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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO CARLOS - UFSCAR

CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS CAMPI ARARAS


CURSO DE GRADUAO EM CINCIAS BIOLGICAS - LICENCIATURA

BEATRIZ CAROLINE PADUANELLO DURLIN R.A: 743633


DIEGO FELIPE DAS NEVES R.A: 743664
NATHLIA MANCINE R.A: 743781
RANIELE SILVA SANTOS R.A: 743799

GENE CITOCROMO C OXIDASE CcOI


E SUA RELAO COM O CANCR DE CLON

Araras
2017
INTRODUO

O gene citocromo c oxidase I (CcOI) de origem mitocondrial, forma o


complexo IV da cadeia de transporte de eltrons (KOSAKYAN et al, 2012),
participa do ltimo processo enzimtico na cadeia respiratria, pode ser muito
utilizado como marcador nos estudos de sistemtica filogentica, filogeografia,
cdigo de barras gentico, reconstruo de histria demogrfica e diversificao
adaptativa, sendo considerado um marcador universal para o estudo de cdigo
de barras gentico de animais, pois o mesmo proporciona a vantagem de ser
espcie-especfico. (BUENO-SILVA, 2012).
O sequenciamento do gene CcOI adequada para o estudo gentico
devido a sua elevada taxa de mutao, o que faz com que muitas vezes seja
possvel distinguir espcies por meio dele, (BUENO-SILVA, 2012). A informao
gentica do marcador CcOI obtida por meio de sequenciamento de fragmentos
de DNA mitocondrial.

DESCRIO DO GENE

O DNAmit formado por dois segmentos transcritos de RNA ribossmico,


compostos de 15 a 17 mil pares de bases. So diferenciados entre cadeia
pesada e leve: a cadeia pesada (Cadeia-H) rica em guanina e codifica cerca
de 28 genes; e a cadeira leve (Cadeia-L) rica em citosina codifica apenas 9
genes. Ao todo so um total de 37 genes, com 22 RNA transportadores, 13
codificadores de protenas e 2 RNA Ribossomal (BALARESQUE et al, 2010).
Na cadeia respiratria das mitocndrias temos o complexo respiratrio IV,
o qual possui trs subunidades codificadas do DNA mitocondrial: MT-CO1, MT-
CO2, MT-CO3 (Kosakyan et al, 2012), sendo que a maior delas a subunidade
I denomida como citocromo c oxidase (CcOI). O complexo IV (Figura 1) a
terceira e ltima enzima da cadeia de transporte de eltrons da fosforilao
oxidativa mitocondrial (SARASTE et al, 1994). O complexo enzimtico consiste
entre trs e quatro subunidades em procariontes, e pode ter at 13 polipeptdeos
(em mamferos). Destas treze subunidades, trs delas (I, II e III) so codificadas
pelo DNA mitocondrial (mtDNA) e as outras dez restante codificadas por DNA
nuclear. O gene CcOI denominado como DNA barcoding, sendo um marcador
devido sua ampla distribuio, alto nmero de cpias por clulas, taxa de
mutao diferente comparada as espcies, no sofre recombinao, herana
materna e baixo polimorfismo ancestral.

Figura 1 - Complexos enzimticos da cadeia respiratria na membrana mitocondrial interna.

Fonte: ZEVIANI et al., 2004

O gene CcOI fica localizado no mitogenoma na posio 5.904 7.445,


tendo portanto, um comprimento de 1.542. (Figura 2).

Figura 2: Localizao do MTCO1 no genoma mitocondrial humano.

Fonte: Emmanuel Douzery

O sequenciamento de nucleotdeos desse gene est expresso na Tabela


1.

Tabela 1 Sequenciamento gentico do CcOI


>NC_012920.1:5904-7445 Homo sapiens mitochondrion, complete genome
>NC_012920.1:5904-7445 Homo sapiens mitochondrion, complete genome
1 atgttcgccg accgttgact attctctaca aaccacaaag acattggaac actataccta
61 ttattcggcg catgagctgg agtcctaggc acagctctaa gcctccttat tcgagccgag
121 ctgggccagc caggcaacct tctaggtaac gaccacatct acaacgttat cgtcacagcc
181 catgcatttg taataatctt cttcatagta atacccatca taatcggagg ctttggcaac
241 tgactagttc ccctaataat cggtgccccc gatatggcgt ttccccgcat aaacaacata
301 agcttctgac tcttacctcc ctctctccta ctcctgctcg catctgctat agtggaggcc
361 ggagcaggaa caggttgaac agtctaccct cccttagcag ggaactactc ccaccctgga
421 gcctccgtag acctaaccat cttctcctta cacctagcag gtgtctcctc tatcttaggg
481 gccatcaatt tcatcacaac aattatcaat ataaaacccc ctgccataac ccaataccaa
541 acgcccctct tcgtctgatc cgtcctaatc acagcagtcc tacttctcct atctctccca
601 gtcctagctg ctggcatcac tatactacta acagaccgca acctcaacac caccttcttc
661 gaccccgccg gaggaggaga ccccattcta taccaacacc tattctgatt tttcggtcac
721 cctgaagttt atattcttat cctaccaggc ttcggaataa tctcccatat tgtaacttac
781 tactccggaa aaaaagaacc atttggatac ataggtatgg tctgagctat gatatcaatt
841 ggcttcctag ggtttatcgt gtgagcacac catatattta cagtaggaat agacgtagac
901 acacgagcat atttcacctc cgctaccata atcatcgcta tccccaccgg cgtcaaagta
961 tttagctgac tcgccacact ccacggaagc aatatgaaat gatctgctgc agtgctctga
1021 gccctaggat tcatctttct tttcaccgta ggtggcctga ctggcattgt attagcaaac
1081 tcatcactag acatcgtact acacgacacg tactacgttg tagcccactt ccactatgtc
1141 ctatcaatag gagctgtatt tgccatcata ggaggcttca ttcactgatt tcccctattc
1201 tcaggctaca ccctagacca aacctacgcc aaaatccatt tcactatcat attcatcggc
1261 gtaaatctaa ctttcttccc acaacacttt ctcggcctat ccggaatgcc ccgacgttac
1321 tcggactacc ccgatgcata caccacatga aacatcctat catctgtagg ctcattcatt
1381 tctctaacag cagtaatatt aataattttc atgatttgag aagccttcgc ttcgaagcga
1441 aaagtcctaa tagtagaaga accctccata aacctggagt gactatatgg atgcccccca
1501 ccctaccaca cattcgaaga acccgtatac ataaaatcta ga

Fonte: National Center for Biotechnology Information

FUNO E PESQUISA DO GENE CCOI

Alm de sua atuao na cadeia respiratria e uso no sequenciamento de


animais, utilizado como fonte de estudos em uma pesquisa para saber se a
deficincia de expresso do CcOI em criptas colnias tem relao com o cncer
de clon na Universidade do Arizona. O epitlio do clon pode originar varias
leses focais, como focos abertos de cripta, plipos e criptas deficientes na
subunidade I do citocromo c oxidase (CcOI).
Uma cripta colnica em humanos tem em torno de 5000 clulas
decorrentes da regio da clula-tronco na base da cripta, em que parece haver
concorrncia entre as clulas, onde as clulas filhas descendentes de uma
clula-tronco mutante com uma deficincia de CcOI assume o local da clulas-
tronco. Assim, a descendncia de uma clula tronco cripta colnica humana que
contm uma mutao mtDNA em CcOI pode se expandir para ocupar uma cripta
inteira, essa sugesto baseada nas evidencias de criptas mutantes no
processo de fisso compartilham o mesmo gentipo mitocondrial, suas clulas
vizinhas mutantes partilham mesmo gentipo, e so agrupadas em conjunto ao
longo do clon. As criptas colnicas deficientes em CcOI so facilmente
apontadas das criptas de expresso normal de CcOI usando imuno-
histoqumica.
Os resultados da pesquisa sugerem associao da deficincia de CcOI
com desenvolvimento e progresso do cncer de clon. Nesse estudo, foram
feitas biopsias tiradas em pontos distintos do clon de 154 mulheres e 196
homens, em cada individuo foram feitas trs bipsias retiradas do ceco e trs
retiradas do clon sigmide. A percentualidade mostra a frequncia mdia das
criptas com deficincia de CcOI (CcOI-DC), sendo baixa na faixa etria de 20 a
39 anos, com variao entre 0,48% - 0,40% em mulheres e 1,80% - 0,35% em
homens; tendo uma expresso um pouco mais significativa aps os 40 anos,
ficando as variaes entre as idades de 40 a 44 anos em mulheres com uma
frequncia que atinge 5,89% 0,84%, e nos homes a variao passa a 2,15%
1,27%. A expresso de maior expresso significativa ocorre na faixa etria entre
80 e 84 anos, nas mulheres vai para 15,77% 0,97% e em homens para 22,6%
0,65%.
Dentro dos tumores e em suas margens foram retiradas 34 amostragens
com variao de tamanho de 1 a 10 cm, em 12 homens com faixa etria entre
56 e 82 anos com adenoma avanado ou cncer para avaliao da deficincia
de CcOI. A comparao indicou presena de CcOI-DC significativamente
elevadas, sendo 4,03% 0,27% em indivduos livres de neoplasia na faixa etria
de 55 e 64 anos e 14,13% 0,35% em tecido histologicamente normal ressecado
de homens com cncer na mesma faixa etria. Diferenas expressivas similares
foram mostradas na faixa etria de 65 e 74 anos com a porcentagem de 7,22%
0,28% em indivduos livres de neoplasia e de 23,80% 5,58% em tecido
histologicamente normal ressecado de homens com cncer, na faixa etria de
75 e 84 anos a expresso foi de 13,89% 0,34% em indivduos livres de
neoplasia e 29,44% 3,86% em tecido histologicamente normal ressecado de
homens com cncer. Os resultados apresentados mostram em cada uma das
trs faixas etrias uma frequncia significativamente maior de criptas deficientes
em CcOI em regies de 1 a 10 cm de um adenoma ou cncer de colnico
avanado. A frequncia de cristas deficientes ocorre na faixa dos 40 anos com
associao ao cncer de colon com faixa etria de 60 anos, correlaciona-se com
o aumento do colon sigmoide e sua mutao ocorre ao longo do clon. As criptas
so desde pequenos segmentos de clulas defeituosas at criptas mais
segmentadas com maior frequncia dada pela idade, fisso e tumores. As criptas
deficientes em CcOI podem surgir por mutao no gene CcOI no DNA
mitocondrial, embora reduzida expresso pode gerar mutao; uma mutao ou
epimutao leva a falha na montagem do complexo CcO, degradando-se em
CcOI. (Greaves et al, 2006). As clulas deficientes tm possibilidade de no
conseguir realizar a apoptose, sendo resistentes a essa ao e vantagem
seletiva. Alm disso, podem competir pelo espao na constituio de criptas,
formando remendo ou epitlio do colon.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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ZEVIANI M, DONATO S. Mitochondrial disorders.Brain 127:2153-2172, 2004.