Les sources classiques de la variation

biologique :
la mutation et la recombinaison

MUTATION RECOMBINAISON
Marquage molculaire
Micropropagation
Transgnse
Haplodiplodisation
Hybridation somatique
Polyplodisation
Hybridation interspcifique
Mutagense
Production dhybrides F1

Hybridation puis
slection gnalogique
1re stratgie: slection
des variations, spontanes 2me stratgie: combiner des
ou provoques, et les caractres dans une
exploiter autant que perspective de construction
possible. de gnotype.
 Hybridation et slection gnalogique

Mthode trs efficace:

Croisements Rendement du bl
interspcifiques 12 80 quintaux
systmatiques (100 ans)
HYBRIDEURS
Slection gnalogique AUTOGAMES
sur la descendance
de croisements
Ralisation de lignes
Slection gnalogique parentales des
pour extraire varits synthtiques
les meilleures lignes ou hybrides F1

SELECTIONNEURS ALLOGAMES

1re synthse entre En sappuyant sur

les ides des hybrideurs le mendlisme
et des slectionneurs
 Production dHybrides F1
Hybride F1 = structure varitale exploitant au maximum lhtrosis

Les avantages des hybrides F1

- Rendement
- Homognit
- Homostasie
- Cumul de gnes dominants (rsistances aux maladies)
- Protection des efforts de recherche

Matrise de la fcondation croise

Castration manuelle 1957, INRA 200, mas

1963, MONTFAVET H63-5, tomate
Strilit mle nuclaire 1969, INRA 6501 ligne tournesol
Comptition pollinique 1972, FLAMBOR, endive
Incompatibilit 1975, JAKEZ, chou-fleur
Gamtocide 1985, COURTEL, bl
Strilit mle nuclo-cytoplasmique 1974, FRANSOL et RELAX, tournesol
 Cration et exploitation de croisements
interspcifiques ou intergnriques

Espces naturellement cres par croisements interspcifiques

- Cration despces : bl, coton, colza, moutarde brune, fraisier (fragaria chilensis (Frzier)x
Fragaria virginiana (J. Cartier), peuplier, pcher-amandier,

Les flux de gnomes ont t la base de la cration despces essentielles pour

lHomme.

Croisements interspcifiques provoqus

- Contournement des barrires avant la fcondation : utilisation de pollen mentor, croisement

rciproque, ablation du style,...
- Contournement des barrires aprs la fcondation : polyplodisation, sauvetage dembryons
par culture in vitro,...
Cration et exploitation de croisements
interspcifiques ou intergnriques

fertile
 Cration et exploitation de croisements
interspcifiques ou intergnriques
seigle triticale Cration du triticale
1937
Bl tendre x seigle = triticale octoplode
1948
Bl dur x seigle = triticale hexaplode
1re tape : introduction de gne de
compatibilit de croisement dans le bl
Bl
. tendre
kr1, kr2, Skr (localisation 5A et 5B)
Chinese spring et maintenant Norin 29,
Roazon, courtot Difficile :
2me tape : croisement dun bl sauvetage
tendre compatible avec le seigle dembryon
ABD/ ABD x R/R = ABDR 3me tape croisement dun triticale
Doublement la colchicine primaire par un triticale hexaplode
ABDR/ABDR (octoplode triticale (amlior)
primaire) Triticale primaire ABDR/ABDR x ABR/ABR =
ABR/ABR (limination du gnome D (ou
integration partielle cytoplasme bl tendre)
 Impact des croisements interspcifiques
sur lamlioration des plantes

Quelques nouvelles espces issues de croisements interspcifiques provoqus

Ray-grass hybride L. perenne x L.multiflorum 1978, AUGUSTA

Porte-greffes V. vinifera x V. berlandieri 1978, FERCAL
(vigne)
Arabusta C. arabica x C. canephora 1980, ARABUSTA
Triticale Bl x Secale cereale 1983, CLERCAL
Porte-greffes P. domestica x P. spinosa 1989, AVIVEL TORINDEL
(abricotier)
Porte-greffes P.davidiana, P.mume, 1991, VIKING
(prunus) P.dulcis, P. persica.

Quelques exemples de varits portant des introgressions

Bl tendre A. ventricosa 1976, ROAZON, rsistance au pitin-verse

et aux rouilles (Yr17-Lr37)
Laitue L. saligna 1990, NINJA, rsistance au Brmia
Piment C baccatum 1991, OSIR, rsistance au CMV
Tournesol H. tuberosus 1998, INEDI, rsistance au mildiou
 Impact de lhybridation somatique sur
lamlioration des plantes
Mthode de combinaison dinformation gntique en 3 tapes

1) Ralisation de protoplastes,
2) Fusion de protoplastes,
3) Culture in vitro des produits de fusion et rgnration dune plante entire.

Quelques applications de la fusion de protoplastes

Cration de nouvelles espces

- 1978, la pomate.
- En cours, porte-greffes de Citrus : Poncirus trifoliata x Citrus reticulata.

Introgression de caractres par fusion asymtrique

- Rsistance au virus de lenroulement introduite dans la pomme de terre partir de S.
brevidens.

Manipulation des caractres cytoplasmiques (cybrides)

- Ralisation de cytoplasmes inducteurs de strilit mle chez les Brassica (systme OGU-
INRA) (voir cours sur le colza) puis chez le riz et les chicores.
 Transgnse
La transgense consiste transfrer des gnes
1) sous forme dADN isol par transfert direct ou,
2) sous forme dADN clon dans un vecteur de transfert.

Historique

1983, Premiers tabacs transgniques obtenus grce aux agrobactries simultanment par des
quipes Belges et Amricaines.
1985, Premiers riz transgniques obtenus par transfert direct.
1994, Premire autorisation de mise sur le march des plantes transgniques aux USA.

Avantages de la transgnse

Pour la recherche fondamentale

- Recherche des fonctions des gnes : complmentation de mutants, expression ectopique

En amlioration des plantes

- Source nouvelle de variabilit.
- Prcision de la transmission.
- Prservation du contexte gnomique.
Impact de la transgnse sur lamlioration
des plantes

FRANCE 2001 MONDE

SURFACE CULTIVEE
50 HECTARES 52 MILLIONS DHECTARES
USA, Argentine, Canada et Chine

ESPECES CONCERNEES
Mas, illets 60 autres espces
 Impact de la transgnse sur lamlioration
des plantes
Rsistances aux herbicides : chicore, colza, coton, mas, riz, soja, tabac.
Rsistances aux insectes : coton, mas, pomme de terre, tomate.
Strilit mle : chicore, colza, mas.
Qualit de lhuile : colza (laurique), soja (olique)
Conservation et/ou fermet : melon, illet, tomate.
Sant : tabac
Rsistance au virus : courgette, papaye
Couleur : illet (mauve)

Evolution des caractres introduits

- Qualits gustatives et nutritionnelles, adaptations aux conditions

dfavorables, production de substances diverses.

Evolution des techniques

- Les gnes de slection, les promoteurs ...

- La transformation des plastes devient possible chez certaines espces (tomate).
- Premires russites dans la recombinaison homologue: plantes SAGE.
 Marqueurs molculaires et ralisation de
cartes gntiques
Premire carte gntique partielle chez les plantes

1935 : Emerson, chez le mas

Dcouverte des marqueurs molculaires

1975: dcouverte de la mthode dhybridation de Southern

- 1980 : marqueurs RFLP

1983 : dcouverte de la PCR

- 1989 : marqueurs microsatellites
- 1990 : marqueurs RAPD
- 1993 : marqueurs CAPS
- 1995 : marqueurs AFLP

Marqueurs molculaires = dveloppement trs rapide des techniques de biologie molculaire

Ralisation de cartes de liaisons gntiques satures

Nombreuses espces : chez le riz, le haricot, la tomate, le colza, le soja, le mas, le bl, le pin
maritime,...
 Les marqueurs molculaires et la
connaissance des gnotypes
Cartographie compare : conservation de la syntnie entre espces

Solanaces : (pomme de terre, tomate et piment)

Tritices : (bl, orge, seigle)
Andropogones : (mas, sorgho et canne sucre)
Dcloisonnement des programmes de recherche

Applications directes (marqueurs molculaires)

- Identification varitale
- Prdiction de lhtrosis
- Classement des individus au sein dun germplasme

Localisation de caractres intressants

- Caractre monognique : analyse de la sgrgation en mlange
- Caractre polygnique : approche statistique et identification de QTL

Identification des gnes eux-mmes

Pourquoi ? Plus fiable, recherche dallles, ouvre des perspectives pour la transgnse.
Comment ? Conservation de syntnie et homologies de squences entre espces. Formulation
dhypothses sur les gnes candidats. Cration de banques gnomiques et de cartes
physiques. Production de populations recombinantes de grandes tailles.
 Marqueurs molculaires et slection
Exemple dutilisation des marqueurs en slection

Conversion assiste par marqueurs

Plante Marqueurs
possdant un du caractre
caractre intressant
intressant
GUIDER LES RETROCROISEMENTS
Marqueurs (gain de temps)
Ligne rpartis sur
Elite lensemble
du gnome

ralisations

Conduite de rtrocroisements
- FNRM, PSC8 RM, lignes de tournesol. Rsistance au mildiou (2002)
 LA GENOMIQUE

BIODIVERSITE BIODIVERSITE BIODIVERSITE

SAM

TRANSGENESE

METHODE

METHODE
METHODE

HASARD
HASARD
HASARD

Avant les annes 50 1950-2002 FUTUR

un croisement navait Biotechnologies Construction
jamais cess de ntre Informatique mthodique
quun jeu de hasard. Biochimie de gnotypes
(Emile Schribaux) Phytopathologie