Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Qumicas

Qumica y Farmacia
Microbiologa II

Nombre: Mariana Escobar Quintana Curso: 6to Semestre

Docente: Qf. Celeste Carrillo MsC

ANLISIS MICROBIOLOGICO DE AGUAS DE CONSUMO N.M.P.

OBJETIVO
Determinar la calidad microbiolgica del agua de consumo de las marcas Familia,
Aquamar y Mi comisariato.

FUNDAMENTACIN TERICA

Los controles microbiolgicos rutinarios para determinar la potabilidad del agua (agua
exenta de microorganismos patgenos y sustancias qumicas peligrosas para la salud), se
basan en la bsqueda de microorganismos indicadores cuya presencia nos aporte
informacin sobre la posibilidad de encontrar microorganismos patgenos.
Los microorganismos indicadores son microorganismos que generalmente se encuentran
en la materia fecal del hombre y los animales, su presencia en el agua es una evidencia
de que el agua est contaminada con materia fecal de humanos u otros animales de sangre
caliente y por consiguiente con el microorganismo patgeno.
Entre los microorganismos indicadores de la calidad del agua se encuentran los
coliformes totales. Del grupo coliformes forman parte los coliformes fecales como
Escherichia coli, Enterobacter, KlebsiellaCitrobacter,entreotros. El microorganismo
utilizado como indicador es Escherichia coli y su deteccin se puede hacer mediante
pruebas sencillas como: cultivo en caldo lactosado y determinacin del nmero ms
probable (NMP) de coliformes totales y fecales o mediante filtracin en membrana
usando medios selectivos y diferenciales.

Materiales
Pipetas automticas
Tubos de vidrio
Campanas Durham
 Cajas petri
Puntas Bao de agua a 44.5 0,1C.
Incubadora a 35 2,0C
Horno esterilizador

Reactivos

Caldo lauryl sulfato

Caldo Bilis verde brillante.
Caldo EC
Agar EMB
Agua de peptona
Caldo RM VP
Agar SIM
Agar Urea
Agar Citrato de Simmons

PROCEDIMIENTO TOMA DE LA MUESTRA .-

La muestra debe ser recogida en condiciones de esterilidad, el recipiente debe ser plstico
o de vidrio, estril y de boca ancha. Los frascos ms adecuados son los de vidrio neutro
con tapn esmerilado o roscado, muy limpio y esterilizado en autoclave a 120C durante
treinta minutos o en horno de Pasteur a 180C durante dos horas. Tambin pueden
utilizarse frascos de material macromolecular con tapn roscado, esterilizados mediante
etileno xido, radiaciones gamma u otros sistemas adecuados. El tapn y el cuello del
frasco se protegern con una cubierta de papel, papel de aluminio u otro similar. El
volumen a tomar debe ser el adecuado
Para los anlisis que utilicen la tcnica del NMP se tomarn, como mnimo, 250 ml y para
los que empleen la de membranas filtrantes, como mnimo, 500 ml. La muestra debe ser
representativa en relacin con su lugar de procedencia. Las muestras se cerrarn
convenientemente de formas que quede garantizada su inviolabilidad. Rotulada con datos
como: lugar de procedencia, fecha de recoleccin, hora, temperatura, direccin, presencia
cercana de contaminantes: basureros, salidas de aguas negras, establos vertederos,
mtodos de purificacin si los hay, nombre del recolector Una vez tomada la muestra se
acondicionar de modo que quede en la oscuridad, debiendo remitirse cuanto antes al
laboratorio. Es conveniente iniciar el anlisis antes de que transcurran seis horas desde la
toma de la muestra.

PROCEDIMIENTO .- PRUEBA PRESUNTIVA

Todas las operaciones debern efectuarse en absolutas condiciones de Asepsia.

1. Agitar vigorosamente la muestra por lo menos 20 veces para lograr una distribucin
uniforme de los microorganismos.
2. Dependiendo del origen de la muestra y el contenido bacteriano esperado preparar
diluciones.
3. Para preparar las diluciones, con una pipeta estril tomar una alcuota de 1 mLde la
muestra original y llevarlo a uno de los tubos conteniendo 9ml de agua de peptona estril,
obteniendo de esta manera una dilucin de 10-1
4. Agitar el tubo de la dilucin 10-1y con otra pipeta estril tomar una alcuota de1 mL y
llevarlo a otro tubo con 9 mL de agua de dilucin estril para obtener una dilucin de 10-
2
5. Proceder de la misma manera hasta obtener una dilucin de 10-3 O hasta donde sea
necesario.
6. Inocular aspticamente con 1 mL de muestra por triplicado tubos de Fermentacin
conteniendo caldo lactosado o caldo lauryl triptosa, a partir de las ltimas 3 diluciones y
conservar todas las anteriores en refrigeracin por si se requieren su utilizacin posterior.
7. Incubar todos los tubos a una temperatura de 35 C durante 24horas.
8. Despus de 24 horas de incubacin efectuar una primera lectura para Observar si hay
tubos positivos, es decir, con produccin de cido, si el medio contiene un indicador de
pH, turbidez y produccin de gas en el interior de la campana Durham.
9. Al hacer esta verificacin es importante asegurarse que la produccin de gas sea
resultado de la fermentacin de la lactosa, en cuyo caso se Observar turbidez en el medio
de cultivo, y no confundir con burbujas de aire.
10. Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las Campanas Durham
antes de proceder a la inoculacin y desechar aquellos tubos cuyas Campanas contengan
burbujas de aire de alguna manera eliminar stas y as poder utilizarlos.
11. De los tubos que en la primera lectura den positivos, ya se pueden hacer las pruebas
confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales.
12. En caso de no apreciarse crecimiento en el resto de los tubos, continuarn en
incubacin 24 horas ms.
13. Despus de 48 horas (2h) a partir de la inoculacin, se hace la lectura final.
14. Si pasadas 48 h tampoco se aprecia crecimiento ni produccin de gas, los tubos se
toman como negativos.

INTERPRETACIN:

Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se da por terminado, reportando

la AUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la muestra
analizada.
Todos aquellos tubos que den POSITIVOS para prueba presuntiva se Anotarn
convenientemente y se proceder a realizar la PRUEBA CONFIRMATORIA para
Coliformes Totales y Fecales.

PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES TOTALES:

1. A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitndolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo Lactosa
Bilis Verde Brillante (LBVB).
2. Incubar durante 48 3 h a 35 0.5 C. 3. Despus de la incubacin observar la
presencia de turbidez y de gas.

INTERPRETACIN:

Si se observa turbidez y produccin de gas: La prueba se considera POSITIVA,

debiendo anotar el nmero de tubos positivos para Posteriormente hacer el clculo
del NMP.
Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se observe
turbidez: Se consideran NEGATIVOS, establecindose el Cdigo 0,0,0 para
efecto del clculo del NMP
 Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los grados de
dilucin analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis a partir de grados
de dilucin menores (mayores volmenes de muestra) mayores (menores
volmenes de muestra), respectivamente.

RESULTADOS

Prueba presuntiva (caldo Lauril sulfato)

Muestra AOAC 966 24 N de tubos

Agua Mi Comisariato Mtodo tradicional de Positivos:4
cultivo para recuento de
coliformes
Agua Aquamar Mtodo tradicional de Positivos: 4
cultivo para recuento de
coliformes

REPORTE
Prueba presuntiva (caldo lauril sulfato)
N.M.P N.M.P INEN
MUESTRA AOAC AOAC NTE INEN 2
AQUAMAR Mi 200.2008
Comisariato
AGUA 5.1 NMP/100 2,2 NMP/100 <1,8 NMP/100
ENVASADA ml ml ml
GRAFICOS

CONCLUSIONES
Se reporto que el agua (Aquamar) est dentro del rango de la norma INEN NTE 2 200
2008 a diferencia del agua Mi Comisariato no est en el rango dispuesto por la INEN
NTE 2 200 2008 mostrando la vida til del producto y que se encuentra en condiciones
no aptas para el consumo humano.

BIBLIOGRAFIA
Marquez, A. P. I., Davila, C. M. L., Ku-Pech, P., & Segovia, P. T. (1994). Calidad
sanitaria de los suministros de agua para consumo humano en Campeche. Salud
pblica de Mxico, 36(6), 655-661.
Marchand Pajares, E. O. (2002). Microorganismos indicadores de la calidad del
agua de consumo humano en Lima Metropolitana.