GOTA GRUESA

Qu es?
Es una tcnica de rutina y consiste en una muestra de una gota de
sangre conformada por numerosas capas en su mayora de glbulos
rojos, los que son deshemoglobinizados durante la coloracin con
giemsa. Esta concentracin de glbulos rojos facilita la deteccin de los
parsitos que pudieran estar presentes en su interior en densidades
bajas.

Para qu sirve?
La preparacin de gota gruesa es un tipo de tcnica que se utiliza para
el estudio de parasitosis en sangre, como las distintas especies de
Plasmodium, responsables de la Malaria o Paludismo, y para la
identificacin de distintas especies de Trypanosoma (T. gambiense y T.
rhodesiense, responsables de la enfermedad del sueo o
tripanosomiosis africana; T. cruzi, agente responsable de la enfermedad
de Chagas). El examen de gota gruesa es el mtodo diagnstico ms
ampliamente difundido para el diagnstico de la malaria y el
recomendado como primera opcin en el proceso diagnstico.

En qu Consiste?
La gota gruesa consiste en examinar al microscopio una gota de sangre
obtenido mediante puncin digital de un dedo de la mano o del pie,
sobre una lmina portaobjeto.
El examen microscpico permite identificar forma y caractersticas
parasitarias, es decir, citoplasma, cromatina y pigmento, y se deben
distinguir de los elementos de la sangre, de otros microorganismos
sanguneos y de microorganismos o artefactos que puedan estar
presentes en la lmina o en el colorante y presencia o ausencia de
granulaciones del glbulo rojo. Con el conjunto de hallazgos se logra
diagnosticar tanto el gnero Plamodium como las especies implicadas
en la infeccin y determinar los parsitos.

Realizado de forma adecuada, en la gota gruesa se puede observar la

morfologa de los parsitos, ya que son ms abundantes y tiene mayor
sensibilidad que el en extendido y que las pruebas rpidas. En el
laboratorio clnico se recomienda la utilizacin de ambas muestras en
una sola lmina.

MATERIALES NECESARIOS
2 portaobjetos.

Microscopio ptico.

Muestra sangunea

Colorante Giemsa al 3% en agua destilada.

DESARROLLO DE LA PRCTICA
Obtener la muestra
Colocar una gota de la muestra, con ayuda de una pipeta
pasteur, en el centro de un portaobjetos.
A la derecha de esta, colocar tres gotas un poco ms grandes,
aproximadamente a 1cm de distancia de la gota central.

Realizamos una extensin con la gota central, con ayuda de

otro portaobjetos.

Con una esquina del portaobjetos extensor, mezclamos las tres

gotas de sangre restantes, de manera que formen una capa
gruesa uniforme.
 Cuando la extensin est seca la fijamos con metanol,
dejndola actuar durante aproximadamente un minuto.
Una vez fijada la extensin, dejamos secar la muestra hasta el
da siguiente, pues la gota gruesa necesita 24 horas para su
procesado.
Una vez transcurridas las 24 horas, colocamos un puente de
tincin sobre un cristalizador, ponemos los portas con las
muestras encima y aadimos Giemsa al 3%, el cual dejamos
actuar de 30 a 45 minutos.

Para finalizar, desechamos el exceso de colorante y retiramos con

ayuda de agua destilada el que quede por encima de la
preparacin. Lavamos hasta que deje de salir agua con colorante.
El porta se deja secar de forma vertical y listo para el estudio
microscpico.

VALORES NORMALES
El resultado debera ser negativo. Cuando no lo es, se vuelve a realizar
la prueba y/o realizar otro tipo de examen para comprobar si es positivo
o fue un error del tcnico.
DESCRIPCIN DE GOTA GRUESA Y FROTIS
GOTA GRUESA
Una vez obtenida la muestra, realizar la gota gruesa de la siguiente
manera: utilizando uno de los ngulos de una segunda lmina (lmina
auxiliar) esparcir rpidamente la gota de sangre y extenderla
uniformemente hasta formar una gota gruesa de 1 cm de lado o de
dimetro. La sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente
con 3 a 6 movimientos. De preferencia, realizar el homogeneizado de
la muestra en una sola direccin, en forma concntrica (de adentro
hacia fuera o viceversa).
FROTIS
Utilizando la misma lmina auxiliar, ponerla en contacto con la
superficie de la lmina que contiene la gota central y hacerla correr
firmemente a lo largo de su borde en un ngulo de 45. Asegrese de
que ocurra un contacto parejo con la superficie de la lmina todo el
tiempo que la sangre est siendo esparcida, de tal manera que el frotis
sea homogneo y fino. Siempre manipular las lminas por los bordes o
por una esquina para realizar el frotis.
- Luego de haber secado el frotis, rotular con lpiz de carbn
suave, escribiendo en la parte ms gruesa el cdigo, nmero y
fecha de la muestra. No utilizar bolgrafo para etiquetar la lmina.
Dejar secar la lmina con la gota gruesa en una superficie plana
y protegida de polvo, calor e insectos.
- El frotis se usa como herramienta auxiliar para discriminar entre las
diferentes especies.

SECADO DE LAS MUESTRAS HEMTICAS

- Las lminas con las muestras de sangre deben permanecer
horizontalmente, lo que va a permitir que la gota gruesa est en
un mismo nivel y seque uniformemente.
- En climas hmedos y clidos, la autofijacin de las muestras
ocurre muy rpidamente, por lo tanto deben ser coloreadas
cuanto antes, a ms tardar en un plazo no mayor de tres das
luego de su coleccin.
- .
ERRORES COMUNES EN LA PREPARACIN DE MUESTRAS
HEMTICAS
La preparacin incorrecta de la muestra hemtica puede afectar el
etiquetado, la coloracin o el examen y, a veces, ms de uno de estos.
Las fallas ms comunes que deben evitar cometerse son:
Mala posicin de las muestras de sangre
Las pelculas de sangre debern estar situadas correctamente en la
lmina. Si no es as, puede dificultar el examen de gota gruesa;
incluso porciones de la muestra pueden ser lavadas durante el
proceso de coloracin.

Mucha sangre
Si se obtiene demasiada sangre al colectar la gota gruesa, entonces la
coloracin puede quedar muy bsica (azul), significando que se
observarn muchas clulas blancas por campo pudiendo estas
oscurecer o cubrir algunos parsitos de malaria que pueden estar
presentes. Si el extendido es demasiado grueso, los glbulos rojos
pueden estar unos encima de otros imposibilitando el examen
adecuado despus de la fijacin.

Poca sangre
Si se emplea poca sangre en la preparacin de las muestras, no habr
suficientes clulas blancas por campo y no se examinar suficiente
cantidad de

Lmina con grasa

En una lmina sin desengrasar, la sangre se esparcir irregularmente,
lo que har difcil el examen; por otro lado, parte de la gota gruesa en
algunos casos puede desprenderse durante el proceso de coloracin.
Si el borde de la lmina extensora es irregular

Cuando el borde de la lmina empleada como extensora est astillada,

el frotis es esparcido irregularmente, afectndose la calidad del frotis.
El frotis demasiado grande y la gota gruesa mal ubicada

Si el frotis es demasiado grande, la gota gruesa estar fuera de lugar,

cerca al borde de la lmina, entonces no podr ser visto fcilmente a
travs del microscopio. Durante el proceso de coloracin o secado
porciones de la gota gruesa probablemente pueden ser desprendidas.
PARASITOS MAS COMUNES

Toxoplasma gondii Trypanosoma cruzi

Leishmania spp. Microfilarie Plasmodium spp.

 Prctica n10. Preparacin de gota gruesa | prcticas de manual de
procedimientos de laboratorio
Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de malaria,
Serie de normas tcnicas N 39Lima 2003 pag. 12 -14 PDF