INGENIERA Escuela de Ingeniera Qumica

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES Departamento de Qumica Industrial y Aplicada

MERIDA-VENEZUELA

SEPARACION DE PIGMENTOSNATURALES POR CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

Mrquez Eliana, Rojas Jess, Soto Andrs
Laboratorio De Anlisis Instrumental, Escuela De Ingeniera Qumica, Universidad De Los Andes
Prof. Lisandra Chacn, Seccin: 01.

Fecha de Realizacin de la Prctica: 09-11-2017.

Fecha de Entrega del Informe: 23-11-2017

RESUMEN

La cromatografa en columna es una tcnica de separacin basada en la afinidad de los

componentes que intervienen en una mezcla compleja con una fase estacionaria, la mezcla
atraviesa la fase estacionaria con la ayuda de una fase mvil que es inmiscible con la fase
estacionaria. Durante la prctica experimental se llev a cabo la separacin de los pigmentos
naturales como -carotenos y licopenos del extracto de zanahoria y tomate a partir de la
cromatografa en columna utilizando como fase estacionaria almina, y haciendo eluir los
solventes seleccionados de acuerdo a su poder eluyente, utilizndose para la columna de
almina una mezcla de 50:50 diclorometano:ter de petrleo. Se logr la separacin en la
columna cromatogrfica identificndose cualitativamente -carotenos y licopenos como naranja
y amarillo respectivamente, debido a que presenta grupos cromforos, adems pueden ser
identificados por espectrometra de absorcin, ya que cada uno presenta mximos de absorcin
caractersticos de 460 y 480nm.

Datos experimentales Experiencia 2. Construccin del espectro de

absorcin de las fracciones separadas.
Experiencia 1. Determinacin de las
condiciones de operacin de la columna Tabla 3. Absorbancias de los analitos
cromatogrfica.
Licopeno -caroteno
Tabla 1. Caudal de la fase mvil Longitud de
Absorbancia Absorbancia2
Onda (nm)
Volumen (mL) Tiempo (s) Caudal (mL/s) 360 0,045 0,042
2 195 0,01026 380 0,055 0,050
2 192 0,01042 400 0,065 0,065
Tabla 2. Volumen y porosidad de la 420 0,090 0,100
columna cromatogrfica. 440 0,110 0,150
460 0,125 0,190
Caudal 480 0,110 0,220
Volumen (mL) Tiempo (s)
(mL/s) 500 0,075 0,190
2 195 0,01026 520 0,033 0,140
2 192 0,01042 540 0,020 0,050
Caudal Promedio 0,01034 560 0,015 0,022
580 0,020 0,020
600 0,021 0,019
 Resultados y discusin. Tabla 4. Velocidades relativas de elucin para diferentes grupos funcionales
Inicialmente se prepar una columna empacada con
almina, para poder llevar a cabo la cromatografa en
columna abierta; se utilizaron diferentes solventes con la
finalidad de separar los componentes de inters de la
muestra en estudio por su polaridad, los carotenoides:
-caroteno y licopeno.
El principal factor que se tom en cuenta para controlar
el movimiento de los analitos tales como el -caroteno y
licopeno en el proceso de cromatograma fue la polaridad
tanto de los analitos como del solvente a utilizar. Es
importante tener en cuenta la estructura molecular de las
especies involucradas en la separacin el cual son las
siguientes:
Tanto el -caroteno y licopeno son carotenoides, en
donde, el licopeno es un carotenoide acclico con cadena
aliftica formada por 40 tomos de carbono unidos por
dobles enlaces C=C, constituyndose en la cadena ms
larga de todos los carotenoides en el cual esta
configuracin es la responsable de su capacidad de anular
la accin de radicales y adems predominan las fuerzas
de Van der Waals obteniendo un comportamiento apolar;
el -caroteno en cambio pose una diferencia fundamental
en su estructura y es que en sus extremos pose anillos lo
que hace que sea menos apolar y as mismo pueda ser
eluido por una fase mvil ms polar que a la que se
utilizara para realizar la elucin del licopeno el cual es
afn a fases mviles apolares.
Una lista de los solventes ms usados en los diferentes
tipos de cromatografa, en orden de polaridad creciente,
se indican en la Tabla 4. Entre ms polar sea un solvente,
ms rpido es el movimiento de los compuestos y menos
efectiva la separacin.
Se estableci el orden de polaridad entre los
solventes disponibles para la prctica: Mas polar
Metanol>Dicloro-metano> ter de petrleo Menos
polar.
En esta experiencia todos los grupos trabajaron con
la misma fase estacionaria, en este caso la almina,
con la diferencia en que cada grupo uso un solvente
o una mezcla de solventes diferentes para analizar
cmo se llevaba a cabo cada separacin.
La almina es un adsorbente de carcter polar, lo
que implica que los compuestos pocos polares no
quedan retenidos en la fase estacionaria, es por ello
que estos compuestos salen ms rpidos de la
columna.
Como se haba dicho anteriormente, los 4 grupos
que conforman el laboratorio de anlisis, trabajaron
con solventes distintos, en nuestro caso se emple
como solvente una mezcla de 50:50
diclorometano:ter de petrleo con un caudal de
0,01034ml/s y una porosidad de, en esta experiencia
se observ el arrastre de las muestras en estudio por
toda la columna y a la vez la separacin de los
pigmentos del extracto, obteniendo dos fracciones,
la primera resulto una fraccin de color naranja,
algo rojizo y la segunda fraccin mostro un color
amarillo. Dando lugar a la separacin primero del
licopeno debido a la afinidad de este con la fase
mvil; luego para realizar la elucin del -caroteno
se utiliz solo diclorometano debido a su afinidad
con este solvente. El espectro de absorcin de las
fracciones separadas se obtuvo bebido al gran
nmero de dobles enlaces conjugados que presentan
estos carotenoides en su estructura, absorbiendo
radiacin en la regin visible del espectro
electromagntico, razn por la cual exhiben su color interaccin con la fase mvil (FALTA LA
caracterstico. Tanto el licopeno como el POROSIDAD y caudal)..
-caroteno, se caracterizaron por espectrofotometra
UV-vis, obteniendo sus espectros en el rango de Los resultados de la construccin del espectro de
460-480nm a absorbancias 0,225 y 0,125. Se puede absorcin de las fracciones separadas de -caroteno
decir que se obtuvo un resultado aceptable ya que y licopeno para las solventes y mezcla de solventes
fue similar al terico (400 500nm), este se puede se muestran a continuacin en la figura.
observar en la figura 1. OJO CAMBIAR ESTA IMAGEN POR LA DE
El grupo 2 utiliz como solvente el ter de petrleo, LOS DEMAS GRUPOS COLOCANDOLE QUE
en esta experiencia se obtuvo dos fracciones, la FASE SE USO PARA SEPARARLAS
primera de color amarillo y la segunda de color
rojizo, es de esperarse ya que el -carotenos sea el
primero que salga de la columna ya que l es un
componente apolar por lo que tiene cierta afinidad
con el ter de petrleo que tambin es apolar, en
este caso el licopeno sale en la fraccin 2 ya que
parte del compuesto queda retenido en la fase
estacionaria. Al visualizar la figura 1, se puede
observar que para la fraccin 1 se obtuvo un pico
con un mximo de 480 nm a una absorbancia de
0,155 y para la fraccin 2 se aprecia un pico con un
mximo de 460 nm aproximadamente con una
absorbancia de 0,05 y una porosidad de -----Grupo
de luis. Figura 1. Absorbancia VS longitud de onda

El grupo 3 utilizo como fase mvil 100% metanol,

al hacer pasar la fase mvil por la fase estacionaria
se pudo observar que no hubo separacin de los
pigmentos, debido a que fueron eluidos
simultneamente y esto concuerda con lo
anteriormente mencionado de que entre ms polar
sea el solvente, ms rpida es la elucin y el
movimiento de los compuestos, pero menos efectiva
la separacin debido a las interacciones que no
ocurren con respecto a la polaridad de los
compuestos (FALTA LA POROSIDAD y caudal).
El grupo 4 utilizo como fcil mvil diclorometano
en el cual segn observaciones no separo los
pigmentos correspondientes el cual pudo haber sido
segn la afinidad de los compuestos involucrados en
CONCLUSIONES
A partir de espectrofotometra UV-vis y
pruebas cualitativas, se logr establecer que los
carotenoides licopeno y beta caroteno es
aislaron satisfactoriamente del tomate y la
zanahoria.
El principio fundamental de la cromatografa
en columna es la eleccin del solvente que
interacciona con el analito, como se pudo
observar esta fase mvil logro o no la elucin
movimiento del -caroteno y licopeno en el
dependiendo de su afinidad polar o apolar.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Skoog, D.A., West D.M. (2001).

Qumica analtica (Sptima edicin).
Mxico: Mc Graw Hill.
Skoog, D.A., Holler J.F., y Nieman, T.A.
(2001). Principios de anlisis
instrumental (Quinta edicin).
Interamericana: Mc Graw Hill.

Muestra de Calculo

Calculo del caudal:

Volumen promedio

Tiempo promedio:

Parmetros de la columna