PUFA terkonjugasi, seperti CEPA dan cDHA, disusun oleh perlakuan alkali

mengikuti metode AOAC dengan sedikit modifikasi. Kalium hidroksida pada konsentrasi 6,6
atau 21% (w/w) di etilena glikol disiapkan dan larutan KOH digelembungkan selama 5 menit
dengan gas nitrogen. Sepuluh miligram EPA atau DHA ditambahkan ke 1 ml larutan KOH
6,6% atau 21% dalam tabung reaksi (10 ml). Campuran digelembungkan dengan gas nitrogen
dan kemudian sekrup-ditutup dan didiamkan selama 5 atau 10 menit pada 180 C. Campuran
reaksi didinginkan, dan 1 ml metanol ditambahkan. Campuran diasamkan ke bawah pH 2
dengan 2 ml 6 N HCl. Setelah pengenceran dengan 2 ml air suling, asam lemak terkonjugasi
diekstraksi dengan 5 ml heksana. Ekstrak heksana kemudian dicuci dengan 3 ml 30%
metanol dan dengan 3 ml air suling sebelum menguap di bawah
aliran gas nitrogen. Asam lemak terkonjugasi disimpan pada -20 C setelah dibersihkan
dengan gas nitrogen. UV / VIS analisis spektrofotometri dari asam lemak terkonjugasi
dilakukan dengan Shimadzu UV-2400PC. Pembacaan spektrofotometri dipastikan konjugasi
asam lemak dari pentaene (345 nm) dan hexaene (375 nm) [19, 20]. Terutama isomer yang
dihasilkan CEPA adalah 5Z7E9E14Z17Z. Dengan terkonjugasi PUFA dan normal PUFA
dilarutkan dalam dimetil sulfoksida (DMSO) pada berbagai konsentrasi dan disonikasi
selama 30 detik.
Preparasi asam lemak dari minyak bunga matahari dan CEPA
Asam lemak dibuat dari minyak bunga matahari dengan saponifikasi menggunakan Metode
dilaporkan sebelumnya. Dalam penelitian kami sebelumnya, CEPA, yang memiliki struktur
trienoic terkonjugasi, memiliki efek sitotoksik kuat; dalam penelitian ini, CEPA dibuat dari
EPA oleh alkali isomerisasi menggunakan metode yang sama seperti yang dilaporkan
sebelumnya . Kalium hidroksida pada konsentrasi 21 g / 100 g dalam etilena glikol disusun,
dan gas nitrogen digelembungkan dengan larutan selama 10 menit. EPA (100 mg)
ditambahkan ke 10 mL 4 mol / L larutan KOH dalam tabung reaksi (100 ml Volume). gas
nitrogen itu kembali ditiupkan melalui campuran, dan kemudian tabung itu sekrup-capped
dan didiamkan selama 10 menit pada 180 C. Campuran reaksi didinginkan, 10 mL metanol
ditambahkan, dan kemudian Campuran diasamkan ke bawah pH 2,0 dengan 20 ml 6 mol / L
HCl. Setelah pengenceran dengan 2 mL air suling, asam lemak terkonjugasi diekstraksi
dengan 5 mL heksana. Ekstrak heksana kemudian dicuci dengan 3 mL 30% methanol dan 3
mL air suling sebelum penguapan di bawah aliran gas nitrogen. CEPA konsentrat
disimpan pada -20 C setelah dibersihkan dengan gas nitrogen. UV / VIS analisis
spektrofotometri dari asam lemak terkonjugasi adalah dilakukan dengan Shimadzu UV-
2400PC, dan dikonfirmasi keberadaan asam lemak terkonjugasi yang mengandung senyawa
diena (serapan pada 235 nm),
triena (268 nm), tetraenes (315 nm), pentaenes (345 nm), dan hexaenes (375 nm).
 KOH EPA 10 ml
21 g / 100 g

Dimasukkan ke dalam tabung reaksi

+ Gas Nitrogen 10

+Gas Nitrogen Pencampuran

Penutupan tabung

Pendiaman selama 10 menit pada 180 C

Pendinginan
+10 mL metanol

+HCLhingga pH 2,0

Pengenceran 2 mL air suling

Ekstraksi dengan Heksana

Pencucian denganmethanol dan 3 mL air suling

CEPA Konsetrat

Penyimpanan -20oC

Spektofotometri
Sel dan kultur sel. Garis sel tumor usus manusia (DLD-1) diperoleh dari Sel Resource
Center untuk Biokimia Penelitian di Universitas Tohoku. Garis sel dikultur di RPMI 1640
media (yang mengandung 0,3 g / L L-glutamine dan 2.0 g / L natrium bikarbonat) ditambah
dengan 10% FBS, 100 kU / L penisilin, dan 100 mg / L streptomisin. Dengan DLD-1 sel
dipertahankan pada 37 C dalam suasana dilembabkan dari 95% udara dan 5% CO2.

CEPA Konsetrat

Spektofotometri diena (235 nm),

triena (268 nm), tetraenes (315 nm), pentaenes
(345 nm), dan hexaenes (375 nm).