Universidad del Valle de Mxico

Esterilizacin de material
y preparacin de medios
de cultivo
Microbiologa II

Dominique Flores Verastegui

Karen Beatriz Hernndez Bravo

Linda Monserrath Lemus Maldonado

QFBT

18/08/16

UVM
 Esterilizacin de material y preparacin de medios de cultivo

Introduccion
La esterilizacin se refiere al proceso fsico o qumico que destruye toda forma de
vida microbiana, incluidas las esporas.

Su aplicacin se utiliza para el acondicionamiento del material (pipetas, tubos,

placas de Petri, pinzas, etc) que va a ser utilizado en los laboratorios de
microbiologa, equipos quirrgicos y otros materiales de uso mdico con el riesgo
mnimo de infeccin en el paciente, as como para la preparacin de medios de
cultivo que sern empleados con diferentes propsitos (cultivo de m.o, control de
ambiente, equipos o personal, anlisis microbiolgico de medicamentos,
cosmticos, alimentos, etc).

Hay principalmente dos diferentes mtodos de esterilizacin, los cuales son:

1. Calor hmedo con presin: Consigue la esterilizacin al mantener la

temperatura y presin elevada durante un perodo de tiempo.
2. Calor seco con aire caliente: Se utiliza calor seco, altas temperaturas y
largos tiempos de exposicin, consiguiendo la muerte de los
i
microorganismos por desecacin.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos.
La diversidad metablica de estos es tan grande que la variedad de medios de
cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para
todos ellos, ni siquiera refirindonos a las bacterias con exclusividad.

La preparacin del medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad

deseada del mismo y disolverla en agua destilada siguiendo las instrucciones del
fabricante. Las sustancias termolbiles, se esterilizan por filtracin y se aaden al
resto de los componentes despus de que estos hayan sido previamente

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 Esterilizacin de material y preparacin de medios de cultivo

esterilizados en el autoclave y enfriados a temperatura ambiente o a 40-50C si se

trata de medios con agar.

Antes de su esterilizacin los medios lquidos se reparten en los recipientes

adecuados (tubos, matraces, etc.), se tapa y se esteriliza en el autoclave.

Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estril dentro de ellas
y en un ambiente asptico (en la proximidad de la llama de un mechero Bunsen)
es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operacin para evitar
que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en
todas las placas. ii

Objetivo
Concientizar al alumno para que entienda que la apropiada preparacin de los
medios de cultivo y la correcta esterilizacin de estos y de los dems materiales
con los que se trabaja en los laboratorios, son tan importantes como cualquier otra
fase en el desarrollo de un ensayo microbiolgico.

Materiales
Balanza
Matraz Erlenmeyer con tapa
Placas de Petri
Mechero de Bunsen
Varilla de vidrio agitadora
Pizeta con agua destilada
Esptula
Agar PCA
Aluminio
Charola para pesar
Autoclave

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Guantes

Metodologa
Preparacin del Medio de Cultivo PCA (Agar para conteo en placa).

Es un medio de cultivo recomendado para la determinacin de las bacterias

anaerbicas en agua, aguas residuales, productos lcteos y otros alimentos.
Adems tambin se recomienda como medio de cultivo general para determinar
variadas poblaciones microbianas.

Formula (en gramos por litro por litro)

Extracto de levadura 2.5
Triptena 5.0
Glucosa 1.0
agar 15.0
pH final: 7.0 0.2

1. Preparar 150 mL del medio de cultivo PCA dentro del Matraz, pesando los
reactivos necesarios en base a la frmula anteriormente mencionada y
adicionando el volumen de agua destilada correspondiente segn los
clculos efectuados.
2. Agitar perfectamente los componentes hasta obtener una mezcla lo ms
homognea posible.
3. Tapar el matraz con un tapn realizado con algodn y gasa.
4. Cubrir el tapn del matraz con papel aluminio.
5. Esterilizar el medio de cultivo en autoclave a 121C y 15 libras de presin
durante 15 minutos.
6. Aada a 7 cajas de Petri un aproximado de 20 mL del medio fundido PCA,
previamente atemperado, y mueva cuidadosamente las cajas, para
homogenizar el medio, sin permitir que este se derrame.
7. Deje solidificar el medio contenido en las cajas.

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Calculos y resultados
Agar Levadura Glucosa Triptena
Cantidad para
150 ml 2.25 g 0.37 g 0.15 g 0.75 g

Se prepar la disolucin para 150 ml y rindi lo suficiente para la elaboracin de 8

cajas Petri.

Fig. 1 Agares PCA slidos en cajas Petri

Observacin: Los agares se contaminaron con pequeas colonias de bacterias

blanquecinas y naranjas, debido a ello fue necesaria la realizacin de nuevos
agares para poder realizar la siguiente prctica.

Discusion y Conclusion
La realizacin de agares es el pilar bsico de la microbiologa ya que las
bacterias, hongos y parsitos necesitan requerimientos nutricionales para poder
vivir y el agar se los brinda para que crezcan en condiciones adecuadas y as
poderlos observar tanto macroscpica como microscpicamente.

En cuanto a los primeros agares que realizamos, tenemos la hiptesis de que

pudieron contaminarse por diversos factores como:

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Hablar sin usar cubre bocas

Que las cajas no estuvieran bien esterilizadas
Entrar en contacto con el agar
Haber puesto a incubar las cajas del lado opuesto
Contaminacin en la tapa del matraz
Poner las cajas en un radio ms lejano del mechero
No haber realizado con ms precauciones los agares

Referencias
i
(Universidad de la Repblica Uruguay)

ii
(Universidad Central de Venezuela)

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Prepa
raci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf

http://www.fvet.edu.uy/sites/default/files/microbiolog%C3%ADa/PREPARACION%
20DE%20MATERIALES%202015%20%5BModo%20de%20compatibilidad%5D.pd
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