INFORME PRCTICA: TRANSFERENCIA DE OXGENO EN

PROCESOS FERMENTATIVOS.

Cindy Yurani Correa Villa1, Iowel Montoya Valencia2, Mara Susana Prez
Grisales3, David Eduardo Tibaduiza Garca4 & Ana Mara Valencia Palacios5

Universidad Nacional de Colombia- Sede Medelln

cycorreav@unal.edu.co1, imontoyav@unal.edu.co2,
masperezgr@unal.edu.co3, detibaduizag@unal.edu.co4, Commented [1]: nosotros ya tenemos organizado el
informe en doble columna solo haria falta lo de uds
anmvalenciapa@unal.edu.co5

Resumen: Los bioprocesos en su gran mayora son desarrollados en condiciones aerbicas, por esta
razn es de suma importancia el estudio de la demanda de oxgeno de los microorganismos y cmo
debe darse la transferencia de oxgeno en el medio de cultivo, lo cual se determina por el coeficiente
volumtrico de transferencia de oxgeno k La. Con el fin de determinar el coeficiente se utiliz un
mtodo indirecto (oxidacin de sulfito) y un mtodo directo (mtodo dinmico). Los resultados
obtenidos fueron kLa en el mtodo indirecto: s-1 en el medio de ml y kLa para el mtodo directo: s-1.
Se infiere entonces de acuerdo a los resultados obtenidos que el k La se ve afectado por factores como
agitacin, turbulencia y volumen, y el mtodo ms exacto y adecuado para determinar este parmetro
es el mtodo dinmico puesto que este a diferencia del mtodo indirecto, tiene en cuenta los
requerimientos de los microorganismos en el bioproceso.

Palabras clave: Coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno ( kLa), demanda de oxgeno, oxidacin de
sulfito, mtodo dinmico.

1. INTRODUCCIN.

En los procesos biotecnolgicos a escala industrial se utilizan caldos de cultivo (medios de cultivo en
estado acuoso) compuestos por fuente de carbono y energa, fuente de nitrgeno, sustancias orgnicas
como vitaminas y sustancias inorgnicas como sales. Adems de estos compuestos la aerobiosis se
convierte en un factor fundamental para el desarrollo del bioproceso, por ello el oxgeno se convierte
en un sustrato esencial utilizado por los microorganismos para su crecimiento, mantenimiento y
produccin de metabolitos.

Es claro entonces que para un bioproceso a escala industrial es necesario adems de la seleccin, el
diseo y escalado de los biorreactores, un estudio preliminar que determine el requerimiento de
oxgeno en el medio de cultivo, puesto que la escasez de este afecta el rendimiento del proceso. Por
ende es indispensable garantizar una entrada y distribucin adecuada de oxgeno al medio de cultivo y
es preciso entonces estimar la tasa de transferencia de oxgeno (OTR: Oxygen Transfer Rate) en
diferentes escalas y a diferentes condiciones de operacin. (Garca F, Gmez E, 2009)
La demanda de oxgeno de un microorganismo est parametrizada por la OTR, la cual se calcula por
medio del coeficiente de transferencia de oxgeno, ms conocido como kLa (siendo kL el coeficiente de
transferencia de masa de la fase lquida, y a el rea superficial especfica total disponible para la
transferencia de masa, dado que kL y a no se pueden medir fcilmente de forma individual, por lo
general son agrupados juntos como un nico parmetro) y el gradiente de concentraciones entre la
interfase y la fase lquida, que en sntesis son la fuerza motriz en trminos de concentraciones.

A lo largo de los aos se han desarrollado numerosas correlaciones empricas y tcnicas

experimentales para la determinacin del coeficiente kLa, que pueden dividirse en 2 tipos de mtodos:
indirectos y directos. Los mtodos indirectos no se utiliza biomasa, sino que se realiza una simulacin
del proceso real mediante agentes y tecnicas analiticas quimicas, entre los ms utilizados se encuentra
el mtodo de oxidacin de sulfito de sodio y el metodo de eliminacion de gases. y mtodos directos.
Los mtodos directos utilizan biomasa por ello son ms exactos, el ms conocido es el mtodo
dinmico (Garca F, Gmez E, 2010).

Experimentalmente se llev a cabo como mtodo indirecto, el mtodo de oxidacin del sulfito y como
mtodo directo, el mtodo dinmico. En el mtodo de de oxidacin del sulfito se simula la condicin
fermentativa mediante el uso del sulfito de sodio, un reactivo que en medio ligeramente alcalino
reacciona rpidamente con el oxgeno en presencia de un catalizador Cu 2+ o Co2+. Aunque este
mtodo ha sido ampliamente utilizado por ser bastante ejemplificante, los resultados dependen de las
condiciones de operacin y de la rapidez con que se realice, por lo cual se generalmente obtienen
valores de kLa mayores que otras tcnicas, por lo que en la industria su aplicacin se ha ido
reduciendo (Doran, P. 1998). El mtodo dinmico consiste luego de medir la actividad respiratoria
con que crecen activamente los microorganismos, se detiene la inyeccin de oxgeno hasta llegar a no
menos del 10% de dicha actividad (concentracin) atribuyendo la disminucin de la concentracin de
oxgeno en el biorreactor a su consumo por el microorganismo y inmediatamente cada 10 segundos
por 4 minutos se toma dato de concentracin de oxgeno disuelto a fin de obtener puntos que permitan
un anlisis grfico cuya pendiente refleja el valor kLa (Laboratorio de procesos biolgicos, 2017).

El objetivo del presente trabajo es medir el k La por el mtodo de oxidacin de sulfito y por el mtodo
dinmico, variando condiciones como volumen, agitacin y turbulencia, para conocer el impacto que
tienen estos factores sobre la transferencia de oxgeno.

2. MARCO TERICO.

En las fermentaciones aerbicas, el oxgeno es un sustrato crtico que necesita ser continuamente
alimentado, debido a su baja solubilidad en el agua este puede llegar a ser un limitante en la velocidad
de reaccin (Garcia Ochoa and Gmez,2009). El oxgeno, es un gas que a temperatura ambiente se
dispersa en una masa lquida a travs de la interfase gas-lquido. Este concepto de la pelcula doble,
compuesta de una pelcula fina de gas y una pelcula de lquido en la interfase, fue desarrollado por
Lewis y Whitman (Lewis & Hitman, 1924), originalmente para un fenmeno de transferencia en
Estado de equilibrio continuo- Este estado est caracterizado por un flujo continuo e invariable de
todos los componentes del sistema, de modo que las concentraciones son constantes con el tiempo y
adems se mantienen constantes las condiciones ambientales de presin y temperatura. Bajo estas
limitaciones la transferencia de oxgeno en el agua puede expresarse como:

NO2 = KLa (Cs - Cl ) x 10 -3 (1)

N = Masa de oxgeno transferido [kgO2/h]

KL = Coeficiente de difusin de oxgeno en la pelcula lquida [m/h]
a = rea interfacial [m2]
Cs = Concentracin de saturacin del gas en el lquido [mg/L]
Cl = Concentracin de oxgeno en el lquido [mg/L]

La ecuacin anterior tiene una gran limitacin en su aplicacin, pues excluye una variacin de
concentracin de oxgeno en la interfaz lquida, lo cual en la prctica es imposible. Estudios
posteriores (Higbee, 1935) describieron el fenmeno en condiciones de equilibrio discontinuo. En
este estado est caracterizado porque las concentraciones del gas en cualquier punto del sistema
cambian con el tiempo. Este cambio puede ser el resultado de cambios en la concentracin de oxgeno
en el aire, su flujo, o cambios en las condiciones ambientales de presin y temperatura (Ynez, n.d.)

Para el estudio de un problema de transferencia de masa, son importantes las condiciones de la

interfase. Con excepcin a los casos de transferencia extremadamente intensos o de acumlacin de
particulas slidas en la interfase la experiencia muestra que existe equilibrio entre las fases a travs de
la interfase. Es decir, si una burbuja de aire se mueve en un lquido en una fermentacin, el oxgeno
debe pasar desde el interior de la burbuja hacia el lquido para ser consumida por las clulas. En otras
palabras, la concentracin de oxgeno en el gas, junto a la interfase, est en equilibrio con la
concentracin de oxgeno en el lquido, tambin junto con la interfase.(Erazo & Crdenas, 2001)

La eficiencia en la aireacin de un sistema fermentativo depende de la solubilidad del oxgeno, la

velocidad de difusin en los medios de cultivo, la demanda de oxgeno del cultivo y la capacidad del
biorreactor de satisfacer dicha demanda en la poblacin microbiana. La concentracin de oxgeno
disuelto en los medios de cultivo depende de la velocidad de consumo (oxygen uptake rate, OUR) de
las clulas y de la velocidad de transferencia del mismo (oxygen transfer rate, OTR). La OTR depende
del coeficiente de transferencia de oxgeno kLa y del gradiente entre la concentracin de equilibrio y la
concentracin actual en el lquido, e incide sobre los ndices de productividad y los rendimientos.
(Soler & Buitrago, 2010)

El kLa depende de una gran cantidad de factores uno de estos es la velocidad de agitacin (Alves et al.
2010) la cual modifica el rgimen de turbulencia y disminuye el tamao de burbuja. Sin embargo, el
consumo de energa es proporcional a la velocidad a la tercera potencia y al dimetro del agitador a la
quinta, incidiendo en el costo de operacin. Adicionalmente, debe tenerse en cuenta que altas
velocidades de agitacin tienen una influencia negativa en la productividad de complejos enzimticos,
debido al efecto de los esfuerzos de corte sobre el cultivo . Otros factores que afectan la transferencia
de oxgeno son las caractersticas geomtricas y operacionales de los recipientes de fermentacin, la
composicin del medio de cultivo, la viscosidad, la tensin superficial, la concentracin de oxgeno en
la corriente de gas, la morfologa del microorganismo y el rea superficial que proveen las
burbujas.(Soler & Buitrago, 2010) adems, la concentracin de microorganismo as como las
propiedades de biocatalizador son tambin factores que influyen en el kLa. (Michelin et al.2013)

Es de suma importancia siempre realizar en un balance de masa del oxgeno en estado estacionario, en
el cual se mide el contenido de oxgeno de las corrientes hacia o desde el fermentador, para
determinar como ser el comportamiento dinmico con respecto a la transferencia. Como el proceso
se desarrolla en estado estacionario se obtiene que la diferencia entre el flujo de entrada y el flujo de
salida del oxgeno debe ser igual a la velocidad de transferencia de oxgeno desde el gas hacia el
lquido:
 (2)

VL= Volumen del lquido en el fermentador [L]

Fg= Caudal volumtrico de gas.[L/h]
CAG = Concentracin de oxgeno en fase de gas.[g/L]
i y o= subndices, se refieren a las corrientes de entrada y salida respectivamente.

Dado que la concentracin de gas se mide generalmente como presin parcial, puede incorporarse la
ley de los gases ideales con lo cual se obtiene la siguiente expresin:

(3)

R= Constante universal de los gases

PAG= Presin parcial de oxgeno en el gas
T= Temperatura absoluta

Las presiones parciales de oxgeno en las corrientes de entrada y de salida no suelen ser muy
diferentes durante la operacin por lo que es necesario medirlas con una gran precisin, por ejemplo,
utilizando un espectrmetro de masas. La temperatura y el caudal de gases tambin deben ser medidos
con cuidado para asegurar un valor preciso de NA. Esto es sumamente til en algunos de los mtodos
empleados para la determinacin de kLa.

2.1 Mtodos de determinacin de k La.

Para determinar kLa existen varios mtodos que se dividen en dos grupos:

- Mtodos indirectos: Uso de tcnicas fisicoqumicas que simulan el proceso real dado que no
hay presencia de biomasa en estos. Estos mtodos pueden dar valores ms altos que los reales,
debido a que la velocidad de absorcin se ve favorecida por las reacciones qumicas, las
cuales consumen el oxgeno en la fase lquida rpidamente.

- Mtodos directos: Condiciones reales de un bioproceso. Tienen en cuenta la demanda de

oxgeno del microorganismo ya que hay presencia de biomasa.

2.1.1 Mtodos indirectos.

2.1.1.1 Mtodo de gassing out estatico.

Mtodo de gassing out estatico o el mtodo de eliminacin de gas consiste en medir la velocidad de
incremento de la concentracin de oxgeno disuelto en el medio; se reduce esta concentracin hasta
valores cercanos a cero, haciendo pasar un gas inerte (suele ser nitrgeno gaseoso) por el sistema
durante al menos 20 min. Se suspende el flujo de nitrgeno, se reinicia la aireacin a las condiciones
de operacin establecidas (velocidad de agitacin y velocidad de aireacin) y se se mide con una
sonda polarogrfica el incremento en O2 disuelto de un medio de cultivo. Este mtodo presenta como
ventaja que puede aplicarse para diferentes medios de cultivo y los resultados corresponden a
condiciones en que no hay consumo de oxgeno. A escala industrial se requieren grandes cantidades
de N2 para eliminar todo el oxgeno y el tiempo de respuesta del electrodo puede introducir errores.
(Patel N., Thibault J., 2009)

2.1.1.2 Metodo de oxidacion de sulfito

El mtodo de oxidacin de sulfito tambin conocido como mtodo de Cooper, mide la velocidad de
oxidacin del sulfito a sulfato, siendo anlogo a la transferencia de oxgeno en microorganismos, este
mtodo es lento, no considera la reologa del medio y suele dar valores sobreestimados aunque su
elaboracin es fcil y no necesita de equipos costosos.(Patel N., Thibault J., 2009)

La ecuacin estequiomtrica que representa a la reaccin que ocurre entre sulfito y O 2 es la siguiente:

(4)

Para que la reaccin se realiza correctamente es indispensable que la solucin del sulfito este a un pH
ligeramente alcalino y se requiere la presencia de un catalizador que puede ser una pequea alcuota
de una solucin de Cu2+ o Co2+. La velocidad de la reaccin puede representarse segn la ecuacin:

(5)

Donde k es la constante de velocidad y m y n son coeficientes que deben determinarse

experimentalmente y representan al orden de la reaccin para sulfito y oxgeno respectivamente. Las
ecuaciones que representan al balance de materia para el O2 y Na2SO3 son las siguientes:

(6)

(7)

Donde VL es el volumen del reactor, CA y CB son las concentraciones de O2 disuelto y sulfito en el

medio, CAF y CBF son las concentraciones de O2 y sulfito en la alimentacin, Q es el caudal de
alimentacin, Cuando se alcanza el estado estacionario el trmino de consumo qumico puede
eliminarse de las ecuaciones anteriores sustrayendo, as se obtiene la ecuacin que permite calcular el
kLa:

(8)
En las condiciones de operacin, la concentracin remanente de sulfito en el medio, la concentracin
de O2 en la alimentacin y en el reactor son despreciable frente a la concentracin de sulfito en la
alimentacin con lo que la ecuacin puede reducirse a:

(9)

Una diferencia operacional importante entre este mtodo y el tradicional de Cooper es que en el
original la concentracin elevada de sulfito mantiene relativamente constante el pH.

El procedimiento experimental consiste en llenar el biorreactor con un volumen determinado de

solucin estndar de sulfito de sodio (Na2SO3), al cual se le adiciona una solucin que contiene Cu+2,
llevar el experimento a las condiciones de agitacin y temperatura deseadas. A intervalos de tiempo
regulares tomar volmenes conocidos de muestra. Cada muestra se mezcla con una solucin estndar
de yodo en exceso, y finalmente esta solucin se titula con una solucin estndar tiosulfato de sodio
(Na2S2O3), usando solucin de almidn como indicador del punto final (colorimetra). Las reacciones
que ocurren el el proceso son:

SO3 -2 + I2 + H2O SO4-2 + 2 I- + 2 H+ (10)

2 S2O3 -2 + I2 S4O6-2 + 2 I - (11)

El yodo tiene una baja solubilidad en agua, sin embargo el complejo triyoduro (I3-) es muy soluble, de
modo que las soluciones de yodo se preparan disolviendo I2 en una solucin concentrada de yoduro
de potasio KI, as que es realmente el triyoduro la especie que se usa en la titulacin.

2.1.2 Mtodos directos

2.1.2.1 Mtodo de gassing out dinamico.

Tambin conocido solamente como mtodo dinmico, en este se miden de los niveles de O 2 en
cultivos que estn creciendo en el fermentador, este mtodo puede determinar el k La durante una
fermentacin real y es muy rpido aunque requiere de un sensor muy rpido y preciso el cual suele ser
costoso, trabaja en un rango limitado de concentraciones de O2 pues el nivel no puede caer por debajo
de una concentracin crtica y es difcil de aplicar en fermentaciones con alta demanda de O2. Este
mtodo consiste en detener de forma temporal el flujo de gas (oxgeno puro o aire dependiendo del
requerimiento) en el biorreactor para eliminar la adicin de oxgeno al caldo lquido de tal manera
que la disminucin de la concentracin de oxgeno en el biorreactor puede ser atribuida enteramente a
su consumo por el microorganismo.

La medicin se divide en dos secciones como puede observarse en la figura 1.

 Figura 1. Grfica representativa del mtodo dinmico.

Primero se mide la actividad respiratoria de microorganismos que crecen activamente en biorreactor

en un caldo de cultivo adecuado. Se suspende la aireacin hasta que la concentracin de oxgeno
disuelto llegue cerca de su valor crtico (oxgeno suficiente para utilizacin en el mantenimiento de
los microorganismos). Antes de que la OD alcance su valor crtico, el aire se introduce nuevamente en
el biorreactor y suponiendo que la reoxigenacin del caldo es suficientemente rpida para permitir el
crecimiento de las clulas, el nivel de OD alcanzar un valor de estado estacionario que refleja un
balance entre el suministro de oxgeno y el consumo existente. Este mtodo permite la determinacin
del kLa a travs del anlisis grfico y la ecuacin caracterstica del mismo que permite relacionar la
concentracin y el cambio de esta en el tiempo (velocidad de transferencia de oxgeno) mediante la
ecuacin (Taguchi H, 1966):

(12)

3. ANTECEDENTES

4. METODOLOGA

4.1. Mtodo indirecto: Oxidacin del sulfito de sodio.

Se realizaron cinco experimentos en Erlenmeyer con sulfito de sodio para la determinacin

de la transferencia de oxgeno, donde se vari el volumen del medio de trabajo con respecto
al volumen del matraz. Slo un Erlenmeyer inclua deflectores y las condiciones de
temperatura y agitacin fueron de 30C y 200 rpm respectivamente, para todos los
experimentos. A continuacin en la Tabla 2., se presenta en detalle la informacin.

Tabla 2. Experimentos para la determinacin de la transferencia de oxgeno por el mtodo indirecto:

oxidacin del sulfito
Experimentos: Mtodo Oxidacin del Sulfito
 Experimento Volumen del Volumen Deflectores
Erlenmeyer medio sin
(mL) clulas (mL)
(Na2SO3 0.5 N)

1 1000 100 No

2 1000 200 No

3 1000 400 No

4 250 250 No

5 250 100 Si

Se adicion el sulfito de sodio en las proporciones descritas por la Tabla X. Se desea que el
Na2SO3 en exceso reacciona con el oxgeno en presencia de Co2+ o Cu2+ como catalizadores
produciendo sulfato de sodio, como se muestra a continuacin segn la ecuacin (13). Para
ello se toma un volumen de la solucin catalizadora sulfato de cobre (CuSO4) 1M que es
adicionado al medio de cultivo con fin de obtener una concentracin final de 1 x 10-3M. En
particular, para el primer experimento se agreg al medio 0,1 mL de una solucin de cobre
1M.

(13)

Cabe agregar, que la velocidad de reaccin que se presenta en la ecuacin (13) est
influenciada considerablemente por el pH. En particular, se estableci para esta prctica un
pH ligeramente alcalino (pH igual a 8).

4.1.1 Toma de muestras.

Inmediatamente se adiciono el catalizador en el Erlenmeyer, se comenz a contabilizar el

tiempo. Se extrajo una alcuota de 2 mL cada 20 minuto, para determinar la evolucin del
consumo de oxgeno por parte del Na2SO3. Como esta sustancia se encuentra en exceso, lo
que no reacciona se le adiciona rpidamente 3 mL de una solucin de yodo en exceso 0,5 N,
con el fin de detener la reaccin de oxidacin del sulfito de sodio. Dicha reaccin en
presencia de yodo se muestra a continuacin acorde con la ecuacin (14).

(14)

El exceso de I2 se determina mediante la titulacin con tiosulfato de sodio 0,075 N, el cual

reacciona con el yodo residual. Para esto es necesario hacer uso de un indicador, por lo que se
emple 2 o 3 gotas de almidn (1%). El almidn es adicionado hacia el final de la titulacin,
oscureciendo notablemente el color de la misma, la cual en principio (antes de adicionar el
indicador) era amarillo claro. Finalmente, la titulacin se contina hasta que la solucin se
torna transparente. La reaccin que ocurre se describe a continuacin segn la ecuacin (15).

(15)

Cada experimento se llev a cabo por duplicado y se tomaron un total de cinco muestras cada
20 minutos.

4.1.2 . Determinacin de la concentracin de oxgeno

Para la determinacin de oxgeno se realiza por el mtodo de volumetra mediante retroceso,

es decir, la obtencin de la concentracin de g/L O2 tuvo el siguiente tratamiento matemtico
basado en las relaciones estequiomtricas de la ecuacin 13,14 y 15.

Moles de Yodo (I2)y Moles de tiosulfato de sodio (Na2S2O3)presentes

El yodo participa en las reacciones Segn las ecuaciones 2 y 3. El yodo inicialmente se

adiciona en exceso (I2exc) en la reaccin 14, y la parte de yodo que no reacciona (I2Res) es
identificada por volumetra tiosulfato de sodio (Na2S2O3) en la reaccin 15:

Ecuacin 15

Donde

Concentracin Molar del tiosulfato de sodio

Volumen gastado de tiosulfato de sodio en la titulacin

Ecuacin 14

Despejando de la ecuacin 16

Reemplazando las ecuaciones 20 y 17 en 19

Concentracin de Oxigeno (O2) disueltos en el medio para oxidar el sulfito de sodio

De la ecuacin 13 se tiene que reaccionan con 1, es decir,

Despejando de la ecuacin18

Reemplazando 23 en 21
 Remplazando 24 en 22

Luego

Donde

=concentracin de oxgeno en g/L

=volumen de sulfato de sodio en L

=concentracin molar de sulfato de sodio

=concentracin molar de yodo

=volumen de yodo adicionado en la muestra en L

Volumen de muestra en L, tomado en cada 20 minutos

4.2. Mtodo directo: Mtodo gassing out dinmico.

Se utiliz tambin el mtodo dinmico para la determinacin del coeficiente volumtrico de

transferencia de oxgeno. Inicialmente se inocul el biorreactor con una levadura comercial
Saccharomyces cerevisiae en presencia de un medio de cultivo apropiado y se llev a cabo la
respectiva calibracin del electrodo de oxgeno con base en las condiciones de operacin del
biorreactor (temperatura, aireacin y agitacin).
Una vez la concentracin de oxgeno disuelto (OD) era estable, se inici el experimento
suspendiendo la aireacin y sustituyendo el aire por nitrgeno gaseoso hasta al alcanzar una
concentracin de OD crtica tal que el sistema no fuera anaerobio, es decir, la concentracin
de OD descendi a una concentracin crtica no inferior al 10% del valor de saturacin. A
partir de ese momento, se suspendi la entrada de nitrgeno, se suministr de nuevo aire y se
tom registro del oxgeno disuelto cada 10 segundos hasta alcanzar de nuevo la saturacin.

5. RESULTADOS

5.1 Mtodo indirecto: Oxidacin de sulfito de sodio

En la tabla XX se organizan los datos obtenidos en el anlisis titulomtrico con tiosulfato de

sodio para cada muestra tomada del medio de cultivo de 100 mL por cada 20 minutos.

TablaXX. Volumen gastado en la titulacin con tiosulfato de sodio con respecto al tiempo de
muestreo en el experimento 1.
 Volumen titulacin con tiosulfato de sodio en L

Tiempo Muestra 1 Muestra 2

20 0,0145 0,014

40 0,017 0,0202

60 0,0235 0,025

80 0,028 0,0265

100 0,0312 0,0293

Los datos de la tabla XX se construye la grfica 1 para visualizar el comportamiento con el

tiempo del volumen de tiosulfato requerido por las muestras.

Grfica XX. Evolucin de volumen de tiosulfato de sodio utilizado con respecto al tiempo en
el experimento 1.

Con base a estos valores se procedi determinar la concentracin de oxigeno presente en el

experimento 1 aplicando la ecuacin 26 planteada en la metodologa (Tabla ZZ), para ello
tambin se utiliza los datos de la tabla YY que resume los valores de concentracin de
tiosulfato de sodio, sulfito de sodio y yodo empleados en el anlisis volumtrico.

Tabla YY. Concentraciones de las soluciones utilizadas en el mtodo indirecto

Datos Sulfito de sodio Yodo Tiosulfato de

sodio

Volumen (L) 0,002 0,003 -

Concentracin Inicial [N] 0,5 0,5 0,075

Tabla ZZ. Concentracin de Oxgeno en mol/L por cada 20 minutos de muestreo en el

experimento 1.

Tiempo Muestra 1 Muestra 2

20 0,0000109 0,0000062

40 0,0000344 0,0000644

60 0,0000953 0,0001094
 80 0,0001375 0,0001234

100 0,0001675 0,0001497

Los resultados de la concentracin de oxigeno obtenidos en la tabla ZZ se modela su

comportamiento con el tiempo representado en la grfica ZZ.

Grfica ZZ. Comportamiento de la concentracin de oxigeno con respecto al tiempo en el

experimento 1

Los valores de las pendientes () obtenidas en la grfica XX estn relacionados con del
coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno (), esto es gracias a la cuantificacin
mediante titulacin volumtrica por retroceso, como se menciona en la metodologa, el cual
es determinada por las series de reacciones 13,14 y 15

Para la determinacin del coeficiente KLa se realiza el siguiente clculo:

Dado que en el medio se da un rpido consumo de oxigeno por parte del tiosufito, se tiene
que:

Dnde: = 0,00025 es la solubilidad del oxgeno en agua a 25 C. y presin de 1 atm.

Por lo tanto,

5.2 Mtodo dinmico

A travs del sistema de control del biorreactor se obtienen mediciones directas de oxgeno disuelto en
el tiempo (cada 10 segundos durante 4 minutos). Con la informacin obtenida se lleva a cabo la
construccin de la grfica P, la cual nos da una idea de la dinmica del proceso.
 Grfica P. Mtodo dinmico directo: Porcentaje de oxgeno disuelto contra el tiempo [s].

Como se est trabajando con oxgeno disuelto (OD), para realizar los clculos se debe tener en cuenta
la ecuacin (12) y la relacin existente entre el CAL y el OD.

(16)

Siendo b una constante de proporcionalidad que depende de la presin, temperatura y composicin del
gas de entrada y de la composicin y temperatura del medio de cultivo, sin embargo despreciando este
hecho, podemos ver que CAL y el OD son proporcionales y por ende obtenemos la siguiente ecuacin:

(17)

Mediante el uso de la linealizacin de la curva obtenida en la grfica P , se obtiene una nueva grfica
que expresa la velocidad de transferencia del oxgeno disuelto con respecto %OD como se observa en
la grfica O, y por medio de la ecuacin caracterstica de esta lnea conocemos el valor numrico del
kLa.
 Grfica O. Linealizacin de la variacin del oxgeno disuelto con respecto al tiempo contra el porcentaje de
oxgeno disuelto.

La ecuacin de la curva de tendencia lineal asociada a la grfica O es la siguiente:

y = -0.0202x + 1.0984 (18)

Donde y es dOD/dt y x es %OD en el medio.

A partir de esta ecuacin y sabiendo que independientemente la naturaleza negativa de la

grfica O puede aplicarse valor absoluto a la pendiente, se obtiene para el mtodo dinmico
de kLa = 0,0202 s-1.

6. ANLISIS DE RESULTADOS.

6.1. Determinacin del coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno por el

mtodo Iodomtrico

La velocidad de reaccin entre el sulfito de sodio y el oxgeno es lo bastante rpida de

manera que todo el oxgeno que entra en la solucin es inmediatamente consumido. Dicho
esto, el sulfito de sodio es equivalente a la velocidad de transferencia de oxgeno, donde la
etapa controlante del proceso ser la transferencia de materia entre la interfase gas-lquido.
En consecuencia como se podra anticipar, a medida que transcurre el tiempo el volumen de
tiosulfato de sodio empleado en la titulacin aumenta, en virtud de una mayor cantidad de
yodo y por tanto de una mayor cantidad de sulfito de sodio que ha reaccionado con el
oxgeno.
Dicho mtodo proporciona una estimacin del coeficiente volumtrico de transferencia de
masa que debe ser mayor en comparacin con el determinado por otros mtodos, puesto que
el proceso se realiza en ausencia de clulas y no se tiene en cuenta las caractersticas
reolgicas asociadas al medio de cultivo real. Cabe resaltar adems, que la velocidad a la que
las clulas consumen oxgeno en los fermentadores determina la velocidad a la que el
oxgeno debe transferirse al medio de cultivo, por lo que la demanda de oxgeno depender
de la bioqumica de cada tipo de microorganismo. No obstante, el anlisis de la transferencia
de oxgeno a escala de matraz, permite proponer las condiciones de operacin del biorreactor
cuando se pretende escalar el proceso; empleando como criterio de escalado el coeficiente de
transferencia de oxgeno, en aquellos cultivos aerbicos donde la concentracin de oxgeno
disuelto es un factor clave.
Por otro lado, la oxidacin del sulfito de sodio en presencia de oxgeno, es una reaccin lo
bastante sensible a las condiciones de operacin, lo que inherentemente hay una imprecisin
asociada a la determinacin del KLa. En otras palabras, factores como el pH, la temperatura y
la concentracin de catalizador pueden afectar considerablemente el coeficiente cintico de la
reaccin. En particular, en estudios previos se ha observado que a valores de pH ligeramente
alcalinos se da una mayor absorcin del oxgeno. Para esta prctica, se estableci
inicialmente el pH de la solucin en 8, sin embargo, a medida que transcurre la reaccin hacia
la formacin de productos, pueden haber cambios de pH que a larga afectan la velocidad de
reaccin entre el sulfito de sodio y el oxgeno (Linek, Moucha, & Korda, 2005; Rubio,
Grima, Sanz, & Peral, 1983).
6.2 Mtodo dinmico.

Mediante este mtodo se pudo determinar un incremento en la velocidad de transferencia de

concentracin de oxgeno en el medio, presentando una variacin desde 15,4% hasta 54,6% en 4
minutos. Se observ que al burbujear un gas inerte como el nitrgeno se elimina eficazmente el
oxgeno en el medio, puesto que redujo la concentracin inicial del mismo desde 54,6,% hasta 15,4%
en menos de 1 minuto, un valor aproximado a la concentracin crtica de oxgeno. La razn principal
para no exceder el valor crtico o incluso llevar la concentracin 0% es las clulas microbianas
necesitan un concentracin mnima de oxgeno para realizar cada una de las actividades metablicas
primordiales, para garantizar que las clulas no sean sometidas a condiciones anxicas (estrs
oxidativo), la concentracin s no puede ser inferior al 10% as se garantiza condiciones adecuadas
para el mantenimiento del cultivo.

Es significativo tambin observar que de la actividad respiratoria inicial de microorganismos que

crecen activamente en el biorreactor (54,6%), mediante la realizacin de la experimentacin vara
hasta la concentracin crtica y una vez se retoma el proceso de aireacin termina por obtener una
concentracin de 54,6%, lo que nos sugiere que esta es la demanda de oxgeno ideal para el
microorganismo en el medio de cultivo dado.

Todos los procesos celulares en condiciones aerobias emplean el oxgeno como aceptor final de
electrones para el proceso de la respiracin, lo que conlleva a que este sea uno de los limitantes para el
diseo de los biorreactores. Esta limitacin puede darse tanto por factores como la agitacin y el flujo
de recirculacin. En esta prctica el mtodo dinmico para la determinacin del k La se llev a cabo en
condiciones de no agitacin, razn por la cual se pudo presentar un menor valor del mismo, lo que
sugiere que si en el proceso de biotransformacin se requiere un mayor valor de coeficiente de
transferencia de oxgeno se podra optimizar mediante las variaciones de agitacin e incluso con las
variaciones de dimetro de las burbujas provenientes de la corriente de aireacin.

6.3 Comparacin entre el mtodo indirecto y el mtodo directo

7. REFERENCIAS