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UNIVERSIDAD PERUANA UNIN

FACULTAD DE INGENIERA Y ARQUITECTURA


EAP Ingeniera Ambiental

PRACTICA N 3

TINCION DIFERENCIAL GRAM Y TINCION DIFERENCIAL ACIDO


RESISTENTE

Trabajo presentado en cumplimiento parcial de


Microbiologa Ambiental.

Autores:

Soledad Torres Caldern


Mara Carla Romn Santa Cruz
Deysi rica Laura Pezo

Grupo: 2

Profesora:

Ing. lvarez Loli Jenny Ebenith

Lima, 07 de Abril del 2015


I. FUNDAMENTACION TEORICA

1.1 Tincin Gram

Para (Garcia, 2010) La tincin diferencial de Gram consiste, bsicamente en teir el

frontis, fijado al calor, con un colorante llamado cristal violeta, y despus de lavado con

agua, tratarlo sucesivamente con una solucin de lugol (yodo ms yoduro de potasio), un

agente decolorante como el alcohol o una mezcla de alcohol y acetona y, por ltimo, con

un colorante de contraste como la safranina.

La reaccin a la tincin de Gram est basada en la diferencia en la composicin

qumica de la pared celular bacteriana, las bacterias Gram-positivas tienen una gruesa

capa de peptidoglicano o murena, mientras que esta capa es ms fina en las Gram-

negativas y est rodeada por una bicapa lipdica externa.

El peptidoglicano es un polisacrido formado por dos subdivisiones qumica, N-

acetilglucosamina y acido N- acetilmuramico.

Es fundamental tener claro la base terica y qumica acerca de la tincin diferencial,

Segn (Martos, Barrio, & Salido, 2012) la tincin diferencial requiere el uso de al menos

3 reactivos qumicos que se aplican en secuencia a un frontis fijado por el calor, como

muestra la tabla 1.

Tabla 1
REACTIVOS Funcin

Primario Colorante Primario Imparte color a todas las


clulas.

Secundario Agente decolorante Decolora la clula completa o


solo parte de ella.
Final Colorante de Contraste Le da a las clulas
decoloradas un color que
contrasta con el del colorante
primario, el colorante de
contraste no es absorbido por
clulas que no han perdido el
colorante primario.

Ttulo: Reactivos que se emplean para la tincin Gram. Fuente: Creacin propia.

1.1.1 Tincin Primaria: Se utiliza Cristal Violeta, que tie todas las clulas moradas.

1.1.2 Mordiente: Yodo o lugol. El yodo, aparte de matar bacterias, incrementa la afinidad

del colorante primario con la clula, formando complejos insolubles con este. El complejo

cristal violeta-yodo sirve para intensificar el color del tenido.

1.1.3Agente decolorante: Se utiliza el alcohol etlico al 95%.ya que el etanol tiene doble

funcin: Deshidratante de protenas y solvente de lpidos. El alcohol disuelve los lpidos de

la parte externa de la pared celular Gram- negativa, haciendo la pared ms porosa, de esa

forma el complejo Cristal violeta-yodo es removido en la capa de mureina ms fina de las

bacterias Gram-negativas, mientras que la pared ms gruesa de las Gram- positivas retiene el

tinte en su interior.

1.1.4 Tincin de Contraste: Safranina. Este tinte se utiliza para teir de rojo las clulas

previamente decoloradas, o sea, las Gram negativas.

1.2 Bacterias Gram - positivas

Posee una pared celular gruesa que consta de varias capas y est formada

principalmente por peptidoglucano (150 a 500 A) que rodea la membrana citoplasmtica,


este es un exoesqueleto en forma de malla con una funcin semejante a la del exoesqueleto

de los insectos.

1.2 Bacterias Gram- Negativas

La pared celular de las bacterias Gram-negativas est compuesta por una capa delgada

o por muy capas que sean de peptidoglucano y solo posee una membrana externa. (Tortola,

Funke, & Case, 2007)

Figura1.

Ttulo: La morfologa de las bacterias segn la tincin Gram Fuente: (Murray, Rosenthal, &
Pfaller, 2009)

La fig.1 muestra que las bacterias Gram-positivas, el cristal violeta de la tincin de

Gram es fijado por la solucin yodada y atrapado en la gruesa capa de peptidoglucano. El

decolorante se disemina por la membrana externa Gram- negativa y elimina el cristal violeta

de la capa delgada del peptidoglucano, por ello las bacterias Gram-negativos se visualizan

mediante el colorante de contraste rojo.

Las bacterias Gram positivas retienen el Cristal violeta, y por lo tanto, se ven de un

color violeta intenso; las Gram negativas, que pierden el color violeta con el agente

decolorante, toman un color rojo al teirse con la safranina.


II. ANEXOS
2.1 procedimiento

Fig. 1. Dispersin de los Fig. 2. Agregado de Cristal Violeta Fig. 3. Agregado de Lugol
microorganismos

Se le agrega Cristal de Violeta En esta fase se le cubre la


Los microorganismos de la leche
dejando que actu por 1 minuto pelcula teida con Lugol, dejar
que han sido cultivadas son
luego se le enjuaga con agua que actu por 1 min y luego
dispersados en la lmina
destilada. enjuagar con agua.
portaobjeto.

Fig. 4. Agregado de Alcohol Fig. 5. Agregado de Safranina

Decolorar la pelcula con alcohol


Cubrir el colorante de contraste
dejando que actu durante 15 seg.
con Safranina dejando por 1min.
Pasado el tiempo indicado
Al pasar el tiempo indicado
enjuagar con agua.
higienizar con agua.
2.2. Resultados
Fig. 6. Resultados de proceso de preparacin

Finalmente obtenemos el cubreobjetos con


los microorganismos listas para ver en el
microscopio los Gram Positivos y los Gram
Negativos.

Figura 10. Bacterias del agua de la Mansin

Estreptobacilo
s os s
En la Figura 10. Es posible observar
bacterias con forma de bacilo (en forma de
Bacilos barra o vara) y de color rosadas, esto indica
que son bacterias Gram negativas. Esta
coloracin recibe debido a que en sus paredes
celular delgada de peptidoglicano.
Coco La menor parte se encuentan los cocos.

Figura 9. Bacterias del yogurt


III. DISCUSION

Segn (Forbes, Sahm, & Weissfeld, 2007) La diferencia entre las bacterias Gram-

Positivas y las negativas es en la composicin de las paredes de las clulas, la primera

contienen una capa gruesa de peptidoglucano con numerosos enlaces cruzados de cido

teicoico, y las paredes de las clulas Gram-negativas, en las que la capa de

peptidoglucano es ms delgada ello explica las diferencias de tincin de Gram entre estos

dos grupos principales de bacterias; Sin embargo no solo esas son las nicas diferencias,

(Ingrahan, Wheelis, Painter, & Stanier., 1992) Menciona que las Gram - negativas son

flagelos polares y las Gram - positivas son ms sensibles a los antibiticos que las Gram

negativas.
IV. CONCLUSIN
Las bacterias Gram positivas son de color violeta y las de color rojizo las Gram
negativas, las primeras poseen una capa peptidoglucano gruesa y de la segunda es
delgada.

V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Forbes, Sahm, & Weissfeld. (2007). Diagnostico Microbiologico. Espaa: Panamericana.


Garcia, V. (2010). Introduccion a la Microbiologia. Mexico: Reverte.
Ingrahan, J. L., Wheelis, M. L., Painter, P. R., & Stanier., R. Y. (1992). Microbiologia.
Barcelona: Reverte.
Martos, P. G., Barrio, M. T., & Salido, F. P. (2012). Microbiologia Clinica Practica.
Mexico: Copyright.
Murray, P. R., Rosenthal, K. S., & Pfaller, M. A. (2009). Microbiologia Medica. Espaa:
Barcelona.
Tortola, Funke, & Case. (2007). Introduccion a la Microbiologia Ambiental. Argentina:
Panamericana.