Ensayo y determinacin de la actividad antioxidante por el mtodo del DPPH

Preparacin de la solucin de DPPH

Para cada ensayo se prepar en un matraz completamente cubierto en papel aluminio la solucin
del radical libre 1,1-difenil-2-picril-hidrazilo (DPPH) a 20 mg/L en metanol grado analtico. El
volumen a preparar dependia de la cantidad de muestras a evaluar y subsiguientemente se
transfiri a un frasco mbar cubierto con papel aluminio para evitar su rpida degradacin.

Capacidad captadora del radical DPPH (1,1-Difenil-2- picrilhidrazilo)

La determinacin de la actividad antioxidante de los diferentes extractos vegetales se llev a cabo

de acuerdo con el mtodo BrandWillians et al., (1995), con ligeras modificaciones como se
describe en la figura 15. Cada ensayo se realiz 2 veces y su vez cada muestra por triplicado
(Murillo et al., 2007).

Se realiz un tamizaje a una concentracin de 1000 g/mL para determinar la actividad

antioxidante de cada extracto con el objetivo de descartar aquellos que a dicha concentracin no
presentaran un porcentaje de actividad antioxidante mayor o igual a 25% y por tanto no se
consideraban activos en este trabajo. Para esto se sigui el protocolo descrito en la figura.

Figura. Mtodo para evaluacin de la actividad antioxidante por el mtodo de DPPH (Murillo et
al., 2007).

Como control positivo se tom una solucin de hidroquinona a una concentracin de 1000 g /mL;
como control negativo (AControl (-)) se tom el sistema de disolucin correspondiente segn cada
caso. Ambos controles se midieron siguiendo el mismo protocolo usado para los extractos (figura).
Adems se midi el control fotomtrico preparado a partir de 1.25 mL de metanol para descartar
la absorbancia de este solvente en las mediciones.

El blanco de los extractos fu preparado a partir de 0.25 mL del extracto en anlisis y 1 mL de

metanol. Esta solucin fue medida a una longitud de onda de 517 nm (ABlanco extracto) .

A partir de las absorbancias obtenidas se determin el porcentaje de actividad antioxidante con la

ecuacin que se presenta en la figura 16 (Murillo et al., 2007)
() ( )
% = [ ]

Ecuacin para calcular el porcentaje de actividad antioxidante de los extractos para el ensayo
DPPH. Donde:

AExtracto: Absorbancia de los extractos.

ABlanco extracto: Absorbancia del blanco de los extractos.

AControl (-): Absorbancia del control negativo.

Luego de descartar aquellos extractos con un porcentaje de actividad antioxidante menor al 25%,
se prepararon concentraciones de 500, 250, 100, 50 y 10 g/mL, (ver tabla 4), a partir de cada uno
de los extractos activos a 1000 g/mL, a los cuales se les determino su actividad antioxidante
mediante el mismo protocolo sguido para realizar el tamizaje (figura 15). Posterior al clculo de los
porcentajes de actividad antioxidante para cada una de las concentraciones, se determin la
concentracin mxima de la media inhibitoria (IC50) mediante una regresin en el programa
estadstico GraphPad Prims.