plicaciones de los animales transgnicos

volver

La ingeniera gentica permite modificar genticamente a los animales con diferentes objetivos:

Ayudar en la identificacin, aislamiento y caracterizacin de genes y secuencias importantes para la

expresin gnica,
Generar modelos de enfermedades que afectan al hombre, para el desarrollo de nuevas drogas y
tratamientos,
Servir como fuente de tejidos y rganos para transplantes en humanos,
Mejorar el ganado y otros animales de importancia econmica, y
Producir molculas de inters industrial.

Aunque an no hay animales transgnicos en el mercado, se han producido avances importantes en desarrollos,
sobre todo en el rea de la produccin de frmacos. En este sentido, existen en la actualidad cabras
transgnicas que generan una protena anticoagulante en sus ubres: este producto es el primer medicamento
producido en animales transgnicos y ya aprobado por las agencias regulatorias de Europa y EEUU. Esta
aplicacin de la biotecnologa se denomina en ingls molecular pharming, y consiste en el empleo de los
animales como fbricas de molculas. Hay varios proyectos en este sentido, que incluyen la produccin de
lisozima, lactoferrina, hormona de crecimiento, insulina, alfa-antitripsina, activador tisular de plasmingeno,
etc., en leche de vacas, cerdos, ovejas y cabras, o en huevos de gallina. En esta rea cabe destacar el papel de
Argentina, donde la empresa Biosidus obtuvo el primer tambo farmacutico de bovinos transgnicos capaces de
producir hormona de crecimiento humana en la leche y de perpetuar esta capacidad en la descendencia. Ms
recientemente, la misma empresa consigui desarrollar, con la misma estrategia, terneras que producen insulina
humana.
La produccin en la leche de animales transgnicos es particularmente interesante para protenas que se
requieren en gran cantidad o que son muy complejas. La produccin en leche permite, adems, una purificacin
relativamente simple de la protena de inters. Como la produccin de la nueva molcula no debe interferir con
el crecimiento y metabolismo del animal, se introduce el gen de inters junto con un elemento (promotor) que
permite su expresin nicamente en la glndula mamaria.

Produccin de insulina en la leche de terneras clonadas y transgnicas (infografa de Biosidus)

En relacin con la calidad nutricional de la leche, dos instituciones estatales argentinas (INTA y USAM), lograron
una ternera de raza Jersey, a la que llamaron Rosita Isa, que es el primer clon bovino bitransgnico obtenido en
el pas y tambin el primero en el mundo al cual se le han incorporado dos genes humanos que codifican dos
protenas presentes en la leche humana de alta importancia para la nutricin de los lactantes. Dichos genes
codifican para las protenas lisozima y lactoferrina humanas. Las protenas lactoferrina y lisozima humanas
tienen funciones antibacterianas, de captura de hierro y son inmunomoduladores, entre otras caractersticas.
Con este importante logro, la leche que produzca esta ternera en su vida adulta se asemejar a la leche
humana, ya que la leche de vaca casi no contiene lisozima y la actividad de la lactoferrina es especfica de cada
especie.
En el campo del mejoramiento animal, los avances son ms lentos, aunque se destaca el desarrollo de peces
(salmones, truchas, tilapias, etc.) que alcanzan su tamao adulto ms rpido, vacas que producen leche con ms
casena (para la fabricacin de queso), y bovinos resistentes a enfermedades, como la mastitis. Actualmente se
encuentran adems en etapa experimental el desarrollo de pollos transgnicos (por tecnologa de RNAi) que no
transmitan la gripe aviar a sus compaeros de corral, de manera de disminuir no slo la enfermedad en los
pollos, sino tambin la posibilidad de que alguna cepa mutante pase la barrera de especie y contagie a humanos,
como sucedi con la cepa H1N1.

Biotecnologa aplicada a la acuicultura

ultivos aprobados y adopcin

 volver

Los cultivos transgnicos en Argentina

El primer cultivo transgnico en Argentina fue la soja tolerante a glifosato. Se aprob en 1996 y desde ese
momento el rea sembrada con cultivos GM ha crecido en forma sostenida. Con 24,5 millones de hectreas en
2015 (casi el 14% de la superficie global), Argentina es el tercer productor mundial de este tipo de cultivos,
despus de Estados Unidos y Brasil.

La tasa de adopcin de cultivos GM es una de las ms altas en cuanto a adopcin de nuevas tecnologas en el
sector agropecuario argentino, y supera inclusive a la observada con la incorporacin de los hbridos en el cultivo
de maz. Esto indica un alto grado de satisfaccin por parte del agricultor con respecto a los beneficios que
provee la biotecnologa, que ofrece adems de la disminucin de los costos, otras ventajas, como mayor
flexibilidad en el manejo de los cultivos, disminucin en el empleo de insecticidas, mayor rendimiento y mejor
calidad de la produccin.

Un trabajo realizado por el Dr. Eduardo Trigo, para ArgenBio, concluy que este proceso de incorporacin de
nuevas tecnologas tuvo un profundo impacto de transformacin en la agricultura argentina y en la economa
nacional. Los beneficios totales generados por los cultivos GM fueron calculados en ms de 70 mil millones de
dlares en los primeros 15 aos desde su introduccin en el mercado argentino. En la campaa 2015/16,
prcticamente el 100% de la superficie de soja y de algodn fue sembrada con variedades GM, mientras que el
maz transgnico represent el 96% del total de ese cultivo.

En el caso de la soja, se cultivan variedades tolerantes a glifosato y ya es la tercer campaa que se siembran
variedades que combinan la tolerancia a glifosato con la resistencia a insectos. Por otro lado, el 90% del algodn
transgnico sembrado correspondi a variedades con caractersticas combinadas de tolerancia a glifosato y
resistencia a insectos. Para el caso del maz transgnico, de las hectreas totales sembradas, ms del 75% fueron
hbridos con caractersticas combinadas de tolerancia a herbicidas y resistencia a insectos, y una fraccin menor
fueron hbridos con tolerancia a herbicida o resistencia a insectos, por separado.

La autorizacin para la comercializacin de un cultivo transgnico est a cargo de las autoridades del Ministerio
de Agroindustria, y se basa en los informes tcnicos elaborados por tres Direcciones y sus Comisiones Asesoras.

Informacin sobre cmo se aprueban los cultivos transgnicos en Argentina

En realidad, no es el cultivo el que recibe la autorizacin, sino el evento de transformacin gentica, o

simplemente evento. Un evento es una recombinacin o insercin particular de ADN ocurrida en una clula
vegetal a partir de la cual se origin la planta transgnica. La Comisin Nacional de Biotecnologa Agropecuaria
(CONABIA) define evento como la insercin en el genoma vegetal en forma estable y conjunta, de uno o ms
genes o secuencias de ADN que forman parte de una construccin gentica definida". Los eventos de
transformacin son nicos, y difieren en los elementos y genes insertados, los sitios de insercin en el genoma de
la planta, el nmero de copias del inserto, los patrones y niveles de expresin de las protenas de inters, etc.
Los eventos pueden adems acumularse por cruzamiento convencional, para obtener fcilmente plantas con
varias caractersticas combinadas.

A continuacin se muestra la lista de eventos y combinaciones de eventos aprobadas en Argentina. Haciendo

click en el evento (o en la combinacin) se accede a una breve descripcin de cada uno:

Eventos y combinaciones de eventos aprobados en Argentina para su siembra, consumo y comercializacin.

Ver listado de eventos aprobados

Otros grficos estadsticos

Impacto econmico de los cultivos transgnicos en la agricultura argentina

Grfico: Argentina: evolucin de la superficie sembrada con cultivos GM en hectreas

Grfico: Argentina: evolucin de la adopcin de cultivos GM

Cuadro: Argentina: cultivos GM campaa 2015/2016

Grfico: Cultivos GM en 2015 - rea global de cultivos GM por pas

Animales transgnicos de utilidad

biotecnolgica y biomdica

Esta semana, el da 2 de octubre, se han publicado dos

artculos en la revista Proceedings of the National Academy of Sciences relacionados con la
generacin de animales transgnicos que abren nuevas potenciales aplicaciones biotecnolgias y
biomdicas.

Uno de ellos, dirigido por Scott C. Fahrenkrug, de la Universidad de Minnesota (USA), consiste en un
trabajo en el que, mediante una tecnologa que se denomina TALEN, el grupo ha generado con alta
eficencia un cerdo enano transgnico que puede considerarse como un modelo para la hipercolesterolemia.
Para ello, han utilizado clulas de fibrobastos primarios de cerdos enanos que han modificado en el
laboratorio para producir clulas portadoras de alelos mutados del gen receptor de LDL (LDLR), que han
utilizado como donadoras de ncleo para luego obtener cerdos transgnicos . La tecnologa TALEN consiste
en utilizar un nuevo tipo de nucleasas especficas (N) efectoras (E). Estas nucleasas efectoras TAL tienen
un dominio TALE, un domino que ocurre naturalmente en factores de transcripcin de algunos organismos
y que se une especficamente a secuencias concretas, y un dominio cataltico propio de una endonucleasa,
que introduce una rotura de la doble hebra de DNA. De esta manera, es posible sustituir especficamente
un gen propio de un genoma por una secuencia alterada y no funcional y crear as, tanto organismos
transgnicos como organismos Knockout (KO) por recombinacin homloga. El equipo de investigacin ha
desarrollado una estrategia (mediante el uso de un transposn) que permite la introduccin de una
 secuencia determinada (una mutacin no funcional del gen LDLR) en el hueco creado en el DNA y la
seleccin y enriquecimiento de los fibroblastos primarios genticamente modificados. Estos fibroblastos
seleccionados son luego utilizados como donadores de ncleo para el procedimiento de clonacin. Segn
los resultados del equipo, esta metodologa tiene una alta eficiencia comparada con cualquier mtodo de
transgnesis anterior: de los 18 clones de cerdos enanos recin nacidos que han conseguido tras la
aplicacin de su protocolo experimental, 8 contenan mutaciones monoallicas y 10 contenan
modificaciones en los dos alelos del gen LDLR.

El segundo trabajo, dirigido por Goetz Laible de AgResearch, de Hamilton (Nueva Zelanda), ha
pretendido obtener una vaca transgnica productora de una leche menos alergnica para humanos que la
leche de vaca habitual. La leche de las vacas lecheras contiene la protena -lactoglobulina (BLG), que no
est presente en la leche humana y que es un potente alrgeno para algunos nios y dultos humanos. El
equipo de investigacin ha utilizado una tecnologa diferente a la del trabajo anterior para generar la
transgenia: han utilizado la tecnologa de los micro RNAs o miRNAs. Los miRNAs son molculas pequeas
de RNA, capaces de unirse a mRNAs codificados por otros genes del genoma y, por ello, capaces de dirigir
a la degradacin esos mRNA a los que se han unio por complementacin de la secuencia, evitando as la
generacin de la protena correspondiente. Pues bien, el equipo ha probado que la expresin constitutiva
de un miRNA que elimina la expresin del gen BLG afecta negativamente al crecimiento de las clulas
primarias, as que han diseado una construccin con un promotor especfico de la lactacin que controla
la expresin de un miRNA-BLG (un RNA que interfiere con el mRNA del gen BLG). Antes de utilizarlo en
vacas, cuyos protocolos para la clonacin son econmicamente costosos, han probado su sistema primero
en modelos in vitro celulares de ratn y de ovinos. El resultado ha sido que en estos sistemas in vitro han
detectado una disminucin en la produccin de la protena BLG del 98 y 96%, respectivamente. A partir
de las buenas expectativas que estos resultados aportaban, han procedido a realizar un protocolo
utilizando clulas de fibroblastos de vaca. El grupo ha conseguido 2 lneas celulares transgnicas utilizables
para el procedimiento posterior de transferencia nuclear, aunque slo han conseguido embriones clonados
a partir de una de ellas. En total han conseguido 5 embarazos que llegaron hasta el da 65 de gestacin.
Uno de los embriones conseguidos se ha preservado para futuras opciones de clonacin mediante
disgregacin de sus clulas o nuevos procedimientos de transferencia nuclear. De los 4 embriones
restantes, uno produjo una ternera viva, que sorprendentemente no presentaba cola!. Para probar la
calidad de la leche de esta ternera, aunque an es demasiado joven para cruzarla y que produzca leche
de forma natural, le han inducido hormonalmente la produccin de leche. La leche obtenida no produca
cantidad detectable de BLG, pero produca ms del doble de cantidad de protenas casenas de la leche.
Los investigadores autores del trabajo proponen que su sistema puede ser til para validar la expresin
de miRNAs como una estrategia efectiva para alterar la composicin y otras caractersticas de la leche del
ganado. Por ello, aunque no parece que de momento estemos asistiendo a la produccin de rebaos de
vacas productoras de leche hipoalergnica para su venta, parece que este procedimiento al menos podr
servir para conocer la biologa de la produccin de leche.

La noticia en el peridico La Vanguardia

octubre 7th, 2012 | Categora: Avances en el conocimiento

3 comentarios a Animales transgnicos de

utilidad biotecnolgica y biomdica

horacio
octubre 13th, 2012 en 2:01 Responder

Una reverenda tontera, absolutamente intil, de consecuencias impredecibles bueno, no tan

impredecibles, a partir del estudio de G. E. Seralini, difundido hace pocos das, detectando efectos
cancergenos en animales alimentados con transgnicos.. O el estudio ruso que demostr que la tercera
generacin de cerdos alimentados con transgnicos, era estril. Eso s, un nuevo negocio para
empresarios y medios que los publicitan. Transgnicos: peligrosos e intiles..

o Ana
octubre 15th, 2012 en 12:47 Responder

Decir que los transgnicos son intiles es falso: como ejemplo, no hay mas que mirar la cantidad
de personas que son tratadas con medicamentos obtenidos a partir de organismos transgnicos
(factores de coagulacin, hormonas, interfern, vacunas, anticuerpos,).
Lo de las consecuencias impredecibles, podra ser, pero creo que es ah donde se deben doblar
esfuerzos para evitar esas consecuencias. De momento, en productos agrcolas, los controles ms
severos se exigen, sin duda, a los alimentos transgnicos. Sobre si son suficientes los controles o
no, personalmente prefiero dejarlo en manos de expertos, cosa que no parece ser Seralini, por
cierto. La Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria ha publicado una revisin del trabajo de
Seralini en el que deja sus conclusiones sin validez. La revisin de la EFSA puede consultarse
en: http://www.efsa.europa.eu/en/press/news/121004.htm
Resumidamente, lo que las autoridades europeas indican es que el diseo experimental utilizado en
el trabajo de Seralini es inapropiado: no se usan nmeros de especmenes suficientes para cada
experiencia (internacionalmente se requieren no menos de 50 animales para evitar efectos de azar
y en el trabajo se usan slo 10), no se analiza la composicin de la comida (en especial la posible
presencia de micotoxinas, que se sabe son responsables de la aparicin de muchos tumores), la
cepa de rata elegida no es adecuada por su tendencia espontnea a la formacin de tumores
(informacin que en ningn momento es considerada por Seralini), los controles usados no son
adecuados (el diseo de los controles para qu experimentos, es inapropiado), no se controla la
cantidad de herbicidas que ingieren las ratas (que puede llegar por la comida o por la bebida), el
trabajo no aporta datos sobre la tasa de abandonos que se han producido durante el ensayo o
sobre la presencia de otras lesiones en los animales utilizados, las herramientas estadsticas
utilizadas no son apropiadas (utiliza mtodos estadsticos no habitaules), .. En fin, parece que se
ha usado mucho dinero para realizar un experimento (el propio Seralini ha dicho que ha gastado
1.000.000 de euros en el) que sirve para poco ya que el diseo, presentacin y anlisis de los
resultados invalida las conclusiones. Esto no es hacer ciencia!!!!!

Aplicaciones de los animales transgnicos

La ingeniera gentica permite modificar genticamente a los animales con diferentes objetivos:

Ayudar en la identificacin, aislamiento y caracterizacin de genes y secuencias importantes para la expresin

gnica,
Generar modelos de enfermedades que afectan al hombre, para el desarrollo de nuevas drogas y tratamientos,
Servir como fuente de tejidos y rganos para transplantes en humanos,
Mejorar el ganado y otros animales de importancia econmica, y
Producir molculas de inters industrial.

Aunque an no hay animales transgnicos en el mercado, se han producido avances importantes en desarrollos,
sobre todo en el rea de la produccin de frmacos. En este sentido, existen en la actualidad cabras
transgnicas que generan una protena anticoagulante en sus ubres: este producto es el primer medicamento
producido en animales transgnicos y ya aprobado por las agencias regulatorias de Europa y EEUU. Esta
aplicacin de la biotecnologa se denomina en ingls molecular pharming, y consiste en el empleo de los
animales como fbricas de molculas. Hay varios proyectos en este sentido, que incluyen la produccin de
lisozima, lactoferrina, hormona de crecimiento, insulina, alfa-antitripsina, activador tisular de plasmingeno, etc.,
en leche de vacas, cerdos, ovejas y cabras, o en huevos de gallina. En esta rea cabe destacar el papel de
Argentina, donde la empresa Biosidus obtuvo el primer tambo farmacutico de bovinos transgnicos capaces
de producir hormona de crecimiento en la leche y de perpetuar esta capacidad en la descendencia. Ms
recientemente, la misma empresa consigui desarrollar, con la misma estrategia, terneras que producen
insulina.
La produccin en la leche de animales transgnicos es particularmente interesante para protenas que se
requieren en gran cantidad o que son muy complejas. La produccin en leche permite, adems, una purificacin
relativamente simple de la protena de inters. Como la produccin de la nueva molcula no debe interferir con
el crecimiento y metabolismo del animal, se introduce el gen de inters junto con un elemento (promotor) que
permite su expresin nicamente en la glndula mamaria.

Produccin de insulina en la leche de terneras clonadas y transgnicas (infografa de Biosidus)

En el campo del mejoramiento los avances son ms lentos, aunque se destaca el desarrollo de peces
(salmones, truchas, tilapias, etc.) que alcanzan su tamao adulto ms rpido, vacas que producen leche con
ms casena (para la fabricacin de queso), y bovinos resistentes a enfermedades, como la mastitis.

Biotecnologa aplicada a la acuicultura

Animales transgnicos: pasado, presente y futuro

Transgenic animals: past, present and future

R. Felmer, B.Q, PhD.

Unidad de Biotecnologa, Instituto de Investigaciones Agropecuarias INIA-CRI

Carillanca, Casilla 58-D, Temuco, Chile (rfelmer@carillanca.inia.cl)

Resumen

Desde la demostracin del primer animal transgnico en 1980, la ingeniera gentica

ha revolucionado todos los aspectos de la investigacin biolgica y biomdica. Desde
entonces, se ha logrado la generacin de varios tipos de animales transgnicos,
incluyendo vacas, cerdos, ovejas, cabras y conejos. Hasta muy recientemente, la
generacin de animales transgnicos involucraba la microinyeccin de pequeas
cantidades de ADN en el proncleo de un embrin al estado de dos clulas, tcnica
conocida como microinyeccin pronuclear. El descubrimiento de que los animales
podran ser clonados mediante transferencia nuclear de clulas mantenidas en cultivo
abri las puertas para realizar recombinacin homloga en estas especies. Esto podra
tener importantes implicaciones especialmente para los propsitos del descubrimiento
de nuevas drogas, para mejorar caractersticas productivas de los animales, en la
clonacin de cerdos como fuentes de rganos para trasplantes y en la produccin de
protenas farmacuticas. En esta revisin se discuten los avances que ha tenido la
tecnologa para la generacin de animales transgnicos y los beneficios de la
transferencia nuclear como una nueva ruta para la generacin de animales
transgnicos de granja.

Palabras Claves: animales transgnicos, transferencia nuclear, clonacin.

Summary

Since the initial demonstration in 1980 that a transgenic animal could be generated
harbouring a transgene from a different species, genetic engineering has
revolutionized all aspects of fundamental biological and biomedical research. Since
then, much has been accomplished in the generation of various types of transgenic
animals, including cows, pigs, sheeps, goats and rabbits. Until recently, genetically
modified livestock could only be generated by pronuclear injection. The discovery that
animals can be cloned by nuclear transfer from cultured somatic cells means that it is
now possible to achieve gene targeting in these species. This may have important
implications for the purposes of drug discovery research, to improve animal health and
productivity, in cloning pigs as a source donor for xenotransplantion, and in the
production of pharmaceutical proteins. This review discusses the development of
transgenic technology and the potential benefits emerging from nuclear transfer as a
novel route for the generation of transgenic livestock.

Key Words: transgenics, nuclear transfer, cloning.

INTRODUCCION

Desde sus primeros inicios el hombre ha seleccionado plantas y domesticado animales

mediante el cruzamiento selectivo de individuos con el fin de transferir los caracteres
deseados. La principal limitante de este proceso radica en la incompatibilidad sexual
observada cuando los organismos son muy divergentes genticamente, lo que impide
esta transferencia entre especies. La ingeniera gentica permite romper esta barrera
posibilitando la incorporacin de genes desde otras especies que de otra forma sera
imposible con los mtodos de mejoramiento tradicional. De esta forma los organismos
genticamente modificados o ms comnmente denominados transgnicos son
organismos vivos (plantas, animales o bacterias) manipulados genticamente
mediante la insercin de un gen que habitualmente no formaba parte de su repertorio
gentico. La finalidad de esto es proporcionar a la planta o animal nuevas
caractersticas productivas y hacerlos ms eficientes y competitivos (Clark, 2002).

El gen a ser introducido consiste bsicamente de una construccin de ADN que

contiene una regin promotora y la regin codificante para la protena de inters, los
que se insertan en el genoma en forma artificial mediante alguna de las tcnicas
disponibles como se detalla ms adelante. Esta regin de ADN es denominada
comnmente transgen y puede provenir de otro animal de la misma especie o desde
una bacteria o planta. El lugar del animal donde se expresa el transgen est dirigido
por la regin promotora o las regiones reguladoras de la regin promotora. As por
ejemplo, si se utiliza el promotor del gen de la -Lactoglobulina se podra dirigir la
expresin y secrecin de una protena recombinante exclusivamente en la leche del
animal.

Hasta muy recientemente, la tecnologa para generar animales de granja modificados

genticamente involucraba la microinyeccin pronuclear, en la cual pequeas
cantidades del ADN de inters (transgen) eran inyectadas en el proncleo de un
embrin al estado de dos clulas. Aunque ampliamente aceptada y utilizada en forma
rutinaria en muchos laboratorios, ha habido muy poco progreso para mejorar su
eficiencia, la que se mantiene en el orden 0.1-5%, dependiendo de la especie
considerada (Wall y col., 1997). Al mismo tiempo que la microinyeccin pronuclear se
estaba desarrollando, en animales de granja, las clulas madre embrionarias (ES cells)
estaban siendo desarrolladas y utilizadas para experimentos de recombinacin
homloga en el ratn. Esta tecnologa ha sido tremendamente eficiente para explotar
la capacidad de las clulas en contribuir a la lnea germinal y realizar recombinacin
homloga con ADN exgeno, permitiendo la introduccin de cambios precisos en el
genoma del animal (para revisin ver Hooper, 1992). Sin embargo, a pesar de los
esfuerzos de muchos laboratorios, no se han descrito an clulas madre embrionarias
en otras especies distintas al ratn (Stice, 1998), lo que ha frenado muchas
aplicaciones potenciales de esta tecnologa en animales de granja. Esta situacin se
revirti recientemente despus del nacimiento de Dolly, el primer animal obtenido por
transferencia nuclear de una clula adulta (Wilmut y col., 1997). Sin embargo Polly, la
primera oveja transgnica obtenida por transferencia nuclear (Schnieke y col., 1997),
y George y Charlie, los primeros terneros transgnicos obtenidos de la misma forma
(Cibelli y col., 1998), son los que han marcado el curso de las investigaciones en este
campo y conducirn el camino en el futuro. Hoy en da, la transferencia nuclear se ha
convertido en una alternativa real a la microinyeccin pronuclear debido a que permite
un acortamiento del tiempo entre la obtencin de un animal transgnico fundador y el
establecimiento de un rebao transgnico. Adems, la transferencia nuclear abri las
puertas a la recombinacin homloga de animales de granja que haba sido restringida
slo al ratn mediante la tecnologa de clulas madre embrionarias. Esto posibilita la
eliminacin de genes endgenos en animales de granja (gene knock out) y/o la
insercin de genes especficos en regiones transcripcionalmente activas del genoma,
favoreciendo altos niveles de expresin de la protena de inters.

METODOS DE TRANSFORMACION GENETICA EN ANIMALES

Transformacin gentica mediante el uso de vectores retrovirales. Contrario a la

percepcin de muchos, los primeros animales transgnicos fueron producidos hace ya
casi 30 aos mediante la microinyeccin de ADN viral (SV40) en la cavidad del
blastocele de embriones de ratn (Jaenish y Mintz, 1974). Los prximos intentos
involucraron embriones de ratn infectados con el retrovirus Moloney de la leucemia
murina (MoMuLV), lo que result en la transmisin estable hacia la lnea germinal
(Jaenish, 1976). Esto se logr reemplazando genes que no son esenciales para el virus
por genes heterlogos, aprovechando as la capacidad de los virus de infectar un
amplio espectro de clulas y con una gran eficiencia. Una de las grandes desventajas
de este mtodo radica en que la integracin del ADN se produce en diferentes etapas
del embrin en desarrollo, lo que implica que el ADN no se integra en todas las clulas
somticas o en la lnea germinal y por lo tanto no hay transmisin del transgen a la
descendencia. Adems, los animales generados por este mtodo tienen a menudo ms
de un sitio de integracin, lo cual ocurre cuando ms de una clula del embrin es
infectada por el virus (Palmiter y Brinster, 1985). Esto implica que las lneas de
ratones transgnicos deben ser cruzadas para segregar los diferentes loci conteniendo
el transgen y poder as aislar lneas con un sitio de insercin nico. Finalmente, los
vectores retrovirales poseen una limitada capacidad de ADN forneo que puede ser
acomodado, alrededor de 8 kb, lo cual imposibilita muchos experimentos
especialmente con secuencias genmicas humanas que pueden superar ampliamente
este tamao.

Transformacin gentica mediante microinyeccin pronuclear. En la dcada del 80

ocurri un importante avance en la tecnologa de animales transgnicos que marc el
curso de la investigacin en este campo por al menos dos dcadas. Gordon y
colaboradores describieron una tcnica donde el ADN desnudo fue inyectado en el
proncleo de un ovocito de ratn recientemente fertilizado, el que posteriormente se
transfiri a hembras receptoras sincronizadas (Gordon y col., 1981). Este experimento
demostr que era posible usar un plsmido recombinante como vector para transferir
genes forneos directamente hacia el embrin. El ADN inyectado de esta forma se
integr en el genoma y pudo ser heredado por la descendencia de los animales
transgnicos fundadores. La inyeccin de embriones al estado de una clula fue clave
para obtener una integracin temprana del transgen, permitiendo al ADN forneo
contribuir en el genoma de todas las clulas somticas y la lnea germinal. En ciertos
casos la integracin del transgen tambin ocurri despus de la primera divisin del
zigoto, lo que result en animales fundadores mosaicos. Estos animales mosaicos an
transmiten el transgen a la descendencia pero lo hacen a una frecuencia menor al
50%. Desgraciadamente, la eficiencia para generar animales transgnicos utilizando
esta tecnologa es baja, particularmente en animales de granja. La eficiencia de la
inyeccin pronuclear est controlada por una serie de factores como quedara
demostrado por los trabajos de Brinster y colaboradores, quienes entregaron valiosa
informacin sobre la integracin de los transgenes y permitieron establecer que la
concentracin y la forma (circular o linear) del ADN eran los factores ms crticos para
una eficiente integracin (Brinster y col., 1985). No se encontraron diferencias
significativas cuando el proncleo femenino o masculino era utilizado para la inyeccin,
aunque este ltimo es preferido por ser ms grande. Por otro lado, el cruzamiento de
ratones hbridos (por ejemplo C57BL x SJL) fue ms exitoso en la produccin de
animales transgnicos que las lneas cosanguneas (C57Bl x C57Bl). El descubrimiento
de la inyeccin de proncleos como un nuevo mtodo para modificar el genoma de los
animales revolucion la forma en que los investigadores pudieron analizar la expresin
de los transgenes y paviment el camino para la generacin de los primeros animales
transgnicos de granja hace ya 18 aos (Hammer y col., 1985). Desde entonces, la
tecnologa ha sido implementada con xito en la mayora de los animales domsticos
como en conejos (Buhler y col., 1990), ovejas (Wright y col., 1991), cabras (Ebert y
col., 1991), vacas (Krimpenfort y col., 1991) y cerdos (Wall y col., 1991). Sin
embargo, adems de los problemas asociados con la integracin de los transgenes hay
ineficiencias asociadas con la recoleccin, cultivo de los huevos fertilizados y
transferencia de los embriones hacia las hembras receptoras. Otros factores como el
largo perodo de gestacin y el bajo nmero de animales por generacin, sumado al
costo extra de cuidado de los animales, han contribuido a la lenta adopcin de estas
tecnologas, especialmente en los pases menos desarrollados.

Los primeros estudios realizados en animales de granja se enfocaron hacia el uso de

genes que controlan la productividad del animal, por ejemplo genes de la hormona del
crecimiento para incrementar la tasa de crecimiento y la eficiencia de conversin
(Pursel y Rexroad, 1993). Estos estudios mostraron los problemas de la inyeccin
pronuclear con relacin al control de los niveles de expresin del transgen. Se encontr
una gran variacin de expresin en las lneas de animales transgnicos generados,
siendo sta en general muy pobre, especialmente si no todos los elementos
reguladores del transgen eran incluidos en la construccin gentica (plsmido). Esto
llev a que muchos investigadores dedicaran mayores esfuerzos a entender la forma
en que los transgenes se insertan en el genoma del animal y los factores que afectan
la expresin de los mismos. Esto explica por qu la mayora de los experimentos
dirigidos a alterar la composicin de la leche han sido realizados principalmente en el
ratn, aunque existen algunas notables excepciones tales como la secrecin de
protenas de valor teraputico como el factor IX de la coagulacin en la leche de ovejas
(Wright y col., 1991), el activador de plasmingeno de tejido en la leche de cabras
(Ebert y col., 1991) y la lisozima humana en la leche de bovinos (Krimpenfort y col.,
1991). Sin embargo, dada la baja eficiencia de esta tecnologa (Clark y col., 1994),
sumado a los costos involucrados, es que ha habido una bsqueda constante por
nuevas alternativas. As, la manipulacin de las clulas madre embrionarias de ratn
(ES cells) apareci como una potencial solucin para muchos de los problemas
encontrados con la tcnica de microinyeccin pronuclear.

Transformacin gentica mediante recombinacin homloga en clulas madre embrion

arias (ES cells). El aislamiento de clulas madre embrionarias de ratn, en 1989, abri
nuevas posibilidades para estudiar la funcin gnica en animales transgnicos
(Thompson y col., 1989). Las clulas madre embrionarias se obtienen desde el macizo
celular interno de blastocistos y se pueden mantener en cultivos sin perder su estado
indiferenciado gracias a la presencia en el medio de cultivo de factores inhibitorios de
la diferenciacin. Estas clulas pueden ser manipuladas in vitro va recombinacin
homloga, permitiendo as alterar la funcin de genes endgenos. Las clulas as
modificadas pueden ser entonces reintroducidas en blastocistos receptores
contribuyendo eficientemente a la formacin de todos los tejidos en un animal
quimrico incluyendo la lnea germinal (Evans y Kaufman, 1981; Martin, 1981). Esta
tecnologa posibilita modificaciones genticas muy finas en el genoma del animal, tal
como la introduccin de copias nicas de un gen. La incorporacin de una copia nica
de un gen en un sitio predeterminado del cromosoma tiene las ventajas de permitir
controlar el nmero de copias del transgen y se puede controlar la insercin de este en
un sitio favorable (transcripcionalmente activo) para su expresin tejido-especfica.
Utilizando esta tecnologa ha sido posible anular la funcin de genes endgenos del
ratn mediante la integracin de un marcador de seleccin, lo que ha permitido la
generacin de varios cientos de ratones llamados knock out que han servido como
modelos de enfermedades genticas en humanos y como modelos para analizar la
funcin de genes endgenos (Melton, 1994; Shastry, 1998; Kolb y col., 1999; Wallace
y col., 2000). Lamentablemente, la generacin de animales modificados genticamente
a travs de esta ruta ha sido limitada slo al ratn, fundamentalmente por la
imposibilidad de aislar clulas madre embrionarias de otras especies que conserven la
capacidad de totipotencialidad que caracteriza a estas clulas (Clark y col.,
1992; Niemann y Reichelt, 1993; Cibelli y col., 1998). Aunque clulas parecidas a las
clulas madre embrionarias (ES-like cells) han sido descritas en otras especies (lo que
ha contribuido a la formacin de vacas y cerdos quimricos a partir de ellas), en
ningn caso se ha demostrado que puedan transmitir las modificaciones a su
descendencia, lo cual ha impedido el establecimiento de lneas de animales
transgnicos a travs de esta ruta (Niemann y Reichelt, 1993; Cibelli y col., 1998).

Transformacin gentica mediada por semen. En 1989 Lavitrano y col. describieron la

produccin de ratones transgnicos mediante inseminacin artificial, utilizando semen
que haba sido incubado con ADN exgeno. Aunque atractivo por su simplicidad, este
procedimiento ha sido muy cuestionado por su poca reproducibilidad, ya que a pesar
de los esfuerzos de los principales laboratorios del mundo estos experimentos no
pudieron ser repetidos en el ratn (Brinster y col., 1989). Ms recientemente, el
mismo grupo clama haber producido cerdos transgnicos con una muy alta eficiencia
de 54-60% (Lavitrano y col., 1997); sin embargo, la integridad del transgen no fue
analizada y otros estudios demuestran que el ADN internalizado por esta ruta sufre re-
arreglos y recombinacin con el ADN genmico, lo que dificulta la formacin de lneas
de animales transgnicos con niveles de expresin estable (Zoraqi y Spadafora, 1997).

Transformacin gentica mediante transformacin de clulas somticas y transferencia

nuclear (clonacin). La transferencia nuclear se describi por primera vez en 1952 en
anfibios y consiste en extraer el material gentico de un ovocito para posteriormente
introducirle el material gentico de una clula del animal a clonar. Los trabajos
pioneros de Briggs y King (1957) demostraron que los ncleos de clulas al estado de
blastocisto eran capaces de dirigir el desarrollo embrionario normal de ovocitos
reconstituidos y generar una rana adulta a partir de estas clulas. En la dcada de los
ochenta se realizaron exitosamente transferencias nucleares en la mayora de los
mamferos como conejos (Stice y Robl, 1988), cerdos (Prather, y col., 1989), bovinos
(Prather y col., 1987) y ovejas (Willadsen, 1986; Smith y Wilmut, 1989). Estos
experimentos se realizaron por medio de la disociacin de blastmeros embrionarias
(clulas embrionarias no diferenciadas) y su posterior transferencia nuclear. Sin
embargo, los intentos por realizar transferencia nuclear con clulas ms diferenciadas
fueron infructuosos, lo que llev a pensar que el ADN de clulas diferenciadas no poda
reprogramarse, surgiendo entonces el dogma de que el proceso de diferenciacin
celular era irreversible. Este dogma se derrumb el 27 de febrero de 1997, fecha en
que Ian Wilmut y sus colegas del Instituto Roslin, en Edimburgo, Escocia, explicaron en
la revista Nature cmo haban creado a la oveja Dolly (figura 1). Dolly fue el resultado
de la fusin de un ncleo procedente de una clula mamaria extrada de una oveja
adulta con un vulo al que previamente se le haba extrado el material gentico
(proceso conocido como enucleacin). El equipo escocs demostraba as que las
clulas adultas y especializadas podan ser reprogramadas. La etapa clave de este
proceso fue la coordinacin del ciclo celular de la clula receptora y el de la clula
donante de ncleos que se logr mediante la deprivacin de suero de estas ltimas
(Campbell y col., 1996; Wilmut y col., 1997). La deprivacin de suero, previo a la
transferencia nuclear, induce a las clulas a salir del ciclo de crecimiento y entrar en un
estado de arresto celular o quiescencia (G0/G1 en el ciclo celular), que se ha propuesto
potenciara el desarrollo embrionario, permitiendo a los factores en el ooplasma
reprogramar el ncleo donante (Campbell y col., 1996). Siguiendo los hallazgos de
Campbell y Wilmut muchos grupos han reproducido exitosamente estos experimentos
(Schnieke y col., 1997; Wells y col., 1997; Baguisi y col., 1999; Zakhartchenko y col.,
1999a;Reggio y col., 2001), con la excepcin de un grupo en Estados Unidos, quienes
han recomendado el uso de clulas proliferando activamente, esto es, clulas en G1 en
el ciclo celular en vez de deprivadas de suero (Cibelli y col., 1998). Sin embargo,
ninguno de estos estudios compar directamente la eficiencia de ambos tratamientos
para producir animales clonados y estudios recientes, utilizando fibroblastos fetales,
han demostrado que la induccin del estado de quiescencia en las clulas mejora
significativamente el desarrollo a la etapa de blastocisto comparado con clulas
proliferativas, aunque no se evalu la tasa de xito de la transferencia de estos
embriones en receptoras sincronizadas (Hill y col., 2000; Zakhartchenko y col.,
1999b).
 FIGURA 1. Dolly: El primer mamfero clonado
por transferencia nuclear desde una clula
adulta.
Dolly: The first mammal ever cloned by nuclear
transfer from an adult mammary cell.

La clonacin utilizando clulas somticas sin transformar ha demostrado la utilidad en

generar clones de animales individuales de alto mrito gentico; sin embargo, el real
potencial de la tecnologa radica en la generacin de animales transgnicos, lo que es
posible mediante la incorporacin de los genes de inters a las lneas celulares
mediante transfeccin que puede ser realizada va lipofeccin (Watanabe y col., 1994)
o por electroporacin (Wong y Neumann, 1982; Oshima y col., 1998). Las clulas
transformadas, que se seleccionan previamente mediante la incorporacin de genes de
resistencia, pueden ser utilizadas como donantes de ncleos en la transferencia
nuclear, obtenindose de esta forma clones de animales que adems son transgnicos
(Schnieke y col.,1997; Cibelli y col., 1998; McCreath y col., 2000). A diferencia de la
microinyeccin pronuclear, donde slo un 3-5% de los animales nacidos son
transgnicos (cifra que es inferior en animales mayores), la transferencia nuclear
asegura que el 100% de los animales nacidos sea transgnico, eliminndose, por lo
tanto, una generacin de animales (figura 2). Adems, estos animales presentan un
bajo ndice y/o ausencia total de mosaiquismo. Esto permite producir varios animales
transgnicos en la primera generacin, posibilitando hacer pruebas de expresin del
transgen en un grupo de animales mientras el resto se utiliza para propagar la lnea.
En forma adicional es posible seleccionar el sexo del animal sin necesidad de incurrir a
biopsias del embrin, lo que permitira incrementar la masa ganadera por
multiplicacin (clonacin) en forma ms rpida y eficiente. Finalmente, la posibilidad
de recombinacin homloga (gene targeting) en clulas somticas previo a la
transferencia nuclear abre infinitas posibilidades de manipulacin gentica en animales
de granja que haban sido restringidas slo al ratn, a travs de recombinacin
 homloga en clulas madre embrionarias. Esto permitir expandir el horizonte de
posibilidades a esta tecnologa, posibilitando la eliminacin de genes de inters en el
animal (gene knock out), como, por ejemplo, la eliminacin del gen del cerdo
responsable del rechazo a los trasplantes de rganos (Phelps y col., 2003; Ramsoondar
y col., 2003) o la eliminacin del gen de la oveja responsable de la produccin de
priones (Denning y col., 2001), adems de la posibilidad de insertar genes especficos
en regiones definidas del genoma del animal, favoreciendo un sitio permisivo para
asegurar altos niveles de expresin de la protena de inters (McCreath y col., 2000).

FIGURA 2. Rutas para la produccin de animales transgnicos.

Microinyeccin pronuclear: El ADN es inyectado en un cigoto fertilizado, el estado gentico es confirmado
despus del nacimiento y slo una pequea proporcin de animales nace con la modificacin gentica. Gene
targeting (ES cells): Clulas embrionarias madre (disponibles slo en el ratn), son modificadas in vitro y
luego microinyectadas en blastocistos, la modificacin gentica es transmitida por un ratn
quimrico.Transferencia nuclear: Las clulas donantes de ncleo son primero transformadas y seleccionadas
previo a la transferencia nuclear, todos los animales que nacen son transgnicos y todos los animales
transmiten el transgen a la descendencia.
Pronuclear microinjection: The DNA is injected into the fertilised egg; genetic status is usually confirmed
after birth and only a small proportion of animals born carry the modification. Gene targeting (ES cells):
Embryonic stem cells (availables only in the mouse), are modified in vitro and then microinjected into
blastocists, the genetic modification is transmitted to the offspring by a quimeric mouse. Nuclear transfer:
Nuclear donor cells are first transformed and selected prior to nuclear transfer, all animals born are
transgenics and all animals will pass the transgen to the offspring.

POTENCIALES USOS DE LA TECNOLOGIA DE TRANSFERENCIA

NUCLEAR Y RECOMBINACION HOMOLOGA EN PRODUCCION
ANIMAL

Clonacin de animales elite. Adems de proporcionar una ruta para la generacin de

animales transgnicos, la transferencia nuclear podra utilizarse para realizar la imagen
ms popular de la clonacin, esto es, la produccin de cantidades ilimitadas de
animales genticamente idnticos. La posibilidad de multiplicar razas de animales
seleccionados podra aumentar la eficiencia de la productividad pecuaria. Sin embargo,
la principal ventaja de la clonacin no sera en los programas de seleccin, sino en la
diseminacin ms rpida del progreso gentico desde rebaos elite hacia los
productores. Hasta la fecha esto se ha venido realizando mediante la inseminacin
artificial, la cual suministra slo la mitad de los genes. Con la clonacin, los
productores que pudieran pagar este servicio recibiran embriones que seran clones de
las vacas ms productivas de los rebaos elite, con lo que incrementaran la
performance de sus rebaos en tan slo una generacin. En este escenario las
empresas venderan embriones clonados de la misma forma en que hoy comercializan
el semen. Estos embriones tendran la ventaja de un transporte ms fcil de los
genotipos entre pases, evitndose los inconvenientes de la cuarentena. Un potencial
riesgo de esta prctica estara en la posibilidad de prdida de diversidad gentica; sin
embargo, esto se podra evitar restringiendo la venta de un nmero limitado de clones
de cada genotipo a cada productor. Aunque los rebaos de algunos productores
pudieran consistir slo de animales clonados, el hecho de que estos fueran clones de
diferentes animales elite incrementara la diversidad gentica en estos predios.

Conservacin gentica. Aunque la transferencia nuclear se asocia en la mente de la

gente con una prdida de la diversidad gentica, esta tcnica tambin proporciona
nuevas alternativas para la conservacin gentica. Con una cada vez ms creciente
presin comercial, muchas razas indgenas o criollas adaptadas a las condiciones
locales (a modo de ejemplo la raza Overo Negro en nuestro pas) estn siendo
reemplazadas por razas comerciales sujetas a sistemas intensivos de produccin. Estas
razas locales pueden contener importantes genes que confieran resistencia a
enfermedades y resistencia a las condiciones climticas (fro/calor). Hay, por tanto,
una urgente necesidad por prevenir su extincin. Los mtodos actuales de
conservacin consisten en almacenar semen o embriones congelados, procesos que
son largos y costosos. Como consecuencia, el futuro de slo unas pocas razas est
asegurado. La tecnologa de clonacin puede proporcionar una forma ms simple y
efectiva de conservar estas razas, por cuanto muestras de sangre, biopsias de piel o
incluso pelo pueden ser utilizadas como fuentes de clulas que podran ser crecidas
brevemente en el laboratorio, mantenidas y congeladas mediante su almacenamiento
en nitrgeno lquido para ser luego utilizadas en experimentos de transferencia
nuclear. El mejor ejemplo del potencial de esta tecnologa lo demuestran los recientes
experimentos en diversas especies en peligro de extincin mediante transferencia
nuclear interespecies (Lanza y col., 2000; Kitiyanant y col., 2001; Loi y col., 2001; Lee
y col., 2003).

Eliminacin de genes (gene knock out). La posibilidad de recombinacin homloga

(gene targeting) en clulas somticas previo a la transferencia nuclear ha captado la
atencin de las principales compaas biotecnolgicas que desean capitalizar los frutos
de esta tecnologa (Pollock y col., 1999; Reggio y col., 2001). La modificacin gentica
que conduce a la prdida de funcin de un gen, o ms comnmente conocida como
gene knock out, ha sido utilizada extensivamente en el ratn para obtener un mayor
entendimiento de la funcin gnica y como modelo para ciertas enfermedades
(Shastry, 1998; Kolb y col., 1999; Wallace y col., 2000). Actualmente existe una gran
carencia de rganos para trasplantes humanos que no es cubierta por las donaciones.
El trasplante de rganos de animales hacia humanos (xenotrasplantes) podra ser la
solucin. Sin embargo, existen muchas barreras de rechazo entre especies que limitan
su uso. La principal barrera consiste en el fenmeno de rechazo hiperagudo debido a la
presencia de anticuerpos naturales contra eptopes del disacrido galactosa 1-3
galactosa presente en las superficies celulares de mamferos, pero que estaran
ausentes en las superficies celulares de humanos y monos (Gallili y col., 1985). Este es
uno de los principales usos donde la tecnologa de recombinacin homloga acoplada
con transferencia nuclear est siendo explotada. La reciente generacin de cerdos
transgnicos en los que se elimin el gen 1-3 galactosiltransferasa y que permitira la
produccin de animales que carecen del eptope responsable del rechazo hiperagudo,
es una clara demostracin del poder de esta tecnologa (Phelps y col., 2003).

Otra de las aplicaciones de esta tecnologa est en la creacin de animales resistentes

a ciertas enfermedades. Las enfermedades ocasionadas por priones han tenido un
enorme impacto econmico en algunos pases de Europa y la utilizacin de productos
animales para su uso en humanos es una preocupacin constante. Este es el caso de la
encefalopata espongiforme bovina (EEB) o ms comnmente conocida como
enfermedad de las vacas locas que sera la causa de una nueva forma de enfermedad
de Creuzfeldt Jacob en humanos denominada vCJD (Hill y col., 1997). Experimentos
realizados en ratones (Prusiner y col., 1993) y ms recientemente en ovejas (Denning
y col., 2001), demuestran que es factible eliminar el gen para los priones (PrP)
mediante recombinacin homloga y que los animales producidos son resistentes al
Scrapie. Dado que las ovejas y vacas estn siendo utilizadas para producir protenas
humanas de uso farmacolgico y que estos animales poseen genes funcionales PrP,
sera apropiado producir poblaciones de animales resistentes a estos priones.

La tecnologa de recombinacin homloga ha sido ampliamente utilizada en el ratn

para producir varios modelos de enfermedades humanas. Sin embargo, debido a las
diferencias fisiolgicas sera ms apropiado disponer de modelos animales que se
asemejen ms al humano. Este es el caso del modelo para fibrosis qustica creado en
el ratn, donde se elimin el gen Cftr (Cystic fibrosis transmembrane responder). Este
modelo no present las caractersticas tpicas de la enfermedad en humanos debido a
las diferencias en la fisiologa del pulmn del ratn (Davidson y col., 1995). La
eliminacin del gen Cftr en la oveja se esperara produjera un modelo animal para
fibrosis qustica ms exacto debido a las similitudes de la fisiologa pulmonar entre
ovejas y humanos (Harris, 1997).
Las modificaciones en los animales que pudieran influir rasgos de produccin tales
como el crecimiento y la eficiencia de alimentacin son uno de los principales objetivos
en el mejoramiento animal. Ratones en donde el gen de la miostatina se elimin
mediante recombinacin homloga desarrollaron mayor musculatura esqueltica que
los controles no modificados (McPherron y col., 1997). Adems, el fenotipo de doble
musculatura de algunas razas bovinas, por ejemplo Belgian Blue, ha sido asociado a
modificaciones (mutaciones naturales) del gen de la miostatina (Grobet y col., 1997).
Por lo tanto, la eliminacin de este gen en bovinos, ovejas y cerdos podra producir
animales con mayor masa muscular, lo cual sera de enorme importancia econmica.
Tal es as que actualmente existe una empresa biotecnolgica en USA (http://
www.prolinia.com) cuyo objetivo es proporcionar la clonacin a los mejoradores de
razas registradas, para luego mediante ingeniera gentica proveer a estas razas elite
de caractersticas deseables como la mutacin para el gen de la miostatina.

Otra caracterstica productiva que se podra mejorar a travs de esta tecnologa es la

leche. La leche aporta cerca del 30% de las protenas consumidas en los pases
desarrollados. Por esta razn, la lactancia ha sido objeto de diversos estudios en el
campo de gentica, fisiologa y nutricin. La recombinacin homloga podra ser
utilizada para reemplazar genes de las protenas de la leche de los animales de granja
con la respectiva contraparte de los genes humanos para utilizarlos como fuentes de
protenas. Por ejemplo, la seroalbmina humana es utilizada ampliamente para el
tratamiento de quemaduras y como reemplazo de fluidos corporales en ciruga. La
escala de requerimiento de esta protena (~ 600 toneladas al ao) la hacen un muy
buen candidato para su produccin a escala comercial en la leche de vacas
transgnicas. Desafortunadamente, la seroalbmina bovina es muy similar a la
humana, lo que genera problemas para su purificacin. Una solucin sera reemplazar
el gen bovino con su contraparte humana, as la protena bovina sera eliminada sin
alterar o comprometer la viabilidad del animal. Otro ejemplo lo constituye la -
Lactoglobulina que est presente slo en la leche de rumiantes y no tiene una funcin
conocida en el proceso de secrecin de leche (Clark y col., 1998). Su presencia
confiere algunas propiedades de elaboracin indeseadas y se cree es la responsable de
la mayora de las alergias a la leche bovina, situacin que afecta a una considerable
parte de la poblacin mundial. Por lo tanto, la eliminacin de esta protena podra
proporcionar nuevas propiedades tecnolgicas a la leche (Richardson, 1985). Adems,
su eliminacin no slo ayudara con el problema de las alergias, sino que tambin,
debido a la compensacin compensacin que se producira en la concentracin de las
otras protenas de la leche, probablemente incrementara la concentracin de casenas,
lo que tendra un efecto directo para la industria quesera. De la misma forma, la
sobreexpresin de casenas en la leche se esperara que alterara significativamente las
propiedades tecnolgicas de la misma como fuera demostrado recientemente
por Brophy y col., (2003) y la expresin de proteasas podra generar resistencia a
enfermedades de gran impacto en el sector lechero como la mastitis (Kerr y col.,
2001).

CONCLUSION

La combinacin de las tecnologas de transferencia nuclear y recombinacin homloga

hacen posible actualmente realizar modificaciones genticas muy precisas en el
genoma del animal y han contribuido a incrementar la eficiencia del proceso de
generacin de animales transgnicos de granja. Aunque en una primera etapa las
modificaciones genticas afectarn solamente a genes simples, a medida que la
tecnologa avance y se haga ms eficiente es posible vislumbrar un mayor rango de
modificaciones que irn desde cambios en unos pocos pares de bases hasta la
reingeniera de grandes segmentos cromosmicos. Muchas aplicaciones requerirn de
modificaciones genticas mltiples, lo que puede significar un problema para los
animales de granja dado su largo perodo generacional. Por lo tanto, el real desafo
ser desarrollar clulas que mantengan su capacidad de totipotencialidad para
transferencia nuclear despus de mltiples eventos de recombinacin homloga. Esto
permitir realizar ms de una modificacin gentica en el animal y acortar el tiempo
necesario para establecer estos cambios al estado de homocigosis. Aunque por el
momento muchas de las aplicaciones de esta tecnologa estn orientadas
principalmente a la industria farmacutica, es posible vislumbrar que rasgos tan
complejos de manipular como una mayor eficiencia en la conversin de alimentos y la
resistencia a enfermedades, entre otras, sern ms fcilmente abordadas gracias a
esta tecnologa.

BIBLIOGRAFIA

BAGUISI, A., E. BEHBOODI, D. MELICAN, J. POLLOCK, M. DESTREMPES, C. CAMMUSO,

J. WILLIAMS, S. NIMS, C. PORTER, P. MIDURA, M. PALACIOS, S. AYRES, R.
DENNISTON, M. HAYES, C. ZIOMEK, H. MEADE, R. GODKE, W. GAVIN, E. OVERSTROM,
Y. ECHELARD. 1999. Production of goats by somatic cell nuclear
transfer. NatBiotechnol. 17: 456-61. [ Links ]

BRIGGS, R., T. KING. 1957. Changes in the nuclei of differentiating endodermal cells
as revelead by nuclear transplantation. J. Morphol. 100: 269-312. [ Links ]

BRINSTER, R., H. CHEN, M. TRUMBAUER, M. YAGLE, R. PALMITER. 1985. Factors

affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjecting
eggs. Proc Natl Acad Sci. U S A. 82: 4438-42. [ Links ]

BRINSTER, R., E. SANDGREN, R. BEHRINGER, R. PALMITER. 1989. Non simple solution

for making transgenic mice. Cell. 59: 239-41. [ Links ]

BROPHY, B., G. SMOLENSKI, T. WHEELER, D. WELLS, P. LHUILLIER, G. LAIBLE. 2003.

Cloned transgenic cattle produce milk with higher levels of beta-casein and kappa-
casein. Nat Biotechnol. 21: 157-62. [ Links ]

BUHLER, T., T. BRUYERE, D. WENT, G. STRANZINGER, K. BURKI. 1990. Rabbit beta-

casein promoter directs secretion of human interleukin-2 into the milk of transgenic
rabbits. Biotechnology. 8: 140-3. [ Links ]

CAMPBELL, K., J. MCWHIR, W. RITCHIE, I. WILMUT. 1996. Sheep cloned by nuclear

transfer from a cultured cell line. Nature 7: 64-6. [ Links ]

CIBELLI, J., S. STICE, P. GOLUEKE, J. KANE, J. JERRY, C. BLACKWELL, F. PONCE DE

LEON, J. ROBL. 1998. Cloned transgenic calves produced from nonquiescent fetal
fibroblasts. Science 22:1256-8. [ Links ]

CLARK, A.J., A. COWPER, R. WALLACE, G. WRIGHT, J. SIMONS. 1992. Rescuing

transgene expression by co-integration. Biotechnology. 10: 450-4. [ Links ]
CLARK, A.J., P. BISSINGER, D. BULLOCK, S. DAMAK, R. WALLACE, C. WHITELAW, F.
YULL. 1994. Chromosomal position effects and the modulation of transgene
expression. Reprod Fertil Dev. 6: 589-98. [ Links ]

CLARK, A., S. ALI, A. ARCHIBALD, H. BESSOS, P. BROWN, S. HARRIS, M.

McCLENAGHAN, C. PROWSE, J. SIMONS, B. WHITELAW. 1998. The molecular
manipulation of milk composition. Genome. 31: 950-5. [ Links ]

CLARK, A. 2002. Generation of transgenic livestock by pronuclear

injection. Methods Mol. Biol. 180: 273-87. [ Links ]

DAVIDSON, D., J. DORIN, G. MCLACHLAN, V. RANALDI, D. LAMB, C. DOHERTY, J.

GOVAN, D. PORTEOUS. 1995. Lung disease in the cystic fibrosis mouse exposed to
bacterial pathogens. Nat. Genet. 9: 351-7. [ Links ]

DENNING, C., P. DICKINSON, S. BURL, D. WYLIE, J. FLETCHER, AJ. CLARK. 2001.

Gene targeting in primary fetal fibroblasts from sheep and pig. Cloning Stem Cells 3:
221-31. [ Links ]

EBERT, K., J. SELGRATH, P. DITULLIO, J. DENMAN, T. SMITH, M. MEMON, J.

SCHINDLER, G. MONASTERSKY, J. VITALE, K. GORDON. 1991. Transgenic production
of a variant of human tissue-type plasminogen activator in goat milk: generation of
transgenic goats and analysis of expression. Biotechnology. 9: 835-8. [ Links ]

EVANS, M., M. KAUFMAN. 1981. Establishment in culture of pluripotential cells from

mouse embryos. Nature. 9: 154-6. [ Links ]

GALLILI, U., B. MACHER, J. BUEHLER, S. SHOHET. 1985. Human natural anti-alpha-

galactosyl IgG. II. The specific recognition of alpha (1-3)-linked galactose
residues. J. Exp. Med. 162: 573. [ Links ]

GORDON, J., F. RUDDLE. 1981. Integration and stable germ line transmission of genes
injected into mouse pronuclei. Science 214: 1244-6. [ Links ]

GROBET, L., L. MARTIN, D. PONCELET, D. PIROTTIN, B. BROUWERS, J. RIQUET, A.

SCHOEBERLEIN, S. DUNNER, F. MENISSIER, J. MASSABANDA, R. FRIES, R. HANSET,
M. GEORGES. 1997. A deletion in the bovine myostatin gene causes the doublemuscled
phenotype in cattle. Nat. Genet. 17: 71-4. [ Links ]

HAMMER, R., R. BRINSTER, R. PALMITER. 1985. Use of gene transfer to increase

animal growth. Cold SpringHarb. Symp. Quant. Biol. 50: 379-87. [ Links ]

HARRIS, A. 1997. Towards an ovine model of cystic fibrosis. Hum. Mol. Genet. 6:
2191-4. [ Links ]

HILL, A., M. DESBRUSLAIS, S. JOINER, K. SIDLE, I. GOWLAND, J. DOEY, P. LANTOS.

1997. The same prion strain causes vCJD and BSE. Nature 389: 448-
450. [ Links ]
HILL, J., Q. WINGER, C. LONG, C. LOONEY, J. THOMPSON, M. WESTHUSIN. 2000.
Development rates of male bovine nuclear transfer embryos derived from adult and
fetal cells. Biol. Reprod. 62: 1135-40. [ Links ]

HOOPER, M. 1992. Embryonal stem cells: introducing planned changes into the
germline. H.J. Evans, ed. Harwood Academic Publishers, Switzerland. pp.
117. [ Links ]

JAENISH R., B. MINTZ. 1974. Simian virus 40 DNA sequences in healthy adult mice
derived from preimplantation blastocist injected with viral DNA. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 21: 1250-1254. [ Links ]

JAENISH, R. 1976. Germline integration and Mendelian transmission of the exogenous

Molonkey leukaemia virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73: 1260. [ Links ]

KERR, D., K. PLAUT, A. BRAMLEY, C. WILLIAMSON, A. LAX, K. MOORE, K. WELLS, R.

WALL. 2001. Lysostaphin expression in mammary glands confers protection against
staphylococcal infection in transgenic mice. Nat.Biotechnol 19: 66-70. [ Links ]

KITIYANANT, Y., J. SAIKHUN, B. CHAISALEE, K. WHITE, K. PAVASUTHIPAISIT. 2001.

Somatic cell cloning in Buffalo (Bubalus bubalis): effects of interspecies cytoplasmic
recipients and activation procedures. Cloning StemCells 3: 97-104. [ Links ]

KOLB, A., R. ANSELL, J. MCWHIR, S. SIDDELL. 1999. Insertion of a foreign gene into
the betacasein locus by Cre-mediated site-specific recombination. Gene. 227: 21-
31. [ Links ]

KRIMPENFORT, P., A. RADEMAKERS, W. EYESTONE, A. VAN DER SCHANS, S. VAN DEN

BROEK, P. KOOIMAN, E. KOOTWIJK, G. PLATENBURG, F. PIEPER, R. STRIJKER. 1991.
Generation of transgenic dairy cattle using in vitro embryo
production. Biotechnology 9: 844-7. [ Links ]

LANZA, R., J. CIBELLI, F. DIAZ, C. MORAES, P. FARIN, C. FARIN, C. HAMMER, M.

WEST, P. DAMIANI. 2000. Cloning of an endangered species (Bos gaurus) using
interspecies nuclear transfer. Cloning. 2: 79-90. [ Links ]

LAVITRANO, M., A. CAMAIONI, V. FAZIO, S. DOLCI, M. FARACE, C. SPADAFORA. 1989.

Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of
mice. Cell. 57: 717-23. [ Links ]

LAVITRANO, M., M. FORNI, V. VARZI, L. PUCCI, M. BACCI, C. DI STEFANO, D.

FIORETTI, G. ZORAQI, B. MOIOLI, M. ROSSI, D. LAZZERESCHI, A. STOPPACCIARO, E.
SEREN, D. ALFANI, R. CORTESINI, L. FRATI. 1997. Sperm-mediated gene transfer:
production of pigs transgenic for a human regulator of complement
activation.Transplant Proc. 29: 3508-9. [ Links ]

LEE, B., G. WIRTU, P. DAMIANI, E. POPE, B. DRESSER, W. HWANG, B. BAVISTER.

2003. Blastocyst development after intergeneric nuclear transfer of mountain bongo
antelope somatic cells into bovine oocytes. Cloning StemCells. 5: 25-33. [ Links ]
LOI, P., G. PTAK, B. BARBONI, J. FULKA, P. CAPPAI, M. CLINTON. 2001. Genetic rescue
of an endangered mammal by cross-species nuclear transfer using post-mortem
somatic cells. Nat Biotechnol. 19: 962-4. [ Links ]

MCCREATH, K., J. HOWCROFT, K. CAMPBELL, A. COLMAN, A. SCHNIEKE, A. KIND.

2000. Production of gene-targeted sheep by nuclear transfer from cultured somatic
cells. Nature. 405: 1066-9. [ Links ]

MCPHERRON, A., A. LAWLER, S. LEE. 1997. Regulation of skeletal muscle mass in mice
by a new TGF-beta superfamily member. Nature. 387: 83-90. [ Links ]

MARTIN, G. 1981. Isolation of a pluripotent cell line from early mouse embryos
cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U
S A. 78: 7634-8. [ Links ]

MELTON, W. 1994. Gene targeting in the mouse. Bioassays. 16:633-8. [ Links ]

NIEMANN, H., B. REICHELT. 1993. Manipulating early pig

embryos. J Reprod Fertil Suppl. 48: 5-94. [ Links ]

OSHIMA, Y., T. SAKAMOTO, I. YAMANAKA, T. NISHI, T. ISHIBASHI, H. INOMATA.

1998. Targeted gene transfer to corneal endothelium in vivo by electric
pulse. Gene Ther. 5: 1347-54. [ Links ]

PALMITER, R., R. BRINSTER. 1985. Transgenic mice. Cell. 41: 343-5. [ Links ]

PHELPS, C., C. KOIKE, T. VAUGHT, J. BOONE, K. WELLS, S. CHEN, S. BALL, S.

SPECHT, I. POLEJAEVA, J. MONAHAN, P. JOBST, S. SHARMA, A. LAMBORN, A. GARST,
M. MOORE, A. DEMETRIS, W. RUDERT, R. BOTTINO, S. BERTERA, M. TRUCCO, T.
STARZL, Y. DAI, D. AYARES. 2003. Production of alpha 1,3-galactosyltransferase-
deficient pigs. Science 299: 411-4. [ Links ]

POLLOCK, D., J. KUTZKO, E. BIRCK-WILSON, J. WILLIAMS, Y. ECHELARD, H. MEADE.

1999. Transgenic milk as a method for the production of recombinant
antibodies. J. Immunol. Methods. 231: 147-57. [ Links ]

PRATHER, R., F. BARNES, M. SIMS, J. ROBL, W. EYESTONE, N. FIRST. 1987. Nuclear

transplantation in the bovine embryo: assessment of donor nuclei and recipient
oocyte. Biol. Reprod. 4: 859-66. [ Links ]

PRATHER, R., M. SIMS, N. FIRST. 1989. Nuclear transplantation in early pig

embryos. Biol. Reprod. 41: 414-8. [ Links ]

PRUSINER, S., D. GROTH, A. SERBAN, R. KOEHLER, D. FOSTER, M. TORCHIA, D.

BURTON, S. YANG, S. DEARMOND. 1993. Ablation of the prion protein (PrP) gene in
mice prevents scrapie and facilitates production of anti- PrP
antibodies. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 90: 10608-12. [ Links ]

PURSEL, V., C. REXROAD. 1993. Recent progress in the transgenic modification of

swine and sheep. Mol.Reprod. Dev. 36: 251-4. [ Links ]
RAMSOONDAR, J., Z. MACHATY, C. COSTA, B. WILLIAMS, W. FODOR, K. BONDIOLI.
2003. Production of alpha 1,3-galactosyltransferase- knockout cloned pigs expressing
human alpha 1,2-fucosylosyltransferase. Biol.Reprod. 69:437-45. [ Links ]

REGGIO, B., A. JAMES, H. GREEN, W. GAVIN, E. BEHBOODI, Y. ECHELARD, R. GODKE.

2001. Cloned transgenic offspring resulting from somatic cell nuclear transfer in the
goat: oocytes derived from both follicle-stimulating hormonestimulated and
nonstimulated abattoir-derived ovaries. Biol. Reprod. 65:1528-33. [ Links ]

RICHARDSON, T. 1985. Chemical modifications and genetic engineering of food

proteins. J. Dairy Sci. 68: 2753-62. [ Links ]

SHASTRY, B.S. 1998. Gene disruption in mice: models of development and

disease. Mol. Cell. Biochem. 1: 163-79. [ Links ]

SCHNIEKE, A., A. KIND, W. RITCHIE, K. MYCOCK, A. SCOTT, M. RITCHIE, I. WILMUT,

A. COLMAN, K. CAMPBELL. 1997. Human factor IX transgenic sheep produced by
transfer of nuclei from transfected fetal fibroblasts.Science 19: 2130-3. [ Links ]

SMITH, L., I. WILMUT. 1989. Influence of nuclear and cytoplasmic activity on the
development in vivo of sheep embryos after nuclear transplantation. Biol. Reprod. 40:
1027-35. [ Links ]

STICE, S., J. ROBL. 1988. Nuclear reprogramming in nuclear transplant rabbit

embryos. Biol Reprod. 39: 657-64. [ Links ]

STICE, S. 1998. Opportunities and challenges in domestic animal embryonic stem cell
research. In: Animal Breeding: Technology for the 21st Century. AJ. Clark, ed. Harwood
Academic Press, Switzerland, pp 64-71. [ Links ]

THOMPSON, S., A. CLARKE, A. POW, M. HOOPER, D. MELTON. 1989. Germ line

transmission and expression of a corrected HPRT gene produced by gene targeting in
embryonic stem cells. Cell 56:313-21. [ Links ]

WALL, R., V. PURSEL, A. SHAMAY, R. MCKNIGHT, C. PITTIUS, L. HENNIGHAUSEN.

1991. High-level synthesis of a heterologous milk protein in the mammary glands of
transgenic swine. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 88: 1696-700. [ Links ]

WALL, R., D. KERR, K. BONDIOLI. 1997. Transgenic dairy cattle: genetic engineering
on a large scale. J. DairySci. 80: 2213-2224. [ Links ]

WALLACE, H., R. ANSELL, J. CLARK, J. MCWHIR. 2000. Pre-selection of integration

sites imparts repeatable transgene expression. Nucleic. Acids. Res. 28:1455-
64. [ Links ]

WATANABE, Y., H. NOMOTO, R. TAKEZAWA, N. MIYOSHI, T. AKAIKE. 1994. Highly

efficient transfection into primary cultured mouse hepatocytes by use of cation-
liposomes: an application for immunization. J. Biochem. 116: 1220-6. [ Links ]
WELLS, D., P.M. MISICA, T. DAY, H. TERVIT. 1997. Production of cloned lambs from an
established embryonic cell line: a comparison between in vivo- and in vitro-matured
cytoplasts. Biol. Reprod. 57: 385-93. [ Links ]

WILLADSEN, S.M. 1986. Nuclear transplantation in sheep embryos. Nature. 320: 63-
5. [ Links ]

WILMUT, I., A. SCHNIEKE, J. MCWHIR, A. KIND, K. CAMPBELL. 1997. Viable offspring

derived from fetal and adult mammalian cells. Nature 385: 810-3. [ Links ]

WONG T., E. NEUMANN. 1982. Electric field mediated gene

transfer. Biochem. Biophys. Res. Commun. 30: 584-7. [ Links ]

WRIGHT, G., A. CARVER, D. COTTOM, D. REEVES, A. SCOTT, P. SIMONS, I. WILMUT,

I. GARNER, A. COLMAN. 1991. High level expression of active human alpha-1-
antitrypsin in the milk of transgenic sheep. Biotechnology9: 830-4. [ Links ]

ZAKHARTCHENKO, V., R. ALBERIO, M. STOJKOVIC, K. PRELLE, W. SCHERNTHANER, P.

STOJKOVIC, H. WENIGERKIND, R. WANKE, M. DUCHLER, R. STEINBORN, M. MUELLER,
G. BREM, E. WOLF. 1999a. Adult cloning in cattle: potential of nuclei from a permanent
cell line and from primary cultures. Mol. Reprod. Dev. 54: 264-72. [ Links ]

ZAKHARTCHENKO, V., G. DURCOVA-HILLS, M. STOJKOVIC, W. SCHERNTHANER, K.

PRELLE, R. STEINBORN, M. MULLER, G. BREM, E. WOLF. 1999b. Effects of serum
starvation and re-cloning on the efficiency of nuclear transfer using bovine fetal
fibroblasts. J. Reprod. Fertil. 115: 325-31. [ Links ]

ZORAQI, G., C. SPADAFORA. 1997. Integration of foreign DNA sequences into mouse
sperm genome. DNA CellBiol. 16: 291-300. [ Links ]

Aceptado: 29-06-2004

Todo el contenido de esta revista, excepto dnde est identificado, est bajo una Licencia
Creative Commons

Isla Teja s/n

Casilla 567

Valdivia - Chile

Tel.: (56-63) 221459

Fax: (56-63) 221354

Beneficios y riesgos de los animales
transgnicos
04 de diciembre de 2002 0
La investigadora del Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias (INIA),
Beln Pintado, interviene hoy en el ciclo Biodiversidad y Conservacin
organizado por el CSIC
Compartir
La investigadora del Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias (INIA), Beln Pintado,
intervendr hoy mircoles, da 4, en el ciclo Biodiversidad y Conservacin organizado por
elConsejo Superior de Investigaciones Cientficas (CSIC) y la Fundacin BBVA. La
conferencia, titulada "Animales transgnicos", tendr lugar a las 19,00 horas en el Museo
Nacional de Ciencias Naturales(c/ Jos Gutirrez Abascal, 2).

Pintado explicar las grandes posibilidades que ofrecen los animales transgnicos, tanto a
nivel cientfico como a nivel industrial, y destacar la necesidad de combinar los avances
tecnolgicos con la preservacin de especies autctonas.

Los animales transgnicos representan uno de los avances ms destacables de la

Biotecnologa en los ltimos aos. La introduccin o inactivacin de nueva informacin
gentica en un organismo de forma controlada aumenta enormemente las posibilidades de
la mejora gentica, ya que se vence por primera vez la barrera especfica, permitiendo
combinar material gentico de los ms diversos orgenes.

BENEFICIOS PARA LA SANIDAD Y LA INDUSTRIA

Las aplicaciones potenciales y reales que aportan los animales transgnicos son mltiples.
En primer lugar, mejoran la investigacin bsica, ya que facilitan un mayor entendimiento
de los mecanismos de funcionamiento y control de los genes. En segundo lugar, benefician
la produccin animal, permitiendo la obtencin de un mayor crecimiento con un menor
consumo de energa. Asimismo, permiten modificar especficamente ciertas caractersticas
de productos alimenticios, como la leche, hacindolos ms adecuados para el consumo
humano o ms fcilmente transformables por la industria.

Su aplicacin alcanza tambin el mbito de la Sanidad, ya que la transgnesis facilita el

desarrollo de modelos animales para el estudio de enfermedades humanas o animales, y
ayuda en el entendimiento de mecanismos tan importantes como la proliferacin y la
diferenciacin celular. Finalmente, abre tambin nuevas aplicaciones para la industria,
permitiendo la transformacin de animales en biorreactores para la produccin de protenas
de inters teraputico e industrial con importantes implicaciones futuras.

Como demostrar la investigadora, las expectativas de aplicacin son enormes. Con todo,
Pintado insistir en la necesidad de considerar de forma consciente el impacto ambiental
que puedan implicar.

PROTECCIN DE ESPECIES AUTCTONAS

Y es que, la transgnesis, como sistema de mejora gentica, puede tener las mismas
consecuencias negativas que han causado la prdida de cientos de razas autctonas en todo
el mundo, al introducir otras con mejores caractersticas productivas. El desafo de los
investigadores es evitar la prdida del patrimonio gentico que garantiza la biodiversidad,
ya que en este momento se conocen los medios para evitarlo. Corresponde tambin a la
comunidad cientfica realizar estudios de impacto medioambiental que permitan
beneficiarse de nuevas tcnicas, sin que ello ponga en peligro el medio natural.

Beln Pintado es veterinaria y trabaja desde 1986 en el departamento de Reproduccin

Animal del Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias (INIA). Sus trabajos iniciales
abordaron las tcnicas reproductivas, la obtencin de cultivos y la transferencia de
embriones. Realiz una estancia postdoctoral en Beltsville (Estados Unidos), uno de los dos
centros pioneros en la produccin de animales de granja transgnicos.

Posteriormente, de vuelta en Espaa, se responsabiliz de la creacin de una unidad de

produccin de ratones transgnicos que en este momento funciona a pleno rendimiento y
colabora con diversos grupos de investigacin, centrados fundamentalmente en la
obtencin de modelos animales para enfermedades.