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Escola EB 2, 3/S de Vale de Cambra

Curso Profissional de Tcnico de Processamento e controlo da Qualidade alimentar 3 I

Microbiologia Ficha Informativa

Mdulo 9- Controlo Microbiolgico da carne e produtos crneos

Normas portuguesas 2077; 3005; 2878; 2879

Actividade laboratorial Contagem de Bolores e Leveduras em amostras de Carne

A- Colheita

- O alimento deve ser colhido com recurso a material bem lavado e esterilizado.

- Deve ser removida a camada superficial do alimento; a amostra deve ser constituda por
pores colhidas em diferentes locais, nas zonas superficiais, mdias e perfundas.

B- Material necessrio

- Agitador magntico

- Balana sensvel a 0,01g

- Frascos de 200 cm3 e de 500 cm 3, de boca larga e rolha esmerilada

- Homogenizador electrico

- Placas de petri e tubos de ensaios esterilizados

C- Meios de cultura: Plate Count agar e Cooke Rose Bengal agar


Diluente-soluo de triptona-sal com tween
D- Preparao da amostra:

- Com os devidos cuidados de assepsia e utilizando um bisturi, faca, pina, sonda ou tesoura,
retiram-se pequenas pores de diferentes zonas da amostra que se pesam em recipientes
esterilizados.

- Adiciona-se um volume de soluo de salina apropriada que, aps triturao conveniente em


almofariz ou triturador, permite medir a mistura com uma pipeta.

E- Preparao da suspenso-me e das diluies

1. Pesa-se assepticamente 20,0 g de amostra para um recipiente e adiciona-se, com os


devidos cuidados 1800 cm3 de diluente;
2. Deixa-se repousar 10 minutos;

3. Procede-se a triturao durante 30 segundos com o homogeneizador elctrico.

10 Cm3 da suspenso = a 0,1g de amostra


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Mdulo 9- Controlo Microbiolgico da carne e produtos crneos

Diluies:

- A partir da suspenso-me (1/10) efectuam-se diluies decimais sucessivas

- Agita-se o gobel que contm a diluio 1/10 transferindo seguidamente 1cm 3 desta
suspenso para um tubo de ensaio contendo 9 cm 3 de diluente. Obtm-se assim uma diluio
de 1/100.

- Repete-se o processo para as diluies seguintes utilizando uma pipeta diferente para cada
diluio.

- De cada vez que se efectua uma nova diluio deve agitar-se a diluio anterior.

F- Sementeiras

- Na preparao das sementeiras devem utilizar-se duas diluies no mnimo

- De cada uma das diluies a utilizar, retira-se assepticamente 1cm3 que se distribui por 5
placas contendo meio de cultura

- Espalhar o inoculo sobre toda a superfcie do meio com o auxlio de um semeador de vidro
devidamente esterilizado e arrefecido.

- Para cada uma das diluies deve utilizar-se uma pipeta diferente.

G- Incubao: aps a sementeira, as placas so incubadas a 23 +/- 20C durante 120 +/- 2
horas.

H- Contagem de colnias

A contagem de colnias efectuada com o auxlio de um contador de colnias nas 5 placas


de mais baixa diluio cujo nmero de colnias por placa seja inferior a 300.
As colnias de bolores e de leveduras so contadas separadamente de acordo com a
sua morfologia.

I-Resultados:

* n = soma do n de colnias de bolores contadas nas 5 placas de diluio considerada;


*n= soma do n de colnias de leveduras contadas nas 5 placas de diluio considerada;
*n1,n2,n3 = somas do n de colnias de cada gnero de bolor quando identificado que
perfazem a soma total N;
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Mdulo 9- Controlo Microbiolgico da carne e produtos crneos

*d- denominador da diluio em relao ao qual se efectuou a contagem.

*Teor total de fungos por grama de produto = ( n+n) x d

*Teor total de bolores por grama de produto = n x d

*Teor total de leveduras por grama de produto = n x d

*N de colnias de cada gnero de bolores por grama de produto respectivamente:

N1 x d

N2 x d

N3 x d

Apresentao dos resultados: o teor micologico exprime-se em nmero de colnias de


fungos por grama de produto e apresentado por um nmero compreendido entre 1,0 e 9,9
multiplicado por 10n em que n representa o expoente apropriado da potncia de 10. No caso
de no se haver registado qualquer valor por ausncia de colnias, os resultados exprimem-se
por: inferior a 1 x d colnias por grama, sendo d o denominador da mais baixa diluio
efectuada. No caso de no se ter registado qualquer valor por excesso de colnias que
impossibilite a contagem em todas a diluies, os resultados exprimem-se por: superior a
1,5x103xd1 colnias por grama, sendo d1 o denominador da mais alta diluio efectuada.

No relatrio deve identificar-se:

-A amostra;
-Tcnica de anlise utilizada;
-Os resultados e a forma como esto expressos;
-Os detalhes eventualmente verificados durante a analise que possam influenciar os
resultados;

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