CONCEPTOS Y TECNICAS DE BIOTECNOLOGA I

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 1

 Cambio de escala

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 2

Microorganismos utilizados en biotecnologa

Aislamiento de microorganismos

Procedimientos de screening

Mejoramiento de cepas-Optimizacin de condiciones

Produccin a pequea escala

Produccin a gran escala. Fermentadores

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 3

Caractersticas ventajosas de los microorganismos
usados en bioprocesos
. Degradacin de polmeros heterogneos hasta
azcares simples
. Fermentacin simultnea de una mezcla de
azcares
. Tolerancia a los inhibidores producidos durante la
hidrlisis
. Tolerancia a la concentracin creciente del
producto final y a las condiciones del proceso de
fermentacin

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 4

Algunos Procesos Microbianos Industriales
Producto Microorganismo(s) utilizado(s)
Productos industriales
Etanol (de glucosa) Saccharomyces cerevisiae
Etanol (de lactosa) Kluvyeromyces fragilis
Acetona y butanol Clostridium acetobutylicum
2-3 butanediol Enterobacter, Serratia
enzimas Bacillus, Aspergillus, Mucor, Trichoderma
Aditivos de alimentos
Aminocidos (ej: lisina) Corynebacterium glutamicum
cidos orgnicos ( ej: citrato) Aspergillus niger Del libro
nucletidos Corynebacterium glutamicum Microbiology
vitaminas Ashbya, Eremothecium de Prescott,
Polisacridos (ej: xantano) Xanthomonas Harley y Klein
Productos medicinales
antibiticos Penicilium, Streptomyces, Bacillus
alcaloides Claviceps purpurea
Transformaciones de esteroides Rhizopus, Arthrobacter
Insulina, hormona de crecimiento, interferon E. coli, Saccharomyces y otros (recombinantes)
Combustibles
Hidrgeno Bacterias fotosintticas
metano Methanobacterium
Etanol Zymomonas, Thermoanaerobacter
Bioplsticos
polihidroxialcanoatos ConceptosRalstonia
2012-Nancy I. Lpez
eutropha, E.coli recombinante 5
BIOTECNOLOGIA MICROBIANA

Tres categoras de productos microbianos de

importancia industrial

Metabolitos primarios
Metabolitos secundarios
Enzimas

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 6

Crecimiento bacteriano

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 7

 Metabolitos primarios
Producidos durante el crecimiento normal del microorganismo, parte
del metabolismo. Pueden ser intermediarios o productos finales de
vas metablicas esenciales para el crecimiento.

Ej: aa, nucletidos, azcares,

productos de fermentacin, exoenzimas.

Normalmente se producen en gran

abundancia en la fase logartmica.

Acetobacter o
Gluconobacter
Etanol Acido actico

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 8

Metabolitos secundarios
Producidos luego del crecimiento
normal del microorganismo, se
acumulan cuando las condiciones
son desfavorables para el
crecimiento (fase estacionaria).
Compuestos no esenciales para el
crecimiento y su rol en muchos
casos es desconocido.

Ej: antibiticos

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 9

Metabolitos primarios
cidos y solventes
Principales cidos orgnicos y solventes
producidos por microorganismos

Etanol 1. Acido ctrico

cido ctrico
2. Acido actico
3. Acido lctico
4. Acido succnico
5. Acido propinico y butrico
6. Etanol
7. Butanol
8. Acetona
9. 1,2 y 1,3 propanodiol
10. 2,3 butanodiol

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 10

Metabolitos primarios-cidos y solventes
Etanol
Conocido como producto derivado de microorganismos
Levaduras desde azcares Pasteur 1822-1895

Investigaciones en los ltimos 20 aos bacterias capaces de produccin

desde distintos sustratos con alto rendimiento.

Enzimas claves: Piruvato decarboxilasa y alcohol deshidrogenasa

Etanol or etil alcohol (CH3CH2OH, mol. wt. 46.07) incoloro, inflamable.

Usos
Bebidas
Medicinal o Qumico
Combustible Bioetanol

Al 95% puede ser usado como combustible

Etanol anhidro si se mezcla con gasolina

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 11

Produccin de etanol

Fermentacin

Qumica etileno

Incremento del precio del petrleo

Agotamiento de las reservas

Fermentacin

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 12

Programas gubernamentales de bsqueda de nuevas fuentes de energa

1975

Saccharomyces

1980

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 13

Primera generacin de bioetanol
 Desarrollo de la produccin de alcohol

Saccharomyces spp.

Nuevas cepas tolerar etanol

fermentar azucares rpidamente
capaces de flocular
Estrategias
Fermentaciones continuas con reciclado de levadura
dem con vaco para evaporar etanol
Levaduras inmovilizadas

Uso de bacterias Zymomonas mobilis

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 14

Zymomonas mobilis

Bacilo gram negativo aerobio facultativo (algunos obligadamente

anaerobios otros toleran O2)
-Proteobacteria

Metabolismo fermentativo obligado con produccin de etanol.

Algunos fermentan sacarosa (2 moles de etanol y 2 de C02 por mol
de glucosa).
Etanol 10-12%
Genoma completo 2005-2,06 Mb
Vive sobre plantas incluido el cactus Maguey que fermentado da
bebida mexicana pulque
Desde 1970 1400 trabajos publicados

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 15

Emden-Meyerhof Entner-Doudoroff

Zymomonas
(fermentativo)

Pseudomonas
KDPG aldolasa

PDC

. ADH

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 16

Productos de fermentacin Zymomonas vs. Levaduras

Pathway ETANOL Lactic Acid CO2 ATP

Embden-Meyerhof
Saccharomyces
2 0 2 2

Entner-Doudoroff
Zymomonas
2 0 2 1

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 17

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 18
BIOETANOL
Estrategias:
cambio de materias primas
Segunda generacin de bioetanol

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 19

MANIPULACIONES GENTICAS PARA INCREMENTAR LA
PRODUCCIN DE ETANOL
Promotor

Plsmidos pdc

adh

Genes
recombinantes
Cromosoma

No pueden usar pentosas eficientemente

Menos susceptible a manipulaciones genticas
Diferentes requerimientos
de O2 durante crecimiento y produccin de etanol

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 20

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 21
 Otros microorganismos
Entner-Doudoroff

KDPG aldolasa Escherichia

y otras entricas

PDC

ADH

pet operon Recombinantes E. coli con

operon para produccin de
etanol de Zymomonas
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 22
E. coli etanolognica
Hexosas y pentosas

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 23

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 24
TOLERANCIA AL ETANOL DE LAS CLULAS BACTERIANAS

. Efecto citotxico es la razn por la cual se puede usar como desinfectante y

preservante. Desventaja en procesos fermentativos

. Citotoxicidad desde efectos reversibles a muerte celular

. Efectos: alteraciones en metabolismo de fosfolpidos y de cidos grasos. Membrana

principal blanco

. Costo en el proceso de fermentacin: disminucin de tasa de produccin

a medida que el producto se acumula

. E.coli K011. Puede utilizar compuestos ligno-celulsicos pero no tiene alta

tolerancia al etanol.
.Seleccin de mutantes. Cambios en cidos grasos de membrana para tolerar.
. Z. mobilis mas tolerante. Aumento de la expresin de las protenas de heat shock
. Bacterias lcticas tambin tolerantes pero los mecanismos
son menos conocidos.
. Sobreexpresin de protenas de heat shock GroEL,
GroES, DnaK y DnaJ

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 25

BIODIESEL
Biocombustible que se obtiene a partir de aceites vegetales
o grasas animales, mediante procesos industriales de esterificacin y
transesterificacin, dando metil steres de cidos grasos y etil steres de
cidos grasos (FAME o FAEE).

Glicerol FAME o FAEE

Aceite vegetal

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 26

 Biodiesel
Microdiesel: Escherichia coli Combinacin de formacin de etanol y posterior
esterificacin de etanol con cidos grasos para dar etil oleate o etil palmitate y etil palmitoleato.

Expresin in E. coli of the Zymomonas mobilis

piruvato decarboxilasa y alcohol deshidrogenasa y
aciltransferase de Acinetobacter baylyi strain ADP1.

Kalscheuer et al. Microbiology (2006), 152, 25292536

Compuestos equivalentes al
biodiesel
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 27
 Microdiesel

/o
etanol

Biodiesel Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 28

Metabolitos primarios- cidos y solventes
PRODUCCIN DE CIDOS ORGNICOS

Acido Ctrico
Buen conservante y antioxidante natural que se aade industrialmente
como aditivo en el envasado. Saborizante, gusto cido frutal.
Plastificante: disminuye la espuma en fabricacin de resinas.
Cosmtica como astringente.
A pH neutro o acido forma complejos.
En produccin de detergentes
Aspergillus niger es el mejor productor en presencia de Fe+3.
Ciclo de Krebs. Ingeniera metablica.
Quelante de Al3+. Plantas que expresan niveles elevados de citrato
sintasa bacteriana.

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 29

 Inhibidores
Ferrocianuro
Estrategias Fluorocitrato
para incrementar Malonato
la produccin
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 30
 Aspergillus niger es el
mejor productor.
Produccin industrial 1917.
Pfizer.

Melaza como fuente

de azcar
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 31
 CINTICA DE LA
ACIDO CTRICO Y SU FORMA FERMENTACIN DEL
IONICA QUELADA CON Fe(III)
ACIDO CTRICO

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 32

Otras aplicaciones del cido ctrico

Trpicos
Suelos cidos solubilizacin de aluminio

Quelante de Al3+.
Plantas que expresan niveles
elevados de citrato sintasa
bacteriana.

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 33

BIOTECNOLOGIA MICROBIANA

Tres categoras de productos microbianos de

importancia industrial

Metabolitos primarios

Metabolitos secundarios

Enzimas

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 34

 Metabolitos secundarios
Compuestos microbianos de uso medicinal
En 1928 Alexander Fleming descubri el primer antibitico.
Observ que el hongo Penicillium produca un antibitico que
mataba a S. aureus.

Condiciones para la produccin

de metabolitos 2rios deben ser
controladas

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 35

 Antibiticos clsicos
Sustancias qumicas producidas por microorganismos que matan o
inhiben el desarrollo de otros microorganismos. Interfieren en algn
paso del metabolismo donde encuentran un blanco adecuado.

Antibiticos producidos
por fermentacin
a gran escala

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 36

Antibiticos
Clsicos

Carmen Snchez Rivas

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 37

Bsqueda de antibiticos
Rastreo de nuevas cepas
productoras de
antibiticos

Ensayo en placa

Produccin y
anlisis de su
estructura

Anlisis in vivo

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 38

Estrategias

. Biotecnologa moderna (Nueva Biotecnologa)

Obtencin de cepas con alto rendimiento

Manipulaciones genticas
Mutagenesis
Sobreexpresin
Modificaciones a nivel regulatorio

Dificultades: va metablica compleja necesidad

de identificar gen clave: ciencia bsica

. Bsqueda de nuevos compuestos

BIOTECNOLOGA AZUL (MARINA)

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 39

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 40
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 41
 Como se sintetizan estos compuestos?
Pptidos no ribosomales y policetidos

Adenilacin (A): activacin de los aminocidos

Tiolacin (T, o alternativamente PCP): tioesterificacin de un aminocido activado
Condensacin (C) enlace peptdico entre dos sustratos vecinos para la elongacin
de la cadena peptdica.
Se genera un pptido lineal o cclico que se escinde por un dominio tioster (TE).
Epimerizacin (E), responsable de la conversin de una configuracin D o L.
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 42
Como se sintetizan estos compuestos?
Pptidos no ribosomales y policetidos

Otros compuestos bioactivos

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 43

 Metabolitos secundarios
BIOTECNOLOGA AZUL: MARINA

Descubrimiento
Largazole: macrlido
de nuevos
compuestos
bioactivos de
bacterias marinas

Cianobacterias

Agentes antitumorales
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 44
BIOTECNOLOGIA MICROBIANA

Tres categoras de productos microbianos de

importancia industrial

Metabolitos primarios
Metabolitos secundarios
Enzimas

Enzimas y extremfilos

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 45

 Enzimas . Biocatalizadores. Convierten
sustratos en productos sin sufrir
cambio alguno.

. Casi todas las reacciones en

mundo viviente son catalizadas y
controladas por enzimas.

. Especificidad. Cada reaccin qca.

catalizada por su propia enzima

. Aumentan velocidad de reaccin.

Actan a T moderada, pH y p

. Capaces de discriminar entre

sustratos similares
. NO SUFREN CAMBIO Y NO . Catalizan reacciones
SE CONSUMEN EN EL estereoespecficas.
PROCESO
. BIODEGRADABLES Y NO . Pueden funcionar in vitro
TXICAS
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 46
EFECTO DEL AMBIENTE SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

. Concentracin de sustrato

. pH

.T

ptimo pH
Temperatura

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 47

Animales, plantas y microorganismos como fuentes de enzimas

Vegetales: Fuentes potenciales de enzimas a escala industrial.

Granos: malta que contiene amilasas y proteasas usadas en la
produccin de cerveza.

Siglo XIX, mtodos simples para obtencin de grandes

cantidades de proteasas de la savia de plantas tropicales.

Desventajas:
Desventajas:
.Suministro y concentracin de las enzimas vara con las
estaciones del ao.
.Requerimiento de grandes cantidades de plantas como
material. .Procesamiento de grandes cantidades es un trabajo
muy duro.

Desventajas similares para la obtencin a partir de animales

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 48

 Vegetales
Papaina y quimiopapaina del rbol de la papaya. Similar a
la pepsina
Ablandadores de carne, digestin y limpieza de lentes de
contacto.

Ficina de higueras. Enzima proteoltica

Bromelaina del tallo de la planta de la pia. Enzima

proteoltica
Animales
Descubrimiento de enzimas digestivas siglo XIX. Desarrollo de mtodos
para obtencin de enzimas de matanza de animales.

Pepsina del estmago de cerdos y del cuajo del estmago de ganado

bovino.Ccteles de enzimas con tripsina, quimiotripsina, lipasas y amilasas
del pncreas de cerdo.

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 49

LA MAYORIA DE LAS ENZIMAS DE IMPORTANCIA INDUSTRIAL
PODRIAN PRODUCIRSE A PARTIR DE MICROORGANISMOS
Microorganismos como fuentes de enzimas
Produccin de grandes cantidades con bajo
costo
No afectada por las estaciones del ao. Proceso de
extraccin ms simple y menos contaminante.
Uso de mutantes y procesos de seleccin que
aumentan la produccin. Enzimas hechas a medida
a travs de ingeniera gentica y diseo de
protenas

1950 gran desarrollo de procesos sumergidos

Enzimas hidrolticas simples como: proteasas, amilasas, pectinasas, lipasas.
Degradan polmeros naturales
Enzimas extracelulares . Poco especficas
Fcil extraccin . Bajo costo
Poco requerimiento de cofactores
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 50
 90 % de microorganismos
Distribucin de enzimas por reas 6% animales y 4% plantas

AREAS PORCENTAJE Aplicaciones

ESPECFICAS
Alimentos 41 Clarificacin de vino y jugos,
cervezas,pan y galletas,
edulcorantes,lacteos, suplemento de
alimentos de animales

Detergentes 34 Limpieza de ropa, lentes de contacto

Textiles 11 Desengomado de telas, teminacin

jeans

Cueros 3 Ablandamiento

Pasta/papel 1 Blanqueamiento de pulpa de celulosa

Otras aplicaciones 6 Reactivos para anlisis,

manipulacin gentica,
bioconversiones, trastornos
digestivos, inflamaciones,disolventes
de cogulos
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 51
Seleccin de organismos productores de enzimas
Gram positivos

Bacillus alta capacidad secretora

Exoenzimas

Streptomyces
glucosa isomerasa citoplasmtica

Gram negativos
Pseudomonas lipasas

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 52

 Exoenzimas vs. Enzimas intracelulares

. Son separadas directamente Se necesita proceso de extraccin

del caldo de cultivo (durante
fermentacin) y formuladas en
alta concentracin
. Solubles en agua
Glucosa oxidasa: conservacin de
carne
Asparraginasa: terapia del cncer
Penicilina acilasa: conversin de
antibiticos
Glucosa isomerasa: jarabe de
fructosa

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 53

Enzimas microbianas que participan en
la degradacin del almidn

Ej: Obtencin de Jarabe de Maz de Alta Fructosa (JMAF)

almidn
Amilasa (Bacillus)
Almidn
parcialmente
hidrolizado Glucoamilasa (Aspergillus)
glucosa
Glucosa isomerasa (Bacillus, Streptomyces)

fructosa Mucho + dulce y soluble que glucosa

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 54

 Lipasas-Aplicaciones de las Enzimas Bacterianas
Criterios de seleccin para lipasas como aditivos de detergentes:
Amplio rango sobre una variedad de grasas y lpidos
Estabilidad a pH alcalino
Solubilidad en detergente
Compatibilidad con las proteasas presentes (no fcilmente degradable)
Facilidad de produccin

Pseudomonas spp.

Pseudomonas alcaligenes 1995

Maquinaria de secrecin
Pseudomonas sp. Strain KFCC 10818: P112Q
Pseudomonas sp. Strain 42A2

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 55

 Celulasas-Aplicaciones de las Enzimas Bacterianas

Capaces de hidrolizar la unin 1,4 -D-glucosdica en celulosa

Endoglucanasas
Exoglucanasas
-Glucosidasas
Bacillus subtilis
Thermomonospora fusca

Hemicelulosa
Celulosa
Lignina

Textil: Stone washed

Lignocelulosa sustrato de
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez inters en biotecnologa 56
Detergentes biolgicos
Aplicacin ms importante de las enzimas hidrolticas

Componentes de las manchas:

- Protenas difciles de remover, no se disuelven

fcilmente en agua. A altas temperaturas, se une
fuertemente a las fibras textiles.
-Polvo, holln, pigmentos y materia orgnica.
-Grasas y protenas actan como pegamento.

Detergentes sueltan la grasa de la tela, las

protenas permanecen en el material.
Enzimas: Proteasas, lipasas, celulasas y amilasas
en la eliminacin de manchas.
Condiciones en las cuales debe ser activa.
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 57
 Detergentes biolgicos

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 58

Pectinasas
Produccin de zumo de frutas
Al prensar fruta y vegetales para la
obtencin de jugo, las pectinas de alto peso
molecular reducen la produccin.

Pectinasas procedentes de cultivos sumergidos

de Aspergillus y Rhizopus.
Se pica la fruta y se aaden pectinasas
para degradar las pectinas de cadena
larga. Se reduce la viscosidad del zumo,
facilitando la filtracin y se obtiene
ms cantidad.
Alimentacin de bebs maceran las
fruta y los vegetales para hacerlos ms
suaves y fciles de comer.
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 59
Productos Qumicos
Penicilin amidasa/Penicilin acilasa: usada para producir
intermediarios para la obtencin de penicilinas semisintticas.

E. coli
Kluyvera citrophila
Alcaligenes faecalis
Pseudomonas

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 60

Enzimas Solucin
Inmovilizadas
Enzimas en solucin
Se emplean grandes volmenes (ton), deben ser de bajo costo
Su purificacin debe ser sencilla o no interferir con el producto
Ventajas:
-pueden seleccionarse de alta o baja especificidad
-generan pocos o ningn producto secundario
-actividad ptima en condiciones de reaccin
Desventajas:
-costo generalmente alto
-sustratos poco solubles son difciles de procesar
-baja estabilidad
-problemas de inhibicin
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 61
Enzimas inmovilizadas

Ventajas:
- se puede reutilizar la enzima
- no requiere proceso de recuperacin y separacin de la enzima
del producto. Menores problemas de disposicin de efluentes
- puede proveer un ambiente ms adecuado para la actividad
cataltica de la enzima.
-Generalmente mayor pureza del producto
-Estabiliza las enzimas evitando desnaturalizacin

Desventajas:
- puede haber drenado de la enzima a la solucin
- limitaciones significativas por restricciones a la transferencia
de masa
- la actividad y la estabilidad de la enzima se puede reducir
- no se pueden controlar las condiciones en el microambiente que
rodea a la enzima
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 62
Enzimas inmovilizadas
Celulosas modificadas
Carbn activado
Arcillas minerales
1.Unin: a soporte xidos de aluminio
Bolitas de vidrio

Adsorcin-enlace inico-enlace covalente.

2. Polimerizacin. Con agente polimerizante.

Ej. Glutaraldehido. Mantener actividad de la
enzima.

3. Inclusin enzimtica: en membrana

semipermeable. Microcpsulas, geles,
polmeros fibrosos como acetato de celulosa.

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 63

 Otras ventajas de los biocatalizadores
inmovilizados

1. Ideales para operaciones continuas

2. Permiten un control ms seguro del
proceso cataltico
3. Permiten el desarrollo de un sistema de
reaccin multienzimtico
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 64
MERCADO
Aunque enzima sea esencial cantidad necesaria en mercado pequea
Alto volumen para grado industrial.
Bajo volumen para analitica, diagnosticas o teraputicas.

Ej: Aditivos en masa 1-2Kg/1000 Kg de sustrato. Formulaciones lquidas. No

purificadas
Diagnstico g-mg. Alto grado de pureza.
Dominado por Holanda y Dinamarca.

Se busca obtener:
Alto rendimiento-Estabilidad-Independencia de inductores o cofactores
Buena recuperacin
. Suprimir: Olor-Color-Metabolitos no deseados.
. Bajo potencial alergnico
. Libre de microorganismos
Biorreactores para produccin
. Certificado de material seguro
de enzimas
. Responsabilidad sobre el fabricante 10-50 m3-30-150 h

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 65

 Enzimas de extrem
extremfilos
A) Temperatura
Psicrfilos Hipertermfilos
Termfilos
Mesfilos
Mesfilos
Termfilo
Psicrfilos
Hipertermfilos
37

B) Acidez y alcalinidad
Acidfilos
Alcalfilos

C) Disponibilidad de agua
Halfilos y Halfilos extremos (Sal)
Osmfilos (Azcar)
Xerfilos (Ambientes Secos)

D) Alta presin
piezfilos o barfilos

E) Alta concentracin de
metales pesados o radiacin
metalfilos
radifilos Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 66
 Degradacin de macromolculas
Almidn
-amilasa
pululanasa
glucosa isomerasa

Amilosa ( 1,4)

Detergentes biolgicos

pH alcalino
Amilopectina
Baja temperatura (Ramificado 1,6 cada 24-30
glucosa)

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 67

Produccin de enzimas de extremfilos

Biocatlisis con enzimas

extremfilas

Productor natural En hospedador

extremfilo recombinante

Ventajas y Desventajas

Enzimas aisladas solubles

inmovilizadas
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 68
 ENZIMAS DE EXTREMOFILOS
Cul es la base de su eficiencia en ambientes extremos?
interacciones internas
Optimizacin de
interacciones externas interfase protena-solvente
con metabolitos, cofactores
y solutos compatibles

Factores que afectan la estabilidad

Termfilas
Mayor nmero de interacciones inicas
- sheet Cambios en aminocidos (polares cargados)
Reduccin de la relacin superficie-volumen
Aumento de interacciones hidrofbicas
Mayor asociacin cooperativa
Modificacin de reas expuestas a solventes
Reduccin de zonas flexibles y del nmero de
cavidades

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 69

 Almidn oligosacridos

Actinoplanes missourensis
Mutanes con mayor
Conceptos 2012-Nancy I. Lpez actividad 70
Bibliografa

. Quax, W. J. (2006). Bacterial Enzymes. CHAPTER 3.4.

Prokaryotes 1:777796
. Rogers, P. et al., (2006). Organic acids and solvents. CHAPTER
3.1. Prokaryotes 1:511-755.
. Demain, A. and G. Lancini (2006) Bacterial Pharmaceutical
Products. CHAPTER 3.6. Prokaryotes 1:812-833.

Conceptos 2012-Nancy I. Lpez 71