bulu babi hidup ke Jepang kurang dari 0,5

metrik ton per tahun (JFTA, 2003 in Sonu, 2003).

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, bulu babi Diadema setosum

mengandung senyawa bioaktif. Senyawa bioaktif yang terkandung dalam bulu babi

ini berasal dari golongan steroid, saponin, flavonoid dan lain-lain. Kandungan

senyawa bioaktif yang terdapat dalam bulu babi ini dapat berpotensi sebagai

senyawa anti bakteri. Tidak hanya senyawa bioaktif yang terkandung dalam bulu

babi yang dapat dijadikan sebagai anti bakteri, namun kandungan toksinnya pun

juga. Menurut Abubakar et al. (2012) dalam Akerina et al. (2015), menyatakan

bahwa toksin yang dihasilkan oleh organisme salah satunya bulu babi dapat

dimanfaatkan dalam bidang pengobatan yang berpotensi untuk dimanfaatkan

sebagai antibiotik tipe baru untuk dikembangkan dalam bidang farmasi karena

mengandung senyawa bioaktif.

Senyawa anti bakteri dalam kehidupan dapat berguna untuk mengobati

infeksi dan menghambat pertumbuhan bakteri, terutama bakteri pathogen. Salah

1
 2

satunya adalah Escherichia coli dan Bacillus cereus, dimana kedua bakteri ini

merupakan bakteri yang terdapat dalam pencernaan manusia dan dapat

menyebabkan penyakit.

Senyawa bioaktif pada bulu babi dapat diambil dengan cara ekstraksi

menggunakan pelarut. Salah satunya adalah dengan menggunakan metode

maserasi. Untuk menentukan pelarut yang tepat maka harus diketahui sifat bulu

babi tersebut, karena pelarut yang bersifat like dissolve like. Berdasarkan penelitian

yang telah dilakukan ekstraksi bulu babi lebih banyak menarik senyawa bioaktif

dengan menggunakan pelarut yang bersifat semi-polar, sehingga dalam penelitian

ini digunakan pelarut semi-polar yaitu etil asetat karena mengandung toksisitas

yang rendah dan mudah diuapkan.

Pemanfaatan bagian bulu babi sebagai senyawa anti bakteri belum banyak

dilakukan, sehingga perlunya dilakukan penelitian mengenai anti bakteri alami dari

ektrak bagian bulu babi yang diharapkan dapat bermanfaat dalam bidang farmasi.

1.2. Perumusan dan Pendekatan Masalah

1.2.1. Perumusan Masalah

Pemanfaatan bulu babi (D. setosum) masih terbatas, sejauh ini hanya sebatas

bagian gonadnya. Bagian gonad bulu babi diketahui dapat dijadikan sebagai

senyawa anti bakteri. Untuk itu maka perlu diketahui senyawa bioaktif yang

terkandung dalam bulu babi. Untuk mengeluarkan senyawa bioaktif yang

terkandung dalam bulu babi maka perlu dilakukannya ekstraksi dengan

menggunakan pelarut. Ekstraksi dengan menggunakan pelarut dapat dilakukan

dengan cara maserasi.

 3

Penggunaan pelarut dalam ekstraksi merupakan hal yang sangat penting.

Menurut penelitian Akerina et al. (2015), etil asetat mampu mengeluarkan senyawa

bioaktif lebih baik dibandingkan pelarut methanol dan n-heksan pada pengujian

fitokimia kualitatif. Berdasarkan penelitian tersebut, bulu babi D. setosum

mengandung senyawa bioaktif steroid, saponin, triterpenoid, fenol-hidrokuinon dan

flavonoid.

Senyawa bioaktif tersebut diketahui mampu menghambat pertumbuhan

bakteri pathogen dari gram positif hingga negatif. Bakteri E. coli dan B. cereus

merupakan bakteri pathogen yang memiliki gram negatif dan positif. Menurut

Marimuthu et al. (2015), berdasarkan hasil yang diperoleh, secara jelas ekstrak

ovarium D. setosum memiliki kandungan anti bakteri yang baik melawan bakteri

pathogen dan non-pathogen. Bakteri yang digunakan antara lain : Bakteri gram

negatif (Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri,

Pseudomonas aeruginosa, Aeromonas hydrophila, Acinetobacter sp, Citrobacter

freundii and Klebsiella pneumoniae) and Bakteri gram positif (Bacillus subtilis,

Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus).

1.2.2. Pendekatan Masalah

Penlitian pendahuluan dilakukan dengan mengekstraksi dengan pelarut,

yaitu pelarut semi-polar (etil asetat). Ekstraksi dilakukan dengan merendam sampel

cangkang duri dan gonad D. setosum selama 3x24 jam dengan beberapa

pengadukan pada suhu ruang dengan konsentrasi yang berbeda. Setelah itu, sampel

diuji fitokimia kuantitatif. Menurut Pramana dan Chairul (2015), maserasi adalah

salah satu metode pemisahan senyawa dengan cara perendaman dengan

menggunakan pelarut organik pada temperatur ruangan. Proses maserasi sangat

 4

menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam karena selain murah dan mudah

dilakukan, metode ini sangat tepat digunakan untuk senyawa yang tidak tahan

panas. Sampel dimaserasi dengan pelarut organik metanol, tujuannya untuk

menarik senyawa-senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam sampel.

Proses maserasi menyebabkan pelarut akan menembus dinding sel dan masuk

kedalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif tersebut akan larut karena

adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan di luar

sel, maka larutan yang terpekat akan didesak keluar. Peristiwa tersebut akan

berlangsung terus-menerus sampai terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan

di luar sel dan di dalam sel. Sampel dimaserasi dengan pelarut metanol pada suhu

ruang selama 3 x 24 jam sambil sesekali dikocok.

Penelitian utama adalah menentukan zona hambat dari konsentrasi ekstrak

bulu babi, kemudian dilanjutkan dengan uji kontrol negatif. Konsentrasi yang

digunakan adalah 1000 g. Menurut penelitian Shankarlal dan Natarajan (2011),

pada pengujian anti bakteri dari ektrak cangkang bulu babi ungu (Salmacis

virgulata L.), memiliki zona hambat yang besar (mm) terhadap bakteri Salmonella

typhi, Proteus mirabilis, Vibrio cholerae dan Proteus vulgaris, secara berturut-turut

15 mm, 15mm, 15mm, dan 18mm.

 5

1.3. Tujuan dan Manfaat Penelitian

1.3.1. Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah:

1. Mengetahui kadar kandungan senyawa bioaktif secara kuantitatif; dan

2. Mengetahui aktivitas anti bakteri dari ekstraksi bagian bulu babi (D.

setosum) terhadap bakteri E. coli dan B. cereus.

1.3.2. Manfaat Penelitian

Manfaat penelitian ini adalah sebagai berikut :

1. Memberikan informasi kadar kandungan senyawa bioaktif secara

kuantitatif; dan

2. Memberikan informasi aktivitas anti bakteri dari ekstraksi bagian bulu babi

(D. setosum) terhadap bakteri E. coli dan B. cereus.

1.4. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian akan dilaksanakan pada bulan Januari 2017 yang berlokasi di

perairan Pulau Panjang, Jepara untuk sampling bulu babi. Proses ektraksi dan

evaporasi dilakukan di Laboratorium Terpadu Universitas Diponegoro, Semarang.

Pengujian skrinning fitokimiawi dilakukan di Laboratorium Chemix Pratama,

Yogyakarta dan pengujian aktivitas anti bakteri yang akan dilaksanakan di

Laboratorium Bacteriology Laboratorium Terpadu, Universitas Diponegoro.

 6

Permasalahan
I
1. Perlunya diketahui senyawa bioaktif dari bulu babi D. setosum dan
N
kandungan gonadnya melalui studi pustaka
P
2. Kandungan senyawa bioaktif dari D. Setosum memiliki potensi
U
sebagai antibakteri
T

Penelitian Pendahuluan
1. Ekstraksi dengan pelarut etil asetat pada bagian cangkang, duri dan
gonad D. setosum
2. Uji skrining fitokimiawi kuantitatif
U
M P
P R
A O
N S
B Penelitian Utama E
A S
L 1. Uji Aktivitas antibakteri terhadap bakteri E. coli dan B. cereus
I
K

Pengujian
Parameter Utama : Uji Aktivitas Anti Bakteri
Parameter Pendukung : 1. Uji Skrining Fitokimia Kuantitatif
2. Uji kontrol negatif

O
U
T
Data
P
U
T
Analisis Data

Kesimpulan

Gambar 1. Skema Penelitian

 BAB II

TINJAUAN PUSATAKA

2.1. Bulu Babi

Secara morfologi, bulu babi (Echinoidea) terbagi dalam dua kelompok yaitu

bulu babi beraturan (regular sea urchin) dan bulu babi tidak beraturan (irregular

sea urchin). Bentuk tubuh bulu babi regularia adalah simetri pentaradial hampir

berbentuk bola sedangkan bulu babi iregularia memperlihatkan bentuk simetri

bilateral yang bervariasi (Aziz 1987; Radjab 2001 dalam Suryanti dan Ruswahyuni,

2014).

Sea urchin atau lebih dikenal dengan landak laut adalah suatu binatang laut

yang 95% tubuhnya terdiri dari duri-duri. Duri-duri yang sedikit beracun ini sangat

rapuh. Binatang ini memiliki duriduri yang bisa digerakkan yang muncul dari

badannya. Duri-duri inilah yang digunakan untuk bergerak, mencapit makanan dan

melindungi diri. Pada beberapa jenis landak laut, duri-duri ini mengandung racun

(Aprilia et al., 2012).

Gambar 2. Anatomi Bulu Babi

Sumber : Pinsino dan Valeria (2015)

7
 8

2.2. Diadema setosum

Menurut Rumahlatu (2012), D. setosum merupakan anggota dari famili

Diadematidae kelas Ecninoidea filum Echinodermata. Aziz (1996)

mengungkapkan bahwa tubuh hewan ini berbentuk bulat dan cangkang yang

beraturan. Bentuk cangkang berupa buah delima atau dengan bentuk lebih tertekan

memipih memberikan kesan setengah bola. Ukuran cangkang yang telah dewasa

bisa mencapai 90 mm dengan cincin putih di sekitar sistem apikal dan juga cincin

merah bata di pangkal kerucut anus dan mempunyai duri-duri berwarna hitam yang

tajam dengan panjang 8-10 cm.

Bulu babi D. setosum hidup di daerah pantai di wilayah Indo-Pasifik.

Umumnya, bulu babi D. setosum dapat ditemukan diseluruh perairan pantai, mulai

dari daerah pasang surut sampai perairan dalam. Bulu babi D. setosum lebih

menyukai perairan yang jernih dan airnya relatif tenang. Keberadaan bulu babi D.

setosum pada ekosistem terumbu karang memberikan pengaruh yang signifikan

terhadap keseimbangan ekologi. D. setosum tidak saja hidup pada daerah terumbu

karang, tetapi juga pada daerah rocky shore atau daerah lamun (Thamrin et al.,

2011).

D. setosum adalah salah satu jenis landak laut mempunyai nilai ekonomis

untuk dikonsumsi (Azis 1993 dalam Ratna 2002), dan bagian tubuh yang

dikonsumsi adalah gonad atau telurnya (Aprilia et al., 2012).

2.2.1. Gonad

Menurut Roslita (2000), gonad bulu babi di luar negeri menjadi makanan

populer dengan nilai perdagangan yang baik, dipasarkan dalam bentuk produk

segar, beku, asin, produk kering, maupun produk kalengan berupa pasta fermentasi.
 9

Aziz (1993) menambahkan, gonadnya dapat dijadikan sebagai sumber pangan

karena mengandung 28 macam asam amino,vitamin B kompleks, vitamin A,

mineral, asam lemak tak jenuh omega-3, dan omega-6.

Menurut Salma et al. (2016), secara keseluruhan kandungan nutrisi pada

gonad D. setosum secara utuh memenuhi persyaratan untuk digunakan sebagai

sumber makanan. Penggunaan gonad D. setosum sebagai sumber makanan secara

tidak langsung menyelamatkan kekarangan di laut. Kandungan vitamin E dan

vitamin A lebih besar dibandingkan dengan makarel, salmon, sardine, ikan kepala

ular dan telur. D. setosum cukup sebagai sumber untuk meningkatkan respon imun

sama seperti pengaturan pada inflamasi.

Menurut Marimuthu et al. (2015), berdasarkan penelitian mengenai

aktivitas anti bakteri pada ekstrak ovarium D. setosum, telah disebutkan bahwa

terdapat senyawa antibakteri pada spesies Echinodermata secara luas. Pada

kebanyakan studi spesies, seluruh bagian tubuh atau bagian body wall telah diuji

untuk akativitas anti bakteri. Hasil penelitian menyatakan bahwa ovarium D.

setosum memiliki sifat antimikroba yang baik melawan bakteri pathogen dan non-

pathogen.

Tabel 1. Komposisi gonad D. setosum

Komposisi Total (%)
Kadar air 66.86 - 77.24
Kadar abu 2.09
Kadar lemak 6.89
Kadar protein 12.60
Kadar karbohidrat (by different) 11.58
Sumber : Afifudin et al. (2014)
 10

2.2.2. Duri

Menurut Aprilia et al. (2012), sea urchin atau lebih dikenal dengan landak

laut adalah suatu binatang laut yang 95% tubuhnya terdiri dari duri-duri. Duri-duri

yang sedikit beracun ini sangat rapuh. Binatang ini memiliki duri-duri yang bisa

digerakkan yang muncul dari badannya. Duri-duri inilah yang digunakan untuk

bergerak, mencapit makanan dan melindungi diri. Pada beberapa jenis landak laut,

duri-duri ini mengandung racun.

Cangkang dan duri landak laut memiliki kandungan senyawa aktif yang

bersifat toksik. Kandungan dalam cangkang dan duri landak laut telah diketahui

sampai saai ini adalah polihidroksi dan apelasterosida A dan B (Angka dan

Suhartono, 2000). Diperkirakan racun yang ada dalam cangkang dan duri tersebut

dapat juga digunakan sebagai bahan obat.

2.2.3. Cangkang

Landak laut memiliki cangkang yang keras dan bagian dalamnya bersisi

lima simetris. Cangkang dari jenis bulu babi tertentu dilapisi oleh pigmen cairan

hitam yang stabil. Cairan ini dapat digunakan sebagai pewarnaan jala dan kulit.

Cangkang dari bulu babi juga diminati sebagai barang perhiasan sedangkan organ

dari sisa pengolahan bulu babi biasanya berupa cangkang dan organ dalam (jeroan)

dapat diproses lebih lanjut menjadi pupuk.

Cangkang landak laut memiliki kandungan senyawa aktif yang bersifat

toksik, diperkirakan racun yang ada dalam landak laut tersebut dapat juga

digunakan sebagai anti bakteri (Aprilia et al., 2012).

 11

2.3. Skrining Fitokimia

Skirining fitokimia merupakan tahap pendahuluan dalam suatu penelitian

fitokimia yang bertujuan memberi gambaran tentang golongan senyawa yang

terkandung dalam tanaman yang diteliti. Metode skrining fitokimia yang dilakukan

dengan melihat reaksi pengujian warna dengan menggunakan suatu pereaksi warna

(Simaremare, 2014).

Skrining fitokimia secara kualitatif dilakukan dengan penambahan berbagai

pereaksi tertentu ke dalam ekstrak tanaman sehingga menghasilkan warna

larutan/endapan spesifik yang menandakan keberadaan senyawa tertentu. Secara

kuantitatif, senyawa sekunder dapat diukur dengan spektrofotometer, seperti pada

penetapan kadar tanin atau saponin. Analisis juga dapat dilakukan dengan High

Performance Liquid Cromatography (HPLC) (Ginting et al., 2012).

2.4. Senyawa Bioaktif

Senyawa bioaktif merupakan senyawa yang terkandung dalam tubuh hewan

maupun tumbuhan. Senyawa ini memiliki berbagai manfaat bagi kehidupan

manusia, diantaranya dapat dijadikan sebagai sumber antioksidan, anti bakteri,

antiinflamasi, dan antikanker (Firdiyani et al., 2015).

Meningkatnya kebutuhan untuk agen antimikroba baru mampu

mengendalikan penyakit yang muncul atau ketahanan terhadap mikroorganisme

terinspirasi dari semakin banyak kelompok penelitian untuk mengeksplorasi lautan

untuk senyawa bioaktif yang baru. Sepanjang tahun, program skrining secara luas

dikembangkan di seluruh dunia dan upaya-upaya besar telah dikhususkan bertujuan

untuk mengisolasi metabolit baru dari mikroorganisme laut (Debbab et al., 2010).
 12

2.4.1. Flavonoid

Golongan flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C6- C3-

C6. Artinya kerangka karbonnya terdiri atas dua gugus C6 (cincin benzena

tersubstitusi) yang disambungkan oleh rantai alifatik tiga-karbon (Yunita et al.,

2009).

Senyawa flavonoid merupakan senyawa yang bersifat non polar, namun

flavonoid mempunyai gugus gula yang menyebabkan mudah larut dalam polar

ataupun semi polar (Firdiyani et al., 2015).

Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang larut dalam etil asetat jika

terdapat dalam bentuk glikosida dengan satu molekul gula dan larut dalam eter jika

terdapat dalam bentuk aglikon (Markam, 1982 dalam Aminah dan Suwijo, 2013).

Flavonoid merupakan senyawa fenol yang agak asam sehingga dapat larut

dalam basa, karena itu warnanya berubah bila ditambah basa atau ammonia,

sehingga mudah dideteksi dengan kromatogram atau dalam larutan. Identifikasi

flavonoid dapat dilakukan secara spektrofotometri UV, NMR dan Massa

(Markham, 1982; Harborne, 1987 dalam Aminah dan Suwijo, 2013).

2.4.2. Fenol-Hidrokuinon

Fenol meliputi berbagai senyawa yang berasal dari tumbuhan dan

mempunyai ciri sama yaitu cincin aromatik yang mengandung satu atau dua gugus

hidroksil. Flavonoid merupakan golongan fenol yang terbesar, selain itu juga

terdapat fenol monosiklik sedarhana, fenilpropanoi, dan kuinon fenolik (Harborne

1987). Kuinon adalah senyawa bewarna dan mempunyai kromofor dasar, seperti

kromofor pada benzokuinon, yang terdiri atas dua gugus karbonil yang

berkonjugasi dengan dua ikatan rangkap karbon-karbon.

 13

Kuinon untuk tujuan identifikasi dapat dipilah menjadi empat kelompok,

yaitu benzokuinon, naftokuinon, antrakuinon dan kuinon isoprenoid. Tiga

kelompok pertama biasanya terhidroksilasi dan bersifat senyawa fenol serta

mungkin terdapat in vivo dalam bentuk gabungan dengan gula sebagai glikosida

atau dalam bentuk kuinol tanpa warna, kadang-kadang juga bentuk dimer. Dengan

demikian diperlukan hidrolisis asam untuk melepaskan kuinon bebasnya (Harborne

1987). Senyawa kuinon yang terdapat sebagai glikosida mungkin larut sedikit

dalam air, tetapi umunya kuinon lebih mudah larut dalam lemak dan akan terdeteksi

dari tumbuhan bersama-sama dengan karotenoid dan klorofil. Reaksi yang khas

adalah reduksi bolak-balik yang mengubah kuinon menjadi senyawa tanpa warna,

kemudian warna kembali lagi bila terjadi oksidasi oleh udara. Reduksi dapat

dilakukan menggunakan natrium borohidrida dan oksidasi ulang dapat terjadi hanya

dengan mengocok larutan tersebut diudara (Harborne 1987).

2.4.3. Steroid

Steroid merupakan senyawa bioaktif yang tergolong non polar, biasanya

senyawa non polar akan tertarik oleh pelarut non polar (like dissolved like)

(Firdiyani et al., 2015).

Steroid merupakan grup senyawa alami dan sintesis yang sangat besar

dengan aktivitas biologi yang luas. Nukleus steroid dasar terdiri dari tiga cincin

sikloheksana dan satu cincin siklopentana. Perbedaan steroid terutama

menghasilkan variasi dari rantai samping, R1, R2, dan R3 yang kedua adalah

perbedaan pada substansi nuklir dan derajat ketidakjenuhan. R1 dan R2 umumnya

adalah grup metil yang terkadang dapat teroksigenasi. R2 tidak terdapat dalam

hormone esterogen dan steroid lainnya memiliki cincin aromatik A/B. Rantai
 14

samping R3 dapat meliputi 2, 4, 5, 8, 9, 10, atom karbon: apabila tidak ada posisi

tersebut biasanya teroksigenasi. Kelas-kelas steroid yang paling penting termasuk :

Sterol, asam empedu, kortikosteroid, hormone kelamin, saponin, dan withanolides

(Brahmachari, 2013).

2.4.4. Triterpenoid

Senyawa triterpenoid yang dapat dijumpai pada tumbuhan berfungsi

sebagai pelindung untuk menolak serangga dan serangan mikroba. Kandungan

senyawa triterpenoid pada pelarut etil asetat lebih banyak dibandingkan pelarut

methanol (Riyanto et al., 2013 dalam Firdiyani et al., 2015).

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam

satuan isoprena. Senyawa ini berstruktur siklik yang relatif rumit, kebanyakan

berupa alkohol, aldehida, atau sam karboksilat. Uji yang banyak digunakan ialah

reaksi Lieberman-Burchad (anhidrida asetat H2SO4 pekat), di mana uji ini akan

memberikan warna hijau-biru untuk triterpena dan sterol (Yunita et al., 2009).

2.4.5. Saponin

Saponin diberikan nama demikian karena sifatnya yang menyerupai sabun

(bahasa Latin sapo berarti sabun). Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang

kuat menimbulkan busa jika dikocok dalam air, dan pada konsentrasi yang rendah

sering menyebabkan hemolisis sel darah merah.

Dalam larutan yang sangat encer, saponin sangat beracun untuk ikan, dan

tumbuhan yang mengandung saponin telah digunakan sebagai racun ikan selama

beratus-ratus tahun. Beberapa saponin juga dapat bekerja sebagai antimikroba. Pada

beberapa tahun terakhir ini, saponin tertentu menjadi penting karena dapat

diperoleh dari beberapa tumbuhan dengan hasil yang baik, dan digunakan sebagai
 15

bahan baku untuk sintesis hormon steroid yang digunakan dalam bidang kesehatan

(Robinson, 1995 dalam Yunita et al., 2009).

2.5. Ekstraksi

Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut

sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan menggunakan pelarut

cair (Yulianti et al., 2014).

Menurut DEPKES RI (2000), metode ekstraksi dapat dilakukan dengan

ekstraksi dengan menggunakan pelarut dan juga dengan destilasi uap.

2.5.1. Ekstraksi dengan Menggunakan Pelarut

(1) Cara dingin

a. Maserasi

Maserasi

adalah proses pengekstarakan simplisia dengan menggunakan

pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada

temperatur ruangan (kamar). Secara teknologi termasuk ekstraksi

dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan.

Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinu (terus-

menerus). Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan

pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama, dan seterusnya.

b. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai

sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada

temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan,

 16

tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan /

penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak

(perklorat) yang jumlahnya 1 5 kali bahan.

(2) Cara panas

a. Refluks

Refluks adalah ekstrasi dengan oelarut pada temperature titik

didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang

relative konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan

pengulangan proses pada residu pertama sampai 3 -5 kali sehingga

dapat termasuk proses ekstraksi sempurna.

b. Soxhlet

Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang baru yang

umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi

kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin

balik.

c. Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu)

pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar),

yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40 50oC.

2.5.2. Destilasi Uap

Destilasi uap adalah ekstraksi ekstraksi senyawa kandungan menguap

(minyak atsiri) dari bahan (segar atau simplisia) dengan uap air berdasarkan

peristiwa tekanan parsial senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari

ketel secara kontinu sampai sempurna dan diakhiri dengan kondensasi fase uap
 17

campuran (senyawa kandungan menguap ikut terdestilasi) menjadi destilat air

bersama senyawa kandungan yang memisah sempurna atau memisah sebagian.

Destilasi uap, bahan (simplisia) benar-benar tidak tercelup ke air yang

menidih, namun dilewati uap air sehingga senyawa kandungan menguap ikut

terdestilasi.

Destilasi uap dan air, bahan (simplisia) bercampur sempurna atau sebagian

dengan air mendidih, senyawa kandungan menguap tetap kontinu ikut terdestilasi.

2.6. Pelarut

Untuk mendapatkan ekstraksi yang menyeluruh dan mendapatkan senyawa-

senyawa yang mempunyai aktivitas farmakologi maka pemilihan pelarut yang

digunakan untuk mengekstraksi merupakan faktor yang penting. Pelarut ideal yang

sering digunakan adalah alkohol atau campurannya dengan air karena merupakan

pelarut pengekstraksi yang terbaik untuk hampir semua senyawa dengan berat

molekul rendah seperti saponin dan flavonoid (Wijesekera, 1991 dalam Arifianti et

al., 2014).

Menurut Guenther (1987) dalam Susanti et al. (2012), pelarut sangat

mempengaruhi proses ekstraksi. Pemilihan pelarut pada umumnya dipengaruhi oleh

faktor-faktor antara lain :

1. Selektivitas

Pelarut dapat melarutkan semua zat yang akan diekstrak dengan cepat dan

sempurna.
 18

2. Titik didih pelarut

Pelarut harus mempunyai titik didih yang cukup rendah sehingga pelarut mudah

diuapkan tanpa menggunakan suhu tinggi pada proses pemurnian dan jika diuapkan

tidak tertinggal dalam minyak.

3. Pelarut tidak larut dalam air

4. Pelarut bersifat inert sehingga tidak bereaksi dengan komponen lain

5. Harga pelarut semurah mungkin.

6. Pelarut mudah terbakar

2.6.1. Etil Asetat

Etil asetat merupakan jenis pelarut yang bersifat semi polar. Pelarut ini

memiliki titik didih yang relatif rendah yaitu 77oC sehingga memudahkan

pemisahan minyak dari pelarutnya dalam proses destilasi (Susanti et al., 2012).

Etil asetat merupakan pelarut yang baik digunakan untuk ekstraksi karena

dapat dengan mudah diuapkan, tidak higroskopis dan memiliki toksisitas rendah.

Etil asetat merupakan pelarut yang dapat menarik senyawa golongan alkaloid,

flavonoid, tanin, dan fenol pada daun ketapang (Hafid et al., 2015).

2.7. Anti Bakteri

Anti bakteri adalah zat yang menghambat pertumbuhan bakteri dan

digunakan secara khusus untuk mengobati infeksi. Aktivitas suatu zat yang bersifat

anti bakteri dipengaruhi oleh beberapa faktor penting seperti konsentrasi bahan, pH,

komposisi medium, suhu, jenis bakteri penguji dan kemampuan anti bakteri untuk

mengurangi dalam medium (Maharani et al., 2016).

 19

Mekanisme kerja anti bakteri antara lain merusak dinding sel, mengganggu

permeabilitas membran, merusak molekul protein dan asam nukleat, menghambat

aktivitas enzim, dan menghambat sintesa protein (Muslimin, 1996 dalam

Permatasari dan Ika, 2015).

2.7.1. Escherichia coli

E. coli merupakan bakteri yang selalu terdapat pada sistem pencernaan

manusia dan hewan berdarah panas dan telah umum dianggap sebagai indikator

pencemaran kotoran. Beberapa jenis E. coli umum ditemukan pada penderita diare

dan keracunan makanan. Jenis-jenis E. coli tersebut di antaranya EPEC

(Enteropathogenic E. coli), EIEC (Enteroinvasive E. coli), ETEC (Enterotoxigenic

E. coli), dan EHEC (Enterohaemorrhagic E. coli) (Rohdiana et al., 2013).

Karakteristik bakteri tersebut tersifat sebagai bakteri gram negatif, tidak

tahan asam, tidak membentuk spora. Sebagian besar bakteri E. coli bersifat motil,

dengan alat pergerakan flagella. Pada kondisi alami bakteri E. coli mampu bertahan

hidup selama berbulan-bulan dalam air dan feses.Bakteri E. coli tumbuh dengan

subur pada PH 7, tetapi dapat juga tumbuh pada kisaran PH yang lebih tinggi.

Pertumbuhan bakteri juga bersifat aerobik dan fakultatif anaerobik. Pada umumnya

galur E. coli merupakan saprofit yang berbahaya atau potensial patogen, namun

beberapa galur merupakan bakteri yang memang patogenik yang dapat

berkolonisasi tidak hanya pada saluran pencernaan, tetapi juga pada berbagai organ

dalam (Wibowo dan Surya, 2009).

 20

2.7.2. Bacillus cereus

B. cereus telah dikenali sebagai salah satu penyebab keracunan pada

makanan, sehingga mikroorganisme ini telah menarik banyak perhatian dan

menjadi salah satu penyebab keracunan pada pangan yang termasuk sering

ditemukan (Sumaryati dan Sudiyono, 2015).

B. cereus ialah bakteri berbentuk batang yang berspora dan bersifat gram

positif, selnya berukuran besar dibandingkan dengan bakteri batang lainnya serta

tumbuh secara aerob fakultatif. Untuk membedakan B. cereus dengan Bacillus

lainnya digunakan ciri morfologi dan biokimia. B. cereus merupakan salah satu

jenis bakteri yang masuk ke dalam genus Bacillus. yang banyak ditemukan pada

makanan dan dapat menyebabkan sakit pada manusia sehingga digolongkan ke

dalam bakteri pathogen. Bakteri ini mampu menghasilkan spora yang tahan

terhadap panas dan proses dehidrasi (Amanati, 2014).

 BAB III

MATERI DAN METODE

3.1. Hipotesis

Hipotesis dari penelitian adalah perbedaan bagian tubuh ekstrak bulu babi

(Diadema setosum) mempengaruhi zona hambat pada bakteri Escherichia coli dan

Bacillus cereus, dengan rumusan :

Ho: Perbedaan bagian tubuh ekstrak D. setosum tidak memberikan pengaruh

terhadap daya hambat bakteri E. coli dan B. cereus pada pengujian aktivitas

anti bakteri

H1: Perbedaan bagian tubuh ekstrak D. setosum memberikan pengaruh terhadap

daya hambat bakteri E. coli dan B. cereus pada pengujian aktivitas anti bakteri

Kaidah pengambilan keputusan adalah sebagai berikut:

1. Jika Fhitung < Ftabel maka terima H0 dan tolak H1 atau p > 5%.

2. Jika Fhitung Ftabel maka tolak H0 dan terima H1 atau p < 5%.

21
 22

3.2. Materi Penelitian

3.2.1. Bahan

Bahan yang digunakan adalah bulu babi (D. setosum) yang diambil

di perairan Pulau Panjang, Jepara, Jawa Tengah.

Bahan yang digunakan pada proses ekstraksi D. setosum adalah sebagai

berikut:

Tabel 2. Bahan yang digunakan pada Proses Ekstraksi D. setosum

No Bahan Keperluan Fungsi
1. D. setosum 1000 gram Sebagai bahan baku
2. Kertas saring Secukupnya Sebagai penyaring saat ekstraksi
3. Etil asetat 3 liter Sebagai pelarut
4. Aquadest Secukupmya Sebagai bahan untuk mencuci
alat
5. Alumunium foil Secukupnya Sebagai pembungkus saat
ekstraksi

Bahan yang digunakan pada pengujian fitokimia kuantitatif ekstrak D.

setosum adalah sebagai berikut:

Tabel 3. Bahan yang digunakan pada Pengujian Fitokimia Kuantitatif Ekstrak D.

setosum
No Bahan Keperluan Fungsi
1. Ekstrak D. setosum 30 gram Sebagai bahan yang akan diuji
2. Metanol 80% 100 ml Sebagai pelarut dalam uji
flavonoid
3. Etanol 20% 120 ml Sebagai pelarut dalam uji
saponin
4. Dietil eter 20 ml Sebagai reagen pengujian
saponin
5. N-butanol 60 ml Sebagai reagen pengujian
saponin
6. NaCl % 20 ml Sebagai reagen pengujian
saponin
 23

Bahan yang digunakan pada pengujian aktivitas anti bakteri ekstrak D.

setosum adalah sebagai berikut:

Tabel 4. Bahan yang digunakan pada Pengujian Aktivitas Anti Bakteri Ekstrak D.
setosum
No Bahan Keperluan Fungsi
1. Nutrient Agar (NA) 2.76 gram Sebagai media tumbuh
bakteri
2. Nutrient Broth (NB) 0.16 gram Sebagai media tumbuh
bakteri
3. Kultur bakteri 1 ose Sebagai bakteri uji
(E. coli dan
B.cereus)
4. Alumunium foil Secukupnya Sebagai pembungkus saat
sterilisasi
5. Cling wrap Secukupnya Sebagai pembungkus cawan
petri
6. Alkohol 70% secukupnya Sebagai bahan sterilisasi
7. Aquadest 200 mL Sebagai pelarut media agar

3.2.2. Alat

Alat yang digunakan pada proses ekstraksi D. setosum adalah sebagai

berikut:

Tabel 5. Alat yang digunakan pada Proses Ekstraksi D. setosum

No Alat Fungsi
1. Rotary Evaporator Sebagai alat untuk menguapkan pelarut
2. Labu round bottom flask Sebagai tempat sampel pada saat evaporasi
3. Vortex Sebagai alat homogenisasi
4. Erlenmeyer Sebagai tempat ekstraksi sampel
5. Timbangan analitik Sebagai alat untuk menimbang sampel
6. Corong Sebagai alat bantu penyaringan
7. Labu ukur Sebagai alat untuk pengenceran
8. Gelas ukur Sebagai alat pengukur cairan

Alat yang digunakan pada pengujian fitokimia kuantitatif ekstrak D.

setosum adalah sebagai berikut:

 24

Tabel 6. Alat yang digunakan pada Pengujian Fitokimia Kuantitatif Ekstrak D.

setosum
No Alat Fungsi
1. Labu ukur Untuk pengenceran
2. Centrifuge Untuk memisahkan endapan dan filtrate
3. Tabung reaksi Untuk tempat larutan
4. Rak tabung reaksi Untuk tempat tabung reaksi
5. Spektrofotometer Untuk mengukur absorbansi larutan
6. Pipet ukur Untuk mengambil larutan
7. Propipet Untuk alat bantu pipet ukur

Alat yang digunakan pada pengujian aktivitas anti bakteri ekstrak D.

setosum adalah sebagai berikut:

Tabel 7. Alat yang digunakan pada Pengujian Aktivitas Anti Bakteri Ekstrak D.
setosum
No Alat Fungsi
1. Cawan petri Sebagai tempat media agar dan pembiakan
bakteri
2. Inkubator Sebagai alat untuk inkubasi
3. Laminar air flow Sebagai tempat inokulasi bakteri
4. Autoclave Sebagai alat sterilisasi
5. Erlenmeyer Sebagai tempat pembuatan media
6. Tabung reaksi Sebagai tempat larutan
7. Rak tabung reaksi Sebagai tempat tabung reaksi
8. Vortex Sebagai alat homogenisasi
9. Jarum ose Sebagai alat menggoreskan bakteri
10. Bunsen Sebagai alat untuk sterilisasi non gelas
11. Mikropipet Sebagai alat untuk mengambil larutan
12. Propipet Sebagai alat bantu pipet ukur
13. Boor pop Sebagai alat pembuatan lubang sumuran
14. Pinset Sebagai alat untuk meletakkan sumuran
pada agar
15. Jangka sorong Sebagai alat pengukur diameter zona
hambat

3.3. Metode Penelitian

Metode penelitian yang digunakan adalah experimental laboratories,

menurut Aprilia et al. (2012), eksperimental laboratories yaitu metode penelitian

 25

untuk menyelidiki kemungkinan saling hubungan sebab akibat dengan

menggunakan pada satu atau lebih kelompok eksperimental, satu atau lebih kondisi

perlakuan dan perbandingan hasilnya dengan satu atau lebih kondisi perlakuan dan

perbandingan hasilnya dengan satu kontrol atau lebih kelompok kontrol yang tidak

dikenai kondisi perlakuan. Menggunakan kontrol untuk dibandingkan dengan

kelompok yang dikenai perlakuan eksperimental.

3.3.1. Penelitian Pendahuluan

Penelitian pendahuluan yang dilakukan bertujuan untuk mengetahui

senyawa bioaktif yang dihasilkan dari ekstrak cangkang, duri dan gonad D.

setosum.

3.3.1.1. Persiapan Sampel

Sampel yang telah diambil kemudian dimasukkan kedalam cool box yang

telah diisi air laut dan es. Tujuan pemberian es adalah untuk menjaga bulu babi agar

tetap dalam keadaan segar. Sampel kemudian dipisahkan bagian cangkang, duri dan

gonadnya.

3.3.1.2. Skrining Fitokimia Kuantitatif

1. Penentuan Flavonoid

Sampel sebanyak 10 gram diekstrak secara berulang kali dengan 100 ml

metanol 80% pada suhu kamar. Seluruh larutan disaring dengan kertas saring

Whatman No. 42, kemudian filtrat dimasukkan ke dalam krus porselain dan

diuapkan dengan pengeringan di atas penangas air, lalu beratnya ditimbang hingga

konstan. Metode yang digunakan adalah metode Boham dan Kocipai-Abyazan

(1994).
 26

2. Penentuan Saponin

Sebanyak 20 gram sampel dimasukkan ke dalam Erlenmeyer dan

ditambahkan dengan 100 ml etanol 20%. Setelah itu campuran dipanaskan di atas

penangas air selama 4 jam pada suhu 55oC. Kemudian campuran disaring dan

residunya diekstrak kembali dengan 20 ml etanol 20%. Setelah itu ekstrak yang

telah diperoleh dipanaskan dalam penangas air dengan suhu 90 oC sehingga

volumenya tinggal 40 ml. Ekstrak yang telah pekat dimasukkan ke dalam corong

pisah 250 ml, kemudian ditambahkan dengan 20 ml dietil eter dan dikocok dengan

cepat. Lapisan yang mengandung air dipisahkan dan lapisan eternya dibuang.

Setelah itu proses pemurnian diulang kembali dengan ditambahkan larutan nbutanol

sebanyak 60 ml. Ekstrak nbutanol yang telah diperoleh dicuci sebanyak 2 kali

dengan 10 ml larutan NaCl 5%. Lalu larutan sisanya dipanaskan dalam penangas

air. Setelah terjadi penguapan, sampel dikeringkan dalam oven hingga beratnya

konstan; persen kandungan saponin ditentukan. Metode yang digunakan adalah

metode Obadoni dan Ochuko (2001).

3.3.1.3. Ekstraksi Diadema setosum

Ekstraksi D. setosum menggunakan pelarut etil asetat yang mengacu pada

penelitian Akerina et al. (2015) karena pelarut etil asetat mampu mengambil

senyawa bioaktif lebih baik dibandingkan dengan methanol dan n-heksan. Pelarut

etil asetat bersifat semi polar yang berhubungan dengan senyawa bioaktif yang

terdapat pada D. setosum yang juga bersifat semi polar.

Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi yaitu sebanyak 50 g sampel

direndam dalam pelarut etil asetat dengan perbandingan 1 : 3 selama 3 x 24 jam.

Ekstrak disaring menggunakan kertas saring kemudian dievaporasi dengan vacum

 27

rotary evaporator pada suhu 37-40C, selanjutnya ekstrak disimpan pada suhu

chiling (0-4C) sebelum dianalisis.

3.3.2. Penelitian Utama

Penelitian utama yang dilakukan bertujuan untuk mengetahui zona hambat

dari hasil ekstrasi cangkang, duri dan gonad D. setosum.

3.3.2.1. Uji Aktivitas Anti Bakteri

Pengujian aktivitas anti bakteri terhadap bakteri uji menggunakan metode

difusi sumur. Sumur dengan kedalaman 3 mm dibuat pada media yang telah

dicampurkan dengan 20 L inokulum bakteri uji dengan menggunakan pipet tetes

steril. Ekstrak bulu babi (D. setosum) dengan konsentrasi 1000 g ditetes ke dalam

sumur sebanyak 20 L Aktivitas anti bakteri ditandai dengan terbentuknya zona

bening di sekitar sumur dan diukur menggunakan penggaris.

Proses Uji Anti bakteri dengan Menggunakan Metode Difusi Sumur

a) Sterilisasi Peralatan dan Media

Alat-alat yang terbuat dari kaca disterilkan dengan menggunakan oven pada

suhu 1800C selama 2 jam. Alat-alat logam disterilkan dengan cara dipijarkan

menggunakan lampu spiritus, sedangkan untuk alat-alat yang tidak tahan dan

medium pada pemanasan dengan suhu tinggi, disterilkan dalam autoklaf pada suhu

1210C tekanan 2 atm selama 15 menit.

b) Pembuatan Media

Pembuatan media yang akan digunakan dalam pengujian aktivitas anti bakteri

antaralain : hard agar, soft agar dan nutrient broth (NB). Masing-masing media

mempunyai kegunaan sendiri, seperti hard agar digunakan sebagai lapisan dasar

pada cawan petri, soft agar digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri
 28

pathogen, nutrient broth (NB) digunakan sebagai media cair pertumbuhan bakteri.

Menurut Ngajow et al., (2013), Hard agar dibuat dengan cara melarutkan 0,8 g

nutrient broth (NB) dan 2 g agar dalam 100 ml aquadest, Sedangkan soft agar

dibuat dengan cara melarutkan 0,8 g NB dan 0,76 g agar dalam 100 ml aquadest,

Selanjutnya untuk media suspense bakteri dibuat dengan melarutkan 0,8 g NB

dalam 100 ml aquades. Semua media tersebut dihomogenkan dan disterilisasi di

dalam autoclave dengan suhu 121C selama 15 menit.

c) Pembuatan suspense bakteri uji

Bakteri uji diambil dengan menggunakan kawat ose yang telah disterilkan

sebanyak 1 ose lalu disuspensikan ke dalam tabung reaksi yang berisi 10 ml larutan

nutrient broth (NB) dan divortex agar homogen kemudian di inkubasi pada suhu

37C selama 24 jam.

d) Pembuatan media pengujian

Pembuatan media sumuran dengan membuat lapisan dasar (hard agar)

sebanyak 10 ml terlebih dahulu pada cawan petri, setelah dibiarkan memadat, maka

permukaan lapisan dasar dibuat sumuran dengan menanamkan 3 sumuran yang

jaraknya tidak terlalu dekat. Selanjutnya soft agar dan bakteri dituang perlahan ke

cawan petri yang telah berisi lapisan dasar dan juga sumuran diatasnya. Kemudian

cawan petri dimasukkan ke dalam kulkas dan telah dibungkus dengan plastic wrap

terlebih dahulu.Waktu penyimpanan selama 10 menit. Setelah memadat sumuran

yang diambil dengan pinset perlahan-lahan sehingga akan terbentuk lubang

menyerupai sumur.
 29

e) Pengujian aktivitas anti bakteri

Pengujian dilakukan dengan cara mengukur diameter daerah hambatan (zona

hambat) bakteri uji yaitu E. coli dan B. cereus. Langkah yang pertama yaitu

meneteskan ekstrak bulu babi (D. setosum) dengan berbagai konsentrasi yaitu 1000

g dengan menggunakan mikropipet. Setelah penambahan ekstrak maka dilakukan

inkubasi 37C selama 2x24 jam dan dilakukan pengamatan serta pengukuran zona

hambat yang terbentuk. Pengujian selanjutnya yaitu uji kontrol negatif.

3.4. Parameter Pengujian

3.4.1. Uji Kontrol Negatif

Pengujian kontrol negatif menggunakan pelarut etil asetat. Media diinkubasi

pada suhu 37C selama 24 jam, pengamatan terhadap aktivitas anti bakteri

dilakukan tiap dua jam untuk menentukkan sifat ekstrak terhadap bakteri uji.

3.5. Rancangan Percobaan

Rancangan percobaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah

Rancangan Acak Lengkap (RAL) dan dilakukan pengulangan sebanyak tiga kali.

Uji yang dilakukan yaitu uji fitokimia kuantitatif dan uji aktivitas anti bakteri.

Perlakuan dalam penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 8.

Tabel 8. Matriks Rancangan Percobaan

Sampel
Konsentrasi Ulangan
A B C
1 KA1 KB1 KC1
1000 g 2 KA2 KB2 KC2
3 KA3 KB3 KC3
 30

Keterangan :

A : D. setosum bagian cangkang

B : D. setosum bagian duri

C : D. setosum bagian gonad

3.6. Analisa Data

Pengujian normalitas dan homogenitas dilakukan terlebih dahulu sebelum

analisa ANOVA, agar dapat diketahui sifat data sehingga dapat dilakukan sidik

ragam atau tidak. Metode analisa yang digunakan adalah sidik ragam ANOVA

dengan uji lanjut untuk menentukan nilai yang berpengaruh maupun yang tidak

dengan uji BNJ (Beda Nyata Jujur).

 DAFTAR PUSTAKA

Afifudin, I. K., S. H. Suseno, dan A.M. Jacoeb. 2014. Profil Asam Lemak dan Asam
Amino Gonad Bulu Babi. JPHPI. 17 (1) : 60-70.

Amanati, L. 2014. Uji Bakteri Staphylococcus aureus dan Bacillus cereus pada
Produk Mi Instan yang Beredar di Pasaran. Berita Litbang Industri. 3 (2) :
73-80.

Aminah S., dan S. Pramono. 2013. Isolasi Flavonoid Daun Murbei (Morus alba L.)
Serta Uji Aktivitasnya Sebagai Penurun Tekanan Darah Arteri pada Anjing
Teranestesi. Majalah Farmasuetik. 9 (1) : 235-242.

Aprilia, H. A., D. Pringgenies, dan E. Yudiati. 2012. Uji Toksisitas Ekstrak

Kloroform Cangkang dan Duri Landak Laut (Diadema setosum) Terhadap
Mortalitas Nauplius artemia Sp.. Journal of Marine Research. 1 (1) : 75-83.

Brahmachari, G. 2013. Chemistry and Pharmacology of Naturally Occurring

Bioactive Compounds. CRC Press. United States.

Debbab, A., A. H. Aly, W. H. Lin, dan P. Proksch. 2010. Bioactive Compounds

from Marine Bacteria and Fungi. Microbial Biotechnology. 3 (5) : 544-563.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2000. Parameter Standar Umum

Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen Kesehatan. Jakarta.

Firdiyani, F., T. W. Agustini, dan W. F. Maruf. 2015. Ekstraksi Senyawa Bioaktif

Sebagai Antioksidan Alami Spirulina Platensis Segar dengan Pelarut yang
Berbeda. JPHPI. 18 (1) : 28-37.

Ginting, S. P., B. R. Prawiradiputra. 2012. INDIGOFERA Sebagai Pakan Ternak.

IAARD Press. Jakarta.

Hafid, S., M. Zakir, dan S. Dali. 2015. Pemanfaatan Fraksi Etil Asetat Daun
Ketapang (Terminalia catappa) Sebagai Bioreduktor dalam Sintesis
Nanopartikel Emas dan Analisis Sifat Anti bakterinya.

Harborne, JB. 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan, Terjemahan Kosasih P. dan Iwang S.K., ITB. Bandung.

Maharani, T., D. Sukandar, dan S. Hermanto. 2016. Karakterisasi Senyawa Hasil

Isolasi dari Ekstrak Etil Asetat Daun Namnam (Cynometra cauliflora L.)
yang Memiliki Aktivitas Anti Bakteri. Jurnal Kimia VALENSI: Jurnal
Penelitian dan Pengembangan Ilmu Kimia. 2 (1) : 55-62.

31
 32

Marimuthu, K., P. Gunaselvam, M. A. Rahman, R. Xavier, J. Arockiaraj, S.

Subramanian, F. M. Yusoff, dan A. Arshad. 2015. Antibacterial Activity of
Ovary Extract from Sea Urchin Diadema setosum. European Review for
Medical and Pharmacological Sciences. 19 : 1895-1899.

Mentari, R. S., A. H. Alimuddin, dan Harlia. 2015. Identifikasi Metabolit Sekunder

Ekstrak Landak Laut (Diadema setosum) dan Uji Aktivitas Anti Bakteri
Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. JKK. 4 (4) : 53-60.

Permatasari, E. P. P., I. Trisharyanti D.K. 2015. Uji Aktivitas Anti Bakteri Ekstrak
Etanol dan Infusa Daun Ubi Jalar Merah (Ipomoea batatas Lamk.) Terhadap
Bakteri Streptococcus pyogenes.

Pinsino, A., dan V. Matranga. 2015. Sea Urchin Immune Cells as Sentinels of
Environmental Stress. Developmental and Comparative Immunology. 49 :
198-205.

Pramana M. R. A., dan C. Saleh. 2013. Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Steroid
pada Fraksi N-Heksana dari Daun Kukang (Lepisanthes amoena (HASSK.)
LEENH.). Jurnal Kimia Mulawarman. 10 (2) : 85-89.

Rohdiana, D., D. Z. Arief, dan A. Budiman. 2013. Aktivitas Penghambatan

Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli oleh Berbagai Jenis Teh dan
Seduhannya. Jurnal Penelitian Teh dan Kina. 16 (1) : 37-44.

Rumahlatu, D. 2012. Respon Perilaku Bulu Babi Deadema setosum Terhadap

Logam Berat Kadmium. Jurnal Bumi Lestari. 12 (1) : 45-54.

Salma, W. O., S. Wahyuni, I. Yusuf, L. O. M. Y. Haya, I. Yusuf, dan S. Asad.

2016. Immune Nutrient Content of Sea Urchin (Diadema setosum) Gonads.
International Journal of Nutrition and Food Sciences. 5 (5) : 330-336.

Shankarlal, S., K. Prabu dan E. Natarajan. 2011. Antimicrobial and Antioxidant

Activity of Purple Sea Urchin Shell (Salmacis virgulata L. Agassiz and
Desor 1846). American-Eurasian Journal of Scientific Research. 6 (3) :
178-181.

Simaremare, E. S. 2014. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gatal (Laportea

decumana (Roxb.) Wedd). PHARMACY. 11 (1) : 98-107.

Sumaryati, E., dan Sudiyono. 2015. Kajian Aktivitas Anti Bakteri Ekstrak Angkak
Terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus dan Bacillus
stearothermophillus. Jurnal Teknologi Pangan. 6 (1) : 1-11.

Suryanti dan Ruswahyuni. 2014. Perbedaan Kelimpahan Bulu Babi (Echinoidea)

pada Ekosistem Karang dan Lamun di Pancuran Belakang, Karimunjawa
Jepara. IJFST. 10 (1) : 62-67.
 33

Susanti, A. D., D.Ardiana, G. Gumelar P., dan Y. Bening G. 2012. Polaritas Pelarut
Sebagai Pertimbangan Dalam Pemilihan Pelarut untuk Ekstraksi Minyak
Bekatul dari Bekatul Varietas Ketan (Oriza Sativa Glatinosa). Simposium
Nasional Rapi XI FT UMS. ISSN : 1412-9612.

Thamrin, Y. J. Setiawan, dan S. H. Siregar. 2011. Analisis Kepadatan Bulu Babi

Diadema setosum pada Kondisi Terumbu Karang Berbeda di Desa Mapur
Kepulauan Riau. Jurnal Ilmu Lingkungan. 5 (1) : 45-53.

Wibowo, M. H. dan S. Amanu. 2009. Efektivitas Pengobatan Preparat Kombinasi

Amoksisilin dan Kolistin Sulfat pada Kasus Infeksi Buatan Escherichia coli
Patogen Pada Ayam Broiler. J. Sain Vet. 27 (1) : 1-9.

Yulianti, D., B. Susilo, dan R. Yulianingsih. 2014. Pengaruh Lama Ekstraksi dan
Konsentrasi Pelarut Etanol Terhadap Sifat Fisika-Kimia Ekstrak Daun
Stevia (Stevia rebaudiana bertoni M.) dengan Metode Microwave Assisted
Extraction (MAE). Jurnal Bioproses Komoditas Tropis. 2 (1) : 35-41.

Yunita, A. Irwan, dan R. Nurmasari. 2009. Skrining Fitokimia Daun Tumbuhan

Katimaha (Kleinhovia hospital L.). Sains dan Terapan Kimia. 3 (2) : 112-
123.
 34

Pembuatan Kertas Cakram

Pembuatan kertas cakram dilakukan dengan menyiapkan potongan kertas
dibuat kertas cakram berdiameter 6 mm dibuat dari kertas saring Whatman,
diletakan dalam cawan petri kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121C
selama 20 menit, kemudian kertas cakram yang telah disterilkan tersebut ditetesi
larutan uji masing-masing ekstrak dengan berbagai konsentrasi dan kontrol positif
serta kontrol negatif masing-masing sebanyak 15 L.
Mira Miranti, Prasetyorini dan Chrys Suwary. 201. PERBANDINGAN
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL 30% dan 96% KELOPAK
BUNGA ROSELLA (Hibiscus sabdariffaL)TERHADAP BAKTERI
Staphylococcus aureus. Ekologia. 13 (1) : 9-18.