Anda di halaman 1dari 11

Rev. bras. hematol. hemoter.

2007;29(2):168-178 Murador P et al

Reviso / Review

Aspectos estruturais da membrana eritrocitria


Structural aspects of the erythrocyte membrane

Priscila Murador1 Este artigo descreve as estruturas e funes da membrana eritrocitria e sua impor-
tncia na medicina transfusional. A membrana eritrocitria uma das membranas
Elenice Deffune2
mais conhecidas em termos de estrutura, funo e gentica. Como qualquer membrana
plasmtica, tem como funo mediar transportes e, ainda, fornece ao eritrcito resis-
tncia e maleabilidade. De acordo com a International Society of Blood Transfusion
(ISBT), so mais de 500 antgenos expressos na membrana das hemcias e, destes,
cerca de 270 esto envolvidos nos casos de reao transfusional e doena hemoltica
do feto e do recm-nascido. Na classificao feita pela ISBT, destaca-se a srie de alta
freqncia representada por antgenos presentes em mais de 99% dos indivduos de
uma populao. Estes antgenos so conhecidos tambm como antgenos pblicos e a
maioria, quando ausente, determina problemas graves do ponto de vista transfusional.
Como exemplo dessa problemtica, uma gestante com ausncia do antgeno P j sofreu
seis abortos de repetio por insuficincia placentria devido ao anticorpo formado
pela ausncia do antgeno. Protenas importantes so descritas nesta reviso como:
banda 3, glicoforinas, espectrina e outras. A banda 3 a mais abundante protena
integral da membrana do eritrcito e sua principal funo mediar a troca de cloro e
nions de bicarbonato atravs da membrana plasmtica. A segunda protena integral
mais abundante a sialoglicoprotena glicoforina A (GPA). Com um alto contedo de
cido silico, a GPA contribui com a rede de carga negativa na superfcie da membrana
do eritrcito, minimizando, assim, a interao clula-clula e prevenindo sua agrega-
o. Glicoforina C (GPC) o receptor para PfEBP-2 (baebl, EBA-140), o mais novo
local de ligao identificado para o Plasmodium falciparum. O complexo tercirio
espectrina, actina e 4.1R define a rede de citoesqueleto da membrana do eritrcito e
ainda responsvel pela estabilidade sob mecanismos de estresse. Essa reviso da
membrana eritrocitria importante para um melhor entendimento das reaes
transfusionais, onde a formao de anticorpos contra antgenos de alta freqncia
dificulta a transfuso compatvel. O estudo da diversidade antignica, a caracterizao
bioqumica de diferentes protenas trar uma contribuio para o estabelecimento da
sade, assim como para o diagnstico, desenvolvimento de tecnologias, como a produ-
o de anticorpos monoclonais e conduta teraputica para muitas enfermidades. Rev.
bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178.

Palavras-chave: Membrana eritrocitria; protenas; antgenos; glicoforinas.

A membrana da hemcia plasmticas de um modo geral apresentam-se como barrei-


ras seletivas que asseguram a composio interna constan-
A membrana da hemcia o modelo primrio para es- te das clulas, atravs do controle da transferncia ativa e
tudo de membrana plasmtica celular animal, pelo fato de passiva de inmeras molculas. Estas membranas tm um
ser desprovida de ncleo e organelas. As membranas sistema estrutural complexo, citoesqueleto, que envolve

1
Mestre em Biotecnologia Mdica pelo Hemocentro da Faculdade de Medicina de Botucatu. Biloga do Hemocentro de Botucatu.
2
Doutora em Imunologia Universidade Pierre et Marie Curie - IV - Paris. Docente do Dept de Urologia da Fac. de Medicina de Botucatu (Unesp).

Correspondncia: Priscila Murador


Hosp. das Clnicas da Faculdade de Medicina de Botucatu Diviso Hemocentro - Distrito de Rubio Jr. s/n
Lab. de Engenharia Celular
18618-000 Botucatu-SP Brasil
E-mail: pmurador@fmb.unesp.br

168
Murador P et al Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178

tanto a forma da clula, como sua mobilidade, deforma-


bilidade e o transporte de macromolculas. Entre os dife-
rentes constituintes da membrana apresentam-se recepto-
res envolvidos em funes complexas que permitem a co-
municao entre as clulas, reconhecimento imunolgico e
fenmenos de adeso celular.1
A membrana eritrocitria, como as milhares de outras
clulas do organismo humano, essencialmente constituda
de lipdeos e protenas. A hemcia no um simples "saco"
contendo hemoglobina. Os lipdeos e protenas esto dis-
postos na superfcie da hemcia de forma to complexa que
so comparveis com os mais sofisticados mosaicos bizan-
tinos.2 Esta membrana consiste em uma bicamada fosfo-
lipdica, que representa aproximadamente 50% de sua massa
total e forma a barreira entre dois compartimentos lquidos,
intra e extracelular.3 As trocas entre estes compartimentos
so feitas atravs de bombas, canais de trocas de ons e
transporte molecular como o da glicose.2 Alm disso, a Figura 1. Modelo de mosaico bilipdico e fludico da membrana celular
deformabilidade de sua membrana, a fluidez de seu citoplasma
e a complexidade de sua superfcie membranria, em relao dades mecnicas e elsticas, regulando a viscosidade san-
ao seu volume interno, asseguram as funes de transporte gnea. Todas as protenas de transporte da membrana do
de O2 dos pulmes e remoo do CO2 dos tecidos para os eritrcito so produzidas nos estgios primordiais dos
pulmes. Esta capacidade de transporte depende das condi- eritroblastos.3
es de adaptao circulatria e tambm da hemoglobina O modelo estrutural de membrana eritrocitria mais
citoslica e de um polipeptdio maior da membrana: a banda 3 aceito o de mosaico bilipdico e fludico proposto e des-
ou protena de troca de ons (anion exchanger 1, AE1). Como crito por Singer e Nicolson em 19721 como representado na
transportador de membrana, a AE1, ou banda 3, media as Figura 1.
trocas de Cl-/HCO3-, aumentando ento a capacidade san- Diversas doenas podem ser associadas a defeitos na
gnea de transporte de CO2, garantindo a homeostase e o estrutura dessa membrana que, embora a mais estudada, ain-
equilbrio cido-bsico. Por interao com lipdeos e prote- da possui vrias caractersticas sem um completo entendi-
nas, a banda 3 multifuncional (AE1) une o complexo multi- mento. Estes defeitos podem envolver outras protenas re-
protico do citoesqueleto e confere aos eritrcitos proprie- presentadas graficamente na Figura 2.

FC= Fosfatidilcolina; EM= Esfingomielina; FS= Fosfatidilserina; FE= Fosfatidiletanolamina; GPA= Glicoforina A e GPC= Glicoforina C
Figura 2. Protenas integrais e perifricas da membrana do eritrcito.

169
Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178 Murador P et al

Protenas de membrana Mutaes da banda 3 tm sido associadas esferocitose


hereditria e acidose tubular renal. Outras mutaes foram
As protenas que compem a membrana eritrocitria identificadas no sudoeste da sia, determinando aumento
so estruturalmente classificadas em integrais ou trans- da rigidez do eritrcito e resistncia infeco por malria
membranrias e perifricas ou extramembranrias. Essas pro- associados ovalocitose. Um caso registrado na literatura
tenas do citoesqueleto membranrio formam uma verdadeira relata ausncia de banda 3 com esferocitose hereditria e
malha, que constitui quase uma concha para o material intra- nefrocalcinose. A banda 3 tem sido considerada, ainda, como
celular. Este esqueleto responsvel pela forma, bicncava receptora para o Plasmodium. falciparum.7,9
normal ou anormal, em caso de defeitos genticos, dos Ela possui um domnio transmembranrio de 52kDa que
glbulos vermelhos, e representa por si s 60% da massa atravessa de 12 a 13 vezes a bicamada lipdica, e um domnio
protica de toda a membrana.2 citoplasmtico de 43kDa. O domnio transmembranrio tem
As protenas integrais penetram ou atravessam a bica- um papel primordial na troca de ons, principalmente o cloro
mada lipdica e interagem com a poro hidrofbica das mo- (Cl-) e bicarbonato (HCO3-). O Cl- transportado 1 milho de
lculas lipdicas. Fazem parte destas as protenas de trans- vezes mais rpido que o ction correspondente o potssio
porte, como a banda 3, denominada protena transportadora (K+) e apenas 1.000 a 10.000 vezes mais rpido do que um
de ons, e as glicoforinas A, B, C, D, que possuem receptores nion divalente como o sulfato (SO42-). Este mecanismo fisi-
de membrana e antgenos que participam do reconhecimento olgico muito importante quando se tem perda rpida
clula-clula na extremidade externa e auxiliam na estabiliza- sangnea ou de volume atravs de outras vias.1,2,9 A combi-
o do citoesqueleto atravs de ligaes com a protena 4.1 nao de diferentes tecnologias tais como time-resolved
na face interna da membrana.5 optical anisotropy (TOA) e saturation-transfer electron
Das diferentes protenas da membrana eritrocitria, o paramagnetic resonance (ST-EPR) spectroscopie tem sido
domnio citoplasmtico da banda 3 se destaca como um gran- utilizada para anlise da flexibilidade do domnio cito-
de centro organizacional que interage com muitas outras pro- plasmtico prximo ao domnio transmembranrio, onde ocor-
tenas perifricas ou ligantes: anquirina (a maior ponte para o re a troca de ons.10
citoesqueleto espectrina-actina), protena 4.1, protena 4.2, A forte concentrao de resduos carregados negati-
aldolase, gliceraldedo-3-fosfato desidrogenase (G3PD), vamente no domnio citoplasmtico da banda 3 tem papel
fosfofrutoquinase (PFK), desoxihemoglobina, tirosina- importante na interao desta protena com outras, sendo
quinase p72syk e hemicromos, que regulam a interao do esta a responsvel pela fixao das protenas membranrias
citoesqueleto com enzimas glicolticas.6 4.1, 4.2 e anquirina. Este segmento citoplasmtico tem forte
afinidade pelas hemoglobina, aldolases, G3PDH e a PFK.
Protenas integrais Estes stios tm o significado fisiolgico tambm na regulao
da gliclise e auxiliam a formao de complexos multi-
Banda 3, anion exchanger 1 (AE1)7 enzimticos.12
As protenas integrais da membrana ou transmem- Em 2003, estudos descreveram aspectos da poro N-
branrias esto incorporadas na parte mais profunda da terminal da banda 3 ou AE1(CDB3) de hemcias humanas. A
bicamada lipdica. Seu domnio funcional pode se estender poro CDB3 o substrato executor da apoptose induzida
tanto nas zonas extra como intramembranrias. Exemplos dis- pela caspase 3. A ao da caspase 3 observada em hemcias
so so: a banda 3 ou anion exchanger 1 (AE1), implicada no adultas, mas no em necitos ou hemcias jovens. Esta
mecanismo de transporte de muitas molculas e situada no descoberta esclarece a eluio de alguns antgenos eritro-
compartimento extramembranrio, a citocromo- -5-redutase, citrios durante o tempo de conservao das hemcias in
que participa do mecanismo de reduo da metaemo- vitro.12
globina.7,8 No ano seguinte foi publicado um trabalho sobre a
A banda 3 considerada a principal protena integral purificao e caracterizao do domnio C- terminal da banda
da membrana e seu peso molecular de 102kDa. Representa 3, tambm denominada de HEM-B3, com 33 aminocidos. Os
25%-30% de todas as protenas da membrana e tem em torno autores isolaram dois peptdios, C1 e KS4. O peptdeo C1,
de 106 cpias por hemcia. Seu gene est localizado no quando colocado em presena de extrato de membrana
cromossomo 17q21-q22. A banda 3 est expressa na membra- eritrocitria humana, desempenhou uma atividade de protease
na plasmtica de todos os eritrcitos e pode ser detectada sobre a poro C- terminal GPA. No entanto, esta atividade
tambm na membrana basolateral das clulas intercaladas inibida pela tripsina. O outro peptdeo isolado, KS4, no pos-
nos tbulos distais e nas alas de Henle, proximal e distal. A sui esta caracterstica.13
banda 3 tem, recentemente comprovada, atuao na retirada Ao analisar a importante contribuio das protenas de
de CO2 dos tecidos, regulando tambm o transporte de membrana e o formato das hemcias, o autor relacionou, por
HCO3-. Alm disso, regula o metabolismo da glicose, man- estudos dinmicos e por microscopia eletrnica, a acanto-
tm a morfologia eritrocitria e remove clulas senescentes. citose no s com as alteraes da banda 3, com deficincias

170
Murador P et al Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178

da piruvato-quinase e pirimidina-5-nucleotidase. As altera- brana. Em geral, as glicoforinas tm trs domnios: um dom-


es da banda 3 esto tambm confirmadamente relaciona- nio externo, onde esto os oligossacardeos, um segmento
das com a estomacitose hereditria, fentipo In(Lu), corea- includo no interior da bicamada e um segmento interno
acantocitose e fentipo McLeod (KX).14 citoplasmtico. O domnio externo carrega determinantes
Em outro trabalho foi estudado o gene AE1 de dois comumente conhecidos como Ena. A concentrao de GPA
irmos portadores de acidose tubular renal e nefrocalcinose. sobre as hemcias responsvel por 80% da carga negativa
Este gene codifica a protena transportadora de nions (AE1) destas clulas em funo da sua constituio bioqumica com-
ou banda 3, expressa em hemcias e clulas dos tbulos re- posta de cido silico e carboidratos terminais. Essa super-
nais. Os autores identificaram que uma deleo determina a fcie negativa celular ajuda a minimizar a interao clula-
mutao no cdon 888 (Ala-888-->Leu) seguida de stop codon clula e prevenir a aglutinao eritrocitria. A GPA suscet-
na posio 889, truncando a protena em 23 aminocidos. Os vel clivagem pela enzima tripsina, ficina e papana na regio
autores sugerem que a anlise precoce do gene AE1 e a iden- prxima membrana eritrocitria. Seu peso molecular de
tificao da mutao descrita sejam decisivas para o diag- 16kDa. A GPA parece estar presente de forma macia nas
nstico de nefrocalcinose.15 linhagens celulares eritrides e pode ser detectada em dife-
Casos de malformao congnita com proeminncia rentes fases da diviso celular em eritroblastos basfilos e
frontal e alteraes perifricas do Sistema Nervoso Central normoblastos.1,19
tm sido associados deficincia de glicosilao do tipo Ig. Os domnios extracelulares da GPA e banda 3 so extre-
Esta deficincia compromete a glicosilao da protena ban- mamente polimrficos. A associao da GPA com o AE1 ou
da 3 da superfcie da hemcia. Trata-se de uma mutao do banda 3 contribui com propriedades mecnicas na membrana
gene ALG12 que codifica a dolichol-P-manose do sistema eritrocitria e tambm apresenta relao com o grupo
retculo-endoplasmtico, o que determina a hipoglicosilao sangneo Wrb cujo stio de ligao encontra-se exatamente
da GPA e alteraes estruturais da banda 3. Portanto, o estu- na regio das duas protenas. Sobre o segmento N- terminal
do eletrofortico desta protena em caso de malformao con- externo da GPA, esto representados os antgenos dos gru-
gnita pode levar ao diagnstico.16 pos sangneos M e N e os receptores de lectina, do vrus
O sucesso ou a refratariedade da esplenectomia no influenza e myxovirus. Esta poro da GPA atua ainda como
controle clnico da esferocitose hereditria foram analisados receptora para o parasita da malria P. falciparum e para o
tambm. Nos estudos, os autores identificaram que os paci- vrus Sendai.20,21
entes que tm sucesso com a esplenectomia mantm menos A GPA e a GPB so pontos de ancoragem para 43
de 60 molculas de IgG fixadas sobre as hemcias ps-proce- antgenos dos sistemas MNSs. Muitas anormalidades das
dimento, caso estruturalmente tenham defeito na espectrina glicoforinas esto descritas na literatura especializada. A au-
e na anquirina. Nos casos de refratariedade, observaram que sncia de GPA no homem determina um grupo sangneo
as hemcias dos pacientes, aps o ato cirrgico, mantinham denominado En (a-), j a ausncia de GPA e GPB no mesmo
mais de 140 molculas de IgG fixadas e, portanto, continua- indivduo determina um fentipo denominado Mk, e a ausn-
vam sendo opsonizadas. Neste caso, o paciente era portador cia apenas da GPB determina a falta dos antgenos S e s.21
de deficincia na banda 3.17
A interao do marcador CD47 (Integrin-associated Glicoforina B (GPB)
protein/IAP) na matriz extracelular de membranas que co- uma glicoprotena transmembranria de 10kDa, co-
expressam a integrina tem sido alvo de pesquisas. Concluiu- dificada pelo gene localizado no cromossomo 4q28-31. Ex-
se que este marcador nos eritrcitos um ligante entre a pressa determinantes para os antgenos S e s. Est presente
banda 3 e o complexo Rh na manuteno da integridade da em todas as hemcias e seus precursores. A funo das
membrana. hemcias parece ser normal mesmo em indivduos com defi-
Macrfagos e clulas dendrticas expressam o receptor cincia de GPA e GPB. Os indivduos com fentipo nulo MN:
SIRP, o que os torna menos ativos, minimizando o efeito da En(a-) so totalmente resistentes a infeces por Plasmodium
doena auto-imune. Quando as clulas so CD47 negativas, falciparum.8,9,21
o efeito inibidor da opsonizao no ocorre. Portanto, a
interao CD47 e SIRP tem um papel importante na limita- Glicoforina C (GPC)
o do processo de destruio das hemcias em casos de A GPC o menor componente protico da membrana
anemia hemoltica auto-imune.18 eritrocitria. codificada pelo gene GYPC localizado no
cromossomo 2. Este mesmo gene codifica uma forma truncada
Glicoforinas conhecida como glicoforina D - GPD. A GPC uma protena
de 35kDa. As glicoforinas C e D definem os grupos sang-
Glicoforina A (GPA) neos Gerbich: Ge:1, Ge:2, Ge:3 e Ge:4. A maioria dos fentipos
a maior sialoglicoprotena transmembrana dos expressa os quatro antgenos, no entanto alguns indivduos
eritrcitos, correspondendo a 2%-4% das protenas de mem- que sofreram mutao podem expressar fentipos raros como

171
Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178 Murador P et al

Quadro 1. Glicoforinas A,B,C/D e banda 3: gene, localizao cromossmica, peso molecular, stio de expresso e interaes 31
Stio
Protena Gene Localizao PM (Da)* Sinnimos Interaes
de expresso
GYPA 4q28.2-q31.1 16274 Grupo sangneo MN Hemcias, feto, Banda 3
GPA, MN, PAS-2 reticulcito Receptor de Lectina
Sialoglicoprotena Eritroblastos Receptor de Mixovrus
GPA Sialoglicoprotena MN Rc virus influenza
Antgeno CD235a
GYPB 4q28-q3 9796 Grupo sangneo Ss Hemcias Complexo
protico Rh
GPB PAS-3, GYPB, GPB,
CD235b, Ss
GPC Hemcias Banda 4.1
GPC, D 35124 Glicoforina D Fgado Protena de membrana
GYPD, GPD, CD236 Palmitolato 1
SLC4A1 17q21-q22 101798 SLC4A1 Ubiquitria Anidrase carbnica IV
Banda 3 da
Anidrase carbnica II
membrana da hemcia
BND3 Calnexina
Banda 3 Protena eritride Banda 3 Anquirina
EPB3 Anquirina 1
Anion exchanger protein 1 Complexo Rh
AE1, Antgeno CD233 Banda 4.1
Adaptado de Peri, S. Genome Research 2003
*A literatura demonstra diferentes pesos moleculares, sendo assim, foi padronizado usar a mdia entre o menor e o maior peso descrito
e adotar a unidade em daltons (Da).

o fentipo Leach (Ge1-,2-, 3-,4-), onde ocorre a deficincia originria. Trs das protenas j mencionadas interferem
completa tanto da GPC quanto da GPD. Todos os indivduos essencialmente na estrutura: a espectrina, a actina e a ban-
de fentipo Leach apresentam eliptocitose hereditria, des- da 4.1.3
tacando o papel importante da GPC e da banda 4.1 no com-
plexo juncional.22 Informaes e caractersticas das diferen- Protenas perifricas
tes glicoforinas esto descritas no Quadro 1.
H muito tempo acredita-se que as glicoforinas servem Espectrina
como receptores para o P. falciparum. No entanto, a maioria A espectrina a mais abundante protena perifrica
dos estudos indicava a GPA como a receptora primria e a do citoesqueleto e est presente em um nmero de 105 cpi-
GPB como a secundria. A protena PfEBF-2 que se liga ao as por clula. Apresenta peso molecular de 285kDa. uma
eritrcito humano dependente de cido silico; os autores protena longa e fibrilar constituda por duas cadeias poli-
demonstraram que ela no se liga nem GPA e tampouco peptdicas e com peso molecular de 240 e 220kDa res-
GPB. A interao com o receptor da GPC representa um ter- pectivamente, correspondendo s bandas 1 e 2 na repre-
ceiro caminho para a invaso.23 sentao esquemtica da eletroforese de protenas mem-
branrias (Figura 3).
Outras protenas da membrana eritrocitria A espectrina recebe esse nome por servir de sustenta-
Outras protenas maiores tm sido descritas na mem- o membrana e ser a protena perifrica responsvel pelo
brana do eritrcito. So receptores enzimticos ou hormonais fenmeno dos ghosts eritrocitrios. A espectrina e poli-
como o receptor da insulina e o transportador de glicose que peptdios associados so responsveis tanto pelo formato
corresponde a uma protena da banda 4.5. do glbulo vermelho quanto pela sua deformabilidade, alm
As protenas perifricas formam o citoesqueleto da mem- de constiturem elementos estabilizadores da bicamada
brana constituindo-se, principalmente, por espectrina, actina, lipdica.1
anquirina, protena 4.1 e 4.9. Mesmo aps a extrao das Esta protena, durante muito tempo, foi considerada
protenas de membrana do eritrcito em presena de deter- especfica dos glbulos vermelhos; no entanto, sabe-se que
gente, o esqueleto membranrio conserva a forma da clula ela est presente em muitos outros tecidos. Ela faz parte da

172
Murador P et al Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178

Estas interaes espectrina-actina tm um elemento facilitador


representado pela protena 4.1. A rede de espectrina se fixa a
um fragmento de 43kDa que emergem no citoplasma, ligado
banda 3 por intermdio da anquirina (banda 2.1).2

A anquirina, banda 2.1 ou sindena


A anquirina possui trs domnios estruturais: domnio
funcional, que se liga subunidade da espectrina; um se-
gundo domnio funcional que interage com a banda 3; um
domnio regulador que controla a funo dos dois preceden-
tes. Esta protena tem peso molecular de 434kDa e est repre-
sentado em um nmero de 105 cpias por clula. Nos estudos
eletroforticos em gel de poliacrilamida, as membranas dos
eritrcitos podem conter no local da corrida da anquirina
(banda 2.1) bandas adicionais produtos de protelise da ban-
da 2.1. Estas ltimas so denominadas 2.2, 2.3 etc.2
Arritmias cardacas ocorrem devido a mutaes da
anquirina-B, tambm conhecida como anquirina 2. Essas
mutaes resultam, ainda, em uma desregulao na organiza-
o celular da bomba de sdio, na troca sdio/clcio e nos
Figura 3. Representao esquemtica de eletroforese de extrato
de membrana eritrocitria; G3PDH = gliceraldedo-3-fosfato- receptores inositol-1,4,5-triphosphate, os quais reduzem os
desidrogenase (banda 6); PAS = Periodic Acid Schiff, colorao nveis e a atuao desta protena em tbulos transversos.
especfica para ster de cido silico 2 Alteraes na sinalizao de Ca2+ em cardiomicitos adultos
tambm ocorrem, resultando em extrasstoles. Os autores iden-
famlia de protenas dimricas, interage com a actina e com a tificaram um novo mecanismo para arritmia cardaca devido
calmodulina, que, por sua vez, interagem com clulas espec- coordenao anormal de funes mltiplas relacionadas aos
ficas no crebro e polipeptdeos especficos da camada ciliar canais de transporte de ons.24
do intestino. Os estudos bioqumicos mostram que a espec-
trina clivada pela tripsina em cinco segmentos: domnios Banda 4.1
I,II,III,IV e V partindo da extremidade NH2- terminal. Na ca- A banda 4.1 uma protena do citoesqueleto com gen-
deia , os domnios individualizados por ao da enzima so tica e localizao tpicas e diversas. Esta protena pode ser
denominados de -I a IV a partir da extremidade C- terminal, encontrada, alm da membrana plasmtica, em outras locali-
como pode ser visto no Quadro 2. Ambas as cadeias e zaes intracelulares e no ncleo. Possui peso molecular de
so fortemente homlogas, possuindo 30% de absoluta iden- 97kDa e est presente numericamente em 2x 105 cpias por
tidade e esto associadas de forma antiparalela; o grupamento clula.25
NH2- terminal da cabea do domnio -I fica face ao grupo Os mecanismos de adeso celular so importantes no
C- terminal do domnio -I. Os dmeros da espectrina so s para o mecanismo em si mas tambm para a manuteno
associados in vitro sobre a forma de tetrmeros dependendo da morfognese do tecido. A banda 4.1 integrante de uma
da fora inica e temperatura. A zona de interao do tetrmero, famlia de protenas definidas sobre a membrana do eritrcito
que tambm a forma fisiolgica, constituda pela regio N- como "organizadores" do sistema de aderncia. Seu estudo
terminal de uma cadeia que est de frente para a regio C- eletrofortico tambm mostra subunidades denominadas 4.1a
terminal de uma cadeia do dmero oposto.12 e 4.1b. A subunidade 4.1b est localizada no compartimento
Os tetrmeros de espectrina se unem a outros pela sua basal, regio de adeso da espermatognia.26
extremidade distal, atravs de curtos filamentos de actina Estudos demonstram que o maior ponto de ligao da
que formam "ns" na malha do citoesqueleto eritrocitrio. banda 4.1 na membrana do eritrcito com a glicoforina C
(GPC) e D (GPD), e que a banda 4.1 purificada pode se ligar a
Quadro 2. Ao da tripsina sobre a espectrina: domnios e dois locais distintos nas glicoforinas C/D. Uma destas inte-
com seus respectivos pesos moleculares11
raes direta, envolvendo resduos 82-98 na GPC (61-77 na
Domnios Peso molecular Domnios Peso molecular GPD), enquanto a outra interao medida pela p55, uma
(kDa) (kDa)
outra protena perifrica de membrana. A protena p55 tam-
-I 80 -I 28 bm se liga GPC. No existem evidncias de que ocorra
-II 46 -II 65
-III 52 -III 33 interao da banda 4.1 com a banda 3 tambm. Acredita-se
-IV 41 -IV 74 que a distribuio nas ligaes das trs protenas a uma
-V 41 - - membrana normal seja correspondente a 40% para p55, 40%

173
Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178 Murador P et al

para GPC/D e 20% para a banda 3. Uma mesma regio da do citoesqueleto da maioria das clulas eucariontes. abun-
banda 4.1 liga GPC/D e banda 3, enquanto o local de ligao dante e localiza-se logo abaixo da membrana citoplasmtica.
da p55 diferente. A interao envolvendo a banda 4.1 com uma protena de 33kDa que forma o denominado comple-
p55 e esta com GPC/D so de alta afinidade, enquanto a xo juncional composto por 12 molculas de actina associa-
GPC/D com banda 3 de baixa afinidade.27 O Quadro 3 mos- das banda 4.1, aducina e tropomiosina. Este complexo
tra as propriedades das principais protenas do cito- fortalece a ligao da actina com a espectrina. Existem dois
esqueleto eritrocitrio. tipos de actina: actina G (globular) e actina F (funcional),
sendo esta ltima a que se compacta para formar o comple-
Quadro 3. Propriedades das principais protenas do citoesqueleto xo juncional.12
Migrao Outras PM
Interaes
Eletrofortica denominaes (kDa) Banda 6
Banda 1 espectrina 240 anquirina, banda 4.1 Corresponde enzima gliceraldedo-fosfato desidro-
Banda 2 espectrina 220 Actina genase (GAPD) de peso molecular de 36kDa que se liga
Banda 2.1 anquirina ou 434 espectrina, banda 3 banda 3 no mesmo local da hemoglobina.
sindena
Banda 4.1a 80 espectrina, actina Banda 7
Banda 4.1b 78 Actina, glicoforinas uma banda composta principalmente por tropomiosina
de peso molecular de 32kDa. Para serem visualizadas no es-
Banda 4.9 dematina 46 Actina
tudo eletrofortico, o extrato membranrio tem que ser trata-
Banda 5 actina 33 espectrina, banda 4.1
do com MgCl2. Essa protena integra o complexo juncional
Banda 7 tropomiosina, 32 ? associado actina.12
estomatina
Adaptado de Peri, S. Genome Research 2003 Aducina
um heterodmero constitudo de trs subunidades:
Banda 4.2 ou palidina aducina 1, com peso molecular de 84kDa, aducina 2 com 81kDa
Protena de peso molecular de 80kDa, est representa- e aducina 3, com 79kDa. Liga-se s actina e espectrina. Des-
da 100 mil vezes em cada hemcia e liga-se com a banda 3 e taca-se que a ligao da aducina espectrina inibida pela
com anquirina, desempenhando um papel organizacional na banda 4.1, provavelmente por competirem pelo mesmo stio
membrana.12 um importante componente no citoesqueleto de ligao.12
da membrana eritrocitria porque regula a estabilidade e flexi- Os quadros 4, 5 e 6 descrevem as protenas mem-
bilidade dos eritrcitos.28 branrias perifricas quanto a: nome, gene, localizao, PM,
sinnimos, stios de expresso e interaes.31
Banda 4.9 ou dematina A imunoematologia, a imunoqumica e a imunogentica
A Banda 4.9 fosforilada por vrias protenas quinases so as trigmeas do ltimo sculo: elas nasceram, de fato,
(PK) do eritrcito e apresenta peso molecular de 46kDa. Ao em Viena, em 1900, quando tudo comeou com a descrio
realizar cromatografia das protenas da membrana do do grupo sangneo ABO, por Karl Landsteiner. A desco-
eritrcito, duas protenas com similares mobilidades no gel berta desse sistema permitiu, mais concretamente, o esta-
de eletroforese foram encontradas: a primeira com peso belecimento das bases cientficas da transfuso sangnea.
molecular de 49kDa e pH bsico, e a segunda, com peso Nos anos seguintes sua descoberta, Landsteiner previu
molecular de 50,5kDa, pH cido. Foi verificado que a protena que os grupos sangneos permitiriam, um dia, identificar
de 49kDa se liga a filamentos de actina.29 os homens to bem, ou melhor, que as suas prprias im-
Para demonstrar a versatilidade de atuao da banda presses digitais.
4.9, realizou-se um estudo no qual os autores usaram a tcni- Desde 1908, sabe-se cientificamente que os grupos
ca de immunoblotting revelando-a com um anticorpo anti- sangneos pertencem ao capital hereditrio que cada um de
banda 4.9, purificado e marcado. Demonstrou-se e quan- ns recebe, que eles so transmitidos dos pais aos filhos,
tificou-se a presena de uma forma de reao imune na banda seguindo as leis da gentica, que alguns so constantes e
4.9 nos crebros e cristalino de aves e bovinos, no corao diversos, constantes no mesmo indivduo, diversos na cole-
de aves, tanto quanto em plaquetas humanas e de mamfe- tividade, distribudos segundo certas propores atravs dos
ros, aves, peixes e eritrcitos de anfbios. A banda 4.9 foi sculos. So milenares dentro de uma populao dada, per-
encontrada, ainda, em fibras corticais de cristalino e em manecendo os mesmos do nascimento morte do indivduo
neurnios cerebrais de aves.30 at o advento do transplante da medula ssea. O mosaico
constituinte da membrana eritrocitria, os sistemas de grupo
Banda 5 ou actina sangneo, suas colees e sries so testemunhos inequ-
A banda 5 ou actina o maior componente protico vocos da hereditariedade. A intrincada diversidade expressa

174
Murador P et al Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178

Quadro 4. Protenas de membrana e caractersticas


PM Stio de
Protena Gene Localizao Sinnimos Interaes
(Da)* Expresso
espectrina SPTAN1 9q33-q34 285081 -I espectrina Hemcia tirosina fosfatase tipo 4A.1
no-eritride
NEAS Crebro actina
-II espectrina aducina 1 e 2
SPTAN1 sinapsina I
SPTA2 e3B1
Calspectina actina
desmina
anquirina 1 e 2
1 proteioquinase C
banda 4.2
Espectrina beta I
banda 8 (Na/Ca)
banda 9 - isoforma A2
calpana 3
banda 4.1
caderina associada 1
anquirina ANK2 4q25-q27 433768 anquirina no-eritride Crebro Espectrina
anquirina cerebral Msculo Espectrina 1
anquirina neuronal banda 8 (Na/Ca)
anquirina B Sigma receptor 1
molcula de adeso L1
NrCAM
ANK1 8p11.2 206289 anquirina R Hemcias Obscurina
ANK Crebro Espectrina
anquirina eritride Msculo molcula de adeso L1
banda 4 anion exchanger
neurofascina
Linfoma clulas T
AE2
Titina
Complexo Rh
Banda 4.1 EPB41 1p36.2-p 97062 Protein 4.1 presles Ubiquitria Receptor de dopamina D2 e D3
EPB41 1 espectrina
GPC
banda 4.2
Espectrina
banda 4.2
4.1, espectrina, Ras p21
Banda 4.2 EPB42 15q15 79896 Protena eritride 4.2 Hemcia banda 3
EPB42 sitaxina 12
E42P anquirina 1 e 2
Palidina CD47
Adaptado de Peri, S. Genome Research 2003

175
Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178 Murador P et al

Quadro 5. Protenas de membrana e caractersticas


PM Stio de
Protena Gene Localizao Sinnimos Interaes
(Da)* Expresso
Banda 4.9 EPB49 8p21.1 45643 Dematina Crebro actina
EPB49 Corao espectrina
Protena 4.9 Msculo Actina
Rins Banda 4.2
Pulmes
Stem cell
Placenta
Pncreas
Fgado
CAZ1 Hemcia CD2AP
Banda 5 CAPZA1 1p13.1 32924 CAPPA1 Placenta Actina
CAPZ Feto 2 CapZ
1 Cap protein Msculo esqueltico
1 Capping protein,
1 F-actina
1 CAPZ
EcapZ
GAPDH Ubiquitria Receptor de
andrognio
Banda 6 GAPD 12p13.31-p13.1 36056 G3PD Fosfolipase D2
Gliceraldedo 3 fosfato Tubulina
Desidrogenase Actina
Banda3
Banda 7 STOM 9q34.1 31733 Banda 7.2 Hemcia Anion exchanger 1
EPB72 Amiloridina
EPB7 Leuccito

Protena integral de membrana Clon


eritrocitria banda 7
BND7 Intestino delgado

Estomatina Ovrio
Testculo
Prstata
Timo
Bao
Corao
Placenta
Pulmo
Fgado
Msculo esqueltico
Pncreas, rins
Adaptado de Peri, S. Genome Research 2003

176
Murador P et al Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178

Quadro 6. Protenas de membrana e caractersticas


PM Stio de
Protena Gene Localizao Sinnimos Interaes
(Da)* Expresso
Aducina1 ADD1 4p16.3 84324 aducina Ubiquitria Aducina 2
ADD1 pt de choque 105 kDa
Aducina eritride espectrina
ADDA Calmodulina 1
Espectrina
I espectrina
Na+-K+-ATPase
Aducina 2 ADD2 2p14-p13 80859 ADD2 Crebro Espectrina
aducina Stem cell Rabphilin-3A
Subunidade Hemcia Aducina
da aducina
ADV Aducina 2
Calmodulina 1
Fyn
ADD3 10q24.2-q24.3 79159 Aducina like 7.0

Aducina 3 ADDL
ADD3 Ubiquitria
Adaptado de Peri, S. Genome Research 2003

na membrana eritrocitria define a identidade biolgica de and its main function is to mediate exchange of chloride and
cada um, reconhecendo o carter nico do ser humano. bicarbonate anions across the plasma membrane. The second most
O estudo da diversidade dos antgenos, a caracteriza- abundant integral membrane protein in the human erythrocyte is
sialoglycoprotein glycophorin A (GPA). With its high sialic acid
o bioqumica das diferentes protenas e o estabelecimento
content, GPA is the main contributor to the net negative cell-surface
das funes desta multiplicidade antignica trar uma subs-
charge and is thus critical for minimizing cell-cell interactions and
tancial contribuio tanto para o estabelecimento do estado preventing red cell aggregation. Glycophorin C (GPC) is the recep-
de sade, assim como para o diagnstico, desenvolvimento tor for PfEBP-2 (baebl, EBA-140), the newly identified erythrocyte
de tecnologias como a produo de anticorpos monoclonais binding ligand of Plasmodium falciparum. The ternary complex of
e a conduta teraputica de muitas enfermidades, como o spectrin, actin and 4.1R defines the nodes of the erythrocyte
exemplo da malria. membrane skeletal network, and is inseparable from membrane
stability when under mechanical stress. This erythrocyte membrane
review is important for a better understanding of transfusion
Abstract reactions, where the antibody formation against high prevalence
antigens makes compatible transfusions difficult. The study of antigen
This article describes the structures and functions of the erythrocyte diversity and biochemical characterization of different proteins will
membrane and its importance in transfusional medicine. The contribute to healthcare, as well as diagnosis, development of
erythrocyte membrane is one of the best known membranes in terms technology such as monoclonal antibody production and the
of structure, function and genetic disorders. As any other plasma therapeutic conduct of many diseases. Rev. bras. hematol. hemoter.
membrane, it mediates transport functions. It also provides the 2007;29(2):168-178.
erythrocytes with their resilience and deformability. According to Key words: Erythrocyte membrane; proteins; antigens;
the International Society of Blood Transfusion (ISBT), more than glycophorins.
500 antigens are expressed in the erythrocyte membrane, and around
270 are involved in transfusion reaction cases and hemolytic diseases
of the fetus and newborn. In the ISBT classification, the high frequency
series is represented by antigens in more than 99% of population Referncias Bibliogrficas
(high prevalence antigen). In transfusion, the absence of these 1. Salmon C, Cartron JP, Rouger P . The human blood groups part1.
antigens determines severe problems as for example, one woman New York: Masson Publishing USA; 1984. cap. 4, p.44-53.
without the P antigen suffered 6 repetitive miscarriages due to 2. Wajcman H, Lantz B, Girot R. Les Maladies du globule rouge. Paris:
placental insufficiency, which was caused by an antibody formed Les editions INSERM. Mdecine-Sciences Flammarion;1984. cap.
against the absent P antigen. Some important erythrocyte membrane 3, p.31-44.
proteins are described here including Band 3, Glycophorins and 3. Cooper GM. The cell surface In: The cel: A molecular approach.
spectrin. The most abundant integral membrane protein is Band 3 Washington: ASM Press 1997. p.467-517.

177
Rev. bras. hematol. hemoter. 2007;29(2):168-178 Murador P et al

4. Matei H, Frentescu L, Benga Gh. Comparative studies of the 23. Lobo CA, Rodriguez M, Reid M, Lustigman S. Glycophorin C is the
protein composition of red blood cell membranes from eight receptor for the Plasmodium falciparum erythrocyte binding ligand
mammalian species. J Cell Mol Med. 2000;4:270-80. PfEBP-2 (baebl). Blood. 2003;101:4628-31.
5. Gallager PG, Forget BG, Lux SE. Disorders of Erythrocyte 24. Mohler PJ, Schott JJ, Gramolini AO, Dilly KW, Guatimosim S,
Membrane. In: Nathan DG, Oski FA, Orkin SH. Hematology of DuBell WH, et al. Ankyrin-B mutation causes type 4 long-QT
Infancy and Childhood. 5 ed. Philadelphia: WB Saunders; 1998. cardiac arrhythmia and sudden cardiac death. Nature. 2003;421:
p.544-664. 587:589-90.
6. Zhang D, Kiyatkin A, Bolin JT, Low PS. Crystallographic structure 25. Gascard P, Nunomura W, Lee G, Walensky LD, Krauss SW, Takakuwa
and functional interpretation of the cytoplasmic domain of Y, et al. Deciphering the nuclear import pathway for the cytoskeletal
erythrocyte membrane band 3. Blood. 2000;96:2925-33. red cell protein 4.1R. Mol Biol Cell. 1999;10:1783-98.
7. Jarolin P, Rubin HL, Zakova D, Storry J, Reid ME. Characterization 26. Terada N, Ohno N, Yamakawa H, Baba T, Fujii Y, Zea Z, et al.
of seven low incidence blood group carried by erythrocyte band 3 Immunohistochemical study of protein 4.1B in the normal and
protein. Blood. 1998;92:4836-43. W/W(v) mouse seminiferous epithelium. J Histochem Cytochem.
8. Storry J. A review: modification of red blood membrane and its 2004;52:769-77.
application in blood groups serology. Immunology. 2000;16(3):3-5. 27. Hemming NJ, Anstee DJ, Staricoff MA, Tanner MJA, Mohandas
9. Telen MJ, Kaufman R. In: Greer JP, Foerster J, Lukens JN, Rodgers N. Identification of the membrane attachment sites for protein
GM, Paraskevas F, Glader B - Wintrobes Clinical Hematology. 4.1 in the human erythrocyte. J Biol Chem. 1995;270:5360-6.
11th ed. Philadelphia: Lippincott William & Wilkins; 2003. v. 1, 28. Karacay B, Chang LS. Induction of erythrocyte protein 4.2 gene
cap. 8, p.217-47. expression during differentiation of murine erythroleukemia cells.
10. Blackman SM, Hustedt EJ, Cobb CE, Beth AH. Flexibility of the Genomics. 1999;59:6-17.
cytoplasmic domain of the anion exchange protein, band 3, in 29. Horne WC, Miettinen H, Marchesi VT. Erythrocyte membrane
human erythrocytes. Biophys J. 2001;81:3363-76. skeleton phosphoprotein: identification of two unrelated
11. Saad STO. Anemias por defeitos de membrana eritrocitria. In: phosphoprotein in band 4.9. Biochim Biophys Acta. 1988;944:
Zago MA, Falco RP, Pasquim R. Hematologia: fundamentos pr- 135-43.
ticos. So Paulo: Atheneu; 2001. cap 26. p.250-264. 30. Faquin WC, Husain A, Hung J, Branton D. An immunoreactive
12. Mandal D, Baudin-Creuza V, Bhattacharyya A, Pathak S, Delaunay form of erythrocyte protein 4.9 is present in non-erythroid cells.
J, Kundu M, Basu J. Caspase 3-mediated proteolysis of the N- Eur J Cell Biol. 1988;46:168-75.
terminal cytoplasmic domain of the human erythroid anion 31. Peri, S. et al. Development of human protein reference database
exchanger 1 (band 3). J Biol Chem. 2003;278(52):52551-8. as an initial platform for approaching systems biology in humans.
13. Fu G, Wang T, yang B, Lv F, Shi C, Jiang X, et al. Purification and Genome Research. 2003;13:2363-71.
characterization of human erythrocyte band 3 protein C- termi-
nal domain. Biochemistry. 2004;43:1633-8.
14. Wong P. A basis of the acanthocytosis in inherited and acquired Avaliao: Editor e dois revisores externos
disorders. Med Hypotheses. 2004;62:966-9. Conflito de interesse: no declarado
15. Cheidde L, Vieira TC, Lima PRM, Saad STO, Heilberg IP. A novel
mutation in the anio exchanger 1 gene is associated with familial Recebido: 08/06/2006
distal renal tubular acidosis and nephocalcinosis. Pediatrics. 2003; Aceito aps modificaes: 29/12/2006
112:1361-7.
16. Zdebska E, Bader-Meunier B, Schischmanoff PO, Dupre T, Seta N,
Tchernia G, et al. Abnormal glycosylation of red cell membrane
band 3 in the congenital disorder of glycosylation Ig. Pediatr Res.
2003;54(2):224-9.
17. Reliene R, Mariani M, Zanella A, Reinhart WH, Ribeiro ML, del
Giudice EM. Splenectomy prolongs in vivo survival of erythrocytes
differently in spectrin/ankyrin- and band 3-deficient hereditary
spherocytosis. Blood. 2002;100:2208-15.
18. Oldenborg PA. Role of CD47 in erythroid cells and in autoimmunity.
Leuk Lymphoma. 2004;45:1319-27.
19. Auffray I, Martafia S, Jong L, Lee G, Huang C, Pasztyet C, et al.
Glycophorin A dimerization and band 3 interaction during erythroid
membrane biogenesis: in vivo studies in human glycophorin A
transgenic mice. Blood. 2001;97:2872-8.
20. Hassoun H, Hanada T, Lutchman M, Sahr KE, Palek J, Hanspal M,
et al. Complete deficiency of glycophorin A in red blood cells
from mice with targeted inactivation of band 3 (AE1) gene. Blood.
1998;91:2146-51.
21. Poole J, Banks J, Bruce LJ, Ring SM, Levene C, Stern H, et al.
Glycophorin A mutation Ala65 - Pro gives rise to a novel pair of
MNS alleles ENEP (MNS39) and HAG (MNS41) and altered Wrb
expression: direct evidence for GPA/band 3 interaction necessary
for normal Wrb expression. Transfusion Med. 1999;9:167-74.
22. Garraty G, Telen MJ, Petz LD. Red cell antigens as functional
molecules and obstacles to transfusion. Hematology. 2002;445-62.

178